目的:探讨慢性旋毛虫（ Trichinella spiralis, Ts）感染对伯氏疟原虫（ Plasmodium berghei ANKA， PbA）共感染小鼠肝脏免疫病理的调节作用及其机制。 方法:将64只SPF级6 ~ 8周龄雌性昆明小鼠按体重（22 ~ 25 g）采用随机数字表法分为4组：对照组，不做处理； Ts单感染组（ Ts组），每只小鼠口饲感染30条 Ts幼虫； PbA单感染组（ PbA组），每只小鼠于实验第121天经腹腔注射0.1 ml含1 × 10 6个感染 PbA红细胞的磷酸盐缓冲液（PBS）； Ts与 PbA共感染组（ Ts+ PbA组）：每只小鼠于口饲感染30条 Ts幼虫后第121天经腹腔注射0.1 ml含1 × 10 6个感染 PbA红细胞的PBS溶液。每组16只小鼠，其中每组10只小鼠用于观察生存率。 PbA组和 Ts+ PbA组于感染 PbA后第3天起每隔1天取尾静脉血，制作薄血膜涂片，进行吉姆萨染色，光镜下计数外周血红细胞 PbA感染率。在感染 Ts后第135天和/或感染 PbA后第15天处死小鼠，称取小鼠体重和肝脏重量，计算肝脏指数；取感染 Ts小鼠的新鲜膈肌制作肌肉压片，光镜下观察 Ts幼虫囊包；光镜下，苏木素-伊红（HE）染色观察各组小鼠肝脏组织病理改变，天狼星红染色观察比较各组肝脏组织的纤维化程度，免疫组织化学染色观察肝脏中F4/80 +枯否氏细胞表达水平。 结果:感染 Ts、 PbA后，光镜下分别观察到膈肌组织中的 Ts幼虫囊包和红细胞内的 PbA。感染 PbA后， PbA组和 Ts+ PbA组小鼠生存率比较，差异无统计学意义（ P > 0.05）；与 PbA组比较， Ts+ PbA组小鼠外周血红细胞 PbA感染率在感染 PbA后的第11、15天均较低（%：27.104 ± 7.623比45.032 ± 9.849，60.218 ± 2.776比76.778 ± 6.351， P均< 0.05），小鼠肝脏指数和肝脏组织病理学评分也均较低（ P均< 0.05）。天狼星红染色结果显示， Ts+ PbA组小鼠肝脏组织的纤维化阳性面积显著高于 PbA组（ P < 0.05）。免疫组织化学染色显示， Ts+ PbA组小鼠肝脏组织中F4/80 +枯否氏细胞的平均光密度值显著高于 PbA组（ P < 0.01）。 结论:慢性 Ts感染可降低 PbA共感染小鼠外周血红细胞的 PbA感染率，增强肝脏组织F4/80 +枯否氏细胞的表达，减轻肝脏免疫病理改变。

目的 探讨小鼠白细胞介素-4(IL-4)对肠道期旋毛形线虫感染的保护作用.方法 消化旋毛虫保种小鼠肌肉,收集肌幼虫,超声破碎后离心,取上清制备旋毛虫抗原.将10只野生型BALB/c小鼠随机分成未感染组和野生感染组,每组5只;另取4只IL-4敲除(IL-4KO)BALB/c小鼠作为IL-4KO感染组.野生感染组和IL-4KO感染组每鼠灌胃旋毛虫肌幼虫400条,未感染组灌胃等体积PBS.感染旋毛虫后8 d,采集各组小鼠眼眶静脉血,离心收集血清,ELISA检测单核细胞趋化因子1(MCP-1)含量.剖取十二指肠和近端空肠,制备石蜡切片后进行苏木精-伊红(HE)染色,使用Aperio ImageScope 12.4.3测量测量十二指肠、空肠的肠绒毛和隐窝的长度与杯状细胞的数量和大小,计算肠绒毛长度/隐窝长度的比值(V/C)和杯状细胞数/绒毛长度的比值(GC/V).分离肠系膜淋巴结中的淋巴细胞,与旋毛虫抗原(10μg/ml)共培养72 h,收集细胞上清,高通量液相蛋白芯片(Luminex)技术检测IL-1β、IL-12p70、IL-2、IL-5、IL-6、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.使用SPSS 26.0统计软件对数据进行分析,两两比较采用独立样本t检验,多样本比较采用单因素方差分析.