目的:通过脂多糖（LPS）建立脓毒症相关性脑病（SAE）体外模型，探讨人髓样分化蛋白2（MD2）在LPS导致神经元死亡过程中的作用及内在机制。方法:选择健康C57BL/6J孕鼠，孕期14~18 d，取胎鼠脑皮质组织，用0（空白对照组）、1、5和10 g/L的LPS刺激神经元后24 h，检测乳酸脱氢酶（LDH）释放量，观察神经元死亡情况，并用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎症因子白细胞介素（IL-6、IL-1β）水平，以确定建立SAE体外神经炎症模型的最佳LPS剂量。将细胞分为空白对照组和LPS组，用原位末端缺刻标记法（TUNEL）染色检测细胞凋亡情况，用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测相关蛋白标志物活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）表达、坏死性凋亡相关蛋白神经元受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3（RIPK3）及磷酸化RIPK3（p-RIPK3）水平，用免疫荧光化学染色检测p-RIPK3和微管相关蛋白2（MAP2）的表达，以评估细胞死亡类型及神经元死亡程度；用Western blotting法检测MD2表达，免疫荧光化学染色观察p-RIPK3及MD2在神经元中的表达和分布，以评估MD2是否参与炎症反应促进神经元死亡。此外，将细胞分为空白对照组、LPS组和MD2干扰肽组（LPS+TC组），检测IL-6、IL-1β、LDH水平，评估干扰MD2能否减轻LPS诱导的神经炎症。结果:10 g/L LPS可诱导明显的神经元死亡，该浓度刺激神经元24 h后LDH释放量较空白对照组明显增加（相对释放量：1.45±0.04比1.00±0.00， P<0.01），神经元发生凋亡及坏死性凋亡，炎症因子IL-6、IL-1β水平显著增加〔IL-6（相对水平）：1.94±0.04比1.00±0.00，IL-1β（相对水平）：1.53±0.09比1.00±0.00，均 P<0.01〕。与空白对照组比较，LPS组TUNEL检测细胞凋亡明显增多，活化caspase-3表达明显增加（活化caspase-3/GAPDH：1.55±0.10比1.00±0.00， P<0.01），p-RIPK3/RIPK3比值明显升高（相对值：1.54±0.06比1.00±0.00， P<0.05），神经元周围p-RIPK3表达显著增多，提示脓毒症环境下神经元发生显著凋亡及坏死性凋亡。同时，与空白对照组比较，LPS组MD2表达量显著增加（MD2/GAPDH：1.91±0.07比1.00±0.00， P<0.01），神经元周围MD2表达显著增多，提示LPS诱导的MD2上调可能在脓毒症神经炎症及诱导神经元死亡中发挥关键作用。此外，与LPS组比较，MD2干扰肽能够降低炎症因子IL-6、IL-1β的表达水平〔IL-6（相对水平）：1.16±0.08比1.94±0.04，IL-1β（相对水平）：1.15±0.05比1.75±0.09，均 P<0.01〕，减少LDH释放（相对释放量：1.09±0.01比1.44±0.04， P<0.05）。 结论:LPS刺激神经元通过MD2诱导神经元炎症反应，最终导致神经元发生凋亡和坏死性凋亡；干扰MD2功能可减轻炎症，抑制神经元死亡。

肌萎缩侧索硬化（amyotrophic lateral sclerosis, ALS）是一种同时累及大脑锥体细胞、脑干运动细胞核、脊髓前角细胞和锥体束的神经系统变性疾病，早期诊断非常困难，目前尚无特效治疗，预后较差，平均寿命3~5年。研究和发现ALS在早期诊断中特异性的生物标志物，对于缩短诊断延迟时间、探讨和阐明发病机制、监测疾病进展和判断预后非常重要。近年的研究表明，神经丝蛋白（neurofilament）在上述方面具有重要的作用，是目前认为最具临床价值和应用前景的ALS生物标志物。因此，本文对神经丝蛋白与ALS的有关研究进行了综述。

