目的:探讨诺卡菌角膜炎的临床及活体共聚焦显微镜（IVCM）影像学特征。方法:回顾性病例系列研究。收集2018年至2022年首都医科大学附属北京同仁医院连续就诊的诺卡菌角膜炎16例（16只眼）患者资料，其中男性11例，女性5例；年龄为（42.6±15.5）岁。所有患者均有典型诺卡菌角膜炎临床表现及至少1项阳性病原学检查结果（角膜病灶刮片或微生物培养）。收集患者完整的病史、临床资料及微生物学检查结果，包括危险因素、确诊时间、临床表现、诊断方法、分离菌种、治愈时间及治疗前后最佳矫正视力；裂隙灯显微镜及IVCM检查、刮片细胞学检查、微生物培养与质谱鉴定等。结果:诺卡菌角膜炎的主要危险因素为植物或其他异物伤（5/16）、角膜接触镜（4/16）、穿透性角膜移植术后（1/16）、脑膜瘤术后（1/16）。患者出现症状到确诊的时间为（20.8±11.8）d，随访时间（46.8±12.6）d。就诊时最佳矫正视力<0.05者和≥0.05且<0.3者均为7只眼，≥0.3者2只眼。典型体征为角膜浅层花环状灰白色浸润灶，随病情进展出现角膜溃疡及表面干燥隆起灰白色坏死组织，严重患者可致角膜溃疡穿孔。12只眼（12/16）刮片细胞学提示诺卡菌感染，9只眼（9/16）微生物培养质谱鉴定提示诺卡菌感染，8只眼（8/16）刮片细胞学和微生物培养均提示诺卡菌感染。IVCM下，角膜病灶区可见较多量纤细丝状中高反光菌丝，呈细长、串珠、分枝状结构排列，菌丝周围有较多量高反光圆形炎症细胞浸润。14例患者给予药物治疗后痊愈，2例患者行角膜移植术后感染被控制，治愈时间（37.5±25.2）d，随访6个月无复发病例。结论:诺卡菌角膜炎早期以角膜基质圆形或花环状致密浸润为主，中晚期灰白色干燥角膜溃疡或前房积脓。病灶区纤细的分枝状或串珠状中高反光菌丝样结构为其IVCM典型特征。

目的:探讨三维生物打印负载纳米银的甲基丙烯酸酐化明胶（GelMA）水凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面的作用。方法:采用实验研究方法。采用扫描电子显微镜观察不同质量浓度的纳米银溶液中的纳米银颗粒的形态、粒径、分布和含不同终质量分数GelMA的含银GelMA水凝胶的孔隙结构，并计算孔径大小。处理1、3、7、14 d，采用质谱仪检测含终质量分数15% GelMA和终质量浓度10 mg/L纳米银的水凝胶的纳米银释放浓度。培养24 h，检测含终质量浓度0（无纳米银）、25、50、100 mg/L纳米银的GelMA水凝胶对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌圈直径。取浙江大学医学院附属第二医院泌尿外科2020年7月收治的1名健康5岁男童包皮环切术后废弃包皮和该院整形外科2020年7月收治的1名健康23岁女性抽脂手术后废弃脂肪，采用酶解法分别提取成纤维细胞（Fb）和脂肪干细胞（ASC）。将Fb分为仅有培养基的空白对照组和另加入含相应终质量浓度纳米银溶液的2 mg/L纳米银组、5 mg/L纳米银组、10 mg/L纳米银组、25 mg/L纳米银组、50 mg/L纳米银组，培养48 h，采用细胞计数试剂盒8检测Fb增殖活性。将Fb分为进行相应处理的0 mg/L含银GelMA水凝胶组、10 mg/L含银GelMA水凝胶组、50 mg/L含银GelMA水凝胶组、100 mg/L含银GelMA水凝胶组，于培养1、3、7 d，同前检测Fb增殖活性。将ASC与GelMA水凝胶混合种植，分为三维生物打印组和非打印组，于培养1、3、7 d，同前检测ASC增殖活性并行活/死细胞荧光染色观察ASC生长情况。以上实验中样本数均为3。于18只雄性4~6周龄SD大鼠背部各制作4个全层皮肤缺损创面，分别设为单纯水凝胶组、水凝胶/纳米银组、水凝胶支架/纳米银组、水凝胶支架/纳米银/ASC组并移植相应支架。