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PAD4在抗β 2GP1/β 2GP1复合物促进中性粒细胞胞外诱捕网形成中的作用
编辑人员丨4天前
目的:探讨肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)在抗β 2GP1/β 2GP1复合物诱导中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)形成中的作用。 方法:分离健康人外周血中性粒细胞与抗β 2GP1/β 2GP1复合物(100 μg/ml)共孵育一定时间,Western blot检测细胞PAD4表达;进一步采用PAD4抑制剂Cl-amidine(10 μmol/L)预处理中性粒细胞,Western blot检测细胞瓜氨酸化组蛋白3(CitH3)蛋白质表达,ELISA检测细胞培养上清中髓过氧化物酶(MPO)-DNA相对含量。下腔静脉狭窄法建立APS小鼠血栓模型,并通过腹腔注射Cl-amidine(50 mg/kg)进行干预,Western blot检测血浆中CitH3蛋白质表达,荧光染色法检测血浆中循环游离DNA(cf-DNA)浓度,取下腔静脉血栓称其重量,观察Cl-amidine能否抑制APS-IgG诱导的NETs和血栓形成。组间差异采用 t检验或单因素方差分析。 结果:抗β 2GP1/β 2GP1复合物能够显著下调细胞质中PAD4蛋白质表达水平[(3.67±0.32) vs (1.47±0.19), t=10.22, P<0.05],并使细胞核内PAD4蛋白质含量升高[(0.57±0.19) vs (2.97±0.31), t=11.49, P<0.05];Cl-amidine能显著抑制抗β 2GP1/β 2GP1复合物诱导的中性粒细胞CitH3蛋白质表达[(2.46±0.47) vs (0.46±0.13), t=12.24, P<0.01],明显减少培养上清中MPO-DNA含量[(4.09±0.94) vs (2.80±0.57), t=4.23, P<0.05]。在体内试验中,Cl-amidine能显著抑制APS小鼠血浆中CitH3蛋白质表达[(3.97±0.56) vs (1.09±0.45), t=11.83, P<0.01],明显降低APS小鼠血浆中cf-DNA浓度[(2 685.0±735.8) vs (1 784.0±577.0), t=3.93, P<0.05];与对照组EAPS小鼠相比,经Cl-amidine预处理的APS小鼠血栓形成明显减小[(8.22±3.06) vs (4.89±1.90), t=2.27, P<0.05]。 结论:PAD4参与了抗β 2GP1/β 2GP1复合物诱导的NETs形成,其可能在APS血栓形成中发挥重要作用。
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编辑人员丨4天前
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GSK484对小鼠呼吸机相关性肺损伤及中性粒细胞胞外诱捕网的影响
编辑人员丨4天前
目的:评价GSK484对小鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)及中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的影响。方法:SPF级健康雄性C57BL/6小鼠48只,5~6周龄,体质量15~20 g,采用随机数字表法将小鼠分为4组( n=12):自主呼吸组(S组)、自主呼吸+GSK484干预组(SG组)、VILI组(V组)、VILI +GSK484干预组(VG组)。S组及SG组气管插管后自主呼吸4 h;V组及VG组机械通气4 h(潮气量30 ml/kg、呼吸频率75次/min、吸呼比1∶2、呼吸末正压0 mmHg、吸入氧气浓度21%)。于VILI建模前3 d,SG组及VG组腹腔注射GSK484 4 mg/kg,1次/d,S组及V组每天以等容量生理盐水代替。小鼠自主呼吸或机械通气4 h时,采集腹主动脉血样,行血气分析,记录PaO 2;随后处死小鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。确定肺组织湿重/干重比值(W/D);肺组织HE染色后,光镜下观察病理学结果并行损伤评分;采用ELISA法检测BALF IL-1β、IL-6、TNF-α及髓过氧化物酶(MPO)浓度;采用Western blot法检测肺组织肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及瓜氨酸化组蛋白3(Cit-H3)表达水平。 结果:与S组和SG组比较,V组和VG组肺损伤评分和W/D比值升高,PaO 2降低,BALF IL-1β、IL-6、TNF-α和MPO浓度升高,肺组织PAD4、NE、HMGB1和Cit-H3表达上调( P<0.05);与V组比较,VG组肺损伤评分和W/D比值降低,PaO 2升高,BALF IL-1β、IL-6、TNF-α和MPO浓度降低,肺组织PAD4、NE、HMGB1和Cit-H3表达下调( P<0.05)。 结论:GSK484可减轻小鼠VILI,机制与抑制PAD4表达,减少NETs产生,减轻肺组织炎症反应有关。
