目的 为了对肉制品中牛肉源性成分进行准确定量,本文采用数字PCR(dPCR)技术对牛肉的线粒体Cytb基因进行定量检测,根据基因拷贝数建立了肉制品中牛肉源性成分PCR的定量检测方法.方法 参照标准设计的牛源性特异性引物、探针,猪源性特异性引物、探针,鸭源性特异性引物、探针以及动物源性成分通用引物、探针,建立了双重数字PCR体系.结果 在一定范围内生鲜牛肉质量与DNA含量、DNA含量与DNA拷贝数之间均呈现明显的线性关系,并以DNA含量为中间值计算出DNA拷贝数(C)与生鲜牛肉质量之间的换算公式:M 牛=0.020 9C+0.676.应用建立的dPCR方法对构建的肉样模型进行检测,结果显示牛肉定量检测值与实际质量基本一致,且受外源物种的干扰小.运用该方法对抽取的10份市售牛肉样品检测,同时通过特异/通用引物扩增的拷贝数之比(％)辅助判断肉制品中是否存在非牛源性的其他动物源性成分掺假,检测出部分样品不符合标签规定.结论 该方法可实现对牛源性成分的量化检测,能够作为区分故意添加和无意污染的依据,为执法监管部门提供有力的技术保障.

目的:研究外周血相对线粒体DNA拷贝数(mtDNAcn)与人体内在能力和体成分的相关性，探讨外周血mtDNAcn是否可作为评估老年人健康衰老的可靠生物标志物。方法:选取2019年9月至2021年6月在江苏省人民医院老年内分泌科的住院患者416例，提取受试者的外周血mtDNA，利用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测相对性mtDNAcn。内在能力评估包括5个方面，分别是：运动[摩尔斯跌倒评分(MFS)、生理衰弱表型(PFP)、肌少症问卷调查(SARC-CalF)、简易体能状况(SPPB)、起立-行走计时测试(TUG)量表]；活力[微量营养评估(MNA)、住院患者多维预后指数(MPI)量表]；认知[简易智能评价(MMSE)量表]；心理[抑郁评估(GDS)、焦虑自评(SAS)量表]、感觉功能[疾病累积评分-共病指数(CIRS-CI)量表]；评估体成分使用双能X线吸收仪测定受试者躯体各部位脂肪，包括躯干脂肪量、全身脂肪量、腹部脂肪量、臀部脂肪量，计算脂肪指数(FMI)和四肢骨骼肌量指数(ASMI)。结果:Spearman相关性分析和校正性别、体质指数后的偏相关分析结果均显示，mtDNAcn和年龄呈负相关( r＝－0.176、－0.144，均 P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示，mtDNAcn与4 m步速、SARC-CalF、MFS、MNA、MMSE、MPI及其子量表日常生活活动能力(ADL)、简易智能状态问卷(SPMSQ)的评分有相关性( r＝0.171、－0.207、－0.163、0.221、0.184、－0.210、0.241、－0.269，均 P<0.05)，在校正年龄、性别和体质指数后，mtDNAcn与4 m步速、MFS、MNA、MPI、SPMSQ评分仍显著相关( r＝0.170、－0.170、0.148、－0.242、－0.188，均 P<0.05)。此外，进一步分析mtDNAcn与体成分的Spearman相关性分析结果显示，mtDNAcn与FMI、躯干脂肪量、全身脂肪量、腹部脂肪量、臀部脂肪量有相关性( r＝0.168、0.143、0.175、0.116、0.199，均 P<0.05)，校正年龄、性别的偏相关分析结果显示，mtDNAcn与FMI、全身脂肪量、臀部脂肪量仍显著相关( r＝0.126、0.131、0.127，均 P<0.05)。且进一步的多元线性回归分析结果显示，mtDNAcn与年龄、步速、FMI、全身脂肪量、臀部脂肪量、MFS、PFP、MNA、MPI评分显著相关( β＝－0.191、0.156、0.126、0.131、0.125、－0.119、－0.145、0.151、－0.171，均 P<0.05)。 结论:mtDNAcn与躯体功能、衰弱、营养、跌倒、认知及体成分密切相关，可作为评估人体内在能力的运动及活力的生物标志物。

