研究祖师麻及其炮制品对SD大鼠Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)中辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)分化的影响.按体质量将64只SD大鼠随机分为正常组,模型组,祖师麻炙品低、高剂量组,生品低、高剂量组,祖师麻甲素组,雷公藤多苷组.除正常组外,CIA模型在第1次免疫后第7天进行二免,并在二免7 d后灌胃28 d.取材后,采用苏木素-伊红(HE)染色观察CIA大鼠关节滑膜炎症的情况;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中转化生长因子-β(TGF-β)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10水平变化;实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测关节滑膜中分化簇80(B7-1)、分化簇86(B7-2)、分化簇28(CD28)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)mRNA和蛋白表达;流式细胞术用于检测大鼠关节滑膜中Th17和Treg细胞的比例.结果显示,与正常组相比,模型组大鼠的关节滑膜炎症明显加剧,关节炎指数评分明显上升,免疫器官指数上升(P＜0.01);与模型组相比,各给药组均能不同程度地改善大鼠的关节炎症,降低关节评分指数,抑制滑膜增生,降低免疫器官指数;相较于模型组,各给药组中大鼠血清中IL-2、IFN-γ 显著下降(P＜0.01),TGF-β、IL-4、IL-10 显著上升(P＜0.01),滑膜中 B7-1、CTLA-4 mRNA 及蛋白表达显著升高(P＜0.01),关节组织中的Th17细胞和Treg细胞的比例出现显著降低(P＜0.01).综上得出祖师麻通过调控B7/CD28/CTLA-4通路以及调节Th17/Treg平衡,抑制CIA大鼠中Th17细胞的表达,促进Treg细胞的表达,进而治疗RA.

目的:采用高效液相色谱(HPLC)指纹图谱结合近红外光谱模型评价祖师麻膏药质量.方法:采用HPLC法测定了祖师麻甲素含量,建立了25批祖师麻膏药HPLC指纹图谱;用近红外光谱仪采集25批祖师麻膏药近红外光谱图,应用分析软件OPUS5.5建立相关系数模型和一致性评价模型.结果:祖师麻甲素含量均符合药品质量标准,平均值为122 μg/g;祖师麻膏药HPLC指纹图谱和近红外图谱的平均相似度分别为98.52%和99.90%,25批祖师麻膏药全部通过一致性评价模型验证,两种方法均证明了祖师麻膏药质量稳定、可控.结论:近红外光谱模型具有快速、无损伤、无污染的优点,可用于评价祖师麻膏药的质量.

目的:观察祖师麻干浸膏粉及不同萃取部位的皮肤刺激性,并基于生物信息学预测其刺激性成分及作用机制.方法:将斯泼累格·多雷(SD)大鼠随机分为完整皮肤组和破损皮肤组,观察连续给药7 d和停药后3 d皮肤状况.运用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)查询祖师麻刺激性成分和作用靶点.通过GeneCards数据库、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)等数据库收集疾病靶点.运用Metascape平台进行基因本体(GO)富集以及京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析,将核心靶点与祖师麻刺激性成分进行分子对接.结果:祖师麻干浸膏粉低、中剂量组对破损皮肤有轻微红斑、水肿反应;祖师麻干浸膏粉高剂量组、石油醚部位和二氯甲烷部位对完整皮肤和破损皮肤均有轻微红斑、水肿反应;乙酸乙酯部位和水层部位均无红斑、水肿反应.2)从祖师麻活性成分中筛选出7种刺激性成分,通路富集的主要通路为磷酸肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-AKT)信号通路、细胞增殖的肉瘤基因(Ras)信号通路、促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路、端粒结合蛋白(Rap1)信号通路和松弛素(Relaxin)信号通路等.分子对接结果中瑞香毒素、木犀草素以及大黄素甲醚与核心靶点的结合最稳定.结论:祖师麻干浸膏粉高剂量下有轻微皮肤刺激性,可能是存在于石油醚和二氯甲烷部位中的瑞香毒素、木犀草素以及大黄素甲醚等通过多靶点、多通路的复杂作用促进炎症介质的生成,引起皮肤轻微红斑和水肿.

