目的:检测妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）孕妇胎盘组织过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1α（PGC-1α）基因甲基化水平及mRNA表达水平，并探讨二者与胎儿宫内窘迫的关系。方法:选取2018年7月至2019年12月烟台市烟台山医院产科收治的174例GDM孕妇为研究对象，其中胎儿出现宫内窘迫的78名孕妇作为胎儿宫内窘迫组；胎儿正常出生未出现宫内窘迫的96例孕妇为对照组；另同期选取82名无GDM正常妊娠孕妇作为健康组。亚硫酸氢钠处理DNA后采用直接测序法检测胎盘组织中PGC-1α基因甲基化水平；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测胎盘组织中PGC-1α mRNA表达水平；全自动生化分析仪检测甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平；分析胎儿发生宫内窘迫孕妇PGC-1α基因甲基化频率与PGC-1α mRNA表达水平的相关性；分析影响胎儿宫内窘迫发生的因素。结果:胎儿宫内窘迫组PGC-1α基因甲基化频率及TG水平[（25.42±7.31）%、（4.72±0.68）mmol/L]高于对照组[（9.26±2.67）%、（4.31±0.64）mmol/L]和健康组[（3.24±1.07）%、（4.33±0.72）mmol/L]，对照组PGC-1α基因甲基化频率高于健康组，差异均有统计学意义（ P<0.05）；胎儿宫内窘迫组PGC-1α mRNA表达水平（0.67±0.16）低于对照组（0.74±0.14）和健康组（1.00±0.27），对照组PGC-1α mRNA表达水平低于健康组，差异均有统计学意义（ P<0.05）；胎儿发生宫内窘迫孕妇PGC-1α基因甲基化频率与PGC-1α mRNA表达水平呈负相关（ r=-0.515、 P<0.05）；PGC-1α基因甲基化是影响胎儿发生宫内窘迫的独立危险因素（ P<0.05），PGC-1α mRNA高表达是胎儿发生宫内窘迫的保护因素（ P<0.05）。 结论:GDM孕妇PGC-1α基因DNA甲基化水平与胎儿宫内窘迫相关，有可能作为胎儿宫内窘迫的基因修饰靶点。

该研究以产自甘肃徽县太白乡的楤木根皮多糖(ACP)为材料,通过氯磺酸-吡啶法(CSA-Py)合成了楤木根皮多糖硫酸酯(SACP).通过响应面(RSM)实验确定的最佳反应条件:CSA/Py为2.53,反应时间为5.23 h,反应温度为61.25℃,DS理论最大值为0.57.通过红外光谱分析(FT-IR)、X射线光电子能谱(XPS)对产物进行表征,SACP结构中已引入硫酸基团,S以S6+形式存在.气相色谱-质谱联用法(GC-MS)检测显示,SACP由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖和甘露糖组成.采用体积排阻色谱-激光光散射联用法(SEC-LLS)测得的平均分子量(Mw)显示,酸性反应导致Mw降低.体外抗氧化活性发现,SACP有极好的清除O-2·的能力,有较好的清除DPPH自由基、·OH自由基的能力,还原力很强,对Fe2+有较好的螯合能力,具有浓度依赖性.从构效关系来看,清除DPPH自由基、·OH自由基、O-2·自由基以及还原力的能力均与DS呈正相关.上述研究表明了ACP及SACP的化学结构以及化学修饰对ACP抗氧化活性的影响.

β-丙内酯( BPL)是广泛应用于疫苗产业的灭活剂.然而,其对疫苗蛋白抗原的作用及其作用机制仍然知之甚少. 在这里,作者分别提供BPL处理的柯萨奇病毒A16( CVA16)成熟病毒粒子和前衣壳在分辨率为0.39 nm和0.65 nm的冰冻电子显微镜( cryo-EM)结构 . 值得注意的是发现这两种颗粒采用扩展的类似于135-S样无包被中间体的构象,具有包括开放的2倍通道、VP 1衣壳蛋白的N末端的外在化以及不存在袋状因素的特征. 然而,主要的中和表位在这些颗粒上保存得非常好. 进一步的生物化学分析显示,BPL处理以BPL剂量依赖性方式损害了CVA16颗粒与硫酸乙酰肝素附着受体和构象依赖性单克隆抗体相结合的能力,表明BPL能够修饰表面暴露的氨基酸残基.