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编辑人员丨4天前
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TSA上调miR-4298靶向抑制PADI4表达在诱导U251细胞凋亡中的作用
编辑人员丨4天前
目的:探讨微小RNA-4298(miR-4298)靶向抑制肽酰精氨酸脱亚胺基酶4(PADI4)表达在组蛋白去乙酰化酶抑制因子曲古抑菌素A(TSA)诱导U251细胞凋亡中的作用机制。方法:实验分为TSA组(0.2 μmol/L TSA处理)和对照组。采用CCK8法检测TSA对U251细胞增殖的影响;流式细胞术检测药物作用后U251细胞的凋亡水平;反转录PCR和蛋白质印迹法测定miR-4298干扰后PADI4基因和蛋白表达的变化;Luciferase实验测定miR-4298对PADI4的3′UTR区靶向结合与荧光素酶活性的影响;PADI4转染U251细胞,观察miR-4298对凋亡功能的拯救作用。实验各分为3组,即NC组、miR-4298 mimic组、TSA+miR-4298 mimic组以及NC组、miR-4298 inhibitor组、TSA+miR-4298 inhibitor组。结果:U251细胞经0.2 μmol/L的TSA作用4 d后,对照组的吸光度( A)值为1.168±0.148,高于TSA组的0.737±0.007,差异有统计学意义( t=4.948, P=0.008)。与对照组相比,经0.2 μmol/L TSA处理48 h后,U251细胞发生明显的凋亡现象(27.62%±3.49% vs. 4.99%±0.13%, t=11.190, P<0.001)。与药物作用前相比,TSA作用48 h后,PADI4基因表达(0.386±0.020 vs. 0.903±0.021)和蛋白表达水平(0.276±0.041 vs. 0.777±0.031)均有所降低,差异均有统计学意义( t=30.400, P<0.001; t=16.770,) P<0.001。miR-4298在TSA诱导U251细胞凋亡的过程中表达升高(2.573±0.289 vs. 1.003±0.136; t=8.487, P=0.001),并且miR-4298与PADI4的表达呈负相关( r=-0.877, P=0.002)。Luciferase实验证实,miR-4298对野生型PADI4的3′UTR区具有靶向结合和荧光素酶抑制作用。与NC组(0.920±0.026)相比,miR-4298 mimic组(0.413±0.049)和TSA+miR-4298 mimic组(0.213±0.035)PADI4基因相对表达水平均有所降低,差异均有统计学意义(均 P<0.001);其蛋白表达水平变化与基因变化趋势一致。与NC组(3.78%±0.68%)相比,miR-4298 mimic组(7.96%±1.10%)和TSA+miR-4298 mimic组(13.74%±1.26%)诱导细胞凋亡的水平均有所增加,差异有统计学意义( P=0.005; P<0.001)。与NC组(0.183±0.025)相比,miR-4298 inhibitor组(0.483±0.032)和TSA+miR-4298 inhibitor组(0.386±0.025)PADI4基因表达均有所升高,差异有统计学意义( P<0.001; P=0.015)。蛋白表达水平变化与基因变化趋势一致。与NC组(4.96%±0.59%)相比,miR-4298 inhibitor组(23.83%±2.20%)和TSA+miR-4298 inhibitor组(9.55%±1.49%)诱导细胞凋亡的水平均有所增加,差异有统计学意义(均 P<0.001)。救援实验中,miR-4298 mimic组明显升高PADI4表达水平( P<0.001),miR-4298 mimic+PADI4组则相对逆转PADI4表达水平( P=0.002)。 结论:miR-4298可通过靶向调控PADI4基因表达参与U251细胞的凋亡发生过程,miR-4298可能是脑胶质瘤靶向干预治疗的靶点。
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编辑人员丨4天前
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RNA结合基序蛋白15在脓毒症小鼠心肌中的表达及与中性粒细胞胞外诱捕网的相关性
编辑人员丨2024/7/13
