目的:建立一种快速、灵敏、可视化的H7亚型禽流感病毒等温核酸扩增检测方法。方法:针对H7N9禽流感病毒的HA片段保守区序列设计引物、探针，优化反应温度，建立H7亚型禽流感病毒的重组酶聚合酶扩增结合侧流层析试纸条检测技术，评价其特异性和敏感性，并与Real time PCR方法进行比较。结果:该方法检测H7亚型禽流感病毒的最低检出限为20拷贝/μL，与其他流感/禽流感病毒无交叉反应，反应可在20~50℃温度范围内进行，临床样本检测结果与Real time PCR法一致性为100.0％。结论:该检测方法具有快速、特异及灵敏的特点，为在基层和现场快速检测H7亚型禽流感病毒提供了新的方法。

伴随医学进步，操作简单、反应快速且无设备和专业技术人员依赖的即时检测（POCT）有望实现对患者进行连续监测、诊断、管理和筛查，是体外诊断行业的重要发展方向。结合新技术原理，在提高灵敏度、特异性的前提下进一步实现定性至精确定量的转变是POCT发展的必然。在POCT平台开发过程中，具有高效扩增特性及简单、快速且低成本特点的环介导等温扩增（LAMP）技术扮演着越来越重要的角色。本文概述了LAMP技术作用机制及基于LAMP技术开发POCT平台的研究进展和临床应用，总结了目前基于LAMP技术的POCT平台存在的不足及未来发展方向。

目的:建立一种实时荧光逆转录重组酶介导的等温扩增（reverse transcription recombinase-aided amplification，RT-RAA）技术检测寨卡病毒（Zika virus，ZIKV）的方法，以实现ZIKV的现场快速筛查及诊断。方法:通过基因组序列比对，选择ZIKV保守序列设计RT-RAA特异性引物和探针，并用系列稀释的ZIKV重组质粒与毒株核酸验证方法的灵敏性与重复性，通过检测登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒等其他虫媒病毒验证方法的特异性。结果:建立的RT-RAA方法可在39 ℃恒温条件下30 min内对ZIKV进行高效扩增，检测系列稀释的ZIKV重组质粒，其95%检测限可达到15拷贝/反应，特异性强，与登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒虫媒病毒无交叉反应，且重复性好。结论:本研究建立的ZIKV的RT-RAA等温扩增方法，具有反应迅速，无需精密仪器，操作简单等优点，适合于应急快速检测。

伴随着精准医学理念的发展，在新型冠状病毒肺炎疫情流行的背景下，感染性疾病的临床诊疗愈发得到重视，而以分子生物学为核心的实验诊断技术作为感染性疾病临床实验诊断的重要手段尤其受关注。近年来，随着纳米材料、应用化学、光物理学和生物传感等技术的进步，分子诊断技术也迎来了革命性和创造性的发展。新一代定量PCR技术和基因测序技术、等温扩增技术、生物芯片和生物传感器技术在感染性疾病的临床诊断中具有应用前景和发展前途。

目的:探讨环介导等温扩增(LAMP)技术在免疫功能低下患儿耶氏肺孢子菌(PC)快速病原检测中的应用价值。方法:收集2020年5月至2021年5月在上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心治疗的免疫功能低下、根据临床表现高度怀疑耶氏肺孢子菌肺炎(PCP)患儿的肺泡灌洗液或深部痰液，应用聚合酶链反应(PCR)及LAMP方法检测PC。根据PC基因保守区域合成LAMP引物，并对LAMP反应体系及反应条件进行优化，评价其敏感性与特异性，将其与PCR检测病原体结果进行比较。结果:本研究所建立的PC LAMP检测技术特异性和敏感性均较高，1h即可出检测结果。LAMP技术与PCR检测临床高度怀疑PCP患儿12份临床标本，阳性10例，阴性2例，二者符合率100%。结论:LAMP技术可快速高效检测PC，较普通PCR检测效率高，可为临床快速诊断PCP提供良好的技术手段。

目的:建立基于SYBR Green I颜色判定的检测新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）ORF1ab基因的逆转录环介导等温扩增方法（reverse transcription loop-mediated isothermal amplification，RT-LAMP），为诊断SARS-CoV-2提供简便、快速和准确可靠的工具。方法:基于GenBank中SARS-CoV-2 ORF1ab基因序列保守区设计引物，经引物筛选和RT-LAMP反应体系优化后进行灵敏度和特异性评价，并与实时荧光定量RT-PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）方法进行比较。结果:基于颜色判定的RT-LAMP方法可在65℃45 min内完成SARS-CoV-2的快速检测，检测限为3 copies/reaction，与qRT-PCR的敏感度一致。RT-LAMP检测人冠状病毒OC43、人冠状病毒NL63和乙型流感病毒核酸样本结果为阴性，具有较好的特异性。经SARS-CoV-2临床样本验证，RT-LAMP与qRT-PCR的检测符合率达100%。结论:基于颜色判定的RT-LAMP方法灵敏度高、特异性强，适用于SARS-CoV-2的快速可视化检测，具有应用于SARS-CoV-2样本的初筛及基层卫生医疗机构和现场推广的潜力。