目的:探讨以不宁腿综合征（RLS）起病的散发型克雅病（sCJD）的临床特点及辅助检查结果。方法:对四川绵阳四〇四医院2019年10月收治的sCJD患者1例的临床特征和辅助检查结果结合相关文献进行分析。结果:患者59岁，女性，汉族，慢性起病，以左下肢不宁腿样表现18 d首诊于骨科，治疗后症状无改善；20 d后转入神经内科，患者日常生活、活动无任何影响，头颅MRI、脑电图、脑脊液（CSF）常规和生化均阴性；5 d后出现左侧轻微共济失调，随后快速进展，先后出现右侧共济失调，左下肢痉挛内收，不自主运动，肌阵挛，认知下降，无动缄默，反复高热，反复复杂部分癫痫发作；2周后复查头颅MRI见扣带回、额叶皮质、右侧岛叶皮质DWI高信号，小脑萎缩，脑电图三相波；4周后CSF14-3-3蛋白阳性，朊蛋白基因（PRNP）无相关遗传突变，从起病至死亡约8个月。结论:sCJD为朊蛋白病的一种常见亚型，以RLS起病后病情可稳定1个月余，早期临床和辅助检查无任何特异性，多巴丝肼、营养神经治疗均无效，随后病情快速进展，复查头颅MRI及脑电图可发现线索，CSF14-3-3蛋白可辅助临床诊断。

目的 基于网络药理学方法探讨痹祺胶囊的配伍规律,阐释其治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的机制内涵.方法 按照痹祺胶囊及其单味药材的功效将其分为益气养血组、活血通络组、抗炎镇痛组,并分别选取药材中的特征成分,依据反向药效团匹配方法和TCMSP、Uniprot等数据库预测化合物作用靶点,与通过OMIM、DisGeNet、GeneCards等数据库收集RA相关靶点相互交互,将交互靶点借助Omicsbean、STRING等数据库平台对获得靶点进行基因本体功能和京都基因与基因组百科全书通路富集分析,利用Cytoscape软件构建"药材-化合物-靶点-通路-功效"网络.结果 通过网络药理学预测,得到益气养血组11个成分的67个潜在靶点,蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络分析发现白蛋白、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、造血前列腺素合成酶 D、丝裂原活化蛋白激酶 1(mitogen-activated protein kinase1,MAPK1)、雄激素受体、β2肾上腺素能受体等可能为关键核心靶点,主要通过神经营养信号通路、造血细胞谱系、破骨细胞分化、MAPK信号通路等40条相关通路,通过调控骨髓造血微环境、骨形成与代谢平衡、免疫调节等生物过程发挥益气养血作用;得到活血通络组20个成分的117个潜在靶点,进一步PPI网络分析发现蛋白激酶B1(protein kinase B1,AKT1)、基质金属蛋白酶 9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)、肿瘤蛋白 p53(tumor protein p53,TP53)、纤连蛋白、信号转导子和转录激活子3、C-C基序趋化因子(C-Cmotifchemokine2,CCL2)、表皮生长因子受体、细胞间黏附分子1、IL17A等可能为核心靶点,并通过血小板激活、VEGF信号通路、IL-17信号通路等77条相关通路调控凝血和纤溶系统、血管增生、抗炎镇痛等生物过程发挥活血通络、止痛的作用;得到抗炎镇痛组8个成分的180个潜在靶点,进一步PPI网络分析发现TNF、AKT1、IL-6、TP53、IL1B、VEGFA、前列腺素G/H合成酶2、CCL4、CCL3等可能为潜在核心靶点,通过IL-17信号通路、T和B细胞受体信号通路、血清素能突触、趋化因子信号通路、核因子-κB信号通路、花生四烯酸代谢等77条通路干预中枢和外周敏化、抗原呈递、免疫细胞激活、炎症反应等生物过程发挥抗炎镇痛的作用.结论 痹祺胶囊中党参、茯苓、白术组成的益气养血组主要在造血系统、免疫系统和骨形成和代谢等方面发挥"固本"的作用,丹参、三七、川芎、牛膝、地龙组成的活血通络组主要在血液系统、炎症反应等方面发挥"活血化瘀"的作用,马钱子、甘草组成的抗炎镇痛组主要在免疫调控、炎症反应、中枢和外周镇痛等方面发挥"除湿止痛"的作用,各组之间的靶点和通路互有交叉,又各有侧重,充分体现了痹祺胶囊在治疗RA中多成分、多靶点、多通路的特点,为其配伍理论的深入研究奠定了基础.

