目的:评价线粒体通透性转换孔(mPTP)在右美托咪定减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法:清洁级健康成年雄性SD大鼠80只，体重250～300 g，采用随机数字表法分为5组( n＝16)：假手术组(S组)仅分离右侧颈总动脉，不阻塞；脑缺血再灌注组(I/R组)采用线栓法阻塞右侧颈总动脉2 h恢复灌注的方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型；右美托咪定组(D组)脑缺血前和再灌注即刻分别腹腔注射右美托咪定50 μg/kg；mPTP开放剂苍术苷组(A组)脑缺血前10 min时侧脑室注射2 mmol/L苍术苷15 μl，余操作同I/R组；苍术苷＋右美托咪定组(A＋D组)脑缺血前10 min时侧脑室注射2 mmol/L苍术苷15 μl，余操作同D组。于再灌注24 h时行神经功能缺陷评分(NDS)后，处死大鼠取脑组织，提取线粒体，分别测定脑梗死体积、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和MDA含量、线粒体ATP酶(ATPase)活性、线粒体膜电位(MMP)、Bcl-2和Bax蛋白表达、mPTP开放程度。 结果:与S组比较，其余各组大鼠NDS、脑梗死体积百分比和MDA含量升高，Bax蛋白表达上调，mPTP开放程度增加，GSH-Px含量、MMP、Na ＋-K ＋-ATPase和Ca 2＋-Mg 2 ＋-ATPase活性降低，Bcl-2蛋白表达下调( P<0.05)；与I/R组比较，D组大鼠NDS、脑梗死体积百分比和MDA含量降低，Bax蛋白表达下调，mPTP开放程度减少，GSH-Px含量、MMP、Na ＋-K ＋-ATPase和Ca 2＋-Mg 2 ＋-ATPase活性升高，Bcl-2蛋白表达上调( P<0.05)；与D组比较，A＋D组大鼠NDS、脑梗死体积百分比和MDA含量升高，Bax蛋白表达上调，mPTP开放程度增加，GSH-Px含量、MMP、Na ＋-K ＋-ATPase和Ca 2＋-Mg 2 ＋-ATPase活性降低，Bcl-2蛋白表达下调( P<0.05)。 结论:mPTP参与了右美托咪定减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的过程。

为探索中华蜜蜂Apis cerana cerana Fabricius种用雄蜂的高效培育方法,本研究利用实验室和蜂群条件培育中华蜜蜂性成熟雄蜂,比较各实验组雄蜂的体重、可采集精液比例及精子活力,利用转录组测序技术解析实验室饲养对雄蜂基因表达的影响.结果表明,与蜂群饲养组相比,实验室饲养组中华蜜蜂性成熟雄蜂的精子活力无显著差异,但雄蜂的体重和可采集精液比例显著降低.转录组测序共筛选获得实验室饲养组雄蜂的差异表达基因602个,其中上调表达186个,下调表达416个.上调的差异表达基因显著富集于蛋白质结合、核质、淘汰的核质组分和胞内细胞器等19个GO功能分类;下调的差异表达基因显著富集于ATP合成耦合质子转运、线粒体内膜、呼吸体和碳水化合物代谢过程等22个GO功能分类,以及氧化磷酸化、碳代谢、脂肪酸降解和三羧酸循环等6条KEGG通路.表明实验室饲养可作为培育中华蜜蜂种用雄蜂的备选方法进行深入研究.实验室饲养可能通过抑制机体能量代谢和干扰线粒体功能影响雄蜂的生长和精子发生.研究结果为进一步研发中华蜜蜂种用雄蜂的工厂化培育技术提供了科学参考,有助于加速我国本土蜜蜂的良种选育进程.

