目的:探讨肺炎克雷伯菌(KP)外膜蛋白A(OmpA)和黏附素MrkD优势抗原表位融合蛋白对KP感染小鼠的免疫保护作用。方法:根据(美国)国家生物技术信息中心(NCBI)公布的KP ompA和mrkD序列，通过生信分析选取这两个蛋白的优势抗原表位，经融合聚合酶链反应(PCR)扩增表位序列后克隆至pColdI载体，并转入本科室保存的大肠杆菌BL21(DE3)，经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导，Ni ＋层析凝胶纯化后获得重组蛋白rAD。rAD经皮下免疫22只BALB/c小鼠，同时设置22只佐剂对照组。完成免疫程序后通过酶联免疫吸附试验(ELISA)对小鼠血清中的抗体水平和脾脏体外抗原刺激后细胞因子分泌水平进行测定，并对小鼠鼻腔注射KP，观察免疫后的小鼠存活率和肺脏细菌数量。组间比较采用 t检验。 结果:分别扩增出ompA和mrkD抗原表位序列，并成功融合，融合片段大小为1 056 bp，与预测大小一致，克隆至pColdI载体后测序，测序正确。重组表达菌BL21(DE3)-pColdI-rAD经IPTG诱导后破碎收集上清纯化，获得可溶性rAD，大小为38.4×10 3，与预测大小一致。rAD 3次免疫BALB/c小鼠后，免疫组抗体滴度显著高于对照组(170 667.00±59 121.00比0.00±0.00， t＝5.00， P<0.01)。KP感染小鼠后，免疫组小鼠存活率显著高于对照组[(65.00±5.00)%比(0.00±0.00)%， t＝22.52， P<0.01]，免疫组小鼠肺脏细菌数显著低于对照组[(9 500.00±1 384.00) CFU比(87 833.00±25 365.00) CFU， t＝7.55， P<0.01]。脾细胞分离后经rAD刺激，免疫组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)分泌量均显著高于对照组[(115.70±17.21) pg/ml比(24.00±9.17) pg/ml， t＝8.14， P<0.01；(200.30±8.51) pg/ml比(9.00±3.00) pg/ml， t＝36.75， P<0.01；(92.33±6.11) pg/ml比(9.67±1.53) pg/ml， t＝22.73， P<0.01]。 结论:KP OmpA和MrkD优势抗原表位融合蛋白rAD，免疫BALB/c小鼠有助于对KP感染的抵抗。

泌尿道感染(urinary tract infection，UTI)是儿童常见的感染性疾病，随着抗生素的广泛使用，全球范围内细菌耐药率逐渐升高。益生菌作用的主要机制包括竞争性抑制病原、产生抗菌肽、调节酶活性、影响免疫调节和炎症因子等。体外及动物实验显示，益生菌可抑制泌尿道常见病原体的生长、黏附、侵袭以及预防小鼠UTI的发生。部分临床研究也显示，对于泌尿道结构正常或伴有膀胱输尿管反流的儿童，益生菌可有效预防UTI发生，同时降低细菌耐药率。因此，益生菌可能成为非抗生素途径预防儿童UTI的一种方式。

