目的:评价瞬时受体电位M2(TRPM2)-钙调磷酸酶A(CnA)-线粒体动力相关蛋白1(Drp1)通路在丙泊酚减轻小鼠肝缺血再灌注致肾损伤中的作用。方法:SPF级雄性C57BL6小鼠24只，8周龄，体重20～23 g，采用随机数字表法分为4组( n＝6)：假手术组(S组)、肝缺血再灌注组(IR组)、丙泊酚组(P组)和TRPM2激动剂腺苷二磷酸核糖(ADPR)+丙泊酚组(AP组)。采用夹闭肝左、中叶门静脉和肝动脉60 min恢复灌注的方法制备肝缺血再灌注损伤模型。P组于造模前1 h时腹腔注射生理盐水0.2 ml，造模前30 min时腹腔注射1%异丙酚30 mg/kg；AP组于造模前1 h时腹腔注射ADPR 10 mg/kg(溶于0.2 ml生理盐水中)，造模前30 min腹腔注射1%异丙酚30 mg/kg；S组和IR组分别于造模前1 h和30 min时腹腔注射等体积生理盐水。于再灌注6 h时摘眼球采血检测血清BUN、Cr、ALT和AST水平，然后处死小鼠取肾组织，透射电镜下观察线粒体超微结构，并计算线粒体长径，采用Western blot法检测TRPM2、CnA、磷酸化Drp1(p-Drp1) Ser637和cleaved caspase-3的表达。 结果:与S组比较，IR组、P组和AP组血清BUN和Cr浓度升高，肾组织TRPM2、CnA和cleaved caspase-3表达上调，p-Drp1 Ser637表达下调，线粒体长径缩短( P<0.05)；与IR组比较，P组血清BUN和Cr浓度降低，肾组织TRPM2、CnA和cleaved caspase-3表达下调，p-Drp1 Ser637表达上调，线粒体长径延长( P<0.05)，线粒体损伤减轻，血清ALT和AST浓度差异无统计学意义，AP组血清BUN和Cr浓度差异无统计学意义( P>0.05)；与P组比较，AP组血清BUN和Cr浓度升高，肾组织TRPM2、CnA和cleaved caspase-3表达上调，p-Drp1 Ser637表达下调，线粒体长径缩短( P<0.05)，线粒体损伤加重。 结论:丙泊酚减轻小鼠肝缺血再灌注致肾损伤的机制与其抑制肾组织TRPM2的表达，降低胞内CnA的水平，抑制Drp1 Ser637去磷酸化有关。

目的:观察蜂针疗法对咪喹莫特诱导银屑病样小鼠模型疗效,并观察其对TRPV1和TRPM8的影响.方法:40只白变种实验室(BALB/c)小鼠随机分为空白对照组3只和银屑病模型组37只,银屑病建模成功27只后再随机分为模型组、本维莫德乳膏组(阳性对照组)和蜂针疗法组,每组各9只.从实验第22天开始治疗,阳性治疗组外涂本维莫德乳膏1次/d,10 mg/次;蜂针疗法组每周采用蜂针治疗1次,1针/次,留针2 s后拔除,共3周.观察各组小鼠皮损情况,并应用HE染色观察皮损病理状态;免疫组化法观察皮损中TRPV1、TRPM8的表达情况;ELISA法检测IL-17水平;RT-PCR法检测皮损处TRPV1和TRPM8 mRNA表达水平.结果:实验结束时,阳性对照组、蜂针疗法组血清IL-17含量与治疗前相比显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),治疗后与模型组相比,血清IL-17含量亦下降明显,差异有统计学意义(P<0.05).蜂针治疗后模型小鼠皮损中TRPV1表达含量较空白对照组显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);阳性对照组、蜂针疗法组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).蜂针治疗后,蜂针疗法组小鼠皮损中TRPM8含量较模型组显著降低(P<0.05),阳性对照组下降不明显(P>0.05).结论:蜂针治疗能有效改善银屑病患者皮疹及咪喹莫特诱导银屑病样小鼠皮损,同时发现蜂针治疗后皮损中TRPV1含量有所恢复、TRPM8含量有所减少,可见银屑病的发生与皮肤中冷热敏通道存在密切关系.