目的 基于体外实验及网络药理学,初步探讨二肽激肽酶4(DPP-4)抑制剂对鱼藤酮(ROT)诱导神经细胞帕金森病(PD)的干预作用及其相关机制.方法 神经细胞株PC-12分为对照组、模型组、模型+西格列汀组、模型+利格列汀组、模型+维格列汀组,除对照组外各组均使用ROT建立PD体外模型,模型+西格列汀组、模型+利格列汀组、模型+维格列汀组在使用ROT建模的同时在培养基中分别加入DPP-4抑制剂西格列汀、利格列汀、维格列汀.倒置显微镜观察各组细胞形态学变化,CCK-8法观察各组细胞增殖能力.从Swiss Target Prediction、SEA等数据库分别获取DPP-4抑制剂西格列汀、利格列汀、维格列汀、沙格列汀及阿格列汀的药物靶点,通过DisGeNet、OMIM及GeneCards等数据库获取PD相关的疾病靶点,利用韦恩图将药物与疾病靶点取交集得到DPP-4抑制剂作用于PD的相关靶点.通过String数据库构建蛋白—蛋白相互作用(PPI)网络,选取基因满足度(Degree)值>平均值的基因作为DPP-4抑制剂对PD产生作用的关键靶点,将DPP-4抑制剂作用于PD的关键靶点基因输入到DAVID数据库进行GO基因功能和KEGG作用通路分析.将DPP-4抑制剂治疗PD的关键靶点以及KEGG信号通路导入到Cytoscape 3.7.2软件构建药物—疾病—靶点—通路网络,筛选与PD相关信号通路关系最为密切的靶点作为DPP-4抑制剂治疗PD的核心靶点,采用CB-Dock 2对接平台进行核心靶点的分子对接验证.结果 对照组细胞形态完整,增长状态良好,细胞呈多角形,细胞之间类似突触样连接,且突触较长;模型组细胞密度减少,细胞皱缩,细胞与细胞间的突触样连接断裂,且观察到较多圆形的损伤细胞;模型+西格列汀组、模型+利格列汀组、模型+维格列汀组较模型组细胞形态得到改善,恢复到正常状态下的细长、多角形态.模型组细胞存活率低于对照组、模型+西格列汀组、模型+利格列汀组、模型+维格列汀组(P均<0.05).共收集西格列汀药物靶点486个、利格列汀药物靶点665个、维格列汀药物靶点524个、沙格列汀药物靶点507个、阿格列汀药物靶点408个,PD疾病相关靶点1121个;将DPP-4抑制剂靶点与PD疾病相关靶点取交集共得到DPP-4抑制剂作用于PD的36个相关靶点.PPI网络显示,DPP-4抑制剂作用于PD相关靶点中Degree值>平均值的关键靶点共有16个,分别为ALB、IGF1、STAT3、CASP3、EGFR、ESR1、MAPK14、PPARG、MAPK1、HMOX1、NOS3、REN、MMP3、IL2、AR、IGF1R.GO分析结果显示,DPP-4抑制剂作用于PD的关键靶点共同涉及的生物过程主要包括信号转导、细胞迁移的正向调控和细胞凋亡的负向调控等,细胞组分主要包括细胞质、细胞质膜、细胞核等,分子功能主要包括酶结合、蛋白质结合、蛋白丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸激酶活性等.KEGG通路富集分析共得到20条信号通路,与PD较为相关的信号通路为PI3K-AKT信号通路、FoxO信号通路、MAPK信号通路.药物—疾病—靶点—通路网络图显示,在PI3K-AKT、FoxO及MAPK信号通路中均有富集的靶点为IGF1、EGFR、IGF1R及MAPK1.分子对接结果显示,5种DPP-4抑制剂均与PD相关核心靶点蛋白有较好的结合,其结合能均小于-5.0 kcal/mol.结论 DPP-4抑制剂对PD体外模型细胞具有积极地干预作用,其可能通过IGF1、EGFR、IGF1R及MAPK1等核心靶点作用于PI3K-AKT、FoxO、MAPK等信号通路来发挥作用.

[目的]探讨Cofilin-1基因在人胶质瘤细胞侵袭、迁移及细胞粘附中的分子机制.[方法]采用 RNAi技术干扰人胶质瘤细胞系 SHG-44细胞中 Cofilin-1基因的表达.Real-time PCR及 Western blot检测验证 Cofi-lin-1干扰效果;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;粘附作用实验检测细胞粘附能力;Western blot检测细胞中 ICAM-1及胞质和胞核中 NF-κB p65蛋白水平的表达.[结果]RNAi干扰可降低SHG-44细胞中 Cofilin-1的表达水平;Cofilin-1表达干扰抑制 SHG-44细胞迁移、侵袭及粘附能力,降低细胞中ICAM-1的表达,下调胞核中 NF-κB p65的表达水平.[结论]干扰Cofilin-1表达能够抑制胶质瘤细胞的迁移、侵袭及粘附,可能通过调节 NF-κB通路活化发挥作用,Cofilin-1可能成为胶质瘤的潜在治疗靶点.

