目的:探讨Krüppel样因子4（KLF4）在巨噬细胞炎症反应中的表达特点与作用及其对脓毒症小鼠炎症反应与脏器损伤的作用，为烧创伤脓毒症的靶向治疗奠定理论基础。方法:采用实验研究方法。取小鼠RAW264.7巨噬细胞与从10只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠中提取的原代腹腔巨噬细胞（PM）进行实验。采用内毒素/脂多糖（LPS）分别处理RAW264.7巨噬细胞与PM 0（未处理）、1、2、4、6、8、12、24 h构建巨噬细胞炎症反应模型，采用实时荧光定量反转录PCR（RT-PCR）法检测白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、CC趋化因子配体2（CCL2）与肿瘤坏死因子α（TNF-α）mRNA表达，据此确定后续部分实验LPS处理时间。用LPS处理RAW264.7巨噬细胞0、8 h，采用免疫荧光法检测KLF4的定位与蛋白表达；利用高通量测序技术平台对细胞进行转录组测序，采用DESeq2软件筛选2种处理时间细胞间的差异表达基因（DEG）。采用LPS分别处理RAW264.7巨噬细胞与PM 0、1、2、4、6、8、12、24 h，分别用实时荧光定量RT-PCR法与蛋白质印迹法检测KLF4的mRNA与蛋白表达。将RAW264.7巨噬细胞按随机数字表法分为阴性对照组与KLF4过表达组，分别转染对应质粒后用LPS处理0、8 h，采用实时荧光定量RT-PCR法检测KLF4、IL-1β、IL-6、CCL2与TNF-α的mRNA表达，采用蛋白质印迹法检测KLF4蛋白表达。前述实验样本数均为3。将40只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为KLF4过表达组和阴性对照组（每组20只），分别注射相应转染注射液后构建盲肠结扎穿孔脓毒症模型。采用随机数字表法从2组小鼠中各选取12只，观察建模后72 h内生存情况。于建模后8 h取2组分别剩余的8只小鼠，先行眼球取血，采用酶联免疫吸附测定法检测血清中IL-1β、IL-6水平，采用干化学法检测血清中丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平；后取心脏、肺脏、肝脏组织，行苏木精-伊红染色后观察损伤情况。对数据行独立样本 t检验、Cochran&Cox近似 t检验、单因素方差分析、Dunnett检验、Brown-Forsythe和Welch单因素方差分析、Dunnett T3检验、log-rank（Mantel-Cox）检验。 结果:与LPS处理0 h比较，LPS处理6 h与8 h RAW264.7巨噬细胞中IL-1β mRNA表达、LPS处理4~12 h RAW264.7巨噬细胞中IL-6 mRNA表达、LPS处理8 h和12 h RAW264.7巨噬细胞中CCL2 mRNA表达以及LPS处理4~8 h RAW264.7巨噬细胞中TNF-α mRNA表达均显著上调（ P<0.05或 P<0.01），LPS处理4~8 h PM中IL-1β与CCL2 mRNA表达、LPS处理2~24 h PM中IL-6 mRNA表达以及LPS处理2~12 h PM中TNF-α mRNA表达均显著上调（ P<0.05或 P<0.01）。选取8 h作为后续部分实验的LPS处理时间。KLF4主要定位在RAW264.7巨噬细胞的细胞核中。与LPS处理0 h比较，LPS处理8 h RAW264.7巨噬细胞中KLF4蛋白表达明显减少；LPS处理8 h RAW264.7巨噬细胞中有1 470个差异表达显著的DEG，包括转录表达显著下调的 KLF4［错误发现率<0.05，log 2（差异倍数）=-2.47］。与LPS处理0 h比较，LPS处理6~24 h RAW264.7巨噬细胞中KLF4 mRNA表达、LPS处理1~24 h RAW264.7巨噬细胞与PM中KLF4蛋白表达以及LPS处理4~24 h PM中KLF4的mRNA表达均明显降低（ P<0.05或 P<0.01）。