目的:建立一种稳定、灵敏的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测人血浆12种神经酰胺方法。方法:收集2021年10月至2022年10月在遵义医科大学及其各附属医院健康体检的438名表观健康人群，建立12种神经酰胺生物参考区间。采用氘代同位素作为内标，使用ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）色谱柱进行分离，流动相为水（含0.1%甲酸）和异丙醇：乙腈（1∶1，v/v，含0.1%甲酸），流速0.4 ml/min，梯度洗脱。使用Qlife Lab 9000 Plus三重四极杆质谱建立LC-MS/MS检测12种神经酰胺的方法。并从线性、定量下限、精密度、回收率和稳定性几个方面对该方法进行性能评价。结果:该方法通过了线性、定量下限、回收率、精密度、稳定性的性能评价。12种神经酰胺批内和批间精密度为1.3%~14.3%，正确度通过加标回收实验验证，回收率在91.9%~111.0%，最低定量下限范围为0.001~0.100 μmol/L，标准曲线显示出良好的线性关系（ r>0.990），稳定性实验显示12种神经酰胺在生物基质中及不同条件处理后规定时间内稳定。12种神经酰胺建立了各自相应的生物参考区间，分别为0.103~0.326 μmol/L［Cer（d18∶1/16∶0）］、0.018~0.098 μmol/L［Cer（d18∶1/18∶0）］、0.933~3.919 μmol/L［Cer（d18∶1/24∶0）］、0.243~1.072 μmol/L［Cer（d18∶1/24∶1）］、0.001~0.007 μmol/L［Cer（d18∶1/14∶0）］、0.022~0.095 μmol/L［Cer（d18∶1/20∶0）］、0.185~0.835 μmol/L［Cer（d18∶1/22∶0）］、0.003~0.022 μmol/L［Cer（d18∶0/16∶0）］、0.001~0.016 μmol/L［Cer（d18∶0/18∶0）］、0.017~0.156 μmol/L［Cer（d18∶0/24∶0）］、0.008~0.074 μmol/L［Cer（d18∶0/24∶1）］、0.106~0.721 μmol/L［LacCer（d18∶1/24∶1）］。 结论:本研究建立了可靠的检测人血浆12种神经酰胺的LC-MS/MS检测方法，适合于临床应用。

目的:评估流动注射-串联质谱法(FIA-MS/MS)应用于溶酶体贮积症(LSDs)筛查的可行性。方法:病例对照研究。使用含酸性β葡糖脑苷脂酶(ABG)、酸性鞘磷脂酶(ASM)、β半乳糖脑苷脂酶(GALC)、α-L-艾杜糖苷酸酶(IDUA)、α半乳糖苷酶A(GLA)和酸性α葡糖苷酶(GAA)6种酶的底物及化学结构与相应产物类似的同位素内标准品缓冲液孵育，经液液萃取，氮气吹干，复溶后串联质谱分析酶反应产物和内标，计算酶活性。评价精密度、准确度、回收率、稳定性和携带污染。使用2022年7月至2023年3月上海市儿童医院2 845份新生儿筛查样本和10例明确诊断的LSDs患儿样本进行临床验证。结果:6种低浓度酶活性检测值，批内变异系数(CV%)为4.650%～9.020%，批间CV%为6.990%～11.350%，高浓度酶活性检测值批内CV%为6.553%～8.690%，批间CV%为6.590%～12.850%；6个酶活性检测值与靶值的偏倚在－20.59%～20.45%；不同稀释浓度酶活性检测回收率为46.00%～136.67%，实测值与系列理论值间相关系数( R2)为0.986～0.997；稳定性评价6种酶活性差异均<15.00%；携带污染评价6种酶活性差异均<20.00%；6种酶活性在人群呈偏态分布，10例LSDs患儿酶活性明显低于切值，能有效检出相应疾病。 结论:FIA-MS/MS检测ABG、ASM、GALC、IDUA、GLA和GAA有较高的精确性和准确度，有临床应用价值，可作为戈谢病、尼曼-皮克病A/B、克拉伯病、黏多糖贮积症Ⅰ型、法布里病和糖原贮积症Ⅱ型的筛查技术。

目的 建立高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)法测定新生儿微量血浆中苯巴比妥(PHB)的浓度.方法 用有机溶剂沉淀蛋白进行前处理,以PHB-D5为内标,反相色谱柱,流动相:0.05％甲酸-1 mmoL·L-1乙酸铵-水(A)和甲醇(B),梯度洗脱,流速为0.5 mL·min-1,柱温为50℃,进样量为2μL.用负离子电喷雾离子源负,多反应监测(MRM)模式扫描.考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、残留和稀释效应、精密度与回收率、基质效应和稳定性.结果 血浆样品中PHB的线性方程式为y=109.38 x10-3x+19.57x10-3(r=0.999 6),PHB在1～75μg·mL-1线性关系良好,定量下限为1 μg·mL-1.批内和批间精密度相对标准偏差≤ 5.74％,准确度为91.29％～103.31％,提取回收率为102.83％～111.22％,稳定性良好,不受血浆基质的影响.结论 本方法快速、简便、灵敏且专属性强,适用于新生儿血浆中PHB的治疗药物监测和药代动力学-药效学研究.