分别于伤后4、7、14、21 d，行大体观察并计算创面愈合率（样本数为6）；于伤后7、14 d，对创面行苏木精-伊红染色观察组织病理学改变（样本数为6）；于伤后21 d，对创面行Masson染色观察胶原排列情况（样本数为3）。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析、Bonferroni校正、独立样本 t检验。 结果:不同质量浓度的纳米银溶液中的纳米银颗粒均呈圆形，散在分布，粒径均匀。含不同终质量分数GelMA的含银GelMA水凝胶都呈现大小不一且相互连通的孔隙结构。含终质量分数10% GelMA的含银GelMA水凝胶的孔径明显大于含终质量分数15%和20% GelMA的含银GelMA水凝胶（ P值均<0.05）。处理1、3、7 d，含银GelMA水凝胶的体外纳米银释放浓度的变化趋势相对平缓；处理14 d，其体外纳米银释放浓度迅速增加。培养24 h，含0、25、50、100 mg/L纳米银的GelMA水凝胶对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌圈直径分别为0、0、0.7、2.1 mm和0、1.4、3.2、3.3 mm。培养48 h，2 mg/L纳米银组、5 mg/L纳米银组Fb的增殖活性均明显高于空白对照组（ P<0.05），10 mg/L纳米银组、25 mg/L纳米银组、50 mg/L纳米银组Fb的增殖活性均明显低于空白对照组（ P<0.05）。与0 mg/L含银GelMA水凝胶组相比，培养1 d，50 mg/L含银GelMA水凝胶组、100 mg/L含银GelMA水凝胶组Fb的增殖活性均明显降低（ P<0.05）；培养3 d，50 mg/L含银GelMA水凝胶组Fb的增殖活性明显升高（ P<0.05），100 mg/L含银GelMA水凝胶组Fb的增殖活性明显降低（ P<0.05）；培养7 d，100 mg/L含银GelMA水凝胶组Fb的增殖活性明显降低（ P<0.05）。培养1 d，三维生物打印组的ASC增殖活性与非打印组比较，差异无统计学意义（ P>0.05）；培养3、7 d，三维生物打印组的ASC增殖活性均明显高于非打印组（ t值分别为21.50、12.95， P<0.05）。培养1 d，三维生物打印组死亡ASC数略多于非打印组。培养3、5 d，三维生物打印组和非打印组中的绝大多数ASC为活细胞。伤后4 d，单纯水凝胶组和水凝胶/纳米银组大鼠创面渗液较多，水凝胶支架/纳米银组和水凝胶支架/纳米银/ASC组大鼠创面干燥且未见明显感染迹象。伤后7 d，单纯水凝胶组和水凝胶/纳米银组大鼠创面仍有少量渗液，水凝胶支架/纳米银组和水凝胶支架/纳米银/ASC组大鼠创面干燥结痂。伤后14 d，4组大鼠创面上的水凝胶均脱落。伤后21 d，仅单纯水凝胶组仍有少量创面未愈合。伤后4、7 d，水凝胶支架/纳米银/ASC组大鼠创面愈合率均明显高于其他3组（ P<0.05）。伤后14 d，水凝胶支架/纳米银/ASC组大鼠创面愈合率明显高于水凝胶/纳米银组和单纯水凝胶组（ P值均<0.05）。伤后21 d，单纯水凝胶组大鼠创面愈合率明显低于水凝胶支架/纳米银/ASC组（ P<0.05）。伤后7 d，4组大鼠创面上的水凝胶均保持在位；伤后14 d，单纯水凝胶组大鼠的水凝胶已与创面脱离，而其余3组仍有部分水凝胶存在于创面新生组织中。伤后21 d，单纯水凝胶组大鼠创面胶原排列无序，而水凝胶/纳米银组、水凝胶支架/纳米银组、水凝胶支架/纳米银/ASC组大鼠创面胶原排列相对有序。 结论:含银GelMA水凝胶具有良好的生物相容性及抗菌性能，其三维生物打印的双层结构能更好地与大鼠全层皮肤缺损创面新生组织相融合并促进创面愈合。