与阴性对照组比较，KLF4过表达组LPS处理0、8 h RAW264.7巨噬细胞中KLF4的mRNA（ t'值分别为17.03、8.61， P<0.05或 P<0.01）与蛋白表达均明显升高，LPS处理0 h RAW264.7巨噬细胞中IL-6、CCL2的mRNA表达均明显升高（ t值分别为6.29、3.40， P<0.05或 P<0.01），LPS处理8 h RAW264.7巨噬细胞中IL-1β、IL-6、CCL2、TNF-α的mRNA表达均显著下降（ t值分别为10.52、9.60、4.58、8.58， P<0.01）。KLF4过表达组小鼠建模后72 h内生存比例明显高于阴性对照组（ χ2=4.01， P<0.05）。建模后8 h，KLF4过表达组小鼠血清中IL-1β、IL-6与ALT、AST水平分别为（161±63）、（476±161）pg/mL与（144±24）、（264±93）U/L，明显低于阴性对照组的（257±58）、（654±129）pg/mL与（196±27）、（407±84）U/L（ t值分别为3.16、2.44与4.04、3.24， P<0.05或 P<0.01）。建模后8 h，与阴性对照组比较，KLF4过表达组小鼠心脏、肺脏、肝脏的组织结构紊乱减轻，炎性渗出明显减少，脏器实质细胞病理样改变明显减轻。 结论:KLF4在LPS诱导的巨噬细胞炎症反应中表达显著下降，显著抑制巨噬细胞炎症反应；KLF4显著提高脓毒症小鼠生存率并缓解炎症反应与脓毒症相关脏器损伤。

目的:探讨氧化铜纳米酶对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面修复的作用及其机制。方法:(1)采用氯化铜与L-抗坏血酸反应的方法合成氧化铜纳米酶。采用透射电子显微镜观察氧化铜纳米酶大小和形貌，动态光散射粒度分析仪和纳米粒度电位仪分别分析其水合粒径和表面电位。(2)采用过氧化氢检测试剂盒、超氧阴离子检测试剂盒、3，3′，5，5′-四甲基联苯胺显色剂分别测定150 ng/mL氧化铜纳米酶的过氧化氢、超氧阴离子、羟自由基清除能力，计算过氧化氢、超氧阴离子、羟自由基清除比例(样本数均为3)。(3)将小鼠成纤维细胞系3T3细胞采用随机数字表法(分组方法下同)分为空白对照组、单纯过氧化氢组和过氧化氢＋氧化铜组，每组3孔。将终质量浓度25 ng/mL的氧化铜纳米酶加入过氧化氢＋氧化铜组细胞中预处理30 min。然后，在单纯过氧化氢组和过氧化氢＋氧化铜组细胞中各加入终物质的量浓度250 μmol/L过氧化氢，空白对照组常规培养。培养24 h后，采用2′，7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针检测细胞内活性氧水平(以绿色荧光强度表示)，细胞计数试剂盒8法检测并计算细胞存活率。(4)取10只6～8周龄雄性BALB/c小鼠(性别、鼠龄下同)，分为磷酸盐缓冲液(PBS)组与氧化铜组，每组5只。氧化铜组小鼠经尾静脉注射200 ng/mL的氧化铜纳米酶800 ng/kg，PBS组小鼠注射等体积的PBS。2组小鼠均每天注射1次，连续注射7 d。于第8天，取每组5只小鼠，采血行血细胞与血清生化分析，处死后收集心、肝、脾、肺和肾行苏木精-伊红(HE)染色后组织病理学观察。(5)取20只小鼠分为PBS组与氧化铜组，每组10只。采用链脲佐菌素及高糖高脂饮食法诱导糖尿病，并在其背部制作直径6 mm的全层皮肤缺损创面。伤后即刻，PBS组小鼠创面滴加20 μL PBS，氧化铜组小鼠创面滴加20 μL 200 ng/mL的氧化铜纳米酶，连续处理12 d。每组选定3只小鼠分别于伤后0(即刻)、3、6、9、12 d观察创面愈合情况，并计算创面未愈合面积。伤后6 d，每组取未行创面观察的3只小鼠，处死后酶联免疫吸附测定法测定创面组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6含量。伤后12 d，处死2组各剩余7只小鼠，行HE染色并观察创面新生上皮长度，行二氢乙锭荧光探针染色观察活性氧水平(以红色荧光强度表示)。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析、独立样本 t检验、Bonferroni检验。 结果:(1)制备的氧化铜纳米酶大小均匀，在干燥状态下平均直径为3.5～4.0 nm，水合粒径约为4.5 nm，表面电位为(-9.8±0.3)mV。综合判定，成功制备了氧化铜纳米酶。(2)氧化铜纳米酶分别处理2 h、10 min、5 min后，过氧化氢、超氧阴离子、羟自由基清除比例分别为(77±5)%、(45±5)%、(84±4)%。