目的:原核表达淋病奈瑟球菌MetQ蛋白，采用鼻腔免疫途径初步评估MetQ蛋白的免疫保护效果。方法:利用基因重组技术构建pCold TF-metQ- E.coli BL21表达菌株，并进行MetQ蛋白的表达纯化。将6 ~ 8周龄BALB/c雌性小鼠随机分两组，每组6只，MetQ组：MetQ蛋白+霍乱毒素B亚单位（CTB）佐剂等比例混匀后对小鼠进行鼻腔滴注，10 μg/只；磷酸盐缓冲液（PBS）组：鼻腔滴注等比例、等剂量的PBS + CTB佐剂。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测MetQ组末次免疫后3只小鼠的血清及阴道分泌物中的抗体效价。免疫印迹分析MetQ在不同淋病奈瑟球菌中的表达情况。间接ELISA分析MetQ抗血清与全菌抗原的结合能力。评估MetQ抗血清对淋病奈瑟球菌的杀菌活性以及对ME-180细胞的黏附抑制作用。计量资料以 ± s表示，不同处理组间比较采用 t检验。 结果:成功表达去除信号肽的MetQ蛋白。MetQ组小鼠经鼻腔免疫后血清能检测到特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgA抗体，抗体滴度分别达1 × 10 7、1 × 10 5、2 × 10 4、1 × 10 2，阴道分泌物能检测到特异性IgG、IgA抗体，抗体滴度分别达1 × 10 3和1 × 10 2。免疫印迹结果显示，MetQ蛋白在8株淋病奈瑟球菌中均有表达。间接ELISA结果显示，MetQ抗血清与淋病奈瑟球菌全菌抗原结合能力为20。血清杀菌力实验结果显示，与无血清对照组（100%）相比，MetQ抗血清的有效杀菌滴度可达1∶320（淋病奈瑟球菌存活率：46.33% ± 6.67%， t = 8.05， P = 0.001），MetQ抗血清稀释1∶160、1∶640时，淋病奈瑟球菌存活率分别为22.01% ± 6.80%（ t = 11.47， P <0.001）、84.55% ± 6.99%（ t = 2.21， P > 0.05）。黏附抑制实验结果显示，与无血清对照组（100%）相比，MetQ抗血清稀释1∶20、1∶40、1∶80能抑制淋病奈瑟球菌对ME-180细胞的黏附作用（淋病奈瑟球菌黏附率= 17.25%、28.23%、54.51%， t = 48.44、31.88、7.29，均 P<0.05）。 结论:MetQ蛋白在不同淋病奈瑟球菌中均有表达，经鼻腔免疫小鼠后能在血清及阴道分泌物中检测到高效价的特异性抗体。MetQ抗血清与淋病奈瑟球菌有较好的亲和性，并具有较好的血清杀菌活性及抗体黏附抑制作用，是一种有潜力的淋病奈瑟球菌疫苗候选蛋白。

目的:探讨新生儿气管导管内腔表面细菌生物膜(endotracheal tube-bacterial biofilm，ETT-BF)与呼吸机相关性肺炎(ventilator-associated pneumonia，VAP)之间的关系。方法:纳入2019年1月至2020年1月在温州医科大学附属第二医院新生儿科采取气管插管留置时间≥48 h的新生儿30例，根据气管导管留置时间分为A组(2~6 d)13例、B组(7~14 d)9例和C组(>14 d)8例。观察扫描电子显微镜下ETT-BF的形态，分析3组患儿VAP的发生率，气管导管表面分离菌株阳性率和下呼吸道分泌物分离菌株阳性率、菌株检出情况及其耐药性。统计学分析采用 χ2检验。 结果:扫描电子显微镜结果提示气管导管留置达3 d可在气管导管内腔表面观察到片状基质物，留置4 d可见球菌黏附，随着气管导管留置时间延长，细菌生物膜结果趋近完善。30例新生儿中，下呼吸道分泌物分离菌株阳性率达23.3%(7/30)，均为革兰阴性菌。A组无患儿发生VAP，B组有2例VAP患儿，C组有5例VAP患儿，3组VAP发生率差异有统计学意义( χ2＝10.82， P＝0.004)。不同气管导管留置时间下气管导管表面分离菌株阳性率差异无统计学意义( χ2＝1.03， P＝0.598)。13例A组患儿中气管导管表面分离菌株阳性者7例，主要为革兰阳性菌，随着留置时间延长，气管导管表面分离菌株逐渐以革兰阴性菌为主。在7例VAP患儿中，5例下呼吸道分泌物分离菌株与其对应气管导管表面分离菌株一致，分别为液化沙雷菌、产酸克雷伯菌、黏质沙雷菌、脑膜脓毒性黄杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌，且菌株耐药性一致。 结论:早期的ETT-BF定植菌可能来自上呼吸道，较少发生迁移引起VAP，随着气管导管留置时间延长，患儿的VAP发生率升高，气管导管表面及下呼吸道分泌物可发现同一病原菌，具体病原菌来源仍有待进一步研究阐明。

