目的 建立高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)法测定新生儿微量血浆中苯巴比妥(PHB)的浓度.方法 用有机溶剂沉淀蛋白进行前处理,以PHB-D5为内标,反相色谱柱,流动相:0.05％甲酸-1 mmoL·L-1乙酸铵-水(A)和甲醇(B),梯度洗脱,流速为0.5 mL·min-1,柱温为50℃,进样量为2μL.用负离子电喷雾离子源负,多反应监测(MRM)模式扫描.考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、残留和稀释效应、精密度与回收率、基质效应和稳定性.结果 血浆样品中PHB的线性方程式为y=109.38 x10-3x+19.57x10-3(r=0.999 6),PHB在1～75μg·mL-1线性关系良好,定量下限为1 μg·mL-1.批内和批间精密度相对标准偏差≤ 5.74％,准确度为91.29％～103.31％,提取回收率为102.83％～111.22％,稳定性良好,不受血浆基质的影响.结论 本方法快速、简便、灵敏且专属性强,适用于新生儿血浆中PHB的治疗药物监测和药代动力学-药效学研究.

目的:建立同位素稀释液相色谱串联质谱法（ID-LC/MS/MS）测定人血浆甲氧基去甲肾上腺素的候选参考方法，并对方法性能进行评价。采用该方法对室间质量评价计划样品进行定值，初步评价血浆甲氧基去甲肾上腺素的检测现状。方法:采用甲氧基去甲肾上腺素同位素标准溶液为内标，重量法进行取样，标准曲线法进行定量；采用蛋白沉淀结合弱阳离子固相萃取进行前处理，采用超高液相色谱耦联三重四极杆质谱仪进行液质联用分析。根据相关EP文件对方法的特异性、基质效应、检测限、定量限、精密度、正确度和不确定度等性能指标进行了评价。采用该方法对2020年国家卫生健康委临床检验中心甲氧基去甲肾上腺素室间质量评价计划样品进行定值，以该定值结果为靶值，生物学变异最佳可允许总误差标准为评价限，对实验室的检测质量进行评价。结果:方法特异性良好，干扰物和基质效应均不影响检测结果。血浆甲氧基去甲肾上腺素测定的检测限及定量限分别为1.08 pg/g和3.54 pg/g，批内变异系数（ CV）和批总 CV分别为0.43%~1.10%、0.61%~1.42%，相对回收率为98.5%~101.9%，4种血浆样品的相对扩展不确定度分别为3.10%、2.34%、2.16%、1.73%。室间质量评价计划结果显示，实验室测定202013和202014样品的及格率分别为80%和85%。 结论:本研究建立了ID-LC/MS/MS测定人血浆甲氧基去甲肾上腺素的候选参考方法，方法准确、精密、简便，有望作为血浆甲氧基去甲肾上腺素测定的参考方法，可应用于室间质量评价计划样本的定值。

目的:建立同位素稀释液相色谱串联质谱（ID-LC-MS/MS）方法检测血清中L-色氨酸及其代谢物。方法:方法学建立及评价。收集2022年11月至2023年1月的华西医院166例健康体检者的血清样本。采用L-色氨酸（Trp）、L-犬尿氨酸（Kyn）和犬尿喹啉酸（KA）的同位素标记物为内标，通过蛋白沉淀处理血清样本，应用LC-MS/MS同时检测Trp、Kyn和KA含量。评价该方法的选择性、特异性、线性、检出限（LOD）、定量限（LOQ）、携带污染、精密度、加标回收率、基质效应和稀释一致性。结果:Trp、Kyn和KA的线性相关系数均>0.999，LOD分别为0.10 μmol/L、0.01 μmol/L和1.00 nmol/L，LOQ分别为0.20 μmol/L、0.04 μmol/L和2.00 nmol/L，批内精密度和批间精密度均<10%，平均加标回收率与相对基质效应均在100%左右，超线性范围的样本最多可稀释16倍。健康体检者血清中Trp、Kyn、KA含量、Kyn/Trp和KA/Kyn比值分别为（59.55±10.92）μmol/L、（1.85±0.43）μmol/L、（39.89±17.93）nmol/L、（31.64±8.19）×10 -3和21.51±6.72。 结论:建立了基于ID-LC-MS/MS定量检测Trp、Kyn和KA的方法，该方法简便快捷、灵敏度高、结果准确可靠，为临床相关研究提供了可靠支撑。