结果 ELISA结果显示,未感染组、野生感染组、IL-4KO感染组小鼠血清中MCP-1含量分别为(344.90±21.80)、(350.50±38.30)、(467.94±190.01)pg/ml,IL-4KO感染组高于野生感染组(t=0.681,P＜0.05).HE染色结果显示,未感染组小鼠的十二指肠和空肠肠黏膜完整、绒毛结构正常,无炎症改变;野生感染组、IL-4KO感染组小鼠的十二指肠和空肠肠黏膜均出现空泡状的杯状细胞、绒毛长度变短,炎症明显,IL-4KO感染组炎症更为严重.IL-4KO感染组小鼠十二指肠和空肠V/C分别为2.62±0.12、2.78±0.25,均低于野生感染组的3.46±0.05、3.65±0.12(F=24.09、20.46,P＜0.01、0.05);未感染组空肠 V/C为4.69±0.16,高于野生感染组(F=25.43,P＜0.01).IL-4KO感染组十二指肠和空肠GC/V分别为9.66±0.88、7.33±0.88,均高于野生感染组的5.33±1.20、4.33±0.33(F=17.12、16.78,均P＜0.05).IL-4KO感染组十二指肠和空肠杯状细胞大小分别为(12.39±1.17)、(11.05±0.60)μm,均大于野生感染组的(8.33±0.44)、(8.44±0.58)μm(F=18.47、16.22,均P＜0.05)o Luminex结果显示,野生感染组小鼠淋巴细胞培养上清中IL-1β、IL-12p70、IL-2、IL-5、IL-6、IFN-γ、TNF-α的含量分别为(0.45±0.03)、(1.03±0.04)、(1.00±0.38)、(0.64±0.16)、(0.62±0.24)、(0.57±0.09)、(0.94±0.31)pg/ml,IL-4KO感染组的含量分别为(0.80±0.37)、(2.70±0.94)、(49.76±16.40)、(25.25±3.26)、(12.51±4.86)、(51.20±8.93)、(15.86±2.74)pg/ml;除 IL-1β(F=0.87,P＞0.05)外,IL-4KO 感染组均高于野生感染组(F=5.52、24.73、48.72、5.00、123.10、50.55,P＜0.05或0.01).结论 IL-4在旋毛虫感染肠道期起免疫保护作用,能够降低小鼠血清中MCP-1含量,减缓十二指肠及空肠的炎症反应,抑制炎性细胞因子的分泌.

试验旨在探究投喂3种饲料对中华绒螯蟹生长、消化酶活性及营养与品质的影响.试验分为3个组:冰鱼组(6月份后投喂冰鱼)、配合饲料组(6月份后投喂配合饲料)和黑水虻组(6月份后投喂黑水虻).每组4重复,每个重复4只.在8-10月养殖90d中,分别于每月20日进行采样,进行相关试验分析.结果表明,10月时中华绒螯蟹的体重、性腺指数(GSI)、总可食用率(TEY)在3组之间没有显著差异(P>0.05),黑水虻组的肝胰腺指数(HSI)最大.在肝胰腺消化酶活性方面,淀粉酶(AMS)和胰蛋白酶(TRY)活性在3组之间没有显著差异(P>0.05),而脂肪酶(LPS)活性黑水虻组最高.肝胰腺脂肪酸中,黑水虻组的总饱和脂肪酸(∑SFA)含量最高,冰鱼组的单不饱和脂肪酸(∑PUFA)和多不饱和脂肪酸(∑MUFA)含量最高;性腺脂肪酸中,配合饲料组的∑SFA、∑PUFA和∑MUFA含量最高;肌肉脂肪酸中,黑水虻组的∑SFA、∑PUFA和∑MUFA含量最高;肝胰腺氨基酸中,3组之间均无显著差异.肌肉氨基酸中,必需氨基酸(EAA)、非必需氨基酸(NEAA)和总氨基酸含量(TEAA)都是配合饲料组最高(P>0.05),半胱氨酸3组之间存在显著差异(P<0.05),冰鱼组含量最高,配合饲料组含量最低;肝胰腺中EAA、NEAA和TEAA都是黑水虻组最高(P>0.05).研究表明,3种饲料对中华绒螯蟹生长没有显著影响,而配合饲料能够提高性腺脂肪酸含量,黑水虻幼虫能够增加肝胰腺氨基酸含量,表明配合饲料更加利于中华绒螯蟹绿色发展.