目的:探讨区域性淋巴结清扫治疗转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC)的临床效果及安全性。方法:回顾分析2015年8月至2021年5月于复旦大学附属肿瘤医院行区域性淋巴结清扫22例mCRPC患者的临床资料。22例均曾行根治性前列腺切除术并进入mCRPC阶段。患者行根治性前列腺切除术时平均年龄65.5(54~79)岁。从根治术至患者进展至mCRPC的中位时间为32 (4~96)个月，从诊断mCRPC至行区域性淋巴结清扫的中位时间为4 (1~43)个月。区域性淋巴结清扫前中位前列腺特异性抗原(PSA)为4.44(2.00~22.15) ng/ml。影像学检查均发现局限于盆腔或者腹膜后的转移性淋巴结，并均排除其他部位的转移；单纯盆腔淋巴结转移16例，腹膜后淋巴结转移3例，盆腔及腹膜后均有淋巴结转移3例。区域性淋巴结清扫前18例应用药物去势联合第一代抗雄药物治疗，4例采用药物去势联合阿比特龙治疗。根据转移淋巴结位置决定清扫范围，闭孔区淋巴结及髂外、髂内血管周围淋巴结转移者清扫范围包括髂外静脉和髂内静脉周围的纤维脂肪组织、闭孔区淋巴脂肪组织；髂总、盆底淋巴结转移者，在原有清扫范围的基础上增加髂总血管周围所有淋巴脂肪组织，至主动脉分叉；腹膜后淋巴结转移者，切除位于肾动脉和主动脉分叉之间所有淋巴脂肪组织。分析术后病理特征、手术并发症、术后PSA缓解率、PSA进展时间。结果:本组22例中，6例行单侧盆腔淋巴结清扫，10例行双侧盆腔淋巴结清扫，3例同时行盆腔和腹膜后淋巴结清扫，3例行单纯腹膜后淋巴结清扫。病理结果示19例(86.3%)淋巴结阳性，平均每例清扫9.8(3~29)枚淋巴结，平均4.1(0~12)枚阳性。22例均在淋巴结清扫后继续沿用之前的内分泌治疗方案。术后并发症：7例淋巴漏；5例术后发热，其中1例通过体液培养证实存在盆腔细菌感染；1例因转移淋巴结侵犯血管导致术中大出血，术中予及时止血；1例肠梗阻；1例体表伤口感染。6例淋巴漏在术后1个月内自愈，1例淋巴漏在术后3个月时自愈。术后中位随访时间24(6~48)个月。17例(77.3%)术后达到PSA缓解，其中9例后续发生PSA进展，中位PSA进展时间为12(2~36)个月。单因素分析结果显示，根治术时PSA值( P＝0.029)、行区域性淋巴结清扫手术时淋巴结转移部位( P＝0.005)与术后PSA进展时间相关。 结论:对于单纯淋巴结转移且转移灶可通过手术切除的mCRPC患者，采用区域性淋巴结清扫可以延缓后线药物治疗的开始时间，并发症相对可控。

目的:研究小鼠腐皮镰刀菌性角膜炎中中性粒细胞来源的基质金属蛋白酶8(MMP-8)对角膜组织的损伤作用及其机制。方法:取108只6~8周龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠，采用腐皮镰刀菌感染法制备右眼真菌性角膜炎(FK)模型，裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜炎症情况并评分，依据FK模型眼角膜炎症评分将模型眼分为造模后0、12、24、48和72 h组。于相应时间点处死小鼠并取材角膜组织，采用Western blot法检测MMP-8、腺苷酸激活蛋白激酶α(AMPKα)及其丝氨酸172位点磷酸化形式(p-AMPKα)蛋白在角膜中的相对表达量；采用苏木精－伊红染色法检测各时间点组小鼠角膜中中性粒细胞数量；采用免疫荧光染色法观察角膜中中性粒细胞与MMP-8蛋白的共定位表达。体外角膜胶原降解实验中将角膜组织分为MMP-8组、缓冲液组和生理盐水组，分别采用100 μl活化的重组MMP-8、检测缓冲液和生理盐水处理角膜，采用羟脯氨酸检测试剂盒测定并比较各组角膜组织中羟脯氨酸质量分数。分别提取人外周血中性粒细胞和采集培养的腐皮镰刀菌孢子，将人中性粒细胞分为4个组，其中阴性对照组为培养的中性粒细胞，共培养组为中性粒细胞加孢子共培养，AICAR处理组和化合物C处理组分别向中性粒细胞和孢子共培养体系内加入p-AMPK蛋白酶激动剂AICAR和抑制剂化合物C，采用免疫荧光染色法检测各组人中性粒细胞中MMP-8蛋白的表达水平。