(3)培养24 h后，单纯过氧化氢组细胞内活性氧水平急剧增高，细胞形态异常且数量减少；过氧化氢＋氧化铜组细胞内活性氧水平明显降低，细胞形态与空白对照组相比无明显变化。单纯过氧化氢组细胞存活率明显低于空白对照组和过氧化氢＋氧化铜组( P<0.01)，而过氧化氢＋氧化铜组细胞存活率与空白对照组相近。(4)注射7 d后，PBS组和氧化铜组小鼠肝功能指标、肾功能指标、血细胞相关指标均相近；氧化铜组小鼠的心、肝、脾、肺和肾中，均未观察到组织坏死、充血或出血，与PBS组无明显差别。(5)氧化铜组小鼠创面相比PBS组表现出更快的愈合趋势，创面红肿情况较轻。氧化铜组小鼠伤后6、9、12 d创面未愈合面积分别为(28.8±1.9)、(17.6±3.8)、(10.4±1.8)mm 2，明显小于PBS组的(38.0±4.3)、(30.2±3.0)、(24.2±3.0)mm 2( t＝3.706、5.075、5.558， P<0.01)。伤后6 d，氧化铜组小鼠创面IL-1β、TNF-α、IL-6含量均明显低于PBS组( t＝6.115、11.762、11.725， P<0.01)。伤后12 d，氧化铜组小鼠创面新生上皮长度长于PBS组，创面组织活性氧水平明显低于PBS组。 结论:氧化铜纳米酶不仅具有良好的生物相容性，同时具有高效的活性氧清除活性，能够消除糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面过量表达的活性氧，降低氧化应激、减轻炎症，促进创面修复。

慢性鼻窦炎是一种多因素参与的鼻腔鼻窦黏膜的慢性炎症疾病，与哮喘高度相关。小气道是慢性阻塞性肺疾病和哮喘气流阻塞的主要部位，也是检测气道损伤的敏感部位。对于慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者中是否存在小气道功能障碍尚不清楚，目前常用的肺功能测定方法存在一定的局限性，而脉冲震荡技术被认为是一种有潜力的小气道功能评估方法。研究发现，慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者中小气道可能受损，特别是合并哮喘的患者，评估此类患者的小气道功能对于哮喘的早期筛查和干预可能有重要的临床意义。本文就慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者小气道功能肺量计检查方法、脉冲震荡评估技术、与小气道功能的关系及小气道功能评估的临床意义做一综述。

目的:建立SD大鼠放射性肺纤维化模型，探寻实验中纤维化蛋白、细胞因子等作为组织纤维化程度评价指标的可行性，为放射性肺纤维化的研究提供基础。方法:选取体重为180~200 g的SD雄性大鼠37只，完全随机分为对照组（5只）和照射组（32只）。照射组采用X射线行右肺单次照射，照射剂量分别为13 Gy(10只）、15 Gy(10只）和17 Gy(12只），分别于照后4个月和6个月，采用苏木精-伊红染色和马松三色染色评价大鼠肺组织纤维化程度；采用Western blot检测纤维黏连蛋白1(FN1）、基质金属蛋白酶2(MMP2）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在肺组织中的表达；测定肺组织中羟脯氨酸含量以评价肺组织中胶原蛋白表达水平。酶联免疫吸附测定法测定支气管肺泡灌洗液中转化生长因子β （TGF-β）、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、γ干扰素（IFN-γ）的变化。组间比较采用独立样本 t检验。 结果:与对照组相比，照射组4~6个月后均出现肺纤维化，纤维化程度随照射剂量的增大和照射时间的增长而增加；照射组大鼠肺组织中FN1、α-SMA的蛋白表达水平较对照组升高，MMP2的蛋白表达水平较对照组降低；6个月照射组羟脯氨酸含量较对照组升高，分别从（514.19 ±282.20）μg/mg增加至（886.13±145.01）、（1188.70±273.84）、（1700.70±590.95）μg/mg，且差异均有统计学意义（ t=2.621、3.609、4.004，均 P<0.05）；支气管肺泡灌洗液中TGF-β、白细胞介素6、TNF-α分泌量较对照组上调，差异有统计学意义（ t=4.030~12.780，均 P<0.05），IFN-γ较对照组下调，差异有统计学意义（ t=2.498~4.303，均 P<0.05）。 结论:SD大鼠放射性肺纤维化模型构建成功。大鼠肺组织纤维蛋白含量未能反映肺组织纤维化程度，肺组织羟脯氨酸含量与支气管肺泡灌洗液中细胞因子在重度纤维化时可作为评价指标。