目的 以祖师麻Daphnes Giraldii Cortex不同体积分数乙醇渗漉流浸膏为药物模型,研究其对后交联凝胶基质黏弹性及释药性的影响.方法 结合黏附力测试、流变学指标、体外释放度试验及相关性分析,考察不同祖师麻提取物出膏率、软化点及pH值对后交联凝胶基质成型过程中关键流变学参数及贴膏释药性的影响.结果 当乙醇体积分数在75％～95％时,祖师麻提取物出膏率及pH值随乙醇体积分数的升高而显著降低,软化点则相反.出膏率主要通过影响基质的复合模量(G*)及屈服应力(τ)值来影响贴膏内聚力及抗剪切能力,软化点和pH值主要通过影响基质G*、r、弹性模量(G')、G值来影响贴膏的结构稳定性、抗剪切性、初黏力及剥离强度.体外释药结果显示,祖师麻甲素10 h内的累积释药率随提取物醇提体积分数的升高而增大,但提取物3个理化性质对释药率的影响并不显著.结论 不同祖师麻提取物对后交联基质的性能影响总体差异不大,通过检测基质相关的流变学指标可以有目的地对基质配方进行相应调整,从而进一步提高贴膏的成型质量和后交联基质的普遍适用性.

目的 观察祖师麻乙素(DAN)对胶原诱导型关节炎(CIA)小鼠辅助性T17细胞(Th17)/调节性T细胞(Treg)的影响,初步探讨DAN对CIA小鼠的治疗作用及其机制.方法 通过胶原诱导造模法建立CIA小鼠模型.将DBA/1小鼠随机分为正常组(0.9％NaCl)、模型组(CIA模型)、阳性对照组(腹腔注射1.5 mg·kg-1甲氨蝶呤)和低、中、高剂量实验组(腹腔注射2、4、8 mg·kg-1 DAN).用酶联免疫吸附试验法测定血清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测小鼠滑膜组织转录因子维A酸相关孤儿受体γt(RORγt)和叉头框蛋白p3(Foxp3)mRNA的相对表达水平,用流式细胞术检测小鼠脾Th17、Treg细胞变化.结果 正常组、模型组和中、高剂量实验组和阳性对照组的血清IL-1β水平分别为(38.82±2.20)、(59.37±4.84)、(46.23±4.54)、(43.87±4.72)和(42.76±1.55)pg·mL-1,TNF-α 水平分别为(86.22±2.48)、(106.28±9.13)、(91.74±1.50)、(89.63±1.34)和(88.51±4.75)pg·mL-1,Foxp3 mRNA 表达水平分别为1.00±0.06、0.22±0.14、0.39±0.03、0.44±0.11 和 0.51±0.11,RORγt mRNA表达水平分别为 1.00±0.81、5.27±4.81、1.08±0.89、1.03±0.61 和1.03±0.61,Th17 细胞的表达分别为 1.77±0.88、10.80±1.80、5.35±0.23、4.51±0.01 和 4.08±0.49,Treg 细胞的表达分别为 4.28±0.67、1.52±0.05、2.37±0.17、3.17±0.29和3.39±0.17.模型组的上述指标与正常组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05);中、高剂量实验组、阳性对照组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).结论 祖师麻乙素能缓解CIA小鼠关节肿胀,减轻CIA小鼠关节病理损伤,其机制与调节CD4+T淋巴细胞亚群Th17/Treg细胞失衡有关.

目的:探索温经止痛巴布膏的最佳乙醇提取工艺.方法:采用正交试验L9(34)法,以7-羟基香豆素、芍药苷的含量和干浸膏得率为考察指标,筛选出最佳提取工艺条件.结果:影响提取工艺的因素的程度依次为提取时间、料液比、乙醇浓度.最适工艺条件为:处方量药材加6倍量60%的乙醇,浸泡30 min,提取60 min,提取2次.结论:该提取工艺稳定、可行.

目的:观察灌胃给予祖师麻肠溶微丸对CCI大鼠的MWT以及背根神经节中P2X4和P38MAPK受体的影响,探究祖师麻肠溶微丸治疗坐骨神经痛的机制.方法:术后第8天按MWT值对位随机分配法分为7组:Control组、Sham组、Model组、Positive Drug组、HEPZ组、MEPZ组和LEPZ组,于术后第8天开始灌胃给药.给药14 d后灌注固定,取背根神经节,免疫组化观察P2X4和P38MAPK的表达情况.结果:Model组在第8、14和20天MWT明显降低(P＜0.01).与Model组相比,其余各组第14天MWT值出现显著差异(P＜0.01),20 d以后差异持续存在(P＜0.01).免疫组化P2X4在背根神经节中的表达情况,各组均与Model组有统计学差异(P＜0.01),P38MAPK的表达情况除Positive Drug组外,各组与Model组相比,有明显差异(P＜0.05).结论:口服祖师麻肠溶微丸可明显改善CCI模型,提高MWT,且背根神经节中P2X4和P38MAPK受体表达下调,提示祖师麻肠溶微丸有治疗坐骨神经痛的作用,其止痛的效果与P2X4-P38MAPK通路有关.