结果:造模后24 h组小鼠模型眼出现角膜混浊，造模后72 h组出现角膜穿孔。造模后24、48和72 h组角膜炎症评分均高于12 h组，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。造模后12、24和48 h组角膜中MMP-8蛋白相对表达量高于0 h组，差异均有统计学意义(均 P<0.001)；模型眼角膜中MMP-8蛋白相对表达量与炎症评分呈中等强度正相关( rs＝0.50， P<0.05)。造模后24、48和72 h组角膜内p-AMPKα(Thr 172)/AMPKα值高于0 h组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；角膜中p-AMPKα(Thr 172)/AMPKα值与MMP-8蛋白相对表达量呈中等强度正相关( r＝0.54， P<0.01)。造模后24、48和72 h组角膜中中性粒细胞数目明显多于0 h组，差异均有统计学意义(均 P<0.001)；角膜中中性粒细胞数目与炎症评分呈强正相关( rs＝0.77， P<0.001)，与MMP-8蛋白相对表达量呈中等强度正相关( r＝0.56， P<0.05)。模型眼角膜中MMP-8蛋白表达与中性粒细胞高度共定位。缓冲液组、生理盐水组和MMP-8组角膜羟脯氨酸质量分数分别为(0.52±0.02)、(0.51±0.03)和(0.27±0.02)μg/mg，组间总体比较差异有统计学意义( F＝156.63， P<0.01)，其中MMP-8组角膜羟脯氨酸质量分数低于缓冲液组和生理盐水组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。培养的镰刀菌孢子感染人中性粒细胞实验中，AICAR处理组MMP-8表达荧光强度值明显高于阴性对照组和化合物C处理组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:小鼠真菌性角膜炎中性粒细胞分泌的MMP-8可降解角膜基质层胶原纤维，导致角膜混浊或穿孔。人中性粒细胞中MMP-8蛋白的表达水平变化可能与AMPK活化有关。

患儿，男性，5岁5个月。患儿因右眼被猫抓伤1 d，眼结膜充血、眼痛及视物不清，于2023年8月23日至华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科就诊。SL－40H型裂隙灯显微镜(英国KEELER公司生产)检查结果显示右眼混合充血，角膜全层裂伤。给予完善全身检查、注射狂犬疫苗，收入院。患儿既往足月顺产，出生时体重正常，无吸氧史，既往无眼部疾病史和其他疾病史。右眼视力指数/20 cm，左眼视力1.0；双眼眼压均为12 mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa)。右眼眼睑肿胀，结膜混合性充血，下方角膜可见弧形全层裂伤，伴有虹膜嵌顿，前房浅，瞳孔变形，晶状体混浊，其余窥不入；左眼无充血，角膜透明，前房清晰，瞳孔直径3 mm，对光反射灵敏，晶状体透明，眼底未见明显异常。诊断为右眼角膜穿通伤，右眼外伤性白内障。遂于当日急诊全身麻醉下行右眼角膜穿通伤清创缝合术联合前房冲洗及前房成形术。术中见角膜中央全层裂伤，伤口长度约4.5 mm，伴有虹膜嵌顿于伤口且部分脱出、坏死。经专家组讨论，切除部分坏死虹膜，还纳嵌顿虹膜，在黏弹剂辅助下采用10－0尼龙线间断缝合角膜全层，达到水密状态。手术过程顺利无并发症，术中未见晶状体皮质外溢，因此未行白内障摘除手术。