目的 探讨经超声提取的防风多糖(USPS)进行硫酸酯化修饰后对人乳腺癌MCF-7细胞体外增殖的抑制作用以及对肿瘤相关巨噬细胞募集和驯化的影响.方法 ①采用氯磺酸-吡啶法对USPS进行硫酸酯化修饰得到硫酸酯化USPS(S-USPS).②采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定USPS和S-USPS在不同给药浓度下对MCF-7细胞生长的抑制作用.③体外诱导生成THP-1来源的巨噬细胞,采用TIranswell法检测S-USPS作用上清对巨噬细胞募集的影响.④采用qRT-PCR和ELISA法检测S-USPS对MCF-7细胞趋化因子表达和分泌的影响.⑤采用qRT-PCR法检测S-USPS、CCL3对巨噬细胞促炎和抗炎因子表达的影响.结果 ①与USPS相比,S-USPS体外可明显抑制MCF-7细胞的增殖活性(P＜0.05),且抑制率呈剂量和时间依赖性.②S-USPS可显著促进MF-7细胞趋化因子3(CCL3)的转录和分泌.③与空白对照和MCF-7细胞上清组相比,S-USPS可上调巨噬细胞白介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达,同时下调转化生长因子β(TGF-β)、IL-10 mRNA的表达(P＜0.05).④向MCF-7条件培养基中加入CCL3中和抗体,可显著逆转S-USPS对IL-1β、TNF-α表达的促进作用(P＜0.05).结论 硫酸酯化防风多糖可通过作用于CCIL3促使MCF-7细胞对巨噬细胞的募集作用,并驯化巨噬细胞向M1型分化.

目的 观察屋尘螨诱导哮喘模型小鼠气道平滑肌细胞中磷酸二酯酶4D(phosphodiestarase 4D,PDE4D)基因表达水平,及PDE4D基因启动子区域甲基化水平的改变.方法 12只C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组,每组6只.模型组用屋尘螨(house dust mite,HDM)致敏建立哮喘模型,对照组用磷酸盐缓冲液代替.检测小鼠肺功能变化,观察小鼠肺组织病理变化,进行肺泡灌洗并对灌洗液中免疫细胞分类、计数.实时定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)检测气道平滑肌细胞中PDE4D基因mRNA的表达量,重硫酸盐测序分析PDE4D基因启动子区域DNA甲基化水平.结果 与对照组小鼠相比,模型组小鼠气道平滑肌细胞中PDE4D基因mRNA的表达水平显著升高(P＜0.05),PDE4D启动子区域的甲基化位点的整体甲基化程度显著下降(P＜0.05).此外,部分甲基化修饰位点改变.结论 哮喘小鼠中PDE4D基因启动子区域的甲基化水平改变,可能通过调控PDE4D基因表达,参与哮喘的发生发展.

目的:寻找肝素替代品,作为体外循环管路中的抗凝血活性涂层物质.方法:依据肝素的抗凝血机制,选取了3种天然植物多糖,采用惰性化浓硫酸法对植物多糖进行硫酸酯化处理,并采用共价键结合法将多糖硫酸酯固定于体外循环管路材料表面.对涂层材料表面功能基团和形貌结构进行分析,并对涂层材料表面抗凝血性能进行测试.结果:多糖硫酸酯可以均匀地涂层于管路材料表面,使材料表面APTT明显延长(P＜0.05).结论:通过浓硫酸法对植物多糖进行修饰可以获得多糖硫酸酯,可以应用于管路材料抗凝血涂层,发挥良好的抗凝血作用.

