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帕宁Ⅰ号方对帕金森病小鼠多巴胺能神经元氧化应激介导的铁死亡途径的影响
编辑人员丨5天前
目的 研究帕宁Ⅰ号方对帕金森病(PD)小鼠多巴胺能神经元氧化应激介导的铁死亡途径的影响,探讨帕宁Ⅰ号方治疗PD的作用机制.方法 SPF级C57/BL6小鼠60只,腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导PD模型.将50只造模成功的小鼠随机分为模型组[氯化钠溶液(9 g/L)]、美多芭组(97.5 mg/kg多巴丝肼溶液)及中药低、中、高剂量组(9.05 g/kg、18.10 g/kg、36.20 g/kg帕宁Ⅰ号方),每组10只;另设正常组10只.小鼠灌胃给予相应干预,连续干预14 d.采用爬杆实验、步态实验、旷场实验分析评价小鼠运动功能.采用尼氏染色法检测小鼠黑质神经元活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠纹状体多巴胺(DA)、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、3-甲氧基4-羟基苯乙酸(HVA)含量,免疫组织化学法检测小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)表达,普鲁士蓝染色法检测小鼠黑质Fe3+沉积情况,比色法检测小鼠黑质Fe2+含量、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,流式细胞术检测小鼠多巴胺能神经元活性氧(ROS)水平,Western blot法检测小鼠黑质酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质运载蛋白7家族成员11(SLC7A11)蛋白表达.结果 ①运动功能结果显示,与正常组相比,模型组小鼠步长缩短,行动总距离缩短,爬杆时间延长(P<0.01);与模型组相比,各药物组运动功能障碍随灌胃次数的增加而逐渐减轻,到灌胃后第12天时各项运动功能改善最为明显(P<0.05).②尼氏染色结果显示,与正常组相比,模型组小鼠黑质神经元平均光密度表达减少(P<0.01);与模型组相比,中药中、高剂量组与美多芭组神经元平均光密度表达增加(P<0.01,P<0.001).③ELISA结果显示,与正常组相比,模型组小鼠纹状体DA、DOPAC、HVA含量减少(P<0.001);与模型组相比,美多芭组与中药高剂量组DA含量增加(P<0.001),美多芭组与中药中、高剂量组DOPAC、HVA含量增加(P<0.05,P<0.001).④免疫组织化学法结果显示,与正常组相比,模型组小鼠黑质TH表达减少(P<0.001);与模型组相比,美多芭组与中药高剂量组TH表达增多(P<0.01,P<0.001).⑤普鲁士蓝染色显示,与正常组相比,模型组小鼠黑质铁沉积增多,铁死亡增加;与模型组相比,各药物组铁沉积减少,铁死亡减轻.⑥比色法结果显示,与正常组相比,模型组Fe2+含量增加(P<0.001),CAT、GSH-PX、SOD活性降低(P<0.001),GSH水平降低(P<0.001),MDA水平升高(P<0.01);与模型组相比,美多芭组及中药中、高剂量组Fe2+含量减少(P<0.05,P<0.001)、GSH-PX活性与GSH水平升高(P<0.05,P<0.001),美多芭组CAT活性升高(P<0.05)、MDA水平降低(P<0.05),美多芭组与中药高剂量组SOD活性升高(P<0.05).⑦流式细胞术结果显示,与正常组相比,模型组小鼠黑质ROS水平升高(P<0.001);与模型组相比,美多芭组与中药高剂量组ROS水平降低(P<0.01).⑧Western blot结果显示,与正常组相比,模型组小鼠黑质ACSL4蛋白表达升高(P<0.001),GPX4、SLC7A11蛋白表达降低(P<0.001);与模型组相比,各药物组ACSL4蛋白表达降低(P<0.05,P<0.001),GPX4、SLC7A11蛋白表达升高(P<0.01,P<0.001).结论 帕宁Ⅰ号方可减轻MPTP诱导的PD小鼠运动功能障碍,具有神经保护作用,其机制可能与调节铁代谢、改善氧化应激、抑制多巴胺能神经元铁死亡有关.