术后给予右眼1%醋酸泼尼松龙滴眼液(爱尔兰艾尔建制药公司生产)点眼，4次/d；0.5%盐酸莫西沙星滴眼液(华润紫竹药业有限公司生产)点眼，3次/d；重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶(珠海亿胜生物制药有限公司生产)点眼，3次/d；0.5%复方托吡卡胺滴眼液(沈阳兴齐制药有限公司生产)点眼，1次/晚；头孢克洛干混悬剂[亿腾医药(苏州)有限公司生产]口服，0.125 g，3次/d。术后3 d患儿病情稳定，无明显眼部疼痛。右眼视力指数/40 cm，眼压正常，角膜上皮愈合良好，裂伤口对合好，缝线无松脱，前房深度正常，房水闪辉阳性，瞳孔欠圆，直径约3 mm，颞下方虹膜部分缺损，晶状体混浊，眼底结构不清。见图1。遂嘱带药出院，定期复查。7 d后复诊，右眼视力指数/30 cm；术后20 d复诊右眼视力0.3。角膜伤口未见明显感染迹象，缝线未见松动。2023年10月3日，在角膜手术后40 d，患儿因"右眼流泪不能睁眼4 d"再次就诊。给予0.5%盐酸丙美卡因(美国爱尔康公司生产)表面麻醉下裂隙灯显微镜检查。见图2A和图2B。经裂隙灯显微镜检查，可见角膜中央灰白色浸润灶，直径约3 mm×4 mm,位于伤口内角膜深基质层，房水闪辉阳性，未见前房积脓，SW－2100型眼部B型超声(天津市索维电子技术有限公司生产)检查未见后节感染迹象。考虑患儿为感染性角膜炎，细菌性感染可能性大，遂予以局部加强抗感染及促进修复治疗，给予右眼0.5%左氧氟沙星滴眼液(扬子江药业集团有限公司生产)点眼，1次/2 h；0.3%妥布霉素滴眼液(美国爱尔康公司生产)点眼，1次/2 h；盐酸左氧氟沙星眼用凝胶(湖北远大天天明制药有限公司生产)点眼，1次/晚；0.1%普拉洛芬滴眼液(日本千寿制药株式会社生产)点眼，4次/d；重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶，2次/d。药物治疗3 d后角膜感染未见明显好转，患儿眼痛和视物不清症状未缓解。经裂隙灯显微镜检查，可见角膜浸润病灶直径约4 mm×4 mm，病灶有扩大趋势，前房少量积脓，眼部B型超声检查未见后节感染迹象。为防止感染进一步加重导致眼内炎，经病例讨论，与家属交流，取得对方同意后遂于2023年10月7日急诊全身麻醉下行右眼同种异体穿透性角膜移植术。见图3A和3B，术中选取植床直径7.5 mm，植片直径7.75 mm。术后右眼给予0.1%他克莫司滴眼液(日本千寿制药株式会社生产)点眼，2次/d；0.1%普拉洛芬滴眼液点眼，4次/d；重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶点眼，2次/d；0.5%复方托吡卡胺滴眼液点眼，1次/晚；0.5%左氧氟沙星滴眼液点眼，4次/d；盐酸左氧氟沙星眼用凝胶点眼，1次/晚。术中所取感染角膜分别送一般细菌培养、一般真菌培养及病原微生物高通量二代测序检测与鉴定。病原学检查结果显示，28℃和35℃条件下一般细菌及真菌培养均为阴性。病原微生物高通量基因检测覆盖革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、分枝杆菌、支原体、衣原体及立克次体等10 989种细菌,脱氧核糖核酸病毒和核糖核酸病毒等5050种病毒，1179种真菌及282种寄生虫。提示为二氧化碳嗜纤维菌属和口炎二氧化碳嗜纤维菌种阳性，检出序列5，相对丰度1.08%。真菌、病毒、寄生虫、结核分枝杆菌、支原体、衣原体及立克次体等均未检出。另有检出痤疮丙酸杆菌，但相对丰度0.33%较低，且为常见眼表定植菌。综合患儿被猫抓伤病史及临床表现，诊断患儿为二氧化碳嗜纤维菌感染。术后患儿恢复良好，定期复查。治疗10个月余后，患儿右眼视力恢复至0.1，眼压12 mmHg，角膜植片透明，缝线未松脱，未见植片排斥及感染复发，内皮细胞密度1932个/mm2。见图4。