目的:探讨1个疑似线粒体病家系的遗传学病因。方法:收集患者及其家系成员的临床资料；抽取家系成员外周血，应用二代测序进行家系全外显子组、基因组拷贝数变异和线粒体基因组检测，对候选基因变异位点进行Sanger测序验证。结果:全外显子组家系检测发现患儿存在 NDUFS1基因父源c.64C>T(p.R22X)和母源c.845A>G (p.N282S)复合杂合变异，二者均可能导致蛋白功能丧失。基因组拷贝数变异和线粒体基因组检测未发现致病变异。 结论:疑似线粒体病的患儿可能缺少特异性的临床表型，包含线粒体DNA检测在内的综合性基因检测策略有助于及早明确诊断和治疗干预。

目的:分析煤矿工人中高血压与外周血端粒长度、线粒体DNA拷贝数（mtDNA-CN）的关系以及端粒长度与mtDNA-CN对高血压的交互作用。方法:2013年7-12月在山西省某煤矿集团开展病例对照调查研究，选取325名健康工人作为对照组，378名高血压工人作为病例组。通过问卷调查收集研究对象的一般人口学特征、生活行为习惯等信息；采用实时定量PCR检测外周血端粒长度、mtDNA-CN水平；运用logistic回归分析高血压与端粒长度、mtDNA-CN及其他因素的关系，采用相加、相乘模型分析端粒长度与mtDNA-CN对高血压的交互作用。结果:病例组工人的平均端粒长度为（1.50±0.55）kb，对照组工人的平均端粒长度为（2.01±0.62）kb，两组间的差异有统计学意义（ t=11.68， P<0.001）；相关分析结果显示，在病例组，端粒长度与mtDNA-CN呈正相关（ r=0.157， P=0.002）；多因素分析结果显示，端粒长度（ OR=4.408，95% CI：3.012~6.452）、年龄（ OR=0.417，95% CI：0.284~0.613）、BMI（ OR=1.357，95% CI：1.162~1.584）、家庭月均收入（ OR=0.656，95% CI：0.553~0.778）和工龄（ OR=1.249，95% CI：1.100~1.417）均是高血压的影响因素；且端粒长度与mtDNA-CN对高血压有相乘交互作用（ OR=1.267，95% CI：1.094~1.468）。 结论:端粒长度较短是高血压的危险因素，端粒长度与mtDNA-CN对高血压的相乘交互作用存在，但未发现mtDNA-CN与高血压相关。

目的:探讨线粒体DNA变异和冠心病的相关性，研究1个母系遗传冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)的可能机制。方法:选取2022年5月10日在杭州市第一人民医院就诊的1例女性CHD先证者及其母系遗传CHD家系成员作为研究对象，收集该家系的先证者和母系CHD成员的临床资料。通过对先证者及家系成员进行线粒体DNA测序，对照正常线粒体基因，经过数据比对筛选变异位点。针对变异位点，进行物种间的保守性分析并使用生物信息学软件预测变异位点对tRNA二级结构的影响。Real-time PCR检测线粒体拷贝数，并建立转线粒体细胞系进行线粒体功能分析，包括膜电位和ATP水平测定。结果:该家系共4代32人，母系成员10人，患CHD有4人，外显率为40%。测序结果发现先证者和母系成员携带m.4420A>T及m.10463T>C变异，2个变异位点在物种间均具有高度保守性。m.4420A>T位于tRNA Met D环第22位碱基上，m.4420A>T变异破坏了原有13T-22A碱基配对，可能会引起tRNA代谢障碍。m.10463T>C位于tRNA Arg接收臂的第67位碱基，该位点碱基与tRNA结构稳定性相关。实验发现携带m.4420A>T和m.10463T>C变异的家系成员的线粒体拷贝数、膜电位和ATP水平均低于正常对照( P<0.05)，分别平均下降约50.47%、39.6%及47.4%。 结论:线粒体tRNA Met 4420A>T和tRNA Arg 10463T>C变异可能是这个母系CHD家系的重要分子基础。该家系表现出mtDNA同质性变异、发病年龄以及临床表型等差异，提示核基因、环境因素和线粒体遗传背景对家系成员的冠心病发病进程有一定的影响。