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编辑人员丨5天前
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新型冠状病毒相关急性脑病22例临床及短期预后特征
编辑人员丨5天前
目的:总结新型冠状病毒感染相关急性脑病的临床及短期预后特征。方法:回顾性队列研究。收集2022年12月至2023年1月于首都医科大学附属北京儿童医院神经内科住院的22例新型冠状病毒相关急性脑病患儿的临床资料、影像学资料及短期预后。按照可能的临床病理机制及影像学特征分为细胞因子风暴组、兴奋毒性组及不能分类的脑病组,对各组患儿的临床特点进行描述性分析。根据末次随访儿童校正版Rankin量表(mRS)评分,分为预后良好组(≤2分)和预后不良组(>2分),两组比较采用Mann-Whitney U秩和检验或Fisher确切概率法。 结果:22例患儿中男10例、女12例,起病年龄为3.3(1.7,8.6)岁。11例(50%)有异常既往史,4例有异常家族史。患儿均以发热起病,21例(95%)在发热24 h内出现神经系统症状。首发神经系统症状中抽搐17例,意识障碍5例。病程中脑病表现22例,抽搐20例,言语障碍14例,不自主运动8例,共济失调3例。细胞因子风暴组3例均为急性坏死性脑病(ANE);兴奋毒性组9例,8例为急性脑病伴双相发作及后期弥散减低(AESD),1例为偏侧惊厥偏瘫综合征;不能分类的脑病组10例。天冬氨酸转氨酶升高9例,丙氨酸转氨酶升高4例,血糖升高3例,D二聚体升高3例;5例检测血清铁蛋白3例升高,9例行血和脑脊液神经丝轻链蛋白检测5例升高,18例检测血细胞因子7例升高,8例检测脑脊液细胞因子7例升高。18例头颅影像学异常,3例ANE均显示对称性、多灶性病灶,8例AESD均存在“亮树征”。22例患儿急性期均给予对症治疗及免疫治疗(免疫球蛋白或糖皮质激素),其中1例ANE予托珠单抗治疗。22例患儿随访50(43,53)d,预后良好组10例,预后不良组12例,两组在流行病学、临床表现、生化指标、启动免疫治疗的病程等方面差异均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:新型冠状病毒也是引起急性脑病的重要病原体,AESD和ANE为常见急性脑病综合征,早期甄别发热、抽搐、意识障碍的患儿并积极治疗是改善其预后的关键。
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编辑人员丨5天前
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鼠神经生长因子对大鼠创伤性脑损伤合并海水淹溺后脑组织β-APP和NF-L表达的影响
编辑人员丨5天前
目的:观察鼠神经生长因子(mouse nerve growth factor,mNGF)对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)合并海水淹溺(seawater drowning,SWD)大鼠脑组织含水量、海马组织 β-淀粉样前体蛋白( β-amyloid precursor protein,β-APP)及神经丝蛋白轻链多肽(neurofilament light polypeptide,NF-L)表达的影响,评估其干预效果。 方法:60只SD大鼠随机分为假手术(Sham)组( n=12)、TBI+SWD组( n=24)、mNGF组( n=24)。采用Marmarou颅脑致伤法及气管内泵入海水法建立大鼠模型。mNGF组于伤后立即腹腔注射1 ml mNGF(3 μg/kg),Sham组、TBI+SWD组腹腔注射等量生理盐水。采用干湿质量法、苏木精-伊红(HE)染色法和免疫组织化学(IHC)染色法分别检测大鼠脑组织含水量及海马组织病理变化、β-APP和NF-L的表达。 结果:mNGF组与TBI+SWD组脑组织含水量相似,差异无统计学意义( P>0.05);与TBI+SWD组比较,mNGF组海马组织中β-APP及NF-L表达减弱。 结论:mNGF可减弱β-APP及NF-L表达,对TBI+SWD大鼠神经细胞具有保护作用。
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编辑人员丨5天前