目的 探讨RNA结合基序蛋白 15(RBM15)在脓毒症心肌损伤小鼠中的表达及与中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的相关性.方法 腹腔注射脂多糖(LPS)建立小鼠脓毒症模型,以生理盐水处理小鼠作为对照组.LPS注射 7d后采用心脏多普勒超声检测小鼠心脏功能;采用HE染色观察脓毒症小鼠心肌损伤情况;免疫荧光染色法检测心肌组织切片中瓜氨酸化组蛋白H3(CitH3)表达水平;ELISA法检测心肌组织中CitH3、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)和血浆中髓过氧化物酶(MPO)的酶活性;RT-qPCR检测中性粒细胞相关分子[人核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、核因子κB(NF-κB)、B-细胞淋巴瘤因子 10(Bcl10)、肽酰基精氨酸脱亚氨酶 4(PAD4)]、RBM15 及N6-甲基腺嘌呤(m6A)甲基化酶[甲基转移酶样 3(METTL3)、甲基转移酶样 14(METTL14)、肾母细胞瘤1 关联蛋白(WTAP)、KIAA1429].Western blot检测中性粒细胞相关分子IκBα、核因子κB/p65(NF-κB/p65)、核因子κB/p50(NF-κB/p50)、Bcl10、PAD4、RBM15 及m6A甲基化酶METTL3、METTL14、WTAP、KIAA1429.结果 心脏多普勒超声检测小鼠心脏功能结果显示,与对照组相比,实验组小鼠左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)均降低(P均<0.001);HE染色结果显示,对照组小鼠心肌组织结构正常,实验组小鼠心肌部分断裂,可见炎性细胞浸润,细胞水肿;免疫荧光染色结果显示,实验组CitH3 荧光强度增强,表达上调(P<0.05);ELISA结果显示,与对照组相比,脓毒症小鼠心肌组织中NETs相关分子CitH3、NE及血浆中MPO均升高(P均<0.01);RT-qPCR结果显示,与对照组相比,实验组Bcl10(P=0.960)、PAD4(P=0.324)、METTL14(P=0.592)、WTAP(P=0.505)mRNA表达水平差异均无统计学意义,IκBα(P<0.01)、NF-κB(p65/p50)(P<0.05)、RBM15(P<0.05)mRNA表达水平上升,METTL3(P<0.05)、KIAA1429(P<0.05)mRNA表达水平均降低;Western blot结果显示,与对照组相比,IκBα(P=0.171)、NF-κB/p65(P=0.191)、NF-κB/p50(P=0.063)、PAD4(P=0.687)、RBM15(P=0.176)、METTL3(P=0.430)、METTL14(P=0.089)、KIAA1429(P=0.238)蛋白表达水平差异均无统计学意义,WTAP蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl10 蛋白表达水平降低(P<0.05).RBM15 mRNA表达水平与CitH3(r=0.631,P=0.011)水平呈正相关性,与MPO(r=0.318,P=0.114)及NE(r=0.099,P=0.410)水平无相关性.结论 RBM15、NETs在脓毒症心肌损伤中表达上调,且RBM15 与NETs相关分子CitH3 具有正相关性,RBM15 可能通过调节NETs相关分子参与脓毒症心肌损伤.
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编辑人员丨2024/7/13
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飞龙掌血对胶原诱发关节炎大鼠心血管损害的干预作用及机制
编辑人员丨2024/1/20
目的 基于维生素D(VD)和中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)探讨苗药飞龙掌血对胶原诱发关节炎(CIA)大鼠心血管损害的干预作用及潜在机制.方法 将SD大鼠随机分为正常组(9只)和造模组(61只).造模组大鼠以多点注射牛Ⅱ型胶原+弗氏不完全佐剂的方式制备CIA模型.将造模成功的大鼠分为模型组、甲氨蝶呤组(阳性对照,1.5 mg/kg,每周2次)、VD组[通路验证,1 000单位/(kg·d),每天1次]和飞龙掌血低、中、高剂量组[0.54、1.08、2.16 g/(kg·d),以生药量计,每天1次],每组9只,灌胃给药4周.于造模后、给药前进行关节炎指数评分,分别于给药前和末次给药后测量足跖厚度,观察大鼠踝关节、心脏和腹主动脉组织病理学变化;检测血清中髓过氧化物酶(MPO)、白细胞介素6(IL-6)、25-羟基维生素D3[25(OH)D3]含量;检测心脏组织中肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)、NETs标志物[瓜氨酸化组蛋白H3(CitH3)、MPO]、VD相关指标[维生素D受体(VDR)、25羟基维生素D-1α羟化酶(CYP27B1)]、IL-6蛋白的表达情况.结果 与正常组比较,模型组大鼠关节炎指数和足跖厚度均显著增加(P<0.01),踝关节组织可见明显的炎症细胞浸润和纤维组织增生,心脏组织可见明显的组织空泡和部分周围血管壁增厚,腹主动脉组织可见内皮脱落;血清MPO、IL-6含量显著增高(P<0.01),25(OH)D3水平显著下降(P<0.01);心肌组织中PAD4、CitH3、MPO、IL-6蛋白的表达均显著上调(P<0.01);VDR、CYP27B1蛋白的表达虽有改变,但差异均无统计学意义(P>0.05).与模型组比较,各药物组大鼠踝关节、心脏组织的病理改变均明显改善,上述各指标均普遍逆转(P<0.05或P<0.01).结论 飞龙掌血可通过抑制NETs的形成及炎症反应的发生来改善类风湿性关节炎症状及相关心血管损害,其机制可能与调节VD水平有关.