目的:建立一种基于同位素内标法定量的血清万古霉素液相色谱串联质谱检测方法（LC-MS/MS），并进行临床应用评估。方法:方法学评价类研究。收集2021年3月至2022年6月就诊于浙江大学医学院附属邵逸夫医院且接受万古霉素静脉给药治疗的221例患者的临床血清样本，其中男142例，女79例，年龄（59.31±15.32）岁，检测其谷浓度。收集体检中心30名体检结果均正常的表观健康人剩余血清样本作为空白基质用于方法学评价，其中男 15 名，女 15 名，年龄（35.65±9.86）岁。使用AB Sciex Triple Quad 4500 MD 液相色谱串联质谱系统，采用Phenyl-Hexyl色谱柱进行分离，柱温40 ℃，以含0.1%甲酸的水溶液和含0.1%甲酸的甲醇溶液梯度洗脱，以万古霉素-［d12］三氟乙酸盐作为内标（IS），建立定量方法，并对方法的敏感度、特异度、线性、回收率、精密度、基质效应、残留进行性能验证。结果:万古霉素的检出限是0.2 mg/L，最低定量限是0.5 mg/L，在浓度1~50 mg/L范围内线性关系良好（ R2=0.998 4），准确度（回收率87.45%~112.69%），日内和日间精密度（ CV4.91%~7.69%），内标归一化基质因子（90.22%~104.29%），携带污染不影响待测物的定量分析。221例患者中血药谷浓度为（13.15±8.56）mg/L。 结论:新建立的血清万古霉素LC-MS/MS检测方法分析性能符合要求，可用于临床治疗药物浓度监测。

目的:建立一种稳定、灵敏的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测人血浆12种神经酰胺方法。方法:收集2021年10月至2022年10月在遵义医科大学及其各附属医院健康体检的438名表观健康人群，建立12种神经酰胺生物参考区间。采用氘代同位素作为内标，使用ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）色谱柱进行分离，流动相为水（含0.1%甲酸）和异丙醇：乙腈（1∶1，v/v，含0.1%甲酸），流速0.4 ml/min，梯度洗脱。使用Qlife Lab 9000 Plus三重四极杆质谱建立LC-MS/MS检测12种神经酰胺的方法。并从线性、定量下限、精密度、回收率和稳定性几个方面对该方法进行性能评价。结果:该方法通过了线性、定量下限、回收率、精密度、稳定性的性能评价。12种神经酰胺批内和批间精密度为1.3%~14.3%，正确度通过加标回收实验验证，回收率在91.9%~111.0%，最低定量下限范围为0.001~0.100 μmol/L，标准曲线显示出良好的线性关系（ r>0.990），稳定性实验显示12种神经酰胺在生物基质中及不同条件处理后规定时间内稳定。12种神经酰胺建立了各自相应的生物参考区间，分别为0.103~0.326 μmol/L［Cer（d18∶1/16∶0）］、0.018~0.098 μmol/L［Cer（d18∶1/18∶0）］、0.933~3.919 μmol/L［Cer（d18∶1/24∶0）］、0.243~1.072 μmol/L［Cer（d18∶1/24∶1）］、0.001~0.007 μmol/L［Cer（d18∶1/14∶0）］、0.022~0.095 μmol/L［Cer（d18∶1/20∶0）］、0.185~0.835 μmol/L［Cer（d18∶1/22∶0）］、0.003~0.022 μmol/L［Cer（d18∶0/16∶0）］、0.001~0.016 μmol/L［Cer（d18∶0/18∶0）］、0.017~0.156 μmol/L［Cer（d18∶0/24∶0）］、0.008~0.074 μmol/L［Cer（d18∶0/24∶1）］、0.106~0.721 μmol/L［LacCer（d18∶1/24∶1）］。 结论:本研究建立了可靠的检测人血浆12种神经酰胺的LC-MS/MS检测方法，适合于临床应用。