目的:探讨黏附侵袭性大肠埃希菌( E. coli)LF82菌株对UC小鼠肠道屏障结构和功能的影响。 方法:将24只清洁级C57BL/6小鼠分为菌株UC组、UC组和健康对照组，每组8只。采用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠UC模型，造模前1周，给予菌株UC组小鼠1×10 9 CFU E． coli LF82菌株灌胃，使菌株定植。通过疾病活动指数(DAI)、结肠大体形态损伤评分、结肠黏膜损伤指数(CMDI)、结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性、组织病理学表现等比较 E. coli LF82对UC小鼠结肠炎症的作用。通过透射电子显微镜和直接免疫荧光染色法观察3组小鼠结肠组织超微结构和细胞骨架F-肌动蛋白的变化，采用过碘酸希夫反应(PAS)染色和天狼星红染色评估结肠黏液分泌能力和纤维化程度。采用 t检验、最小显著差异法、重复测量方差分析和单因素方差分析进行统计学分析。 结果:菌株UC组小鼠造模第4、5、6、7天DAI评分均高于UC组[分别为(2.53±0.38)分比(2.01±0.53)分、(3.02±0.62)分比(2.67±0.24)分、(3.13±0.61)分比(2.20±0.24)分、(3.27±0.28)分比(2.20±0.69)分]，差异均有统计学意义( t＝3.37、2.25、9.56、10.24， P均<0.05)。菌株UC组小鼠结肠的大体形态损伤评分高于UC组[(6.17±1.94)分比(2.83±0.98)分]，差异有统计学意义( t＝－3.75， P<0.05)。菌株UC组小鼠CMDI和结肠黏膜MPO活性均高于UC组[(16.80±2.79)分比(11.80±3.11)分、(729.3±77.5) U/mg比(594.4±31.9) U/mg]，差异均有统计学意义( t＝－2.83；均值差值为134.82，95% CI 72.12～197.51； P均<0.05)。透射电子显微镜下结果显示，菌株 E. coli LF82可侵入小鼠肠上皮下，引起结肠组织进一步损伤，使结肠骨架蛋白F-肌动蛋白分布状况发生改变。PAS染色结果显示，菌株UC组和UC组PAS阳性细胞百分比低于健康对照组[(32.40±8.02)%、(41.90±8.99)%比(57.70±11.52)%]，差异有统计学意义( F＝17.63， P<0.01)，菌株UC组PAS阳性细胞百分比低于UC组，差异有统计学意义(均值差值为－9.50，95% CI －18.33～－0.67， P<0.05)。天狼星红染色结果显示，菌株UC组结肠黏膜绒毛上皮部分被破坏，胶原纤维增生严重；菌株UC组和UC组胶原纤维面积比高于健康对照组[(51.83±5.78)%、(37.11±5.59)%比(15.41±2.25)%]，差异有统计学意义( F＝86.72， P<0.01)；菌株UC组胶原纤维面积比高于UC组，差异有统计学意义(均值差值为14.83，95% CI 8.91～20.76， P<0.05)。 结论:E． coli LF82可加重DSS诱导的UC小鼠结肠炎症，导致结肠超微结构和细胞骨架发生改变，还可降低小鼠结肠黏液分泌能力，增加结肠组织纤维化程度。

目的:研究转录调控因子OmpR在创伤弧菌中致病相关的生物学功能及分子机制。方法:通过基因无痕敲除技术构建创伤弧菌 ompR基因敲除株(Δ ompR)。通过生长曲线测定法检测不同渗透压下菌株的耐受力，细菌泳动试验检测运动性，结晶紫染色试验检测细菌生物膜形成能力，菌落计数法测定创伤弧菌Δ ompR株黏附细胞的变化，乳酸脱氢酶释放法测定创伤弧菌Δ ompR株对细胞毒性的变化，以明确Δ ompR株的致病性相关生物学表型；实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)法检测创伤弧菌Δ ompR株和野生株中毒力相关靶基因 ompN、 ompU、 ompA、 hcp2的mRNA水平变化。 结果:成功构建创伤弧菌Δ ompR株。与野生株相比，Δ ompR株在高渗透压培养基中生长缓慢，生物膜形成能力减弱，细菌运动性未有明显差异，Δ ompR株对细胞的黏附率和毒性显著低于野生株。Δ ompR株中渗透压调节及生物膜形成相关 ompN基因mRNA水平显著下调( P<0.05)，其他靶基因mRNA水平无明显变化。 结论:OmpR参与调控创伤弧菌高渗透压环境下生长、生物膜形成、对细胞的黏附及毒性。