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编辑人员丨2024/1/20
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进展期胃癌患者腹腔镜根治术前辅助化疗对血清PADI4、cAT、VEGF及IGF-1表达的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探究术前辅助化疗联合腹腔镜胃癌根治术治疗进展期胃癌的疗效及对血清肽酰基精氨酸脱亚氨酶(PADI4)、瓜氨酸化抗凝血酶(cAT)、血管内皮生长因子(VEGF)和类胰岛素增长因子1(IGF-1)表达的影响.方法 选取铁岭市中心医院普通外科2014年9月—2016年9月收治的进展期胃癌患者90例,随机数字表法分成研究组和对照组各45例,对照组给予腹腔镜根治术,研究组在术前给予新辅助化疗.观察2组围手术期情况,研究组化疗前后临床分期变化、2组手术前后血清PADI4、cAT、VEGF及IGF-1表达情况,比较术后1年存活率和复发率及不良反应发生率.结果 2组手术时间、术中出血量、胃肠道功能恢复时间、下床活动时间、术后肛门排气时间等比较差异无统计学意义(P>0.05),而研究组总切除率、淋巴结清扫数目显著高于对照组(χ2=4.860,t=5.207,P<0.05).研究组新辅疗后,患者临床病理分期均得到显著改善(χ2=39.130,P<0.01).研究组的客观缓解率为64.4%(29/45),显著高于对照组的42.3(19/45)(χ2=4.460,P<0.05).术后3个月,研究组患者血清PADI4、cAT、VEGF、IGF-1表达显著低于对照组(t=28.500、16.745、3.411、3.753,P<0.01).研究组患者术后1年存活率显著高于对照组,复发率显著低于对照组(χ2=4.410、4.860,P<0.05).2组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义(χ2=0.090,P>0.05).结论 术前辅助化疗联合腹腔镜胃癌根治术治疗进展期胃癌效果显著,并能显著改善患者血清PADI4、cAT、VEGF、IGF-1表达水平.
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编辑人员丨2023/8/6
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PAD4功能的研究进展及临床意义
编辑人员丨2023/8/6
肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)是蛋白质翻译后的一种重要修饰酶,是PAD家族成员之一,主要分布于巨噬细胞、粒细胞与单核细胞的细胞质,可催化精氨酸转化为瓜氨酸残基.PAD4在心血管疾病、自身免疫性疾病和多种类型肿瘤中具有重要作用,尤其在心血管疾病和肿瘤方面的作用成为近年来研究的热点.PAD4的相关生物学功能以及与人类疾病的相关性使其可以作为相关人类疾病诊断及治疗的一个重要酶,但其在疾病的发生、发展以及预后中的具体机制仍不清楚,以PAD4为靶酶治疗临床疾病将成为研究热点.
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编辑人员丨2023/8/6
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抗CarP抗体、抗PAD4抗体对类风湿关节炎的诊断价值
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨抗氨基甲酰化蛋白(CarP)抗体、抗肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)抗体对类风湿关节炎(RA)的诊断价值.方法 收集129例RA患者及500例健康体检者外周血标本及实验室类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体检查结果.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测健康体检对照组(500例),RA组(129例)标本血清抗PAD4抗体、抗CarP抗体.分析RA组患者抗PAD4抗体、抗CarP抗体两个指标与RF、抗CCP抗体结果的相关性.结果 (1)RA组抗CarP抗体和抗PAD4抗体诊断RA的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比分别是31.78%、34.11%,96.40%、95.60%,69.49%、67.16%,84.56%、85.05%,8.83、7.93,0.71、0.68.(2)RA组抗PAD4抗体、抗CCP抗体、RF结果均为阴性的3例标本,抗CarP抗体结果阳性.(3)抗CCP抗体、RF检测RA组标本的阳性率是91.47%,联合CarP检测的阳性率是93.80%.结论 抗CarP抗体可以作为抗CCP抗体和RF为阴性的RA患者的补充诊断指标,具有较高的特异性.未发现抗PAD4抗体较抗CCP抗体、RF对RA患者诊断的优势.
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编辑人员丨2023/8/6
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肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)的功能及其小分子抑制剂的研究进展
编辑人员丨2023/8/5
肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(peptidylarginine deiminase 4,PAD4)依赖钙离子催化精氨酸残基向目标蛋白瓜氨酸残基转化的过程,是一种翻译后修饰,被称为瓜氨酸化.PAD4通过组蛋白瓜氨酸化调节基因转录活性诱导人类疾病的发生、发展.综述了PAD4在自身免疫性疾病、肿瘤、急性冠状动脉综合征中的作用,总结了PAD4抑制剂介导蛋白质瓜氨酸化的生物学作用的可能机制,归纳了PAD4特异性抑制剂治疗类风湿关节炎和其他疾病的临床效用,讨论了PAD4及其抑制剂对自身免疫性疾病和癌症的潜在治疗价值.
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编辑人员丨2023/8/5