目的:对比改良冬眠合剂和传统冬眠合剂对严重烫伤大鼠脏器功能的影响。方法:采用实验研究方法。取24只约10周龄雄性SD大鼠，按照随机数字表法分为假伤组、单纯烫伤组、传统冬眠合剂组和改良冬眠合剂组，每组6只。于单纯烫伤组、传统冬眠合剂组和改良冬眠合剂组大鼠背部造成30%体表总面积（TBSA）Ⅲ度烫伤，假伤组大鼠模拟致伤过程致假伤。伤后即刻，传统冬眠合剂组大鼠腹腔注射12 mL/kg由哌替啶、氯丙嗪和异丙嗪构成的传统冬眠合剂，辅以生理盐水灌胃；改良冬眠合剂组大鼠腹腔注射2 mL/kg由咪达唑仑和芬太尼构成的混合药剂，辅以西替利嗪灌胃。随后4组大鼠均腹腔注射乳酸林格液进行补液复苏，使补液及给药总剂量为2 mL·kg -1·%TBSA -1。次日，对2个冬眠合剂组大鼠再次同前给药。伤后3 d，取各组大鼠腹主动脉血并留取肝脏、小肠和肺脏组织，采用酶联免疫吸附测定法检测血浆中白细胞介素1β（IL-1β）、IL-10和IL-6水平，采用全自动生化分析仪检测血浆中丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）、碱性磷酸酶（ALP）、乳酸脱氢酶（LDH）、LDH同工酶1（LDH-1）、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、尿素、肌酐和尿酸水平，对肝脏、小肠和肺脏组织行苏木精-伊红染色后观察组织学变化。对数据行单因素方差分析和Tukey检验。 结果:伤后3 d，传统冬眠合剂组大鼠血浆中IL-10水平为（44±16）pg/mL，显著高于改良冬眠合剂组的（20±9）pg/mL和单纯烫伤组的（21±6）pg/mL（ P值均<0.05）；4组大鼠血浆中IL-1β和IL-6水平比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）。伤后3 d，单纯烫伤组大鼠血浆中ALT和AST水平分别为（77±14）、（213±65）U/L，均显著高于假伤组的（59±5）、（108±10）U/L（ P<0.05）；改良冬眠合剂组大鼠血浆中ALT和AST水平分别为（61±3）、（116±11）U/L，均显著低于传统冬眠合剂组的（81±13）、（207±54）U/L（ P<0.05），且改良冬眠合剂组大鼠血浆中AST水平显著低于单纯烫伤组（ P<0.05）。伤后3 d，4组大鼠血浆中γ-GT、ALP、LDH、LDH-1、肌酸激酶、CK-MB、肌酐和尿酸水平比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）；虽然4组大鼠血浆中尿素水平总体比较差异有统计学意义（ P<0.05），但单纯烫伤组分别与假伤组、传统冬眠合剂组、改良冬眠合剂组之间以及传统冬眠合剂组与改良冬眠合剂组之间比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）。伤后3 d，相对于假伤组，单纯烫伤组大鼠肝脏组织中可见肝细胞弥漫微泡性脂肪变性和空泡变性，小肠组织中可见绒毛间质明显疏松水肿，肺脏组织中可见大片区域肺泡间隔明显增宽；相对于单纯烫伤组，2个冬眠合剂组大鼠的肝细胞脂肪变性和空泡变性都有所减轻，肺泡壁增厚和肠绒毛间质水肿均得到缓解，且其中改良冬眠合剂组大鼠各脏器组织学表现更接近假伤组。 结论:传统冬眠合剂可能有更强的抑炎作用，而改良冬眠合剂具有更好的肝功能保护作用，但这2种冬眠合剂均可缓解严重烫伤大鼠肝脏、肺脏和小肠的组织病理学损害。对于肝脏、肺脏和小肠，改良冬眠合剂具有不亚于传统冬眠合剂的脏器保护作用。

