目的:探讨基于软骨脱细胞外基质微载体体外构建具有功能化和自我更新能力的软骨类器官。方法:取新鲜的猪关节软骨，将部分仅粉碎处理的软骨微粒设置为天然软骨组；利用物理离心化学萃取相结合的脱细胞方法，制备粒径合适的细胞外基质（ECM）微载体，设置为微载体组。通过旋转式生物反应器将人脐带干间充质干细胞（hUCMSCs）和人软骨细胞（hCho）按照3∶1的比例与微载体负载，体外构建软骨类器官，将诱导不同时间的类器官分为诱导0、7、14及21 d组。4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）荧光染色观察、DNA定量评估微载体组和天然软骨组细胞残留情况；番红O、甲苯胺蓝染色观察微载体ECM保留情况，二甲氨基苯甲醛比色法测定微载体组和天然软骨组胶原蛋白含量；二甲基亚甲蓝（DMMB）比色法测定微载体组和天然软骨组糖胺聚糖（GAGs）含量。扫描电镜及能谱分析对微载体进行进一步表征；将添加体积分数10%胎牛血清（FBS）的杜尔伯克改良伊戈尔低糖培养基（DMEM）培养的hUCMSCs作为对照组，将微载体浸提液培养的hUCMSCs作为实验组，两组分别设置培养1、3、5 d共3个时间点的亚组，细胞增殖及毒性检测试剂盒（CCK-8）检测两组生物相容性。活死染色检测诱导0、7、14及21 d组的软骨类器官细胞活性，Ki67荧光染色鉴定诱导14 d软骨类器官的自我更新能力。RT-PCR测定诱导7、14、21 d组的软骨类器官，包括软骨形成相关标记物聚蛋白聚糖（ACAN）、Ⅱ型胶原（COL2A1）、性别决定区Y框蛋白9（SOX9）及软骨肥大、矿化相关标记物Ⅰ型胶原（COL1A1）、Runt相关转录因子2（RUNX2）、骨钙素（OCN）的表达水平；比色法和DMMB法测定诱导0、7、14及21 d组的类器官分泌胶原蛋白和GAGs能力。结果:DAPI荧光染色结果显示，天然软骨组具有大量细胞核，而微载体组则基本无细胞核。微载体组DNA含量为（7.8±1.8）ng/mg，较天然软骨组的（526.7±14.7）ng/mg显著降低（ P<0.01）。番红O、甲苯胺蓝染色可见微载体着色较深且均一，保留大量软骨ECM成分。微载体组胶原蛋白含量为（252.9±1.4）μg/mg，GAGs含量为（173.4±0.8）μg/mg，均显著低于天然软骨组的（311.9±2.2）μg/mg、（241.3±0.7）μg/mg（ P<0.01）。扫描电镜显示，微载体表面有凹凸不平相互交错的胶原纤维网络。能谱分析结果显示，C、O、N元素均匀分布在微载体，表明该微载体成分组成均匀。微载体生物相容性良好，培养1、3 d时，对照组和实验组CCK-8实验结果比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）；培养5 d，实验组 A值为0.53±0.02，优于对照组的0.44±0.03（ P<0.05）。诱导0、7、14及21 d组中，hUCMSCs和hCho贴附在微载体表面且细胞活性好，活死比例分别为（70.6±1.1）%、（80.5±0.6）%、（94.5±0.9）%、（90.8±0.5）%（ P<0.01）；诱导14 d时，软骨类器官有大量Ki67阳性细胞。RT-PCR显示，诱导7 d组ACAN、COL2A1、SOX9、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平分别为1.00±0.09、1.00±0.24、1.00±0.18、1.00±0.03、1.00±0.06、1.00±0.13；诱导14 d组ACAN、COL2A1、SOX9、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平分别为4.16±0.28、5.09±1.25、5.65±1.05、0.47±0.01、1.68±0.02、0.21±0.06；诱导21 d组ACAN、COL2A1、SOX9、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平分别为13.42±0.92、3.07±0.21、1.84±1.08、2.72±0.17、2.91±0.18、3.32±1.20。与诱导7 d组比较，诱导14 d组ACAN、COL2A1、SOX9、RUNX2表达水平均升高（ P<0.05），COL1A1表达水平降低（ P<0.05），OCN表达水平差异无统计学意义（ P>0.05）；与诱导7 d组比较，诱导21 d组ACAN、COL1A1、RUNX2表达水平均显著升高（ P<0.01），COL2A1、SOX9、OCN表达水平差异均无统计学意义（ P>0.05）；与诱导14 d组比较，诱导21 d组ACAN、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平均升高（ P<0.05或0.01），COL2A1表达水平差异无统计学意义（ P>0.05），SOX9表达水平降低（ P<0.05）。诱导0、7、14及21 d组胶原蛋白含量分别为（219.15±0.48）μg/mg、（264.07±1.58）μg/mg、（270.83±0.84）μg/mg、（280.01±0.48）μg/mg，GAGs含量分别为（171.18±1.09）μg/mg、（184.06±1.37）μg/mg、（241.08±0.84）μg/mg、（201.14±0.17）μg/mg。与诱导0 d组比较，诱导7、14、21 d组胶原蛋白和GAGs含量均显著升高（ P<0.01）。在诱导7、14、21 d组中，诱导7 d组胶原蛋白含量最低（ P<0.01），诱导21 d组胶原蛋白含量最高（ P<0.01）；诱导7 d组GAGs含量最低（ P<0.01），诱导14 d组GAGs含量最高（ P<0.01）。 结论:物理化学方法结合制备的微载体脱细胞成功，其基质保留较多，成分均一且无细胞毒性。基于微载体负载hUCMSCs与hCho体外成功构建软骨类器官，具有细胞活性好、自我更新能力、软骨形成相关基因表达强及分泌胶原蛋白和GAGs等特点，诱导14 d时构建的软骨类器官成软骨活性最佳。