目的 基于同位素稀释液相色谱-串联质谱(ID-LC-MS/MS)技术建立检测血清伏立康唑的候选参考方法.方法 以甲醇为沉淀剂,采用蛋白沉淀法(PPT)对样本进行前处理.以伏立康唑-2H3为内标,建立基于ID-LC-MS/MS的血清伏立康唑候选参考方法.评估所建立方法的线性、定量限(LOQ)、检测限(LOD)、准确度、精密度、基质效应、稳定性.结果 ID-LC-MS/MS测定血清伏立康唑的线性范围为0.2～16.0 μg·mL-1,定量限为0.08 μg·mL-1,检测限为0.016 μg·mL-1.加标回收率为97.26%～98.48%.批内变异系数(CV)<1%,批间CV<2%.相对基质效应为-1.87%～0.33%.样本分别经室温[(23±2)℃]放置4、8 h和-20℃反复冻融5次,经前处理后的样本在室温和自动进样器(8℃)分别放置4、8、12、24 h,回收率为95.63%～99.50%,检测结果稳定.相对扩展不确定度≤3.34%.结论 建立了基于ID-LC-MS/MS的血清伏立康唑候选参考方法,可用于该项目的检测标准化.

目的 建立同时测定微量血浆中美罗培南、利奈唑胺、伏立康唑和泊沙康唑4种抗菌药物浓度的高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法,并用于儿童患者治疗药物监测(TDM).方法 血浆样本经甲醇沉淀蛋白前处理,分别以美罗培南-d6、利奈唑胺-d3、伏立康唑-d3和泊沙康唑-d4作为内标,用EVO-C18色谱柱分离,流动相为水(含0.1％甲酸)和乙腈(含0.1％甲酸),梯度洗脱;流速为0.5 mL·min-1.质谱检测方式为电喷雾离子源正离子模式,多反应监测(MRM)扫描.结果 美罗培南浓度在0.5～64.0 μg·mL-1线性关系良好(r=0.999 2);利奈唑胺和伏立康唑浓度在0.2～25.6μg·mL-1线性关系良好(r=0.999 2,r=0.999 9);泊沙康唑浓度在0.1～12.8μg·mL-1线性关系良好(r=0.998 9).准确度、精密度、基质效应和稳定性均符合要求.本方法经过验证后成功应用于49例儿童患者的抗菌药治疗药物监测.结论 本方法操作简便、快速、灵敏度高,适用于人血浆中美罗培南、利奈唑胺、伏立康唑、泊沙康唑4种抗菌药物浓度的分析,可用于儿童患者临床治疗药物监测.

目的 建立电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)同时测定不同产地拐枣七中K、B、Ca、Na、Mg、Al、Zn、Fe、Mn和Se等10种微量元素的方法,并采用聚类分析和主成分分析进行综合质量评价.方法 样品加硝酸经微波消解后,采用内标法测定,选取同位素Ge、In作为内标,采用主成分分析和聚类热图分析对所有样品进行分析,阐明不同产地拐枣七中10种微量元素之间的差异与相关性,筛选出其主要特征元素.结果 检测方法的精密度、重复性、稳定性和回收率良好.18个不同产地的拐枣七中10种微量元素质量分数具有差异性,采用主成分分析后得出的K、Ca、Na、Mg、Al和Mn为主要特征的微量元素,聚类分析后可以分为三大类.结论 该方法操作简单、分析速度快、准确度高,可以用于拐枣七药材中10种微量元素的质量分数测定,同时为评价不同产地拐枣七的质量及开发利用提供参考.

目的 建立3种临床常用碳青霉烯类抗生素——厄他培南(ETP)、亚胺培南(IPM)、美罗培南(MEM)血药浓度检测的超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)法.方法 血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,以3种抗生素的稳定性同位素(ETP-D4、IPM-D4、MEM-D6)为内标,采用ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7 μm)色谱柱分离;流动相为98%乙腈+2%水+0.1%甲酸和98%水+2%乙腈+0.1%甲酸,梯度洗脱;流速为0.3 mL/min;柱温为40℃;采用正离子、多反应监测模式进行扫描分析.结果 该方法专属性良好,在ETP、IPM、MEM 0.2～200、0.1～100、0.1～100 μg/mL范围内线性良好(r2≥0.993),批内、批间精密度和准确度良好(RE均≤5.14%,RSD均≤11.15%),基质效应、提取回收率较一致(RSD≤12.99%).结论 本实验建立了一种可以同时定量ETP、IPM、MEM血药浓度的UPLC-MS/MS法,该方法样品前处理简单、检测时间短、所需样品量少,可满足临床需求.