目的:建立经呼吸道雾化定量吸入生物气溶胶暴露模型，研究炎症应激损伤敏感性早期评价指标。方法:以铜绿假单胞菌（ATCC15692）为模拟生物气溶胶，6周龄雄性SD大鼠为暴露对象。将实验大鼠随机分为对照组24只，无菌磷酸盐缓冲液（PBS）雾化暴露；低剂量暴露组28只，1.6×10 4 cfu/ml ATCC15692雾化暴露；中剂量暴露组40只，8.0×10 4 cfu/ml ATCC15692雾化暴露；高剂量暴露组48只，1.6×10 5 cfu/ml ATCC15692雾化暴露。Masson染色检测肺组织弹性纤维，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清C-反应蛋白（CRP）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素10（IL-10）、降钙素原（PCT）、血清淀粉样蛋白A（SAA）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和CC16蛋白（CC16）分泌水平。 结果:与对照组比较，暴露后实验组CRP、IL-6、PCT、SAA、TNF-α和CC16血清分泌水平明显升高，中剂量暴露组升高更显著（ t=-4.71～-14.88， P<0.01； t=-9.28～-28.29， P<0.01； t=-6.04～-12.97， P<0.01； t=-8.93～-19.12， P<0.01； t=-9.65～-148.76， P<0.01； t=-8.91～-11.90， P<0.01）；实验组血清IL-10浓度在暴露后24、48、72 h 3个检测时间点下降明显，中剂量暴露组下降更显著（ t=-6.74～28.86， P<0.01），在暴露后144 h则明显升高（ t=-4.06～-6.12， P≤0.01）。同一实验剂量组不同时间点比较，CC16血清浓度测量值总体呈下降趋势，低剂量暴露组暴露后24～48 h内下降明显（ t=2.78， P=0.05），中剂量暴露组第144 h下降显著（ t=4.41， P=0.01）；中剂量暴露组血清TNF-α浓度测量值在暴露后48 h下降显著（ t=4.56， P=0.01）；2个实验剂量组血清IL-6测量值暴露后24～72 h内呈升高趋势，暴露后144 h则显著下降（ t=5.91～28.45， P<0.01）；低剂量暴露组血清CRP、PCT、SAA浓度在整个测量时程内呈升高趋势，而中剂量暴露组在暴露后72 h内先升高、在暴露后144 h显著下降（ t=2.10～22.27， P<0.01）。 结论:生物气溶胶定量雾化吸入暴露可有效诱导呼吸系统炎性应答，血清CRP、IL-6、IL-10、PCT、SAA、TNF-α和CC16分泌水平随时间变化规律明显，可作为生物气溶胶吸入暴露早期评估敏感候选指标。

目的:探讨过表达长链非编码RNA（lncRNA）FAM224B对大鼠重症肺炎肺组织的保护作用及机制。方法:研究时间为2020年8月至2021年3月，将20只大鼠采用随机数字表法分为肺炎组（重症肺炎模型）和FAM224B组（重症肺炎模型+FAM224B质粒），每组10只。实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）测定肺组织FAM224B水平，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肺组织匀浆中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）6、IL-1β水平，生物信息学软件starBase v2预测FAM224B的靶基因，qRT-PCR检测肺组织靶基因的表达，Western blot检测肺组织核因子-κB（NF-κB）信号通路蛋白表达。结果:肺炎组、FAM224B组肺组织中FAM224B表达分别为（1.09±0.23）、（10.12±1.52），肺炎组FAM224B表达明显低于FAM224B组（ t=15.86， P < 0.01）。肺炎组肺组织匀浆中TNF-α、IL-6、IL-1β分别为（41.53±2.46）μg/L、（34.01±2.53）ng/L、（20.92±1.95）μg/L，FAM224B组分别为（21.71±2.25）μg/L、（17.13±3.01）ng/L、（11.97±1.21）μg/L，两组差异均有统计学意义（ t=15.94、14.29、13.89，均 P < 0.01）。FAM224B与miR-34b-5p存在互补结合位点。与肺炎组比较，FAM224B组肺组织中miR-34b-5p表达明显降低（ t=15.55， P < 0.01），磷酸化核因子-κB亚单位（p-p65）、磷酸化核因子κB抑制蛋白α（p-IKB-α）蛋白表达降低。 结论:过表达FAM224B通过抑制miR-34b-5p可减轻大鼠重症肺炎肺组织的炎性反应。

