目的:探讨磷酸化叉头框O4型（phosphorylated forkhead box subtype O4, p-FoxO4）在H9c2心肌细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation, H/R）损伤过程中的作用。方法:H9c2细胞正常培养24 h后，均匀接种于6孔板中，密度为4.5×10 5个/ml，每组≥3次重复，按照随机数字表法分为4组：对照组（Control组）、缺氧1 h复氧1 h组（H1R1组）、缺氧1 h复氧3 h组（H1R3组）和缺氧1 h复氧6 h组（H1R6组）。采用细胞增殖-毒性检测法检测4组细胞相对存活率；实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction, qPCR）法检测叉头框O4型（forkhead box subtype O4, FoxO4）、Bcl-2细胞死亡的相互作用介质（Bcl-2 interacting mediator of cell death, Bim）、B淋巴细胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bcl2-Associated X, Bax）的mRNA含量，以此确定最佳H/R时间点。Control组与H1R1组分别通过Hoechst染色检测细胞凋亡程度，Western blot法检测FoxO4、p-FoxO4、Bim、Bcl-2和Bax蛋白含量。将6~8周C57BL/6小鼠按随机数字表法分为5组（每组3只）：假手术组（sham组）、缺血30 min再灌注3 h组（R3组）、缺血30 min再灌注6 h组（R6组）、缺血30 min再灌注12 h组（R12组）、缺血30 min再灌注24 h组（R24组）。采用qPCR法检测结扎小鼠左前降支后导致缺血的左心室前壁的FoxO4、Bim、Bcl-2和Bax的mRNA含量。 结果:与Control组比较，H1R1组、H1R3组和H1R6组细胞相对生存率下降，H1R1组最低（ P<0.05）；与H1R1组比较，H1R3组和H1R6组细胞相对存活率升高（ P<0.05）；与H1R3组比较，H1R6组细胞相对存活率升高（ P<0.05）。与Control比较，H1R1组、H1R3组、H1R6组FoxO4 mRNA表达增加（ P<0.05），H1R1组Bim mRNA表达增加（ P<0.05），H1R1组Bcl-2 mRNA表达降低（ P<0.05），H1R1组Bax mRNA表达增加（ P<0.05），H1R3组、H1R6组Bax mRNA表达减少（ P<0.05）；与H1R1组比较，H1R3组、H1R6组Bim mRNA表达和Bax mRNA表达降低（ P<0.05）。与Sham组比较，R12组、R24组FoxO4 mRNA含量增加（ P<0.05），R6组Bim mRNA减少（ P<0.05），R24组Bim mRNA含量增加（ P<0.05），R3组、R12组、R24组Bcl-2 mRNA含量减少（ P<0.05）；R6组和R24组Bax mRNA含量增加（ P<0.05）；与R3组比较，R12组和R24组FoxO4 mRNA含量增加（ P<0.05），R12组和R24组Bim mRNA含量增加（ P<0.05），R6组、R12组和R24组Bax mRNA含量增加（ P<0.05）。与R6组比较，R12组和R24组FoxO4 mRNA含量及Bim mRNA含量增加（ P<0.05）；与R12组比较，R24组FoxO4 mRNA、Bim mRNA、Bax mRNA含量增加（ P<0.05）。与Control组比较，H1R1组出现较多核固缩、高亮的凋亡细胞，凋亡率差异有统计学意义（ P<0.05）。与Control组比较，H1R1组FoxO4、p-FoxO4、Bim、Bax蛋白含量增高，Bcl-2蛋白含量降低（ P<0.05）。 结论:p-FoxO4可能通过调控细胞凋亡内在途径参与H9c2心肌细胞的H/R损伤。