目的:基于文献计量研究将现有临床专业学位研究生教育质量的关键问题指标进行系统梳理与聚类，以期构建出集科学性、合理性和代表性为一体的多维质量评估指标体系，为评估我国临床专业研究生教育提供科学测度工具。方法:通过挖掘UCINET6网络分析集成软件及其包括的一维与二维数据分析NetDraw程序的相关功能，实现社会网络分析法（social network analysis，SNA）对临床专业学位研究生教育质量问题集的萃取与聚类。结果:构建出三级维度评价指标体系，一级维度为能力考核、教学体系、教学质量保障体系、专业认知与从业前景、考核评估体系和组织；把脉并诊断出临床医学专业研究生教育质量的8个关键问题。结论:临床研究生教育质量评价指标体系是教育质量提高的有效测评工具，基于多维视角，将关键问题作为优先干预的重点领域，为保障2020至2025专业研究生教育发展工作提供有效的循证依据。

目的:观察祖师麻干浸膏粉及不同萃取部位的皮肤刺激性,并基于生物信息学预测其刺激性成分及作用机制.方法:将斯泼累格·多雷(SD)大鼠随机分为完整皮肤组和破损皮肤组,观察连续给药7 d和停药后3 d皮肤状况.运用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)查询祖师麻刺激性成分和作用靶点.通过GeneCards数据库、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)等数据库收集疾病靶点.运用Metascape平台进行基因本体(GO)富集以及京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析,将核心靶点与祖师麻刺激性成分进行分子对接.结果:祖师麻干浸膏粉低、中剂量组对破损皮肤有轻微红斑、水肿反应;祖师麻干浸膏粉高剂量组、石油醚部位和二氯甲烷部位对完整皮肤和破损皮肤均有轻微红斑、水肿反应;乙酸乙酯部位和水层部位均无红斑、水肿反应.2)从祖师麻活性成分中筛选出7种刺激性成分,通路富集的主要通路为磷酸肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-AKT)信号通路、细胞增殖的肉瘤基因(Ras)信号通路、促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路、端粒结合蛋白(Rap1)信号通路和松弛素(Relaxin)信号通路等.分子对接结果中瑞香毒素、木犀草素以及大黄素甲醚与核心靶点的结合最稳定.结论:祖师麻干浸膏粉高剂量下有轻微皮肤刺激性,可能是存在于石油醚和二氯甲烷部位中的瑞香毒素、木犀草素以及大黄素甲醚等通过多靶点、多通路的复杂作用促进炎症介质的生成,引起皮肤轻微红斑和水肿.