目的 探讨小胶质细胞及星形胶质细胞中的瞬时受体电位M2 型(TRPM2)离子通道在颞叶癫痫(TLE)相关神经炎症中的作用.方法 将大鼠随机分为对照组和癫痫组,癫痫组采用氯化锂-毛果芸香碱(匹罗卡品)制作癫痫模型,对照组给予等剂量的生理盐水代替,根据造模后观察的时间将TLE大鼠随机分为 7 个亚组(n = 5):急性期(3 h组、6 h组、1 d组、2 d组)、潜伏期(14 d组)、慢性期(30 d组、90 d组).检测TRPM2 在不同亚组TLE大鼠海马中的表达及TRPM2 在大鼠海马中的细胞定位情况.采用过氧化氢(H2O2)诱导小胶质细胞BV2 及星形胶质细胞C8 细胞系,检测细胞释放IL-1β、IL-6 和TNF-α的水平,检测H2O2 诱导的BV2 及C8 细胞中TRPM2、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)、糖原合成酶激酶 3β(GSK-3β)、磷酸化核因子κB p65 蛋白(p-NF-κB p65)的表达变化,同时检测H2O2 诱导BV2 细胞中钙调神经磷酸酶(CaN)的活性变化.结果 急性期TLE大鼠海马中的TRPM2 表达升高(P<0.05).H2O2 诱导的BV2 及C8 细胞中TRPM2 的表达升高、炎症因子释放增加(P均<0.05),H2O2 可促进BV2 细胞中PARP-1、p-NF-κB p65 的表达并提高CaN、GSK-3β的活性(P均<0.05).结论 氧化应激可促进小胶质细胞及星形胶质细胞TRPM2 及促炎细胞因子的表达,癫痫反复发作引起的氧化应激可能在小胶质细胞中通过TRPM2/CaN/p-NF-κB p65 通路介导TLE相关神经炎症的发生.

目的:研究冰片(borneol)对小鼠心肌梗死(myocardial infarction,MI)后炎症反应和心脏重构的作用及可能机制.方法:8周龄野生型(wild-type,WT)C57BL/6小鼠和瞬时受体电位阳离子通道M亚家族成员8(transient receptor potential cation channel subfamily M member 8,TRPM8)基因敲除(TRPM8 gene knockout,TRPM8-/-)小鼠随机分为假手术组和MI组,再分别用生理盐水(对照组)或冰片(冰片组)灌胃.绘制小鼠MI后生存曲线,28 d后超声心动图检测心脏功能,多导生理记录仪测量血流动力学参数,病理染色观察MI面积、心肌肥大和间质纤维化,并检测梗死交界区心肌中炎症反应情况.结果:在WT小鼠中,梗死交界区心肌组织中TRPM8表达显著增加(P＜0.05),冰片对心脏中TRPM8表达无影响(P＞0.05),但可提高小鼠生存率,缩小MI面积,抑制MI后心脏重构,改善心脏功能(P＜0.05或P＜0.01);在TRPM8-/-小鼠中,冰片对小鼠生存率、MI面积、心肌肥大、心肌纤维化和心脏功能未见明显影响(P＞0.05).在WT小鼠中,冰片可减少中性粒细胞和巨噬细胞的浸润(P＜0.01),抑制炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)过度表达(P＜0.05或P＜0.01);而在TRPM8-/-小鼠中,冰片对炎症细胞数量和炎症因子表达未见明显影响(P＞0.05).结论:TRPM8可能是冰片在心脏的作用靶点;冰片可能通过TRPM8减轻MI后炎症反应和抑制心脏重构,改善小鼠MI后的心脏功能.