目的:探讨血必净注射液上调紧密连接蛋白claudin-5表达的信号通路。方法:利用脂多糖（LPS）建立急性呼吸窘迫综合征（ARDS）动物模型和细胞模型。①体内实验：将20只雄性SD大鼠随机分为4组，每组5只。正常对照组大鼠不做任何处理；LPS诱导组腹腔注射10 mg/kg LPS 12 h；血必净对照组腹腔注射1 mg/kg血必净注射液，每日2次，连续3 d；血必净干预组用血必净注射液预处理后腹腔注射10 mg/kg LPS 12 h。取大鼠肺脏，检测肺湿/干质量比值（W/D）和大鼠肺组织形态学改变；免疫组织化学染色（IHC）和蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测大鼠肺组织claudin-5、磷酸化叉头框蛋白O1（p-FOXO1）、总叉头框蛋白O1（t-FOXO1）、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）、总Akt（t-Akt）蛋白表达。②体外实验：将人肺微血管内皮细胞（HPMECs）分为6组，每组5孔。正常对照组、血必净对照组（与2 g/L血必净共同孵育24 h）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）通路抑制剂LY294002对照组（与10 μmol/L LY294002共同孵育1 h）、LPS诱导组（与1 mg/L LPS共同孵育12 h）、血必净干预组（用2 g/L血必净预处理24 h后与1 mg/L LPS共同孵育12 h）、LY294002干预组（与10 μmol/L LY294002共同孵育1 h后加入2 g/L血必净孵育24 h，然后再与1 mg/L LPS共同孵育12 h）。用Western blotting检测每组HPMECs中claudin-5、p-FOXO1、t-FOXO1、p-Akt、t-Akt蛋白的表达。结果:体内实验结果：①肺组织W/D比值：LPS诱导组较正常对照组显著升高（6.79±0.42比4.19±0.13），经血必净干预后较LPS组明显下降（4.92±0.38比6.79±0.42， P<0.01）。②肺组织形态学改变：与正常对照组比较，LPS诱导组损伤严重，经血必净干预后明显改善。③ claudin-5、p-Akt/t-Akt、p-FOXO1/t-FOXO1蛋白表达水平：LPS诱导组各蛋白均较正常对照组明显降低〔claudin-5蛋白（claudin-5/GAPDH）：0.33±0.03比1.03±0.07，p-Akt/t-Akt：0.18±0.02比1.01±0.13，p-FOXO1/t-FOXO1：0.16±0.06比1.00±0.19，均 P<0.01〕；经血必净干预后表达水平较LPS诱导组显著增高〔claudin-5表达（claudin-5/GAPDH）：0.53±0.05比0.33±0.03，p-Akt/t-Akt：0.56±0.12比0.18±0.02，p-FOXO1/t-FOXO1：0.68±0.10比0.16±0.06，均 P<0.01〕。体外实验结果：LPS诱导组及血必净干预组claudin-5蛋白均较正常对照组明显降低（claudin-5/β-actin：0.45±0.03、0.80±0.08比1.01±0.15，均 P<0.01）；LY294002干预后claudin-5表达较血必净干预组明显下降（claudin-5/β-actin：0.41±0.02比0.80±0.08， P<0.01）。 结论:血必净通过PI3K/Akt/FOXO1信号通路上调claudin-5，从而改善ARDS的肺血管屏障功能。

目的:基于胰岛素抵抗时磷酸化叉头框蛋白O1（pFoxO1）介导的肌肉环指蛋白（MuRF）骨骼肌蛋白降解途径，探讨胰岛素抵抗时骨骼肌蛋白含量变化及健脾清化方的作用。方法:采用高脂饲料喂养c57小鼠制备肥胖伴胰岛素抵抗模型。将成模小鼠按随机数字表法分为模型组、健脾清化方组、二甲双胍组，每组10只。健脾清化方组灌胃健脾清化方水煎液20.961 g生药/kg，二甲双胍组灌胃二甲双胍混悬液18.498 g/kg，模型组灌胃等体积的生理盐水，1次/d，连续给药4周。分别于造模后及给药后进行腹腔葡萄糖耐量试验（IPGTT），采用Western blot法检测pFoxO1、FoxO1、MuRF、肌生成促进因子1（MyoD）、肌球蛋白（myosin）相对表达，采用免疫组化染色法检测MyoD、myosin的定位和表达情况。结果:与模型组比较，健脾清化方组小鼠糖耐量试验中0、60、120 min血糖降低（ P<0.05）；健脾清化方组和二甲双胍组pFoxO1/FoxO1蛋白表达比值［（0.27±0.07）、（0.24±0.14）比（0.05±0.03）］升高（ P<0.05），MuRF蛋白相对表达［（1.22±0.42）、（1.15±0.32）比（3.21±0.35）］降低（ P<0.05），健脾清化方组MyoD［（1.42±0.45）比（0.4±0.11）］、myosin［（0.80±0.11）比（0.51±0.08）］蛋白相对表达升高（ P<0.05）；免疫组化染色显示，健脾清化方组MyoD［（5.06±1.72）比（2.28±0.83）］和myosin［（60.28±7.47）比（39.77±3.34）］表达升高（ P<0.05）。 结论:健脾清化方可有效提高肥胖伴胰岛素抵抗模型小鼠骨骼肌蛋白含量，其机制可能与促进骨骼肌FoxO1磷酸化，抑制骨骼肌蛋白MuRF降解途径有关。