目的 采用基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS的代谢组学方法探索类风湿性关节炎大鼠内源性脂质代谢物在不同病程时期的变化趋势及祖师麻片对差异性代谢物的调控作用.方法 采用胶原诱导关节炎(CIA)大鼠模型,分别收集对照组、模型组及祖师麻片[0.6 g/(kg·d)]组大鼠造模前(0 d)及造模后14、21、36 d的血清样本,提取样本中脂质成分,经生物信息学分析鉴定并寻找差异性代谢物,并探讨代谢规律.结果 与对照组比较,胶原诱导的CIA大鼠脂质代谢出现明显异常,具体表现为3个酰基肉碱含量显著上升,TG碳链中碳原子个数小于58的TG含量呈现下调趋势,碳原子个数大于58的TG类物质含量显著升高.与模型组比较,祖师麻片对1种磷脂酰丝氨酸、1种神经酰胺、2种酰基肉碱、4种磷脂酰胆碱和4种三酰甘油的代谢水平有很好的调节作用.结论 类风湿性关节炎能够引发机体血清中脂质代谢紊乱,祖师麻片对部分脂质代谢物有调控作用.

目的 建立唐古特瑞香药材中4种主要成分的HPLC测定方法,并进行聚类分析.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Teckmeck C18(5μrn,4.6 mm×250 mm);流动相A:乙腈,流动相B:0.4％磷酸,梯度洗脱(0～40min,A:15％→ 30％;40～45 min,A:30％→15％;45～50 min,A:15％);检测波长为266 nm,流速1.OmL·min-1,柱温为35℃,进样量为20 μL.结果 祖师麻甲素、芫花素、紫丁香苷、7-羟基香豆素检测质量浓度线性范围分别为0.4112～205.6 μg·mL-1(r=0.9999)、0.4348～217.40μg·mL-1(r=0.9999)、0.4104～205.2 μg·mL-1(r=0.9999)、0.4276～213.80μg·mL-1(r=0.9999);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均＜2.0％;加样回收率为97.4％～101.3％(RSD=0.80％～1.3％,n=6).10批次样品可聚为2类,产地为青海海北州门源县与青海湟中县样品所合成分含量相近.结论 建立的含量测定方法操作简单,精密度、稳定性、重复性好,可用于同时测定唐古特瑞香药材中祖师麻甲素、芫花素、紫丁香苷、7-羟基香豆素的含量;不同产地的唐古特瑞香药材成分含量差异较大.

目的 验证祖师麻膏药治疗膝骨关节炎的有效性和安全性.方法 采用多中心随机对照临床试验设计,于2016年5月至2017年4月纳人中国中医科学院广安门医院、首都医科大学附属北京中医医院、上海市中医医院、卫生部北京医院、北京积水潭医院、首都医科大学世纪坛医院、北京军区总医院、甘肃省中医院门诊确诊的396例膝关节炎患者,参照美国风湿病学会1995年膝骨关节炎分类标准,将患者以1∶1∶1的比例随机分为祖师麻膏药12 h贴敷组、祖师麻膏药24 h贴敷组和吲哚美辛巴布膏24 h贴敷组并干预2周.主要疗效指标为膝关节疼痛视觉模拟评分(PVAS),次要疗效指标为西安大略和麦克马斯特骨关节炎指数(WOMAC)评分,采用皮肤刺激性强度评价标准对试验过程中出现的皮肤刺激症状进行安全性评价.采用符合方案数据集进行统计分析.结果 3组患者治疗2周后PVAS和WOMAC评分较治疗前均有明显改善(P＜0.001).3组间WOMAC评分中疼痛维度的“平地走路时”和生理功能维度的“上楼”、“平地走路”和“繁重家务劳动”条目评分差异有统计学意义(P＜0.022),其中祖师麻膏药24 h贴敷组“平地走路时”、“上楼”和“繁重家务劳动”条目评分低于吲哚美辛巴布膏24 h贴敷组,差异有统计学意义(P＜0.006);祖师麻膏药24 h贴敷组的“平地走路”条目评分低于祖师麻膏药12h贴敷组,差异有统计学意义(P=0.006).祖师麻膏药12h和24 h贴敷组患者局部皮肤红斑、水肿、瘙痒症状分别为23、7、22和32、13、34例次,多于吲哚美辛巴布膏24 h贴敷组的8、2、8例次,差异均有统计学意义(P＜0.005),但皮肤刺激症状轻微,不影响药物使用.结论 祖师麻膏药短期应用与吲哚美辛巴布膏止痛疗效相当;祖师麻膏药贴敷24 h可明显改善患者平地走路时疼痛和上楼、繁重家务劳动的关节功能,其作用优于吲哚美辛巴布膏.祖师麻膏药应用后局部皮肤刺激但症状轻微.