目的 探究过表达瞬时受体电位阳离子通道M8(TRPM8)在心脏钠通道基因(SCN5A)错义突变后对肥大细胞功能的影响.方法 构建TRPM8基因过表达载体及SCN5A干扰载体并分别转染入人肥大细胞HMC-1中,转染成功后用CCK8检测细胞增殖能力,qPCR、Western blot法检测TRPM8与SCN5A的表达情况,中性红染色计算肥大细胞脱颗粒百分率,比色法测定β-氨基己糖苷酶释放率.结果 TRPM8基因过表达及SCN5A干扰载体成功构建;与空白对照组相比,过表达TRPM8与干扰SCN5A后均抑制了 HMC-1细胞的增殖能力,过表达TRPM8对HMC-1细胞增殖能力的抑制作用低于干扰SCN5A组(P＜0.05);与干扰SCN5A组相比,干扰SCN5A的同时过表达TRPM8后对HMC-1细胞增殖能力的抑制作用有所降低(P＜0.05);与空白对照组相比,过表达TRPM8降低HMC-1细胞脱颗粒反应和β-氨基己糖苷酶释放率,干扰SCN5A后增强了 HMC-1细胞脱颗粒反应和β-氨基己糖苷酶释放率(P＜0.05);与干扰SCN5A后相比,在干扰SCN5A的同时过表达TRPM8可降低HMC-1细胞脱颗粒反应和β-氨基己糖苷酶释放率(P＜0.05);干扰SCN5A后可下调HMC-1细胞中TRPM8的表达(P＜0.05).结论 TRPM8可以抑制SCN5A错义突变后对肥大细胞的激活作用,并可能通过调控SCN5A来减缓肠易激综合征患者疼痛等不适症状.

目的 评价神经胶质细胞源性神经营养因子家族受体α3(GFRα3)在神经病理性痛大鼠冷痛觉过敏时背根神经节瞬时感受器电位M8(TRPM8)表达及膜转运中的作用.方法 鞘内置管成功的健康成年雄性SD大鼠32只,10~12周龄,体重250~280 g,采用随机数字表法分为4组(n=8):假手术+GFRα3 dsRNA组(Sham+dsRNA组)、假手术+GFRα3 siRNA组(Sham+siRNA组)、神经病理性痛+GFRα3 dsRNA组(NP+dsRNA组)和神经病理性痛+GFRα3 siRNA组(NP+siRNA组).采用坐骨神经慢性束缚性损伤法建立神经病理性痛模型.于术后10~13 d时,Sham+dsRNA组和NP+dsRNA组鞘内注射对照的GFRα3 dsRNA,Sham+siRNA组和NP+siRNA组鞘内注射正义链进行2′甲基化修饰和5′胆固醇修饰的GFRα3 siRNA,10 μg∕20 μl,每天1次,连续4 d.于术前1 d、术后10、11、12、13 d(鞘内注射前)及术后14 d时测定冷板抬足次数、机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).最后一次痛行为学测试后处死大鼠,取术侧L4-6背根神经节,采用Western blot法测定GFRα3、总蛋白和膜蛋白TRPM8的表达水平,并计算膜蛋白与总蛋白TRPM8表达水平的比值(m∕t比值).结果 与Sham+dsRNA组比较,NP+dsRNA组和NP+siRNA组术后冷板抬足次数增多,MWT降低,TWL缩短,NP+dsRNA组背根神经节GFRα3、总蛋白和膜蛋白TRPM8表达上调,m∕t比值升高,NP+siRNA 组背根神经节GFRα3表达下调(P<0.01),总蛋白和膜蛋白TRPM8表达水平及m∕t比值差异无统计学意义(P>0.05);与NP+dsRNA组比较,NP+siRNA组术后冷板抬足次数减少,背根神经节GFRα3、总蛋白和膜蛋白TRPM8表达下调,m∕t比值降低(P<0.01),MWT和TWL差异无统计学意义(P>0.05).结论 背根神经节GFRα3可上调TRPM8表达及增强其膜转运,该作用可能参与了神经病理性痛大鼠冷痛觉过敏的维持机制.

应用短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),对其M2型瞬时受体电位(TRPM2)基因进行干扰,以建立稳定shRNA TRPM2 PMVEC细胞株.结果 表明,正常PMVEC对胰酶的最大耐受浓度和嘌呤霉素最小致死剂量分别为0.4 μg/mL和0.6μg/mL;然后加入0.6、2.0、4.0、8.0 μg/mL嘌呤霉素筛选稳定抑制TRPM2表达的shRNA TRPM2 PMVEC株,结果在嘌呤霉素达到8 μg/mL时该细胞株仍细胞生长良好;Semi-quantitative PCR和Western blot对获得阳性细胞株进行TRPM2基因和蛋白表达的检测显示,shRNA TRPM2阳性PMVEC的TRPM2基因和蛋白表达相对量显著低于阴性对照和正常对照组(P＜0.01).该研究通过shRNA慢病毒载体成功建立了稳定shRNA TRPM2 PMVEC细胞株,为进一步开展TRPM2在流感病毒诱导肺微血管内皮细胞损伤的作用机制奠定了基础.