目的:探索过表达膜联蛋白A1（ ANXA1）的人脂肪间充质干细胞（AMSC）治疗急性呼吸窘迫综合征（ARDS）小鼠的效果及其机制。 方法:采用实验研究方法。采用流式细胞术鉴定成人AMSC后，取第3代细胞进行后续实验。采用随机数字表法（分组方法下同），将细胞分为转染含 ANXA1基因RNA序列的质粒的过表达ANXA1组、转染对应空载质粒的空载对照组，另取细胞分为转染含 ANXA1基因小干扰RNA序列的质粒的敲减ANXA1组、转染对应空载质粒的空载对照组，转染后72 h，于荧光显微镜成像系统下观察荧光表达情况，分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法检测ANXA1的蛋白和mRNA表达（样本数均为3）。取50只6~8周龄雄性C57BL/6J小鼠，分为假伤组、单纯ARDS组、正常细胞组、过表达ANXA1组、敲减ANXA1组，每组10只。将后4组小鼠均用内毒素/脂多糖制成ARDS肺损伤模型，假伤组小鼠模拟致假伤。伤后即刻，假伤组、单纯ARDS组小鼠均经尾静脉注射生理盐水，正常细胞组、过表达ANXA1组、敲减ANXA1组小鼠对应注射正常AMSC、过表达 ANXA1的AMSC、敲减 ANXA1的AMSC。注射后24 h，取每组5只小鼠，行伊文思蓝染色观察右肺组织大体染色情况，采用酶标仪检测左肺支气管肺泡灌洗液（BALF）上清液的吸光度值，了解肺血管通透性。注射后3 d，取各组剩余5只小鼠，取右肺组织，行苏木精-伊红染色观察病理学变化，行免疫组织化学染色观察CD11b和F4/80阳性巨噬细胞情况；采用酶联免疫吸附测定法检测左肺BALF上清液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）和IL-1β水平。对数据行配对样本 t检验、单因素方差分析与LSD检验。 结果:转染后72 h，过表达ANXA1组与敲减ANXA1组AMSC均分别较对应空载对照组AMSC表达更高强度的荧光。转染后72 h，与对应空载对照组比较，过表达ANXA1组AMSC中ANXA1蛋白与mRNA表达均明显增多（ t值分别为249.80、6.56， P<0.05），敲减ANXA1组AMSC中ANXA1蛋白与mRNA表达均明显减少（ t值分别为176.50、18.18， P<0.05）。注射后24 h，与假伤组（BALF上清液的吸光度值为0.041±0.009）比较，单纯ARDS组小鼠肺组织明显蓝染且BALF上清液的吸光度值（0.126±0.022）明显升高（ P<0.05）；与单纯ARDS组比较，正常细胞组、过表达ANXA1组小鼠肺组织蓝染程度明显减轻且BALF上清液的吸光度值（0.095±0.020、0.069±0.015）明显降低（ P<0.05），敲减ANXA1组小鼠肺组织蓝染程度与BALF上清液的吸光度值（0.109±0.016， P>0.05）无明显变化；与正常细胞组比较，过表达ANXA1组小鼠BALF上清液的吸光度值明显降低（ P<0.05）。注射后3 d，单纯ARDS组小鼠肺组织结构较假伤组明显损伤；与单纯ARDS组比较，正常细胞组和过表达ANXA1组小鼠肺组织出血、炎症细胞浸润、肺泡萎陷及间质增宽程度等改变均明显减轻，敲减ANXA1组小鼠前述肺组织表现未明显改善。注射后3 d，单纯ARDS组小鼠肺组织中CD11b和F4/80阳性巨噬细胞数量均较假伤组明显增多；与单纯ARDS组比较，正常细胞组、过表达ANXA1组、敲减ANXA1组小鼠肺组织中CD11b和F4/80阳性巨噬细胞数量均减少，以过表达ANXA1组减少最明显。注射后3 d，与假伤组比较，单纯ARDS组小鼠BALF上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平均显著升高（ P<0.05）；与单纯ARDS组比较，正常细胞组、过表达ANXA1组小鼠BALF上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平以及敲减ANXA1组小鼠BALF上清液中IL-1β水平均明显降低（ P<0.05）；与正常细胞组比较，过表达ANXA1组小鼠BALF上清液中TNF-α水平明显降低（ P<0.05），敲减ANXA1组小鼠BALF上清液中TNF-α水平明显升高（ P<0.05）。 结论:过表达 ANXA1可以优化AMSC在ARDS治疗中的效果，增强该类细胞抑制炎症反应和改善肺血管通透性的作用，进而缓解ARDS小鼠的肺损伤。