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基于丝裂原活化蛋白激酶信号通路灯盏细辛对大鼠急性高眼压的缓解及视网膜神经节细胞的保护作用
编辑人员丨5天前
目的:观察灯盏细辛(EBHM)调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对大鼠急性高眼压的影响及视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠60只,采用随机数字表法分为对照组、模型组、EBHM低剂量组(A组)、EBHM中剂量组(B组)、EBHM高剂量组(C组),每组均为12只;以左眼为实验眼。模型组、A组、B组、C组大鼠通过前房加压灌注生理盐水构建急性高眼压模型;对照组仅给予全身麻醉。建模后2~ 30 d,对照组、模型组大鼠灌胃生理盐水3 ml,1次/d;A组、B组、C组大鼠分别给予0.30、0.45、0.60 g/100 g EBHM灌胃,1次/d。建模前以及建模后1、14、30 d测量大鼠眼压,并统计高眼压模型比例。建模后30 d,苏木精-伊红(HE)染色观察视网膜组织病理变化;免疫荧光染色检测RGC数量变化;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组大鼠视网膜中p38MAPK、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3)mRNA相对表达量;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠视网膜中p38MAPK、磷酸化p38MAPK (p-p38MAPK)、Caspase-3蛋白相对表达量。多样本间比较采用单因素方差分析;两两样本间比较采用 SNK-q检验。 结果:建模后1 d,对照组大鼠均未出现急性高眼压,其余各组均建模成功。与模型组比较,B组、C组建模后14 d急性高眼压率较低,差异有统计学意义( χ2=98.701, P<0.05);A组、B组、C组建模后30 d急性高眼压率均为0。A组、B组、C组建模后14、30 d之间急性高眼压率比较,差异均无统计学意义( P>0.05)。HE染色结果显示,对照组大鼠视网膜结构完整,各层清晰可见;RGC计数未见异常,形态饱满圆润。模型组大鼠视网膜明显变薄;RGC数量大量减少,形态空泡化,排列稀疏。A组、B组、C组大鼠视网膜变厚,RGC数量增多,其中C组视网膜结构恢复程度更好。免疫荧光染色结果显示,A组、B组、C组大鼠RGC计数较模型组升高,差异有统计学意义( F=297.514, P<0.05 );组间两两比较,A组低于B组、C组( q=2.842、5.263),B组低于C组( q=2.457 ),差异均有统计学意义( P<0.05 )。RT-qPCR、Western blot检测结果显示,与模型组比较,A组、B组、C组大鼠视网膜中Caspase-3 mRNA ( F=267.912)、蛋白( F=692.279)相对表达量及p-p38MAPK蛋白相对表达量( F=150.061)均降低,差异均有统计学意义( P<0.05 )。组间两两比较,C组大鼠视网膜中Caspase-3 mRNA ( q=6.977、15.642 )、蛋白( q=6.997、15.642)相对表达量及p-p38MAPK蛋白( q=12.443、24.358)相对表达量低于A组、B组,B组低于A组( q=11.678、12.471、10.204),差异均有统计学意义( P<0.05 )。 结论:EBHM可以显著降低急性高眼压模型大鼠眼压,提高RGC计数,减轻视网膜损伤;其调控机制可能与MAPK通路有关。
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编辑人员丨5天前
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酪氨酸激酶结合蛋白调节磷酯酰肌醇-3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶信号通路参与神经炎性反应和自噬的影响
编辑人员丨5天前