目的:建立一种基于ICP-MS技术的全血铁、铜同时检测的候选参考方法。方法:验证性研究。选取钴（Co）作为内标元素，采用称量法配制标准溶液及全血标本，对全血标本进行电热板消解并稀释，通过ICP-MS在同位素分析模式下测量 57Fe/ 59Co、 63Cu/ 59Co同位素比值，采用包括法定量。通过测定EQA质控品和有证标准物质，验证本方法的精密度、加标回收率和正确度，并通过方法比对进一步验证方法的性能。 结果:本法全血铁的检出限为0.136 mg/kg，定量限为0.454 mg/kg。全血铜的检出限为0.008 mg/kg，定量限为0.027 mg/kg。本方法标准曲线浓度范围为铜：0.83~3.33 mg/kg，铁：167~667 mg/kg，该范围内线性良好（ R 2>0.999 90），方法的精密度良好，总 CV范围：铁：0.42%~0.68%；铜：0.14%~0.94%。 方法:加标回收率均在100%左右，其范围：铁均值（99.69%~100.07%）；铜均值（99.26%~100.51%）。结论:成功建立了一种基于ICP-MS技术的全血铁、铜同时测定的候选参考方法，该方法相比传统参考方法简便、快速，精密度与加标回收率良好。

目的:评估流动注射-串联质谱法(FIA-MS/MS)应用于溶酶体贮积症(LSDs)筛查的可行性。方法:病例对照研究。使用含酸性β葡糖脑苷脂酶(ABG)、酸性鞘磷脂酶(ASM)、β半乳糖脑苷脂酶(GALC)、α-L-艾杜糖苷酸酶(IDUA)、α半乳糖苷酶A(GLA)和酸性α葡糖苷酶(GAA)6种酶的底物及化学结构与相应产物类似的同位素内标准品缓冲液孵育，经液液萃取，氮气吹干，复溶后串联质谱分析酶反应产物和内标，计算酶活性。评价精密度、准确度、回收率、稳定性和携带污染。使用2022年7月至2023年3月上海市儿童医院2 845份新生儿筛查样本和10例明确诊断的LSDs患儿样本进行临床验证。结果:6种低浓度酶活性检测值，批内变异系数(CV%)为4.650%～9.020%，批间CV%为6.990%～11.350%，高浓度酶活性检测值批内CV%为6.553%～8.690%，批间CV%为6.590%～12.850%；6个酶活性检测值与靶值的偏倚在－20.59%～20.45%；不同稀释浓度酶活性检测回收率为46.00%～136.67%，实测值与系列理论值间相关系数( R2)为0.986～0.997；稳定性评价6种酶活性差异均<15.00%；携带污染评价6种酶活性差异均<20.00%；6种酶活性在人群呈偏态分布，10例LSDs患儿酶活性明显低于切值，能有效检出相应疾病。 结论:FIA-MS/MS检测ABG、ASM、GALC、IDUA、GLA和GAA有较高的精确性和准确度，有临床应用价值，可作为戈谢病、尼曼-皮克病A/B、克拉伯病、黏多糖贮积症Ⅰ型、法布里病和糖原贮积症Ⅱ型的筛查技术。