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)激动剂LPS腹腔注射对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的预防作用及其作用机制.方法 将60只大鼠根据随机数字表法分为LPS干预组(0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg,均为小剂量)、维拉帕米干预组、模型组、假手术组,每组15只.构建MIRI模型前7 d,LPS干预组给予0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg LPS腹腔注射,维拉帕米干预组给予2.5%维拉帕米(2 mg/kg)腹腔注射,假手术组与模型组给予等容量生理盐水腹腔注射;均每日1次.然后,除假手术组外,其余组大鼠进行缺血再灌注处理.处理后72 h,采用超声检测各组大鼠心功能,苏木精—伊红(HE)染色观察各组大鼠心肌组织病理学变化,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测算各组大鼠心肌梗死面积;采用 Western blotting法检测大鼠心肌组织FoxO3a、pFoxO3aS253、Beclin-1及LC蛋白.结果 与假手术组比较,模型组大鼠左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(LVFS)减小(P均<0.05);心肌损伤严重,心肌梗死面积百分比升高(P均<0.05);心肌组织中pFoxO3aS253蛋白相对表达量降低(P<0.05),FoxO3a、Beclin-1、LC蛋白相对表达量升高(P均<0.05).与模型组比较,维拉帕米干预组及LPS干预组大鼠LVEF、LVFS增加(P均<0.05);0.1 mg/kg及0.5 mg/kg LPS干预组大鼠心肌病变改善不明显,维拉帕米干预组和1 mg/kg LPS干预组大鼠心肌纤维水肿、断裂、坏死及炎细胞浸润程度均减轻;维拉帕米干预组及LPS干预组大鼠心肌梗死面积百分比降低(P均<0.05),pFoxO3aS253蛋白相对表达量升高(P均<0.05),FoxO3a、Beclin-1、LC蛋白相对表达量下降(P均<0.05).结论 小剂量TLR4激动剂LPS可预防大鼠MIRI,其作用机制可能与促使FoxO3a磷酸化及抑制Beclin-1、LC激活有关.

哺乳动物中,叉头框蛋白O(FOXO)基因存在FOXO1、FOXO3a、FOXO4及FOXO6四种亚型,与肿瘤的发生发展过程密切相关.FOXO基因的转录因子通过磷酸化与去磷酸化作用,以及对细胞自噬的调控,在细胞凋亡、细胞周期调控、肿瘤新生血管生成、糖代谢及DNA损伤修复等方面发挥重要作用.通过磷酸化与去磷酸化作用,以及对细胞自噬的调控,FOXO在细胞凋亡、细胞周期调控、肿瘤新生血管生成、糖代谢及DNA损伤修复等方面发挥重要作用.通过研究FOXO及其转录因子,可以更加深入地了解肿瘤的发生发展机制并影响抗肿瘤的综合治疗,为肿瘤放疗、化疗、靶向治疗耐受的患者提供一种新的可行方案,本文对近年来FOXO及其转录因子的研究进展进行综述.

目的 探讨氧化苦参碱调控叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)表达对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的HaCaT细胞炎症因子分泌的影响.方法 细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测不同浓度TNF-α对HaCaT细胞增殖活性的影响,筛选TNF-α诱导浓度和时间.将诱导后的HaCaT细胞分为模型组(25 μg/L TNF-α)、氧化苦参碱组(25 μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,未转染)、氧化苦参碱+LV-NC-GFP组(25 μg/LTNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,转染空载体)、氧化苦参碱+LV-CA-FOXO1组(25 μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,转染FOXO1过表达载体),另取正常培养的HaCaT细胞为对照组.实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞中FOXO1表达水平;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测细胞中炎性因子:肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中AKT、TLR-4和FOXO1蛋白表达水平.结果 本研究采用25 μg/L TNF-α处理24 h诱导HaCaT细胞.与对照组相比,模型组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、细胞增殖活性、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著升高(P＜0.05),细胞凋亡率显著降低(P＜0.05).与模型组相比,氧化苦参碱组和氧化苦参碱+LV-NC-GFP 组 HaCaT 细胞 FOXO1 mRNA 表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1β 含量以及 TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著降低(P＜0.05),细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).与氧化苦参碱+LV-NC-GFP组相比,氧化苦参碱+LV-CA-FOXO1组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、细胞增殖活性、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1 蛋白表达和 AKT 磷酸化水平显著升高(P＜0.05),细胞凋亡率显著降低(P＜0.05).结论 氧化苦参碱可能通过靶向抑制FOXO1表达降低炎性因子分泌,并可促进HaCaT细胞凋亡,抑制细胞增殖.