目的 分离并鉴定旋毛虫新生幼虫分泌的细胞外囊泡(EV)主要成分,了解新生幼虫EV的功能.方法 消化旋毛虫保种小鼠肌肉,手机旋毛虫肌幼虫,昆明小鼠灌胃感染肌幼虫(2 000条/鼠)后5d取小肠,网筛法收集旋毛虫成虫,成虫置于RPMI 1640培养液中培养48 h后收集新生幼虫.采用差速超速离心法提取旋毛虫新生幼虫培养液中的EV,透射电子显微镜观察EV形态,使用纳米颗粒跟踪分析技术检测EV的粒径,蛋白质免疫印迹(Western blotting)验证EV蛋白.对新生幼虫及其EV进行蛋白组质谱分析和miRNA测序分析,采用t检验比较新生幼虫及其EV之间蛋白和miRNA的表达差异.差异表达蛋白和miRNA靶基因进行基因本体论(GO)功能条目富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.使用WoLFPSORT分析蛋白的亚细胞定位.结果 透射电子显微镜和纳米颗粒跟踪分析结果显示,旋毛虫新生幼虫分泌的EV为"杯盘"形膜性囊泡,平均粒径为(101.7±1.8)nm.Western blotting结果显示,新生幼虫EV能与旋毛虫感染小鼠血清产生特异性条带,相对分子质量约为65 000.蛋白组质谱分析结果显示,新生幼虫及其EV样品中分别检测到1424和231种蛋白,有220种蛋白在两组样品中均有表达,其中116种表达有差异(在EV中31种表达上调、85种表达下调).蛋白亚细胞定位分析结果显示,差异蛋白主要分布于细胞质(30.2％,35/116)、细胞核(19.0％,22/116)和细胞膜(17.2％,20/116).miRNA测序结果显示,新生幼虫及其EV样品分别检测到183和117种miRNA,有46种miRNA在两组样品中均有表达,其中40种表达有差异(在EV中10种表达上调、30种表达下调).在EV中表达上调的10种miRNA中,let-7-5p表达最高.GO功能条目富集分析结果显示,差异蛋白有57种属于细胞组成、73种具有分子功能、63种参与生物过程,差异miRNA的靶基因主要与自噬相关12基因转移酶活性、胞质泛素连接酶复合物、细胞对紫外线A的响应和钙离子稳态等条目有关.KEGG通路富集分析结果显示,差异蛋白主要富集在代谢途径、内质网中的蛋白质加工等相关通路,差异miRNA的靶基因仅涉及自噬-其他1条途径.结论 本研究分离并鉴定了旋毛虫新生幼虫分泌的EV,检测到新生幼虫及其EV间差异表达的116种蛋白和40种miRNA,主要参与代谢、自噬等途径,推测新生幼虫EV可能在旋毛虫感染早期逃避宿主免疫防御的过程中发挥重要作用.

目的 调查福建省5地区海鱼感染Ⅲ期异尖线虫(Anisakis spp.)幼虫的情况.方法 2021年10月至2022年5月期间,采购各海鲜市场不同品种海鱼,直接剖检海鱼或人工消化内脏和肌肉查找、分离Ⅲ期异尖线虫幼虫,经光学显微镜镜检虫种.统计分析福建省5地区和不同鱼种中异尖线虫幼虫的感染情况.结果 共剖检18种133尾海鱼,其中12种68尾海鱼感染异尖线虫幼虫,检获虫体2 214条,海鱼异尖线虫幼虫品种检出率、总感染率、感染度分别为66.7％(12/18)、51.1％(68/133)、32.6条/尾(2 214/68),海鱼品种中单尾带鱼的感染情况最严重,为416条/尾;未检出异尖线虫幼虫的海鱼品种有黄翅鱼、黄瓜鱼、东星斑、墨鱼、白鲑、鳊鲈.从地区分布看,长乐地区感染率最高(66.7％),各地区不同品种海鱼检出率芗城最高(71.4％).结论 福建省5地区海鱼体Ⅲ期异尖线虫幼虫感染严重,海鱼中异尖线虫幼虫的分布密度高,各地区异尖线虫幼虫检出率较高,福建省5地区居民具有高度感染异尖线虫的风险.