基于对宽叶山蒿不同萃取组分的化学成分分析以及抗氧化和抗炎作用评价,结合网络药理学、分子对接技术探讨宽叶山蒿发挥抗炎作用的药效物质和分子作用机制.采用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术鉴定出宽叶山蒿 32 个化学成分,其中水组分7 个、正丁醇组分21 个、乙酸乙酯组分22 个;采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH)、2,2′-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS)及铁离子自由基(FRAP)法测定不同萃取组分的抗氧化活性,采用脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7 细胞炎症模型,以细胞上清液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平及细胞中相关炎症因子mRNA表达量为指标评价抗炎作用.结果表明宽叶山蒿乙酸乙酯组分为其最佳抗氧化、抗炎活性组分.网络药理学分析结果显示,鼠李秦素、异泽兰黄素、棕矢车菊素、木犀草素、泽兰黄酮等黄酮类成分可作用于TNF、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 1(AKT1)、肿瘤蛋白p53(TP53)、胱天蛋白酶-3(CASP3)和表皮生长因子受体(EG-FR)等关键核心靶点,通过调节磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-AKT)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等信号通路发挥抗炎作用.分子对接结果进一步显示上述核心成分与核心靶点间均具有良好的结合性能.该研究初步阐明了宽叶山蒿乙酸乙酯组分抗炎的药效物质及作用机制,为后续的临床应用和药物开发提供了依据.

目的 探讨复方川紫方萃取油联合刺络拔罐治疗顽固脓包性皮炎的疗效.方法 选取顽固脓包性皮炎患者78例作为研究对象,按照随机数字表法分成观察组和对照组各39例,观察组采用复方川紫方萃取油联合刺络拔罐治疗,对照组采用盐酸左西替利嗪片治疗,观察2组临床疗效.结果 治疗2个疗程后,观察组治疗总有效率为97.44%(38/39),对照组为84.62%(33/39),观察组显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2组治疗后症状评分较治疗前均有显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),且观察组下降水平显著优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2组治疗后生活质量评分较治疗前均有显著提高,差异有统计学意义(P<0.05),且观察组提高水平显著优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 复方川紫方萃取油联合刺络拔罐治疗顽固脓包性皮炎,能够调和气血、温经通络、扶正祛邪,通过皮肤吸收直接作用于病变部位,起到显著治疗作用.

目的 研究老年人慢性病的影响因素,为老年人慢性病的防治提供有效的建议和措施. 方法 对黑龙江省第五次卫生服务调查数据进行整理,筛选60岁以上的老年人作为研究对象,影响因素设定为健康行为、身体功能、人际网络、物质条件和社会支持五个维度,采用偏最小二乘-结构方程模型(PLS-SEM)进行统计分析. 结果 研究样本的慢性病患病率为56.52％.测量模型的组合信度估计值均大于0.8,数据信度良好;因素负荷量的估计值在0.56～0.89之间,均达到可接受水平;平均变异萃取量(AVE)均大于0.5,表明潜变量从观察变量处获得了很好的解释信息.健康行为、身体功能、物质条件和社会支持四个维度与慢性病的发生均呈负相关,健康行为和患病情况的路径系数为-0.395、身体功能和患病情况的路径系数为-0.306、物质条件和患病情况的路径系数为-0.340、社会支持和患病情况的路径系数为-0.244.结论 健康行为、身体功能、物质条件和社会支持这四个维度对慢性病有直接作用,同时与人际网络共同构建出复杂的路径实现了对慢性病的综合影响.其中健康行为是慢性病的首要影响因素,健康行为的养成有利于控制慢性病的发生发展;老年人身体功能的退化增加慢性病发生的风险;物质条件和社会支持的提升有利于降低慢性病的发病率,提高老年慢性病患者的生活质量.