目的:探究酪氨酸激酶结合蛋白(TYROBP)通过磷酯酰肌醇-3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)信号通路神经炎症及自噬过程的影响。方法:15月龄的C57BL/6J、 TYROBP-/-、淀粉样前体蛋白/早老素1( APP/ PS1)转基因雄性小鼠各10只,分为3组。八臂迷宫实验和新物体识别实验检测动物的学习记忆能力;免疫荧光检测小胶质细胞、NOD样受体家族3(NLRP3)炎症小体的活化情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NLRP3、裂解的半胱氨酸蛋白酶1(cleaved Caspase-1)、选择性自噬接头蛋白1(SQSTM1)、微管相关蛋白轻链3B Ⅱ(LC3B Ⅱ)、TYROBP、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白的表达水平。 结果:与同月龄C57BL/6J小鼠相比, APP/ PS1小鼠学习记忆能力显著降低(均 P<0.05);脑组织NLRP3炎症小体活化增加( P<0.05),小胶质细胞呈激活状态,炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA和蛋白表达水平均增加(均 P<0.05);自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、SQSTM1表达增加(均 P<0.05);TYROBP、p-PI3K、p-AKT表达增加(均 P<0.05)。与同月龄C57BL/6J小鼠相比, TYROBP-/-小鼠炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的蛋白表达下降(均 P<0.05),LC3B Ⅱ、SQSTM1、p-PI3K、p-AKT表达减少(均 P<0.05)。 结论:TYROBP可能通过激活PI3K/AKT信号通路促进炎症反应、抑制自噬过程,参与AD的发生发展。
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编辑人员丨5天前
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HIF-1α-糖酵解通路在丙泊酚减轻急性睡眠剥夺老龄大鼠脑损伤中的作用
编辑人员丨5天前
目的:评价缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)-糖酵解通路在丙泊酚减轻急性睡眠剥夺老龄大鼠脑损伤中的作用。方法:SPF级健康雄性SD大鼠48只,20~22月龄,体质量500~600 g,采用随机数字表法分为4组( n=12):对照组(Con组)、睡眠剥夺组(SD组)、睡眠剥夺+丙泊酚组(SP组)和睡眠剥夺+丙泊酚+二甲基乙二酰氨基乙酸(DMOG)组(SPD组)。采用睡眠剥夺仪建立睡眠剥夺模型。于睡眠剥夺前20和3 h时,SP组腹腔注射1%丙泊酚0.04 mg/g,SPD组腹腔注射1%丙泊酚0.04 mg/g和HIF-1α特异性激动剂DMOG 0.05 mg/g。采用条件恐惧实验、新旧物体识别实验评估大鼠记忆能力。行为学实验结束后,取血液和脑组织标本,采用伊文思蓝(EB)染色法检测血脑屏障通透性,HE染色后观察海马组织病理学变化,TUNEL染色法确定海马神经元凋亡率,ELISA法检测血清神经丝轻链蛋白(NfL)、NSE浓度以及海马组织ROS、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、乳酸和丙酮酸含量,计算乳酸/丙酮酸比值;采用Western blot法检测海马HIF-1α、丙酮酸激酶M2 (PKM2)、己糖激酶2(HK2)、离子钙结合适配器分子1(IBA1)以及裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)的表达。 结果:与Con组相比,SD组和SPD组僵直时间百分比和识别指数降低,血清NSE和NfL浓度、脑组织EB含量、海马组织ROS、IL-6、iNOS含量和乳酸/丙酮酸比值升高,HIF-1α、PKM2、HK2、IBA1、cleaved caspase-3表达上调,神经元凋亡率升高( P<0.05),海马区神经细胞发生病理学损伤。