目的 了解华支睾吸虫体内神经递质5-羟色胺(5-HT)的分布规律.方法 从感染麦穗鱼中消化分离华支睾吸虫囊蚴,以灌胃方式感染90只昆明小鼠(40～50个囊蚴/鼠),分别于感染后第10、20、30天安乐死处死小鼠,从肝门静脉收集虫体.醋酸洋红染色后光学显微镜下观察不同发育阶段虫体内各器官发育情况;同时进行5-HT免疫荧光染色,在激光扫描共聚焦荧光显微镜下观察虫体内5-HT的分布情况.结果 醋酸洋红染色后光学显微镜下观察可见,感染后华支睾吸虫d1.幼虫中,消化、排泄器官基本发育成熟,生殖器官未完全发育成熟,子宫内可见散在分布的虫卵;d20幼虫中,生殖器官发育成熟,子宫中虫卵数量增多,睾丸分支增多;d30成虫中,消化、排泄、生殖系统均发育成熟,子宫内虫卵较d20幼虫排列更紧密,睾丸增大且分支明显.5-HT免疫荧光染色后激光扫描共聚焦荧光显微镜下可见,d1.幼虫的中枢经系统节、神经联合、口吸盘处荧光染色较强,在虫体内部器官中呈点状分布;d20幼虫的口吸盘附近神经联合处观察到少量神经细胞,除中枢神经系统外,虫体的排泄囊及排泄孔、生殖器官中出现5-HT荧光染色;d30虫体的消化、排泄、生殖器官中均出现5-HT荧光染色,睾丸的荧光染色较肠支、口腹吸盘等部位更强,虫体中存在较多神经细胞.结论 5-HT广泛存在于华支睾吸虫虫体内,主要分布于肌肉组织丰富的器官及内脏.5-HT在同一发育阶段虫体内不同器官中的分布存在差异,在相同器官的不同发育阶段也存在差异.

为进一步了解小鼠感染华支睾吸虫过程中的肝纤维化情况和免疫调节变化,将BALB/c小鼠随机分成感染组和对照组,每组30只,感染组小鼠胃饲200μl含150个华支睾吸虫囊蚴的生理盐水,对照组小鼠灌胃同体积生理盐水,于感染后第1、2、4、8和16周随机各取6只,称体质量后取肝、脾和血清.取小鼠肝组织,石蜡切片后进行苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色,观察胶原纤维沉积情况.小鼠肝组织总RNA逆转录后qRT-PCR检测肌成纤维细胞标志a-肌动蛋白(ACTA2)基因的相对转录水平,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测肝组织ACTA2蛋白的相对表达量.取小鼠脾组织,称重并计算每10 g体质量的脾质量(脾脏指数,mg/10g).流式细胞术分析小鼠脾CD4+T细胞、辅助性T1(Th1)细胞、Th2细胞、Th17细胞和调节性T(Treg)细胞的动态变化.取小鼠血清,使用流式细胞术检测肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-2、IL-4、IL-10和IL-17A等细胞因子的分泌水平.使用GraphPad Prism 9.0软件进行数据分析.组间比较采用双向方差分析,两两比较采用t检验.结果显示,小鼠感染华支睾吸虫囊蚴后体质量降低、脾指数升高,感染后各时期肝组织皆可见炎症病灶.HE染色结果显示,小鼠感染华支睾吸虫囊蚴后第1周,肝胆管周围可见华支睾吸虫幼虫,幼虫周围出现炎症细胞浸润.Masson染色结果显示,小鼠感染华支睾吸虫囊蚴后各时期,胶原纤维沉积相对面积均高于对照组(F=20.190,P＜0.05).qRT-PCR结果显示,感染后第2、4和16周,感染组小鼠肝组织ACTA2基因相对转录水平均高于对照组(t=2.042、2.475、1.634,均P＜0.01);第8周低于对照组(t=2.758,P＜0.05)o Western blotting检测结果显示,感染后各时期,感染组小鼠肝脏ACTA2蛋白相对表达量均高于对照组(F=3.225,P＜0.01).