中药材重金属的污染问题已成为影响中药广泛应用的主要问题.由于中草药水煎液中基质复杂,在脱除重金属的同时,还要保证对其有效成分不产生影响,脱除难度大大增加.目前去除中药材中重金属的方法有吸附法(大孔树脂、γ-巯丙基键合硅胶、壳聚糖等)和超临界CO2络合萃取法.着眼于中药材中重金属的脱除方法,对文献报道的脱除方法进行归纳总结,为今后中药重金属脱除方法及材料的开发提供借鉴.

目的 通过研究络合萃取剂组成变化对甘草超滤液中甘草苷萃取效果的影响,优选出适合于甘草苷萃取分离的络合萃取剂.方法 以甘草苷和甘草酸单次萃取率为指标,通过单因素实验,在考察多种二元混合络合萃取剂对甘草超滤液中指标成分萃取情况的基础上,采用U5(53)均匀设计优化含有2种络合剂的三元络合萃取剂,以期进一步提高甘草苷络合萃取效率,降低成本.结果 三元络合萃取剂中磷酸三丁酯(tributyl phosphate,TBP)对三烷基氧化膦(trialkyphosphine oxide,TRPO)络合萃取甘草苷没有协同萃取作用.优选15％TRPO+85％磺化煤油所组成的络合萃取剂甘草苷的单次萃取率为99.6％,甘草酸的单次萃取率为8.3％.结论 优选的络合萃取剂对甘草超滤液中甘草苷的萃取能力强、选择性高,可用于甘草超滤液中甘草苷的络合萃取.

目的 建立一种采用超滤-络合萃取技术制备甘草酸的工艺.方法 考察pH值(pH 4～8)对超滤液中甘草酸萃取率的影响;采用正交试验优选络合萃取甘草酸的工艺条件;通过考察反萃取剂种类及浓度,确定甘草酸的反萃取工艺条件.结果 所得甘草酸最佳络合萃取工艺条件为超滤液pH值应调至2、萃取剂为三烷基氧化膦(TRPO)-磺化煤油(5∶95)、有机相与水相体积比为1∶1,甘草酸平均萃取率达到99.2％.甘草酸最佳反萃取工艺条件为22.5 mmol/L NaOH水溶液为反萃取剂、有机相与反萃取剂体积比1∶1,甘草酸单次反萃取率达到98.8％,甘草酸总转移率为98.1％.结论 超滤-络合萃取技术可作为甘草酸制备的一种新工艺.

目的 建立一种分离纯化甘草超滤液中甘草苷的络合萃取及反萃取制备技术.方法 以甘草苷萃取率为指标,采用均匀设计确定最佳的络合萃取剂组成,再采用正交试验优选络合萃取工艺条件.以甘草苷反萃取率为指标,通过考察反萃取剂的种类及浓度,确定反萃取甘草苷的工艺条件.结果 经络合萃取研究发现,络合萃取剂宜选用由三烷基氧化膦(TRPO)和磺化煤油组成的二元络合萃取剂.甘草苷的最佳络合萃取工艺条件为TRPO-磺化煤油(9∶91)、甘草超滤液pH值调至4、有机相与水相体积比为1∶1,甘草苷平均萃取率达到99.6％.反萃取工艺研究发现,在有机相与反萃取剂体积比为1∶1的条件下,17.5 mmol/L NaOH水溶液为最佳反萃取剂,甘草苷的反萃取率为99.3％.结论 在优选所得条件下,甘草超滤液中的甘草苷可实现从超滤液到络合萃取剂再到碱性反萃取剂的顺利转移,甘草苷总转移率高达98.9％,可为甘草苷的分离纯化提供一种全新的制备技术.