目的 研究阿尔茨海默病(AD)患者皮层差异性金属离子转运基因的分子功能、生物学过程分类、分子调控网络的变化特征及关键节点,为AD的早期临床诊断和防治提供新方法和新思路.方法 从基因芯片公共数据库(GEO)中下载AD患者皮层基因芯片数据,筛选与金属离子转运相关的差异基因,采用PANTHER在线平台对差异基因进行基因本体(GO)分析,包括基因分类、分子功能、生物学过程及信号通路分析,应用STRING11.0 在线分析软件对差异基因进行生物信息学调控网络分析,寻找关键节点基因,并使用Metascape在线软件分析基因功能簇间的相互作用关系,并筛选重要的基因功能簇.结果 在AD患者皮层基因中筛选出 30 个与金属离子转运相关的差异基因,均表达上调,其生物学功能主要与跨膜信号转导、金属离子跨膜转运、细胞内金属离子稳态、基因特异性转录调节、蛋白质结合活性调节相关,与离子型谷氨酸受体信号通路、α肾上腺素能受体信号通路密切相关.蛋白-蛋白相互作用(PPI)调控网络中的子网络分别与调节金属蛋白酶水解、调节电压依赖性钙通道及介导跨膜蛋白进入线粒体内膜密切相关,关键节点包括电压依赖性钙离子通道亚基 α2/δ1(CACNA2D1)、N-甲基-D-天冬氨酸离子能谷氨酸受体(GRIN)1、GRIN3A、电压门控钾离子通道亚家族D(KCND)3、电压门控钾离子通道亚家族Q(KCNQ)1 及KCNQ5.结论 AD的发病机制与皮层组织中的CACNA2D1、GRIN1、GRIN3A、KCND3、KC-NQ1 及KCNQ5 等基因的变化密切相关,主要涉及离子型谷氨酸受体信号通路及α肾上腺素能受体信号通路.

目的:探讨血清Smac检测在上皮性卵巢癌(EOC)诊断和病情监测中的临床意义.方法:选取2015年12月—2017年1月于天津市中心妇产科医院经手术治疗的100例卵巢肿物患者,术后病理诊断明确,根据良恶性分为卵巢良性肿瘤组40例,上皮性卵巢癌组60例;另选取本院体检合格的健康对照组40例.分别收集手术前后及化疗过程中的清晨空腹血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清Smac水平.结果:血清Smac在上皮性卵巢癌组中的表达水平低于健康对照组和卵巢良性肿瘤组(P<0.05);根据受试者工作特征(ROC)曲线,确定血清Smac表达的临界值为429.39 pmol/L,Smac检测的敏感度为91.67%,特异度为95%;Smac在Ⅰ+Ⅱ期EOC的阳性数为14例,阳性率为87.50%;在Ⅲ+Ⅳ期的阳性数为41例,阳性率为93.18%,差异无统计学意义(P>0.05);在EOC中,血清Smac与患者年龄、病理类型、有无腹水、中性粒细胞/淋巴细胞(NLR)和血小板/淋巴细胞(PLR)无关,与国际妇产科联盟(FIGO)分期和淋巴结转移有关;手术后血清Smac的表达水平高于术前,差异有统计学意义(P=0.000),随着化疗次数的增加,Smac表达水平逐渐升高,Smac在第2疗程结束后升至正常.结论:血清Smac表达水平对EOC的早期诊断,鉴别卵巢良恶性肿瘤及EOC术后的病情监测均有一定临床价值.

目的 评价线粒体通透性转换孔(mPTP)在七氟醚后处理减轻失血性休克复苏大鼠脑损伤中的作用.方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠90只,体重300～ 350 g,采用随机数字表法分为5组(n=18):假手术组(S组)、失血性休克复苏组(HSR组)、七氟醚后处理组(SP组)、七氟醚后处理+mPTP开放剂苍术苷组(SP+ATR组)和苍术苷组(ATR组).经右侧颈总动脉30 min匀速放血(总血容量的40％),1h后经左侧颈静脉30 min匀速输回全部自体血,建立失血性休克复苏模型.SP组和ATR+SP组在自体血回输即刻吸入2.4％七氟醚30 min,ATR组和SP+ ATR组于自体血回输前10 min静脉注射苍术苷5 ml/kg.于自体血回输结束24 h时,采用Western blot法检测海马组织Bcl-2和Bax的表达水平,采用钙黄绿素-钴荧光染色法检测mPTP的开放程度;于自体血回输结束72h时,采用Moms水迷宫实验检测认知功能.结果 与S组比较,HSR组逃避潜伏期延长,穿越原平台次数和目标象限运动距离减少,海马Bcl-2表达下调,Bax表达上调,mPTP开放程度升高(P＜0.05);与HSR组比较,SP组逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数和目标象限运动距离增多,海马Bcl-2表达上调,Bax表达下调,mPTP开放程度降低(P＜0.05),ATR组和SP+ATR组各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与SP组比较,SP+ATR组逃避潜伏期延长,穿越平台次数和目标象限运动距离减少,海马Bcl-2表达下调,Bax表达上调,mPTP开放程度升高(P＜0.05).结论 七氟醚后处理减轻失血性休克复苏大鼠脑损伤的机制可能与抑制mPTP开放有关.