目的:对白鲜皮精制多糖(DDP-Ⅲ)进行硫酸酯化修饰,并比较其酯化修饰前后的结构特征及抗银屑病作用.方法:采用DEAE-52阴离子交换纤维素柱、Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱等对白鲜皮多糖(DDP)进行分离纯化,得DDP-Ⅲ;用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化后,采用高效液相色谱法测定其单糖组成.用酯化试剂(无水吡啶+氯磺酸)对DDP-Ⅲ进行硫酸酯化修饰,得SDDP-Ⅲ;采用氯化钡-明胶浊度法测定其硫酸根取代度,并通过红外光谱、拉曼光谱、扫描电镜比较修饰前后的结构特征.将雄性ICR小鼠随机分为正常组、模型组、阳性组(雷公藤多苷,20 mg/kg)和DDP-Ⅲ/SDDP-Ⅲ低、中、高剂量组(均分别为56、112、224 mg/kg).除正常组小鼠外敷凡士林外,其余各组小鼠均外敷咪喹莫特乳膏复制银屑病模型.各给药组小鼠灌胃相应药物溶液0.4 mL,正常组与模型组小鼠灌胃等体积水,每天1次,连续14 d.末次给药2 h后,采用酶联免疫吸附测定法检测各组小鼠血清白细胞介素17(IL-17)、IL-23含量,采用苏木精-伊红染色法观察其近尾部皮肤鳞片,并记录有颗粒层鳞片数.结果:DDP-Ⅲ由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖组成.SDDP-Ⅲ的硫酸根取代度为0.65.红外光谱、拉曼光谱分析结果显示,除与DDP-Ⅲ有相同的特征吸收峰外,SDDP-Ⅲ分别在1255、823 cm-1和1240、815 cm-1处有硫酸根基团的特征吸收峰.扫描电镜分析结果显示,DDP-Ⅲ呈片状,表面光滑、平整,排列紧密;SDDP-Ⅲ呈块状或颗粒状,有孔洞结构,排列疏松.动物实验结果显示,与正常组比较,模型组小鼠皮损表皮明显增厚,颗粒层明显减少,其血清IL-17、IL-23含量均显著升高,有颗粒层鳞片数显著减少(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,各给药组小鼠上述症状均有不同程度的改善,阳性组、DDP-Ⅲ高剂量组以及SDDP-Ⅲ中、高剂量组小鼠血清IL-17、IL-23含量均显著下降,有颗粒层鳞片数均显著升高,且SDDP-Ⅲ中、高剂量组上述指标均显著优于DDP-Ⅲ同剂量组(P<0.05或P<0.01).结论:DDP-Ⅲ含有甘露糖等5种单糖成分.DDP-Ⅲ、SDDP-Ⅲ均具有一定的抗银屑病作用,且经硫酸酯化修饰的SDDP-Ⅲ的作用更强;这种作用可能与抑制IL-23/IL-17信号通路有关.