目的 探讨老年阿尔茨海默病(AD)患者尿液中神经丝蛋白含量检测的临床意义.方法 AD组:门诊以及住院诊断为AD患者66例(AD组),其中男性60例,女性6例;年龄范围75～96岁,年龄(87.27±4.95)岁;对照组:智能正常老人85名,其中男性72名,女性13名;年龄范围74～98岁,年龄(86.93±5.21)岁,所有受试者进行认知功能测评,包括简易智能状态检查量表(MMSE)、临床痴呆评定量表(CDR),Hachinski缺血指数量表(HIS).根据量表评分将AD组分为轻、中、重组.采集尿液标本进行尿液中神经丝蛋白(AD7c-NTP)含量检测.结果 (1)AD组尿AD7c-NTP阳性明显高于对照组,两组阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.001);(2)两组受试者年龄、性别、教育背景与AD7c-NTP含量的相关性分析(Pearson相关分析)显示,两组尿AD7c-NTP含量与以上诸因素均无明显相关性;MMSE分数与AD7c-NTP含量呈负相关,CDR分数与AD7c-NTP含量呈正相关.(3)轻度AD组与中、重度AD组尿AD7c-NTP含量比较差异有统计学意义(F=88.756,P<0.001),提示尿中的AD7c-NTP含量随疾病严重程度增加而上升.结论 通过对老年AD患者尿液中AD7c-NTP含量检测,可以对AD的诊断提供帮助,并可能与病情严重程度有一定的关系.

目的 评价姜黄素对大鼠心脏停搏复苏后脑损伤时海马细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)-蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号通路的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠72只,6～8周龄,体重200～300 g,采用随机数字表法分为3组(n=24):假手术组(Sham组)、脑损伤组(BI组)和姜黄素组(CUR组).BI组和CUR组采用窒息法建立大鼠心脏停搏复苏后脑损伤模型.CUR组于造模前1h时静脉注射姜黄素200 mg/kg;Sham组和BI组给予等容量10％二甲基亚砜.造模后6h时处死大鼠,取脑组织,测定湿重/干重(W/D)比值;采用ELISA法测定海马组织IL-6和IL-8的含量;采用RT-PCR法检测海马组织ERK1/2和Akt的mRNA表达水平;采用Western blot法检测海马组织磷酸化ERK1/2 (p-ERK1/2)和磷酸化Akt (p-Akt)的表达水平;光镜下观察海马神经元病理学结果,电镜下观察海马神经元超微结构.结果 与Sham组比较,BI组脑组织W/D比值、海马组织ERK1/2和Akt的mRNA表达水平、p-ERK1/2和p-Akt的表达水平、IL-6和IL-8的含量升高(P＜0.05);与BI组比较,CUR组脑组织W/D比值、海马组织ERK1/2和Akt的mRNA表达水平、p-ERK 1/2和p-Akt的表达水平、IL-6和IL-8的含量降低(P＜0.05),海马病理学损伤减轻.结论 姜黄素减轻大鼠心脏停搏复苏后脑损伤的机制可能与抑制ERK1/2-Akt信号通路激活有关.

肌动蛋白结合蛋白2(PFN2)基因是进化上高度保守的一个基因,其编码的蛋白是一种常见的肌动蛋白结合蛋白单体,在细胞的运动、细胞的分裂、神经元的分化和突触的可塑性中起着重要的作用.近年来,PFN2与多种肿瘤的相关性得到了广泛研究,目前越来越多的研究证实PFN2基因参与了乳腺癌、食管鳞癌、肺癌、头颈部鳞癌、结直肠癌等恶性肿瘤的发生、发展、侵袭和转移的过程.该文总结PFN2在多种肿瘤中的表达情况和临床意义,并归纳其参与肿瘤发生、发展的相关机制,揭示其在肿瘤治疗中的潜在价值.

神经丝轻链蛋白(NfL)已被确定为许多中枢神经系统疾病中轴突损伤的生物标志物,近年来关于NfL在周围神经病中的应用价值也逐渐引起关注.本研究回顾了血清NfL(sNfL)与各种免疫介导的周围神经病〔吉兰巴雷综合征(GBS)、慢性炎性脱髓鞘性神经根神经病(CIDP)等〕、遗传性周围神经病、药物相关性周围神经病、糖尿病周围神经病等轴突损伤的动态变化之间的关系,综合分析的结论为:sNfL定量可作为一个非常有潜力的生物标志物,监测疾病活动,评估疾病短期预后、长期预后,还可作为未来的临床试验和监测治疗反应的指标.