与SD组相比,SP组僵直时间百分比和识别指数升高,血清NSE和NfL浓度、脑组织EB含量、海马组织ROS、IL-6、iNOS含量和乳酸/丙酮酸比值降低,HIF-1α、PKM2、HK2、IBA1、cleaved caspase-3表达下调,神经元凋亡率降低( P<0.05),海马神经细胞病理学损伤减轻。与SP组相比,SPD组僵直时间百分比和识别指数降低,血清NSE和NfL浓度、脑组织EB含量、海马组织ROS、IL-6及iNOS含量、乳酸/丙酮酸比值升高,HIF-1α、PKM2、HK2、IBA1、cleaved caspase-3表达上调,神经元凋亡率升高( P<0.05),海马区神经细胞病理学损伤加重。 结论:丙泊酚可减轻急性睡眠剥夺诱导的老龄大鼠脑损伤,其机制可能与抑制HIF-1α-糖酵解通路,减轻神经炎症反应有关。
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编辑人员丨5天前
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血浆神经丝蛋白轻链在PD、多系统萎缩-帕金森亚型诊断和鉴别诊断中的作用研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨血浆神经丝蛋白轻链(NfL)在PD、多系统萎缩-帕金森亚型(MSA-P)诊断和鉴别诊断中的作用。方法:选择河南省人民医院神经内科自2019年6月至2021年12月收治的23例MSA-P患者作为MSA-P组,40例PD患者作为PD组。选择该院同期体检的27例健康对照者作为健康对照组。采用单分子免疫阵列法检测各组受试者血浆NfL浓度,比较各组受试者临床资料和血浆NfL浓度的差异,采用相关性分析评价PD、MSA-P患者的血浆NfL浓度与临床特征的关系。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆NfL浓度对PD、MSA-P的诊断和鉴别诊断价值。结果:与MSA-P组比较,PD组患者的病程较长,统一帕金森病评定量表(UPDRS)-Ⅱ评分、自主神经症状量表(SCOPA-AUT)评分较低,差异均有统计学意义( P<0.05)。MSA-P组、PD组、健康对照组受试者血浆NfL浓度依次降低[分别为(37.69±10.47) pg/mL、(17.85±4.23) pg/mL、(12.86±3.14) pg/mL],差异均有统计学意义( P<0.05)。Pearson相关性分析显示MSA-P患者的血浆NfL浓度与年龄呈正相关关系( r=0.442, P=0.035);偏相关性分析显示MSA-P患者的血浆NfL浓度与UPDRS-Ⅰ评分、UPDRS-Ⅲ评分呈正相关关系( P<0.05),与病程、Hoehn-Year分期(H-Y分期)、UPDRS-Ⅱ评分、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分、左旋多巴每日等效剂量(LEDD)、SCOPA-AUT评分无明显相关关系( P>0.05)。Pearson相关性分析显示PD患者的血浆NfL浓度与年龄呈正相关关系( r=0.342, P=0.031);偏相关性分析显示PD患者的血浆NfL浓度与H-Y分期、UPDRS-Ⅲ评分呈正相关关系( P<0.05),与MoCA评分呈负相关关系( P<0.05),与病程、UPDRS-Ⅰ评分、UPDRS-Ⅱ评分、LEDD、SCOPA-AUT评分无明显相关关系( P>0.05)。ROC分析显示血浆NfL诊断PD的曲线下面积(AUC)为0.814(95% CI:0.712~0.920, P<0.001),血浆NfL鉴别诊断PD和MSA-P的AUC为0.980(95% CI:0.954~1.000, P<0.001),血浆NfL诊断MSA-P的AUC为0.998(95% CI:0.993~1.000, P<0.001)。 结论:MSA-P患者的血浆NfL浓度与运动症状严重程度有关,PD患者的血浆NfL浓度与疾病严重程度及认知功能有关。血浆NfL可作为PD、MSA-P诊断和鉴别诊断的生物标志物。
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编辑人员丨5天前
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神经丝蛋白轻链与帕金森综合征相关研究进展