流式细胞术结果显示,感染组小鼠脾CD4+T细胞占比在感染后第2周降低至(13.4± 1.8)％,16周升高至(22.4±1.5)％;Th1细胞占比在感染后第2周升至(16.9±5.3)％,第16周降低至(3.9± 2.6)％;Th2细胞占比在感染后第4周降低至(2.3±0.6)％,第4周后逐渐升高;Th17细胞占比在第8周时升至(5.3±3.4)％,第16周下降至(2.4±1.4)％;Treg细胞占比在第4周降至(7.3±1.5)％,第16周升至(13.9± 1.2)％.感染组小鼠血清TNF水平在感染后第1周时升至(35.16±11.28)pg/ml,第8周起降至正常水平[(8.98± 1.66)pg/ml];血清IL-6水平在感染后各时期均高于对照组(t=2.095,P＜0.05);血清IL-2水平在感染后第8周降至(0.09±0.18)pg/ml,但在第 16周升高至(3.81±2.79)pg/ml;感染组小鼠血清 IFN-γ、IL-4、IL-10 和 IL-17A水平随着感染时间延长而逐渐升高(F=8.726、8.068、6.795、14.840,均P＜0.05).本研究结果提示,CD4+T细胞和血清细胞因子的动态变化与华支睾吸虫诱导肝纤维化的发生发展密切相关.

配制4组等氮等脂(45％蛋白,15％脂肪)的配合饲料,对照组含有30％的鱼粉(FM30),其他3组分别用黑水虻(Hermitia illucens)幼虫粉替代16.67％(FM25)、33.33％(FM20)、50％(FM15)鱼粉,在室内循环水养殖系统中投喂加州鲈(Micropterus salmoides)幼鱼8周,探究用黑水虻幼虫粉替代不同比例鱼粉对加州鲈生长性能、机体健康和肌肉品质的影响.结果显示,各组加州鲈在终末体质量、增重率、特定生长率、成活率上无显著差异(P＞0.05),FM20组鱼拥有较高的增重率和特定生长率,其饲料系数最低,显著低于FM15和FM25组(P＜0.05).用黑水虻幼虫粉部分替代鱼粉,降低了全鱼和肝脏的脂肪含量、血清甘油三酯含量、肝脏的C14:0、C16:0、C18:1n-9和C18:3n-3的含量和肌肉的DHA含量,但是,增加了肝脏C18:0、DHA、EPA和C22:5n-3的含量,对肌肉和肝脏的氨基酸组成影响较小.与对照组相比,FM20组鱼前肠和肝脏的丙二醛含量显著增加(P＜0.05),前肠和血清的碱性磷酸酶活性显著降低(P＜0.05),前肠上皮出现肠绒毛破损、肠皱褶粘连等结构受损情况,前肠脂肪酶活性、肌肉脂肪含量和全鱼粗蛋白含量、肝脏DHA含量最高.上述结果表明,加州鲈具有内源合成高度不饱和脂肪酸的能力;在加州鲈幼鱼的配合饲料中可以用黑水虻幼虫粉替代50％鱼粉(FM15),鱼粉的添加量最低可降到15％,不影响加州鲈的生长性能,但是,最适宜的黑水虻幼虫粉替代水平是替代33.33％鱼粉.研究成果为研制营养组成科学合理、成本低的加州鲈配合饲料提供资料.