目的:探讨UCP2 rs659366位点多态性与结直肠癌术后患者生存结局的关系.方法:选择2010年3月至2013年7月于四川省肿瘤医院肠道外科行手术治疗且资料完整的原发性结直肠癌患者501例,随访术后生存结局.采用限制性片断长度多态性PCR检测UCP2 rs659366位点的基因多态性.采用log-rank检验分析患者主要临床特征对生存结局的影响;采用Cox比例风险回归模型分析UCP2 rs659366位点基因多态性与患者生存结局之间的相关性.结果:本研究中位随访时间为44.23(0.13~78.53)个月,501例结直肠癌患者中101例失访,失访率为20.2%.log-rank检验结果显示,肿瘤部位、TNM分期、脉管侵犯、神经侵犯、术前癌胚抗原水平与结直肠癌患者的生存结局相关(P<0.05或P<0.01).UCP2 rs659366位点AA、GA和GG基因型结直肠癌患者的存活率分别为62.7%、69.9%和75.5%.多因素Cox比例风险回归模型分析结果显示:共显性遗传模型中UCP2 rs659366位点AA基因型是结直肠癌患者生存结局的危险基因型,其不良生存结局的风险是GG基因型的1.823倍;显性遗传模型中UCP2 rs659366位点GG+GA基因型与结直肠癌患者生存结局有关,其不良生存结局的风险是GG基因型的1.498倍;在加性遗传模型中,UCP2 rs659366位点GA基因型患者不良生存结局的风险是GG基因型患者的1.787倍,而AA基因型患者不良生存结局的风险是GA基因型患者的1.787倍.结论:UCP2 rs659366位点基因多态性可能是影响结直肠癌术后患者生存结局的因素.

为研究水杨酸(SA)和霜霉病两种处理诱导黄瓜PCD过程中线粒体相关基因的表达差异及其引发的黄瓜叶片PCD发生方式.选择长出4片真叶的黄瓜植株为试材,用10 mmol/L SA处理叶片,用5×105-10×105个孢子囊/mL的霜霉菌茵液接种叶片,分别取SA处理0、3、12和24 h及接种茵液0、36、72和96 h的叶片提取RNA,用qRT-PCR技术分析16个线粒体相关基因的表达动态.实验结果表明:16个基因在SA处理和霜霉病接种后都表达,呈现相似或相悖的表达趋势,说明SA诱导的PCD相关基因与霜霉病诱导的PCD信号通路有明显的相互联系,其中11个基因在霜霉病处理中结果与SA处理相似皆为上调,5个基因在SA处理中为上调表达,在霜霉病处理过程中却是下调表达,这也表明SA和霜霉病引发抗病信号途径存在差异,从而使黄瓜叶片PCD发生方式不同.通过查找文献分析16个基因的功能及研究现状,这些基因属于4个功能类群,主要包括参与线粒体膜转运、细胞呼吸作用、蛋白质合成、折叠和转运、线粒体信号转导以及其他或未知功能.