目的:探讨阻断瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)对子宫内膜癌细胞和裸鼠移植瘤放射敏感性的影响.方法:选用高表达TRPC6的子宫内膜癌细胞株HEC-1A,用阻断剂SKF96365阻断子宫内膜癌细胞中TRPC6表达,流式细胞仪检测细胞周期.将HEC-1A细胞分为4组:对照组、单纯SKF96365组、单纯照射组和SKF96365+照射组(10μmol/L SKF96365+放射),计算细胞克隆数,判断细胞的增殖能力和放射增敏率.将32只雌性裸鼠随机分为4组,每组8只,分别为单纯SKF96365组、单纯照射组、SKF96365+照射组和对照组,右腹皮下注射5×106个细胞,每周测量裸鼠皮下肿瘤体积,接种12周后处死小鼠,测肿瘤的重量和体积,计算肿瘤生长延迟时间(TGD)和放射增敏因子.结果:SKF96365处理后,子宫内膜癌HEC-1A细胞中G2/M期细胞百分比明显增加,G0/G1期百分比减少.SKF96365+照射组的细胞克隆数最低.裸鼠的实验结果与细胞实验结果相似,SKF96365+照射组裸鼠的皮下移植瘤体积和重量最小.结论:阻断TRPC6通道对子宫内膜癌HEC-1A细胞和裸鼠的肿瘤均有明显的放射增敏作用.TRPC6通道可作为子宫内膜癌放射增敏的调控点,可能成为子宫内膜癌治疗的新靶点.

玫瑰痤疮发病机制尚未完全明确,神经源性炎症和神经血管功能失调均参与其中.瞬时受体电位(TRP)离子通道蛋白在初级感觉神经元和非神经细胞中广泛表达,近年研究表明TRP家族中瞬时受体电位香草酸亚型(TRPV)1～4、瞬时受体电位锚蛋白(TRPA)1和M型瞬时受体电位(TRPM)8可能与玫瑰痤疮发病相关.该文主要对上述离子通道与玫瑰痤疮病理生理过程的关系作一综述.

目的:观察瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员2(transient receptor potential cation channel subfamily M member 2,TRPM2)在小鼠肝缺血再灌注损伤(hepatic ischemia-reperfusion injury,HIRI)模型中的作用及可能的机制.方法:60只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、TRPM2腺病毒干扰载体预处理组(T组)和TRPM2腺病毒对照载体预处理组(C组)(均n=15).取各组小鼠灌注前肝组织,采用荧光显微镜观察腺病毒感染效率,利用real-time PCR检测腺病毒对TRPM2的沉默效率.各组小鼠分别于再灌注2,4和8 h抽取腹主动脉血并获取肝组织,分别检测血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate amino-transferase,AST)活性.采用HE染色观察肝组织病理学变化;蛋白质印迹法检测肝中TRPM2和Rac家族小GTP酶1(Rac family small GTPase 1,RAC1)蛋白质的表达量变化;并通过酶联免疫吸附试验检测肝中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性的变化.结果:与S组和M组相比,T组和C组小鼠肝组织可见大量绿色荧光.与S组、M组及C组相比,T组小鼠肝组织中TRPM2 mRNA的表达量显著降低(均P<0.05).光镜下S组小鼠肝细胞形态正常;M组和C组小鼠肝窦扩张和淤血、肝细胞变性、小叶中央坏死及大量炎症细胞浸润;与M组和C组相比较,T组小鼠肝细胞受损程度明显减轻.与S组相比较,M组、T组及C组小鼠血清中ALT及AST活性在再灌注2,4和8 h均显著升高(均P<0.05);与M组和C组相比较,T组小鼠血清中ALT及AST活性在再灌注2,4和8 h均显著降低(均P<0.05).与M组和C组相比较,T组小鼠中SOD活性在再灌注2,4和8 h均显著升高(均P<0.05),而MDA和MPO活性均显著降低(均P<0.05).T组小鼠肝组织中TRPM2和RAC1蛋白质表达量在再灌注2,4和8 h较M组和C组均显著降低(均P<0.05).结论:TRPM2腺病毒干扰载体预处理能有效沉默小鼠肝组织中TRPM2基因表达,并能减轻HIRI,该机制可能与抑制氧化应激和降低RAC1蛋白质表达水平有关.