目的:建立基于圆盘式（CD）微流控芯片的CALR基因突变的快速检测方法，初步评价其用于脑梗死患者CALR-1和CALR-2基因突变检测的应用价值。方法:基于微流控技术和环介导等温扩增（LAMP）技术建立一个用于CALR-1和CALR-2基因突变同步检测的CD微流控芯片检测平台，并验证该平台检测的灵敏度、特异性、重复性和准确性。前瞻性选取2019年11月至2021年3月复旦大学附属华山医院收治的124例脑梗死患者为脑梗死组，80名健康体检者为对照组。用CD微流控芯片法检测抗凝外周全血样本中的CALR-1和CALR-2基因突变情况，每块芯片同时检测4个样本，同步检测每个样本的3个指标，等温扩增40 min后读取结果。同时采用测序法对检测结果进行验证，比较2种检测结果的一致性。结果:采用CD微流控芯片平台，无需热循环，40 min即可完成样本中3个指标的同步扩增，样本的整个检测过程在60 min内完成。对核酸靶标浓度较高的样本，扩增10 min即可出现阳性信号，收到样本后30 min内报告检测结果。CD微流控芯片法针对CALR-1和CALR-2的检测灵敏度分别为1.0%和0.5%突变负荷浓度，对于其非靶标的核酸样本均未发生任何非特异性扩增，特异性良好，批内重复性和批间重复性的符合率均为100%（20/20）。在脑梗死组中发现2例CALR基因突变，且均为CALR-1突变（L367fs*46），对照组中未发现CALR-1和CALR-2基因突变。CD微流控芯片法与测序法结果一致率为100%（204/204）。结论:CD微流控芯片法用于检测脑梗死患者样本中CALR-1和CALR-2突变具有灵敏度高、特异性好、检测速度快和检测通量高等优势，有助于明确脑梗死患者的病因。

病毒性感染性/传染性疾病是严重影响人类生命健康的一类重大疾病，新发和突发传染病中也以病毒性居多。快速准确的病毒病原检测对于该类疾病的临床诊疗和预防控制具有重要意义。病毒核酸检测作为一种重要的辅助诊断方法，具有灵敏度高和特异性强等优势，现已成为明确病因、确定治疗方案、评估治疗效果和预后的重要手段。基于聚合酶链式反应、等温扩增技术和基因组测序等一系列方法已成功应用于病毒核酸检测。本文将从目前临床常用的病毒核酸检测方法与应用，以及结果解读中需注意的问题等方面进行讨论，助力病毒性感染性/传染性疾病的精准诊断与治疗。

2023年，国内外同道在结核病的介入诊治方面进行了一系列的研究和探索。经多途径、多腔道内窥镜检下的微创介入、导航技术等引导下取样及高准确度的实验室检测技术的临床联用越来越广泛，为疑难结核病的精准诊断发挥了重要作用。针对肺结核、气管支气管结核、纵隔淋巴结结核及肺外结核的诊断技术，包括经传统的可弯曲常规支气管镜、超细支气管镜、超声支气管镜等特殊类型支气管镜检术，经支气管镜透壁针吸活检术、超声及虚拟导航等引导下活检技术，经胸腔镜胸膜冷冻活检术，经皮穿刺活检等技术。经介入技术取样标本的Xpert、Ultra、环介导等温扩增、宏基因组学二代测序及纳米孔测序等技术，显著缩短了诊断的时限并提高了诊断效能。介入治疗集中在肺结核大咯血、气管支气管结核、胸膜结核与结核相关瘘等疾病。气管支气管结核的介入治疗主要包括硬镜的应用，肺结核大咯血的介入治疗涉及血管内栓塞、覆膜支架置入等；经支气管镜冷热消融技术、狭窄气道的球囊扩张及支架置入术等；胸膜结核的介入治疗有胸腔镜技术，经内镜钳夹、支架等封堵器置入及自体脂肪移植等瘘口封堵术。本文就2022年10月至2023年9月已发表的文献进行综述。

目的:建立一种快速、准确、高灵敏度检测基孔肯雅病毒（chikungunya virus，CHIKV）的逆转录-酶促重组等温扩增（reverse transcription enzymatic recombinase amplification，RT-ERA）的基因检测技术方法。方法:以CHIKV非结构蛋白1（non-structural protein 1，NSP1）基因的保守序列为靶标，根据RT-ERA反应原理设计、合成荧光探针及对应引物，以pUC18为载体构建靶标质粒并在体外转录后作为阳性对照品，将阳性对照品倍比稀释后筛选出扩增效率最高的探针引物组合。利用筛选的探针引物组合，对不同拷贝数的CHIKV进行荧光RT-ERA法扩增，评价该方法的最低检出限；再分别以森林脑炎病毒、登革热病毒、寨卡病毒、乙型脑炎病毒、新布尼亚病毒的RNA为模板进行荧光RT-ERA法扩增，评价该方法的特异性。结果:在40 ℃恒温条件下，利用荧光RT-ERA法10 min内可以完成CHIKV核酸扩增，该方法最低检出限可达10拷贝/μL，且当CHIKV核酸扩增为阳性时，其他病毒检测结果为阴性。结论:成功建立一种可用于检测CHIKV NSP1基因的荧光RT-ERA法，该方法操作简便、检测限低且特异性好。