目的 对篦齿虎耳草Saxifraga umbellulata var.pectinata的正丁醇部位化学成分进行研究.方法 利用多种色谱层析方法(硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、ODS反相柱色谱和半制备HPLC等)进行分离纯化,运用理化性质结合现代波谱学(紫外分光光度法、红外分光光度法、核磁共振波谱法、质谱等)技术进行结构鉴定.结果 从篦齿虎耳草正丁醇部位中分离得到31个化合物,分别鉴定为(2S,4S)-6-(4-羟基苯基)已烷-2,4-二醇(1)、(4R)-4-羟基-6-(3,4-二羟基苯基)己烷-4-醇(2)、(2R)-6-(3,4-二羟基苯基)-2-羟基己烷-4-酮(3)、6-(4-羟基苯基)已烷-2,4-二醇(4)、(E)-9,10-二羟基-苯已基-2-烯-4-酮(5)、rhododendrin(6)、对香豆酸(7)、对羟基苯丙酸(8)、异落叶松脂素(9)、(5S)-5-丁氧基-7-(3,4-二羟基苯基)-1-(4-羟基苯基)-3-庚酮(10)、(5S)-5-丁氧基-1,7-二(4-羟基苯基)-3-庚酮(11)、1-(4-羟基苯基)-7-(3,4-二羟基苯基)-5-O-β-D-葡萄糖苷-3-庚酮(12)、5-羟基-1-(4-羟基苯基)-7-(3,4-二羟基苯基)-3-庚酮(13)、alusenone(14)、白桦林烯酮(15)、hannokinol(16)、alnuheptanoid A(17)、5-羟基-1,7-二(4-羟基苯基)-3-庚酮(18)、槲皮素-3,7-二-O-α-L-鼠李糖苷(19)、山柰酚-3,7-二-O-α-L-鼠李糖苷(20)、金丝桃苷(21)、鼠李亭-3-O-半乳糖苷(22)、鼠李素-3-O-鼠李糖苷(23)、槲皮苷(24)、杨梅素-3-O-β-D-半乳糖苷(25)、山柰酚-3-O-(6"-乙酰基)-β-D-半乳糖苷(26)、槲皮素(27)、催吐萝芙木醇(28)、8,9-dihydromegastigmane-4,6-diene-3-one(29)、tubiflorone(30)、chakyunglupulin A(31).结论 化合物1～3为新化合物,依次命名为虎耳草酚二醇、虎耳草酚和(R)-纤孔菌酚A,化合物4、8～11、13、17～20、22、23、26、28～31均为首次从虎耳草属植物中分离报道,化合物6、7、12、14、15、16、24和25均为首次从篦齿虎耳草中分离报道,其中化合物10和11为人工产物.上述黄酮类、二苯庚烷类、单苯烷类和环烯类成分在虎耳草属植物中具有一定的化学分类学价值.

本研究以产自安徽的鲍姆桑黄、产自浙江和吉林的瓦尼桑黄、产自山东的粗毛纤孔菌以及采自山西的野生桑树桑黄为研究对象,检测桑黄子实体乙醇提取物中的总多酚、三萜及麦角甾醇含量.结果表明:不同物种和不同来源的桑黄子实体中总多酚、三萜、麦角甾醇含量存在差异,其中总多酚含量最高的是产自浙江的瓦尼桑黄(1.99％),三萜含量最高的是产自山东的粗毛纤孔菌(产孢前,1.32％),麦角甾醇含量最高的是产自吉林的瓦尼桑黄(0.19％).以丙二醛(MDA)为指标比较不同来源桑黄子实体乙醇提取物的抗氧化活性.结果表明,4种桑黄子实体提取物对大鼠肝微粒体脂质过氧化酶MDA的产生均表现出良好的抑制能力,其中浙江桑黄抗氧化活性最佳,MDA抑制率达到96.53％.应用液相色谱-离子阱-飞行时间质谱联用(LC-IT-TOF-MS)技术从桑黄子实体的乙醇提取物中鉴定了 19种化合物,其中浙江的瓦尼桑黄、吉林的瓦尼桑黄和安徽的鲍姆桑黄子实体的化合物组成较为相似,主要为hispidin的衍生物;野生的桑树桑黄子实体主要产物也为hispidin衍生物,但结构类型不同于上述3种桑黄;山东的粗毛纤孔菌子实体中则含有大量的hispidin单体,hispidin衍生物含量很少.综上所述,不同来源桑黄的化合物组成、活性产物含量和抗氧化活性存在较大差异,特别是不同种属桑黄样品所含活性产物的种类以及含量差异较大.本研究为桑黄抗氧化产品的开发提供了科学参考.