目的 探究果蝇突触黏附分子神经连接蛋白-4(Drosophila neuroligin 4,DNlg4)对幼虫神经肌肉突触发育的调控是否依赖于经典的neuroligin(Nlg)突触前配体分子轴突蛋白(Drosophila neurexin,DNrx).方法 主要利用免疫荧光染色和激光共聚焦显微观测技术,对包括野生型、dnlg4突变体、dnrx突变体和dnlg4,dnrx双突变体等不同基因型果蝇三龄幼虫的神经肌肉接头(neuromuscular junction,NMJ)的形态进行观察,测量其突触分枝总长度并计数突触终扣(bouton)数目.以此作为NMJ发育状态参数,通过比较不同基因型果蝇的NMJ发育缺陷程度,确定DNlg4和DNrx在调控神经肌肉突触发育中的关系.结果 DNrx缺失会导致较DNlg4缺失更严重的NMJ发育缺陷;缺失DNlg4会进一步加重因DNrx缺失而导致的NMJ发育缺陷;运动神经元表达外源的DNlg4可部分挽救DNrx缺失造成的NMJ发育缺陷;未检测到两类分子存在在体的相互结合.结论 DNlg4与DNrx对果蝇幼虫神经肌肉突触发育的正向调控具有协同效应,DNlg4以非依赖于DNrx的方式调控神经肌肉突触的发育.

目的 研究旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原(Trichinella spiralis muscle larvae excretory-secretory,Ts-Es)诱导小鼠肠道保护性免疫能力以及免疫调节作用.方法 54只BALB/c小鼠随机分为3组,空白对照组、旋毛虫感染组(Ts)、旋毛虫Ts-Es抗原免疫组(Ts-Es).空白组小鼠腹腔注射PBS;抗原免疫组小鼠腹腔注射0.1 mL的Ts-Es抗原与等量弗氏完全佐剂;旋毛虫感染组腹腔注射PBS和弗氏完全佐剂,每隔7d注射1次,共3次,末次注射后7d旋毛虫感染组和Ts-Es抗原免疫组用400条/mL旋毛虫感染性幼虫灌胃攻击感染.解剖取材,检查肠道成虫及肌肉幼虫减虫率,用HE染色法观察肠道病理变化,RT-qPCR法检测小肠中 目的基因mRNA表达水平.结果 与旋毛虫感染组相比Ts-Es抗原免疫组成虫和肌幼虫减虫率分别为49％(t=8.109,P＜0.05)和67％(t=8.090,P＜0.05);与空白对照组相比旋毛虫感染组小肠T-bet(t=5.25,P＜0.05)、GATA3(t=2.50,P＜0.05)、RORγ-t(t=4.71,P＜0.05)、IFN-γ(t=3.17,P＜0.05)、IL-4(t=2.60,P＜0.05)、IL-5(t=3.05,P＜0.05)、IL-17A(t=4.88,P＜0.05)mRNA表达量升高,Foxp3表达量没有统计学差异(t=1.55,P＞0.05);与旋毛虫感染组相比 Ts-Es 抗原 免疫组 T-bet(t=4.23,P＜0.05)、RORγ-t(t=4.30,P＜0.05)、IFN-γ(t=3.02,P＜0.05)、IL-17A(t=3.17,P＜0.05)mRNA 表达量 下降;GATA3(t=3.96,P＜0.05)、Foxp3(t=2.76,P＜0.05)、IL-4(t=5.16,P＜0.05)、IL-5(t=3.69,P＜0.05)、IL-10(t=2.61,P＜0.05)mRNA 表达量升高;与空白对照组相比 Ts-Es 抗原免疫组 GATA3(t=6.4,P＜0.05)、Foxp3(t=4.32,P＜0.05)、IL-10(t=2.6,P＜0.05)、IL-4(t=7.26,P＜0.05)、IL-5(t=6.3,P＜0.05)mRNA 表 达量升高均有统计学差异;RORγ-t(t=0.41,P＞0.05)、T-bet(t=1.02,P＞0.05)、IFN-γ(t=0.09,P＞0.05)、IL-17A(t=1.80,P＞0.05)mRNA表达量无统计学差异;肠道HE染色结果显示,与旋毛虫感染组相比抗原免疫组炎症好转,肠道HE染色结果显示,与旋毛虫感染组相比抗原免疫组炎症好转.结论 Ts-Es抗原免疫小鼠后可诱发转录因子GATA3,Foxp3相关的混合型免疫应答,并抑制旋毛虫感染引起的T-bet、RORγ-t所介导的炎症型免疫反应,抑制炎型细胞因子的释放,诱导宿主产生抗旋毛虫感染的免疫保护效果.