目的:探究牙龈卟啉单胞菌( Porphyromonas gingivalis, P． gingivalis)菌体表面菌毛素(fimbrillin, FimA)在 P. gingivalis促进食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)进展过程中的作用。 方法:野生型 P. gingivalis与 fimA基因缺失型 P. gingivalis( fimA-/-P. gingivalis)经形态学和PCR鉴定后感染ESCC细胞，免疫荧光、CCK-8、Transwell小室检测 fimA-/-对 P. gingivalis侵入细胞、增殖、迁移和侵袭能力影响，Western blot检测pSmad2/3变化，裸鼠皮下成瘤检测荷瘤生长。 结果:fimA-/-P． gingivalis与野生型 P. gingivalis比较，FimA缺失可能降低菌体间黏附， fimA-/-P. gingivalis侵入NE6-T细胞内细菌数目减少，刺激NE6-T和KYSE30细胞增殖、迁移和侵袭能力降低，pSmad2/3激活降低， fimA-/-P. gingivalis感染的KYSE30在裸鼠皮下生长较野生型 P. gingivalis明显降低。 结论:FimA介导了 P. gingivalis促进ESCC演进的作用，是阻断 P. gingivalis促肿瘤作用的潜在靶点分子。

目的:研究输尿管支架表面载铜涂层的抗菌性能及其生物相容性，以确定最适宜的载铜水平。方法:利用聚多巴胺（PDA）及二甲胺基甲硼烷（DMAB），在聚氨酯（PU）支架表面构建具有不同铜含量的载铜PDA涂层。通过平板计数法，研究涂层对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀灭情况；采用扫描电镜，研究涂层表面的细菌黏附情况；利用荧光显微镜，观察细菌在涂层表面的活/死情况；利用细胞增殖试验，将样品与L929细胞共培养，研究载铜涂层的生物相容性。结果:载铜样品分别与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌培养24 h后，其抗菌率均超过90%，且随着涂层中铜含量的增加，抗菌性能提升。载铜样品表面黏附的细菌量明显较低，且多数为死细菌。当所用涂层制备液中的铜含量为0.25~1 g/L时，载铜涂层表面的细胞增殖率高于80%，材料无细胞毒性。结论:涂层制备液中的铜含量为1 g/L时，可以制备出兼具优异的抗菌性能及良好的生物相容性的载铜PDA涂层，形成一种潜在的输尿管支架涂层制备方案。

创面愈合是一个涉及血管生成和抗感染的过程，它仍然是世界范围内实验和临床研究中的挑战。据报道，锌离子可广泛参与血管生成并发挥抗菌作用，因此适合用于促进创面愈合。近日，上海市第六人民医院骨科、上海市四肢显微外科研究所的陈仕艳教授团队，上海东华大学材料科学与工程学院的王华平教授团队与上海交通大学医学院附属第一人民医院创伤中心的黄寅骏教授团队联合，在《Burns & Trauma》杂志发表了题为《Zn2+-Loaded adhesive bacterial cellulose hydrogel with angiogenic andantibacterial abilities for accelerating wound healing》的实验研究，观察负载锌离子的黏性细菌纤维素水凝胶在创面愈合过程中的血管生成和抗菌能力，以探讨其在促进创面愈合中的重要意义。该研究制备的细菌纤维素/聚多巴胺/沸石咪唑酸酯骨架-8（bacterial cellulose/polydopamine/zeolitic imidazolate framework-8，BC/PDA/ZIF8）水凝胶具有合适的机械强度、优异的溶胀性能、良好的组织黏附性、有效的血管生成和抗菌作用以及良好的物理屏障性能。体内实验表明，BC/PDA/ZIF8水凝胶通过刺激血管生成，加速大鼠全层缺损创面愈合。该研究证明，BC/PDA/ZIF8水凝胶具有抗菌和改善细胞增殖、上皮再形成和组织重塑作用，在促进大鼠全层缺损皮肤创面愈合方面具有巨大潜力。

脓毒症为感染致全身免疫失调的炎症反应综合征，血小板在脓毒症发生发展中起着重要作用。血小板可通过黏附、聚集、活化、脱颗粒作用与病原微生物相反应，以达到保护机体的作用。同时，脓毒症时血小板还可与中性粒细胞等免疫细胞相互作用，参与微血栓、炎症的形成。因此，血小板有抗微生物效应及与其他先天免疫细胞协作，形成复杂的血管内免疫防御系统，防止细菌传播的功能。但其介导的免疫功能如果失调，可致宿主细胞和组织受到严重的附带损害，导致脓毒症相关器官功能障碍。本文对血小板在脓毒症及其器官功能障碍中的免疫机制作一综述。