目的:探讨人脂肪间充质干细胞（ADSC）来源外泌体对脓毒症小鼠肺血管内皮细胞（PMVEC）损伤的影响及其机制。方法:采用实验研究方法。取空军军医大学第一附属医院收治的3例行腹部手术切除患者（均为女性，年龄10~25岁）遗弃的新鲜脂肪组织进行原代人ADSC的分离培养，于第5天采用倒置相差显微镜观察细胞形态。取第3代ADSC，采用流式细胞术检测ADSC中CD29、CD34、CD44、CD45、CD73和CD90的表达情况。选取第3~5代ADSC，采用差速超高速离心法获取其上清液中的外泌体，采用透射电镜和纳米颗粒跟踪分析法及蛋白质印迹法分别检测外泌体形状、粒径大小及CD9、CD63、肿瘤易感基因101（TSG101）和β肌动蛋白的蛋白表达。取24只成年雄性BALB/c小鼠，按照随机数字表法（分组方法下同）分成正常对照组、单纯盲肠结扎穿孔（CLP）组和CLP+ADSC外泌体组，每组8只，分别进行相应处理。术后24 h，采用酶联免疫吸附测定法检测小鼠血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）水平，采用苏木精-伊红染色和髓过氧化物酶染色检测小鼠肺组织形态，采用免疫荧光法检测小鼠肺组织细胞中8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的表达。取1个月龄雌雄不拘C57小鼠，采用组织块法获取原代PMVEC。取第3代PMVEC，采用免疫荧光法和流式细胞术检测PMVEC中CD31的表达。取第3代PMVEC，与ADSC来源外泌体共培养12 h，采用PKH26试剂盒检测PMVEC吞噬外泌体的情况。取第3代PMVEC，将细胞分为空白对照组、单纯巨噬细胞上清液组和巨噬细胞上清液+ADSC外泌体组，每组3孔，分别进行相应处理。24 h后，采用流式细胞术检测细胞中活性氧含量，采用免疫荧光法检测细胞中8-OHdG表达，采用Transwell实验测定细胞单分子层通透性。以上样本数均为3。对数据行单因素方差分析和LSD- t检验。 结果:分离的原代ADSC培养至第5天，呈梭形密集生长，呈典型的漩涡样排列。第3代ADSC中CD29、CD44、CD73和CD90阳性细胞百分比均>90%，CD34和CD45阳性细胞百分比均<5%。第3~5代ADSC来源外泌体呈典型的双凹盘状结构，外泌体平均粒径为103 nm，外泌体中CD9、CD63和TSG101的蛋白表达均呈阳性，β肌动蛋白的蛋白表达呈阴性。术后24 h，与正常对照组比较，单纯CLP组小鼠血清中TNF-α和IL-1β的含量均明显增加（ t值分别为28.76、29.69， P<0.01）；与单纯CLP组比较，CLP+ADSC外泌体组小鼠血清中TNF-α和IL-1β的含量均明显降低（ t值分别为9.90、4.76， P<0.05或 P<0.01）。术后24 h，正常对照组小鼠肺组织结构清晰完整、无炎症细胞浸润，单纯CLP组小鼠的肺组织较正常对照组水肿明显、炎症细胞浸润现象明显，CLP+ADSC外泌体组小鼠肺组织较单纯CLP组水肿症状明显减轻、炎症细胞浸润明显减少。术后24 h，3组小鼠肺组织中CD31呈阳性表达；单纯CLP组小鼠肺组织中8-OHdG阳性细胞荧光强度较正常对照组显著增大，CLP+ADSC外泌体组小鼠肺组织中8-OHdG阳性细胞荧光强度较单纯CLP组明显下降。第3代PMVEC的免疫荧光结果显示CD31呈阳性表达，流式细胞术鉴定结果显示CD31阳性细胞占比为99.5%。共培养12 h，ADSC来源外泌体成功被PMVEC吞噬，进入胞质。第3代PMVEC培养24 h后，与空白对照组比较，单纯巨噬细胞上清液组PMVEC的活性氧荧光强度明显增加（ t=15.73， P<0.01）；与单纯巨噬细胞上清液组比较，巨噬细胞上清液+ADSC外泌体组PMVEC的活性氧荧光强度明显降低（ t=4.72， P<0.01）。