目的:探讨肝细胞癌病人线粒体DNA拷贝数与临床病理特征的关系及对预后的影响。方法:采用回顾性队列研究方法。收集2011年3—6月海军军医大学附属东方肝胆外科医院收治的71例行手术切除肝细胞癌病人的临床病理资料；男61例，女10例；中位年龄为55岁，年龄范围为26~80岁。所有病人检测肝癌组织和癌旁组织线粒体DNA拷贝数。观察指标：（1）肝细胞癌病人肝癌组织和癌旁组织线粒体DNA拷贝数及其与临床病理特征的关系。（2）随访情况。（3）肝细胞癌病人预后影响因素分析。采用门诊或电话方式进行随访，了解病人术后生存情况。随访时间截至2019年9月。正态分布的计量资料以 x±s表示，组间比较采用独立样本 t检验或配对样本 t检验。偏态分布的计量资料以 M（范围）表示。计数资料以绝对数表示，组间比较采用 χ2检验或Fisher确切概率法。单因素和多因素分析均采用COX回归模型，单因素分析中 P<0.10的指标纳入多因素分析。采用Kaplan-Meier法计算生存率和绘制生存曲线，采用Log-rank检验进行生存分析。 结果:（1）肝细胞癌病人肝癌组织和癌旁组织线粒体DNA拷贝数及其与临床病理特征的关系：71例肝细胞癌病人肝癌组织线粒体DNA拷贝数为0.85±0.08，癌旁组织线粒体DNA拷贝数为1.16±0.08，两者比较，差异有统计学意义（ t=2.96， P<0.05）。71例病人中，48例为线粒体DNA低拷贝数，23例为线粒体DNA高拷贝数。线粒体DNA低拷贝数和高拷贝数病人肿瘤包膜（完整、不完整）和微血管侵犯（有、无）分别为20、28例，21、27例和16、7例，4、19例，上述指标比较，差异均有统计学意义（ χ2 =4.84，4.74， P<0.05）。（2）随访情况：71例病人均获得随访，随访时间为2.1~85.3个月，中位随访时间为47.8个月。71例病人1、3、5年总体生存率分别为87.3%、64.7%、37.4%。48例线粒体DNA低拷贝数病人1、3、5年总体生存率分别为81.2%、50.0%、29.2%；23例线粒体DNA高拷贝数病人1、3、5年总体生存率分别为95.7%、86.5%、54.7%，两者生存情况比较，差异有统计学意义（ χ2 =5.86， P<0.05）。（3）肝细胞癌病人预后影响因素分析：单因素分析结果显示肿瘤数目、门静脉癌栓、微血管侵犯、巴塞罗那临床肝癌分期、线粒体DNA拷贝数是影响肝细胞癌病人预后的相关因素（风险比=2.211，2.911，3.899，3.587，0.440，95%可信区间为1.024~4.777，1.485~5.704，2.115~7.186，1.615~7.966，0.223~0.871， P<0.05）。多因素分析结果显示：微血管侵犯和线粒体DNA拷贝数是肝细胞癌病人预后的独立影响因素（风险比=2.754，0.437，95%可信区间为1.374~5.521，0.205~0.932， P<0.05）。 结论:肝细胞癌病人线粒体DNA拷贝数与肿瘤包膜、微血管侵犯有关；微血管侵犯和线粒体DNA拷贝数是肝细胞癌病人预后的独立影响因素。

线粒体 DNA 耗竭综合征（mitochondrial DNA depletion syndrome，MDS）是一组因核苷酸合成核基因时发生突变，使线粒体DNA拷贝数减少而导致组织器官能量产生障碍的常染色体隐性遗传病。其中肝脑型MDS一般在新生儿期或婴儿期发病，特征性表现为早发性肝病和神经系统表现。本文报道1例DGUOK基因复合杂合突变导致的MDS，以加强临床对本病的认识。