目的 分析EPS硫酸酯化修饰中配料比对硫酸基取代度的影响及其硫酸酯化修饰对EPS抗肿瘤活性的影响.方法 采用氯磺酸-吡啶法修饰EPS,氯化钡-明胶浊度法测定硫酸基取代度,分析酯化剂配料比对硫酸基取代度的影响;红外光谱分析硫酸基团是否与EPS结合形成硫酸酯;CCK-8法检测EPS硫酸酯(SEPS)抑制人结肠癌HCT 116增殖活性;Annexin V-FITC/PI双染法检测SEPS诱导HCT 116细胞凋亡活性.结果 酯化剂和EPS配料比1:1和2:1条件下产物硫酸基取代度分别为0.98％(SEPS-1)和1.18％(SEPS-2),增加酯化剂配料比可以提高产物取代度(P<0.05).红外光谱分析发现1249 cm-1附近出现-OSO3-的S=O伸缩振动吸收峰,表明硫酸基团与EPS结合形成硫酸酯.CCK-8实验表明,在0.02～0.10 mg/L各浓度梯度范围内,SEPS-1对HCT 116细胞增殖的抑制率明显高于EPS(P<0.05);在0.04、0.06、0.10 mg/mL浓度梯度水平时,SEPS-2活性高于EPS(P<0.05);在0.04～0.08 mg/L各浓度梯度水平,SEPS-1活性高于SEPS-2(P<0.05).流式细胞术检测结果显示SEPS-1诱导HCT 116细胞凋亡活性较EPS明显增强,随着SEPS-1浓度的增加,发生早期凋亡的细胞与坏死细胞相应增加,并呈现剂量依赖性,0.06、0.08、0.10 mg/mL处理组细胞早期凋亡率分别为6.38％、11.8％与12.5％,晚期凋亡和坏死细胞率分别为5.26％、8.04％、6.80％.结论 黑根霉EPS硫酸酯化修饰中,酯化剂配料比对产物取代度有直接影响,增加酯化剂配料比可以提高产物取代度.黑根霉EPS硫酸酯化修饰可以提高其抗肿瘤活性,但取代度高低与活性高低没有直接关系.

目的 利用星点设计-效应面法优化白鲜皮多糖(Dictamnus dasycarpus polysaccharide,DDP)硫酸酯化工艺,考察DDP修饰前后结构特征及抗氧化活性.方法 采用氯磺酸-吡啶法,以酯化试剂比例、酯化试剂与多糖溶液比例、反应温度、反应时间为自变量,硫酸根取代度(degree of substitution,DS)为因变量,对自变量各水平进行多元回归拟合,利用效应面法筛选最佳工艺并进行预测分析;采用红外光谱及扫描电镜观察其结构特点.测定硫酸酯化白鲜皮多糖(sulfatedpolysaccharides from Dictamnus dasycarpus,SDDP)对DPPH、OH·、O2-·清除能力,考察其抗氧化活性.结果 最佳工艺条件为酯化试剂比例1:4,酯化试剂与多糖溶液比例1∶1,反应温度73℃,反应时间5h.红外光谱显示SDDP在820 cm-1和1 254 cm-1附近出现C-O-S和S=O硫酸基特征吸收峰,表明DDP修饰成功;扫描电镜显示SDDP表面粗糙,排列紧密,且块状体积明显小于DDP;DDP和SDDP都有清除DPPH、OH·和O2-·能力,且SDDP对DPPH、OH·和O2-·清除率强于DDP.结论 星点设计-效应面法优化DDP硫酸酯化工艺方法简便且预测性良好,DDP经硫酸酯化后,抗氧化活性有所提高.

目的 为了提高药物疗效,降低毒副作用,研究制备了近红外(near-infrared,NIR)和pH双重响应型的介孔碳(mesoporous carbon,MCN)递送系统.方法 首先以十六烷基三甲基氯化铵(cetyltrimethyl ammonium chloride,CTAC)为模板,正硅酸乙酯(ethyl orthosilicate,TEOS)为硅源,酚醛树脂为碳源制备介孔碳载体,然后用浓硫酸和过硫酸铵对载体进行羧基化修饰,最后将聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)修饰在MCN表面,增加载体的分散性和生物相容性.研究采用透射电镜、比表面积及孔径分布仪、Zeta电位测定等对载药体系进行表征.此外,阿霉素(adriamycin,DOX)作为模型药物,并对体系的NIR和pH响应性释放行为进行考察.结果 体外升温效果显示体系具有浓度依赖性和功率依赖性.在pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)中,药物释放量较低,而在pH5.0 PBS中药物释放量增加.当在808 nm激光器照射下,药物释放呈现阶梯式增长,表现出明显的pH和NIR双重响应型释药特征.当PEG修饰在载体表面,体系的溶血百分率明显降低.结论 研究构建的载药系统具有明显pH和NIR双重响应型药物释药特征,为化疗-热疗的联合应用提供了新的思路.