第3代PMVEC培养24 h，与空白对照组相比，单纯巨噬细胞上清液组PMVEC的8-OHdG阳性荧光强度明显增强，巨噬细胞上清液+ADSC外泌体组PMVEC的8-OHdG阳性荧光强度介于空白对照组和单纯巨噬细胞上清液组之间。第3代PMVEC培养24 h，与空白对照组比较，单纯巨噬细胞上清液组的PMVEC单分子层细胞通透性明显增加（ t=6.34， P<0.01）；与单纯巨噬细胞上清液组比较，巨噬细胞上清+ADSC外泌体组的PMVEC单分子层细胞通透性明显降低（ t=2.93， P<0.05）。 结论:ADSC来源外泌体可改善小鼠肺组织氧化性损伤，降低由巨噬细胞上清液诱导的PMVEC的活性氧含量、8-OHdG表达以及细胞通透性。

目的:探讨免疫抑制剂雷帕霉素对流感病毒复制的影响及在流感病毒感染后调节糖酵解和炎性因子的作用。方法:本研究为实验研究，采用甲型H1N1流感病毒株A/PR/8分别感染人肺泡上皮细胞系A549和永生化小鼠骨髓源巨噬细胞(iBMDM)，构建流感病毒感染细胞模型。使用人非小细胞肺癌细胞系A459设置空白对照组、感染对照组、感染雷帕霉素组、感染二甲亚砜组，在流感病毒感染及雷帕霉素处理48 h后，使用空斑法和血凝法测定上清液病毒滴度，定量聚合酶链反应法检测细胞内病毒基因、糖酵解相关基因(PDK3、PKM、GAPDH、LDHA、HK2、PGAM1、PGK1)和炎性因子干扰素α(IFN-α)、Caspase-1、白细胞介素(IL)-1β、IL-18、IL-6、IL-8、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)]基因相对量的表达。设置巨噬细胞空白对照组，巨噬细胞感染对照组和巨噬细胞感染雷帕霉素组，使用小鼠永生化骨髓巨噬细胞(iBMDM)在流感病毒感染及雷帕霉素处理24 h后，酶联免疫吸附测定法检测上清肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度。进行3次平行重复实验。结果:感染雷帕霉素组A549细胞上清中的病毒滴度与感染对照组、感染二甲亚砜组比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)。感染雷帕霉素组NP基因CT值较感染对照组和感染二甲亚砜组升高，分别为[(17.50±0.35)比(16.43±0.12)和(16.52±0.27)，差异有统计学意义，均 P<0.05]；感染对照组A549细胞上清中炎性因子基因GAPDH、LDHA、HK2、PGAM1表达量均较空白对照组上调，分别为[(2.34±0.32)比(1.01±0.16)、(2.43±0.18)比(1.01±0.18)、(2.63±0.48)比(1.00±0.06)，(17.97±1.13)比(1.00±0.09)差异有统计学意义，均 P<0.05]；与感染对照组相比，感染雷帕霉素组下调了GAPDH、LDHA、HK2、PGAM1的相对表达量，分别为[(1.48±0.19)比(2.34±0.32)、(1.79±0.09)比(2.43±0.18)、(1.65±0.28)比(2.63±0.48)、(10.48±0.81)比(17.97±1.13)，差异有统计学意义，均 P<0.05]；感染雷帕霉素组基因PDK3、PKM、PGK1与感染对照组比较差异无统计学意义(均 P>0.05)]。感染对照组A549细胞上清中Caspase-1、IL-6、IL-8基因的相对表达量较空白对照组上调，分别为[(47.02±2.07)比(1.00±0.09)、(17.59±2.14)比(1.00±0.04)、(3.86±0.44)比(1.01±0.19)，差异有统计学意义，均 P<0.05]。以感染复数＝20流感病毒感染iBMDM细胞24 h后，巨噬细胞感染对照组上清液中TNF-α的浓度较巨噬细胞空白对照组升高(260.60±38.90)ng/L比(44.96±3.12)ng/L，而巨噬细胞感染雷帕霉素组的TNF-α的浓度降低了(132.20±12.29)ng/L比(260.60±38.90)ng/L，差异有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:雷帕霉素减少流感病毒NP蛋白基因在肺泡上皮细胞中的表达，同时可有效减轻流感病毒感染引起的糖酵解通路激活，并降低感染后巨噬细胞炎症反应。