目的 建立测定人血浆中盐酸贝尼地平浓度的超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS/MS)方法,并用于健康受试者的药代动力学研究.方法 人血浆样品经乙酸乙酯萃取预处理.色谱柱:Shim-pack XR-ODS Ⅲ(1.6 μm,2.0 mm × 50.0 mm),流动相:水(5 mmol·L-1醋酸铵)-乙腈,等度洗脱,流速:0.3 mL·min-1.三重四极杆质谱电喷雾离子源,多反应监测模式(MRM)正离子MRM扫描,盐酸贝尼地平-d5同位素作为内标.考察该方法的专属性、标准曲线、定量下线、精密度、回收率、稳定性和基质效应.结果 盐酸贝尼地平在0.01～15.00 ng·mL-1 线性关系良好(r＞0.999),提取回收率 78.21％～83.14％,精密度相对标准偏差≤6.42％,稳定性良好,无明显基质效应.6例健康受试者前后2次分别各口服盐酸贝尼地平1片(8 mg),平均T1/2、Tmax和Cmax分别为(4.57±2.92)h,(1.08±0.52)h 和(7.28±1.87)ng·mL-1.结论 该方法灵敏度高、分析时间短、准确度好、操作简单,可用于盐酸贝尼地平药代动力学及生物等效性研究.

目的 建立液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法同时检测人血浆中达沙替尼和甲氨蝶吟浓度,并用于费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病患儿的治疗药物监测.方法 分别以稳定同位素伊马替尼-D8和甲氨蝶吟-D3为内标,取10μL血浆样本经甲醇沉淀蛋白,采用Phenomenex Kinetex EVO C18(30 mm×2.1 mm,2.6 μm)色谱柱分离,流动相为水(含 0.05％甲酸)和乙腈,梯度洗脱;流速为0.5 mL·min-1,进样体积为1 μL.质谱分析条件:电喷雾离子源正离子模式,多反应监测(MRM)扫描分析,离子通道分别为m/z488.2 → 401.2(达沙替尼)和m/z 502.5 → 394.2(伊马替尼-D8);m/z455.1 → 308.2(甲氨蝶呤)和m/z458.1 →311.1(甲氨蝶呤-D3).结果 达沙替尼的线性范围在0.5～200 ng·mL-1(r＞0.9900),定量下限(LLOQ)为0.5 ng·mL-1;甲氨蝶吟的线性范围在5～2000 ng·mL-1(r＞0.9900),LLOQ为5ng·mL-1.达沙替尼和甲氨蝶呤的批内与批间精密度、准确度、提取回收率、基质效应、稳定性均符合方法学要求.结论 本方法操作简便、灵敏、准确,只需要微量血浆,适用于费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病患儿的治疗药物监测.

建立了LC-MS/MS法同时测定人血浆中福沙匹坦及其代谢物阿瑞匹坦,并应用于中国健康受试者的药动学研究.本法中血浆样品以乙腈沉淀蛋白处理,经Cortex C 18+色谱柱(50 mm×2.1 mm,2.7 μm)分离,以甲醇-10 mmol·L-1醋酸铵(含0.1 mmol·L-1EDTA)为流动相.采用电喷雾离子源(ESI源),以多反应监测负离子模式检测.以稳定同位素标记内标d4-福沙匹坦和d4-阿瑞匹坦分别作为福沙匹坦和阿瑞匹坦的内标,用于定量分析的离子反应分别为m/z 613.1→78.9(福沙匹坦)、m/z 617.0→78.9(d4-福沙匹坦)、m/z 533.2→275.1(阿瑞匹坦)和m/z 537.2→279.1 (d4-阿瑞匹坦).由于福沙匹坦为阿瑞匹坦的磷酸化前药,在血浆中快速降解,所以实验中采用碱性缓冲液处理血浆以确保其稳定.测定福沙匹坦标准曲线线性范围为15～6 000 ng·mL-1;测定阿瑞匹坦标准曲线线性范围为10～4 000 ng·mL-1.各待测物的日内、日间精密度和准确度均符合生物样品分析相关要求.该方法经验证后,成功应用于12名中国健康受试者静脉滴注150 mg福沙匹坦双葡甲胺后药动学研究.