目的:对31个甲基丙二酸血症家系进行相关致病基因检测，以明确基因诊断并为家系产前诊断提供依据。方法:针对2017年1月到2019年6月到郑州大学第一附属医院门诊进行咨询的31个甲基丙二酸血症家系，采用高通量测序技术对先证者进行基因变异检测，对致病/疑似致病基因变异进行Sanger测序验证并对先证者父母进行Sanger测序以追踪变异的来源，对只检测到 MMACHC基因杂合变异的先证者用实时荧光定量PCR对 MMACHC基因外显子缺失/重复进行检测。针对检测到致病/疑似致病变异的25个家系，对其中8名孕妇进行产前诊断。 结果:25个家系检测到致病/疑似致病基因变异(检出率80.65%)，3个家系检测到 MMACHC基因存在外显子杂合缺失合并杂合变异(检出率9.67%)，总检出率90.32%，其中18个家系为 MMACHC基因变异(3个家系存在外显子杂合缺失，共12种基因变异，其中1个新变异)，7个家系为 MUT基因复合杂合变异(共11种基因变异，2个新变异)，1个家系为 HCFC1 c．3356C>T(p.Thr1119Ile)半合子变异所致甲基丙二酸尿症伴同型半胱氨酸尿症Cb1X型，1个家系为 PCCB基因复合杂合变异所致丙酸血症，1个家系为 SUCLG1基因纯合变异所致线粒体DNA缺失综合征9型。产前诊断结果提示4名胎儿未检测到MMA相关基因致病变异，1例胎儿为 MUT基因杂合变异携带者，3例胎儿为 MACHC基因复合杂合变异患儿。 结论:高通量测序技术可以高效、准确筛选出甲基丙二酸血症及其他代谢病相关致病基因变异，但存在不能检测出致病基因外显子拷贝数异常的局限，其联合实时荧光定量PCR对致病基因外显子拷贝数进行检测能够提高MMA基因变异检出率，明确基因诊断并为相关家系的产前诊断提供指导。

人们通过日常生活、饮食和职业环境等暴露于各种不同的危害因素，这些危害因素的暴露会对机体造成不同程度的伤害。环境中化学有害因素暴露对线粒体的损伤日益受到关注。线粒体基因组的完整性对线粒体功能和细胞稳态至关重要，在各种有害化学环境因素的刺激下，线粒体极易出现损伤，造成线粒体功能障碍。目前，已有多种化学污染物暴露可对线粒体产生不同程度损伤，这些污染物可能通过诱发氧化应激造成线粒体结构和功能障碍，包括电子呼吸链传递障碍、线粒体膜电位变化、线粒体DNA突变/缺失、线粒体DNA拷贝数变异等方面。线粒体损伤可进一步导致细胞功能异常、凋亡和死亡等，从而诱发相关疾病。因此，本文就重金属等环境中的化学因素暴露对线粒体的损伤作用进行综述。

目的:探究异鼠李素对氧化应激状态下HaCaT细胞线粒体结构及功能的保护作用。方法:以HaCaT细胞为研究对象，实验分为4组：对照组（常规培养HaCaT细胞）、异鼠李素组（仅加入60 μmol/L异鼠李素处理）、H 2O 2组（仅加入600 μmol/L H 2O 2处理）、异鼠李素+ H 2O 2组（加入60 μmol/L异鼠李素预处理12 h后换液加入600 μmol/L H 2O 2处理12 h）。采用流式细胞仪检测细胞活性氧（ROS）水平，电镜观察线粒体超微结构，共聚焦荧光显微镜观察线粒体膜电位，ATP检测试剂盒检测线粒体ATP含量，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）测定线粒体DNA拷贝数。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:HaCaT细胞经H 2O 2处理后呈氧化应激状态，H 2O 2组细胞内ROS水平（10 725.0 ± 845.8）显著高于对照组（1 708.0 ± 69.4， t = 18.40， P<0.001），线粒体膜电位荧光强度、ATP含量、线粒体DNA特征性基因ND-1表达量均显著低于对照组（ t值分别为4.58、4.48、6.11， P值分别为0.010、0.010、0.003）。异鼠李素预处理后，异鼠李素+ H 2O 2组ROS水平（7 640.0 ± 922.7）显著低于H 2O 2组（ t = 4.27， P = 0.013），线粒体膜电位荧光强度、ATP含量、线粒体DNA ND-1基因表达量均显著高于H 2O 2组（ t值分别为4.59、4.58、5.61， P值分别为0.010、0.010、0.005）。电镜下，异鼠李素+ H 2O 2组线粒体结构较H 2O 2组清晰、完整，线粒体嵴无肿胀或轻度肿胀，未见线粒体空泡化；可见自噬小体吞噬受损的线粒体。 结论:异鼠李素可能通过诱导自噬降低ROS水平，对H 2O 2诱导的HaCaT细胞线粒体结构及功能损伤有保护作用。