编辑人员丨5天前
神经丝蛋白轻链(NfL)是一种轴突损伤的敏感标志物,在多种神经系统疾病中升高。帕金森综合征是一类以肌强直、运动迟缓等为主要特征的临床症候群,包括帕金森病和帕金森叠加综合征(PPS)等变性疾病。早期鉴别诊断帕金森病和PPS是神经科的难点。近年研究表明NfL可能是辅助鉴别帕金森病和PPS的潜在生物标志物。文中综述了脑脊液和血液中的NfL在帕金森病和PPS中的研究进展及未来可能的研究方向。
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编辑人员丨5天前
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老年患者术前脑损伤程度与术后谵妄的关系:基于脑损伤标志物的潜在类别分析
编辑人员丨5天前
目的:采用基于脑损伤标志物的潜在类别分析,评价老年患者术前脑损伤程度与术后谵妄(POD)的关系。方法:选择拟行单侧全髋关节置换术老年患者131例,年龄65~84岁,BMI 18~28 kg/m 2,ASA分级Ⅰ-Ⅲ级。术前通过简易智力状态检查量表(MMSE)评估认知功能,麻醉前取动脉血样,采用ELISA法检测血浆脑源性神经营养因子(BDNF)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、前列腺素E2 (PGE2)、中枢神经特异性蛋白(S100β)、神经胶质酸性蛋白(GFAP)、神经纤维丝轻链(NFL)、基质金属蛋白酶(MMP9)、成纤维细胞生长因子23(FGF-23)、补体3(C3)、补体3a(C3a)、补体5a(C5a)及鸢尾素(Irisin)浓度。术后3 d内采用意识模糊评估法(CAM)评估POD发生情况,将患者分为POD组与非POD组。使用潜在类别分析,根据脑损伤标志物水平将患者分为不同损伤程度亚型,并用logistic多因素回归分析患者POD的独立危险因素。 结果:与非POD组比较,POD组患者血浆NFL、GFAP、S100β和PGE2浓度差异有统计学意义( P<0.05)。应用这4种脑损伤标记物进行潜在类别分析,将患者分为高脑损伤程度(91.51%)和低脑损伤程度(8.49%)。logistic多因素回归结果显示,脑损伤程度亚型( OR=8.31,95% CI 1.77~38.90, P=0.007)、年龄( OR=1.14,95% CI 1.03~1.24, P=0.007)及血浆Irisin浓度( OR=0.99,95% CI 0.98~0.99, P=0.027)是POD的独立危险因素。 结论:术前脑损伤程度较高是老年患者POD的独立危险因素。
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编辑人员丨5天前
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SPTLC2基因突变导致儿童型肌萎缩侧索硬化1例并文献复习
编辑人员丨5天前
目的:报道1例由 SPTLC2基因突变c.778G>A(p.Glu260Lys)导致的儿童型肌萎缩侧索硬化(ALS)患者的临床特点。 方法:在北京协和医院神经科ALS临床数据库登记的1 936例患者中,筛选携带 SPTLC2基因致病突变的患者,并收集先证者的临床资料、实验室检查、神经电生理检查及基因检测结果。 结果:经筛选得到1例携带 SPLTC2基因突变的患者,为9岁男性儿童,主因“进行性四肢无力4年余”于2022年12月收住北京协和医院神经科。体格检查发现患者舌肌明显萎缩,伴纤颤。四肢肌力下降,肌肉萎缩。双跟腱反射亢进,双踝阵挛阳性,双侧Babinski征阳性。全基因组测序结果提示 SPTLC2基因存在c.778G>A(p.Glu260Lys)错义突变,未检测到其他ALS相关基因致病突变。Sanger测序验证及家系验证结果显示,患儿父亲和母亲均未携带该突变,提示为新发突变。神经传导检查未见异常,针极肌电图提示广泛神经源性损害。脑脊液及血清神经丝轻链蛋白显著升高。予L-丝氨酸口服后患者症状仍进行性加重。 结论:SPTLC2基因突变可导致儿童型ALS,对其潜在致病机制的研究将有助于揭示ALS的又一潜在致病通路,提供新的治疗靶点。
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编辑人员丨5天前