目的 评价一氧化碳(CO)对氧糖剥夺/复氧复糖诱发大鼠神经元焦亡的影响及其与线粒体通透性转换孔/活性氧(mPTP/ROS)信号通路的关系.方法 体外培养大鼠原代海马神经元,接种于6孔板或96孔板,采用随机数字表法分为5组(n=24):对照组(C组)、氧糖剥夺/复氧复糖组(OGD/R组)、CO后处理组(CO组)、mPTP特异性开放剂苍术苷+CO后处理组(ACO组)、ROS特异性诱导剂抗霉素A+CO后处理组(KCO组).采用无糖培养基低氧(1％O2)孵育16 h再正常培养24h的方法制备氧糖剥夺/复氧复糖损伤模型.CO组于低氧处理结束即刻在2％ CO-5％ CO2混合气体中37℃培养3h,随后正常培养21 h.ACO组和KCO组于低氧处理结束分别加入苍术苷20μμmol/L和抗霉素A 50lμmol/L,其余处理同CO组.各组处理结束后,采用免疫荧光双染cleavedcaspase-1-AlexaFluor 568/DAPI法确定神经元焦亡率.采用四甲基偶氮唑法确定神经元存活率,采用钙黄绿素法测定mPTP开放程度,采用二氯荧光黄双乙酸盐法测定ROS含量,采用Western blot法检测IL-1β、IL-18的表达.结果 与C组比较,其余各组海马神经元焦亡率、ROS含量和mPTP开放程度升高,存活率降低,IL-1β和IL-18表达上调(P＜0.05);与OGD/R组比较,CO组、ACO组和KCO组海马神经元焦亡率、ROS含量和mPTP开放程度降低,存活率升高,IL-1β和IL-18表达下调(P＜0.05);与CO组比较,ACO组和KCO组海马神经元焦亡率和ROS含量升高,存活率降低,IL-1β和IL-18表达上调,ACO组mPTP开放程度升高(P＜0.05).结论 CO后处理可抑制氧糖剥夺/复氧复糖诱发大鼠神经元焦亡,机制与抑制mPTP/ROS信号通路有关.

目的 探索17β羟基类固醇脱氢酶13(HSD17B13)和线粒体融合蛋白2(MFN2)在临床肝细胞癌(以下简称肝癌)组织样本中的表达变化及临床意义;同时采用生物信息学方法 ,进行目标基因分析.方法选取2017年9月-2018年3月于福建省立医院接受手术治疗的15例肝癌患者,手术后获取肝癌及其周围癌组织进行实验研究.通过实时荧光定量PCR及Western Blot法检测HSD17B13和MFN2基因在肝癌组织和癌旁组织中的表达变化情况,并分析其临床意义.采用单细胞测序数据库、GTEx数据库及TCGA数据库分析HSD17B13和MFN2在肝癌组织中的表达量、肝癌不同分期的表达水平及与肝癌总体生存的关系,并分析二者之间的相关性.符合正态分布的计量资料两组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析;非正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验,多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验.采用log-rank检验变量对生存率的影响,Kaplan-Meier法绘制生存曲线.采用Pearson相关分析检验两个变量之间的关系.结果 实时荧光定量PCR及Western Blot检测结果显示,相对于癌旁组织,HSD17B13和MFN2基因在肝癌组织中的表达明显下调(PCR检测t值分别为-2.467、-3.933,P值分别为0.020、0.001;Western Blot检测t值分别为-5.357、-5.771,P值分别为0.006、0.026).生物信息学分析结果表明,肝癌组织中HSD17B13表达明显下调(P<0.05);随着肝癌分期越高,HSD17B13表达水平越低(F=3.220,P=0.023);低HSD17B13表达与不良生存相关(风险比=0.630,P=0.011);在肝癌组织中,MFN2与HSD17B13表达呈显著正相关(r=0.190,P<0.001).结论 MFN2与HSD17B13在肝癌中表达下调,是潜在的具有临床相关性的抑癌基因,可能参与肝癌发生发展过程中的生物学行为,也可成为肝癌筛查、临床分级、预后评估的分子标志物及有效的肝癌治疗靶点.

目的 研究线粒体解偶联蛋白2(uncoupling protein2,UCP2)在肝癌组织中表达的临床意义及其与紫杉醇化疗耐药的关系.方法 选取2012年2月至2013年2月在仪陇县人民医院住院的肝癌病人120例,比较不同病理资料的UCP2水平,通过对病人展开为期5年的随访,比较不同预后及紫杉醇的耐药情况.结果 肝癌组织UCP2阳性表达72例,表达率60.00％,高于癌旁组织的12例,表达率10.00％,不同组织分化、淋巴结转移、TNM分期、生存情况的UCP2水平及紫杉醇耐药情况比较,均差异有统计学意义(P<0.05);不同组织分化、淋巴结转移、TNM分期、生存情况及UCP2水平均为紫杉醇耐药的独立危险因素,UCP2水平与紫杉醇耐药情况呈正相关(P<0.05).结论 UCP2阳性肝癌病人紫杉醇耐药性较高,生存情况较差,可作为病人预后评估的依据.