目的:建立用同位素稀释液相色谱串联质谱（ID-LC/MS/MS）测定人血浆中血管紧张素Ⅱ的候选参考方法，并对方法性能进行评价。方法:以［ 13C 6- 15N］-血管紧张素Ⅱ为内标，重量法准确称取血浆及一定量内标混合，同时加入酶抑制剂，经硫酸锌溶液蛋白沉淀、反相固相萃取板处理，用液相色谱串联质谱分析，质谱选择多反应离子监测模式检测血管紧张素Ⅱ及内标的特定离子碎片。按照ISO15193要求对所建方法进行线性、灵敏度、精密度、回收率等性能评估及不确定度的评价。 结果:血管紧张素Ⅱ在10~1 000 pg/g范围内线性良好（ r=0.999 5），检测下限7.68 pg/g，加标回收率范围为97.14%~102.85%，批内不精密度≤3.21%，批间不精密度≤2.96%，总不精密度≤3.67%。 结论:用同位素稀释液相色谱串联质谱建立了血浆血管紧张素Ⅱ的检测方法，该方法准确可靠，有望成为血浆中血管紧张素Ⅱ测定的参考方法。

目的:建立同位素稀释液相色谱-串联质谱法（ID-LC/MS/MS）测定血清中皮质醇浓度的候选参考方法。方法:方法学建立。将样本与皮质醇内标混匀后加入碳酸钠溶液碱化处理，正己烷/乙酸乙酯进行液液萃取，流动相采用甲醇水溶液等度洗脱，质谱采用电喷雾电离源正离子模式（ESI +）及多反应监测（MRM）分析方法，标准溶液及内标的配制、样本与内标的混合均采用重量法进行控制，括号法计算皮质醇浓度。参照美国临床实验室标准化协会C62-A、C50-A及国内专家共识文件《液相色谱-质谱临床应用建议》《液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证》等对方法正确度、精密度、特异性、线性、检测限和定量下限等性能进行系统评价。数据经Excel2019进行处理，最小二乘法进行线性回归分析。 结果:方法准确精密，测定有证标准物质ERM-DA192、ERM-DA193以及2021—2023年RELA样本的相对偏倚均<2%，加标回收率98.2%~101.1%，批内及批间不精密度均<2%，检测结果不受其他结构类似物干扰，在25~1 600 nmol/L范围内呈现出良好线性，方法检测限和定量下限分别为0.5和1.0 nmol/L。经溯源后的皮质醇测定试剂盒（化学发光免疫分析法）与该候选参考方法同时测定46例临床血清样本的相关性良好。结论:建立了一种灵敏、准确且操作简便的血清皮质醇浓度测定候选参考方法，可为临床常规测定方法的量值溯源及正确度评价提供参考。

目的:评估自动化磁珠法提取儿茶酚胺代谢物联合液相色谱串联质谱进行检测的性能。方法:方法学评价类研究。参考CLSI C62-A、《液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证》等指南，本研究评估使用磁珠法提取血浆中儿茶酚胺代谢物3-甲氧基肾上腺素（MN）、3-甲氧基去甲肾上腺素（NMN）和3-甲氧基酪胺（3-MT）联合液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）测定的线性、定量限、回收率、精密度以及基质效应等，并收集132份临床剩余血浆样本，同时使用磁珠法和传统固相萃取法2种前处理方法进行提取，经LC-MS/MS测定后比较2种提取方法结果的一致性。结果:自动化磁珠法提取MN、NMN和3-MT的线性均>0.99；定量限分别为0.033 5、0.054 7和0.011 0 nmol/L；MN、NMN和3-MT重复性分别为：1.3%~5.1%、2.2%~5.6%和1.7%~7.1%；实验室内总不精密度分别为：1.5%~8.2%、2.2%~7.7%和2.1%~11.2%；虽然绝对回收率较低，但是MN、NMN和3-MT平均相对回收率分别为91.5%~108.5%、92.0%~108.6%和89.3%~104.1%，与预期浓度百分偏差均在15%以内。经过同位素内标校正后，相对基质效应均在100%左右，可抵消潜在的基质效应。固相萃取和磁珠2种方法提取MN、NMN和3-MT结果相关性均良好（相关系数 r>0.99），2种方法比较MN、NMN和3-MT平均相对百分偏差分别为0.2%、-1.4%和1.0%。 结论:本研究中自动化磁珠法前处理提取儿茶酚胺代谢物性能良好，有望提高临床检测自动化及通量。