目的:建立基于肿瘤坏死因子-α(TNF-α)中和活性测定法的阿达木单抗生物学活性检测方法,为实现阿达木单抗同类产品生物学活性的平行比对研究提供技术手段.方法:以小鼠成纤维细胞L929为实验细胞,对TNF-α和放线菌素D(Act-D)等关键试剂进行标准化,并通过摸索细胞接种量、关键试剂浓度、阿达木单抗稀释梯度、孵育时间等对方法进行优化,并对优化后的方法进行实验室内的方法学验证与实验室间的联合验证,证实该方法的性能表现及对阿达木单抗原研药和生物类似药的适用性.结果:阿达木单抗在该方法中存在量效关系,优化后的方法确定细胞密度为2×104个·孔-1、TNF-α和Act-D浓度分别为1和400 ng·mL-1、抗体起始浓度为1000 ng·mL-1、稀释比为1:2.5、铺板时间和孵育时间为18和24 h,方法学验证表明该方法专属性合理、精密度好、准确性高,联合验证结果满意.结论:该方法适用于目前已上市的5家阿达木单抗,可以作为阿达木单抗生物学活性的平台化质控方法,便于国家药品抽验工作开展及各产品间的平行比较,同时也为国家标准品建立提供了可选的评价手段,为未来《中华人民共和国药典》对阿达木单抗各论的收载提供了技术支撑.

历来"桑黄"的种类混淆不清,直至近年来才被确定为桑树桑黄,与其亲缘性相近的物种也一同被划分入广义纤孔菌属的新分支—桑黄孔菌属.本文整理曾被当作"桑黄"的物种,阐述其正名和桑黄孔菌属确立的过程,对目前该属内物种的生物活性和栽培研究进展进行综述,旨在为桑黄孔菌属真菌资源的研究开发提供参考.

从分子水平上探究粗毛纤孔菌与桑黄孔菌属菌株的差异,同时以人乳腺癌MDA-MB-231细胞筛选粗毛纤孔菌深层发酵液抗乳腺癌活性部位,并对其成分进行初步分析.基于rDNA ITS序列分子系统发育树和拆分网络(splits network)分析研究粗毛纤孔菌与桑黄孔菌属菌株的差异;采用MTT法检测发酵液不同提取物抗乳腺癌活性;通过细胞形态观察进一步了解活性提取物对细胞生长的影响;采用LC-MS/MS对活性提取物的成分进行分析.系统发育树表明粗毛纤孔菌与桑黄孔菌属菌株存在一定的遗传差异,粗毛纤孔菌GC含量较桑黄孔菌属菌株低,同时拆分网络分析法能更好地区分粗毛纤孔菌与桑黄;粗毛纤孔菌深层发酵液正丁醇提取物对MDA-MB-231细胞生长的抑制作用最强且呈量效和时效关系(P＜0.05),作用24h的lCso值为245.44μg/mL;细胞形态观察显示正丁醇提取物浓度在250μg/mL时,对MDA-MB-231细胞的凋亡作用随着时间的延长而加强;LC-MS/MS检测到正丁醇萃取部分的物质有2个,这2个物质均首次在粗毛纤孔菌中鉴定得到.结果表明,拆分网络分析法可较好地用于粗毛纤孔菌与桑黄孔菌属菌株的分子甄别,正丁醇提取物是粗毛纤孔菌深层发酵液抗乳腺癌MDA-MB-231细胞的主要活性部位,为进一步开发利用粗毛纤孔菌药用资源提供科学依据.