目的:探讨抗氨基甲酰化蛋白(CarP)抗体对急性冠状动脉综合征(ACS)患者的诊断价值及其与颈动脉粥样硬化斑块之间的关系。方法:选取2021年10月至2022年10月上海市第七人民医院收治的86例ACS患者纳入疾病组，36例非ACS伴颈动脉斑块患者纳入疾病对照组，同一时期41例健康体检者纳入健康对照组。应用自建微阵列蛋白芯片技术检测三组抗CarP抗体表达水平，分析抗CarP抗体对ACS患者的诊断效能，并应用Spearman相关分析抗CarP抗体表达与ACS患者颈动脉粥样硬化斑块之间的关系。结果:疾病组的抗CarP抗体表达水平显著高于疾病对照组和健康对照组(均 P<0.01)。疾病组患者的抗CarP抗体检测诊断ACS与临床诊断的一致性较好(Kappa值＝0.756， P<0.05)，诊断ACS的准确度为89.53%、灵敏度为89.61%、特异度为88.89%、阳性预测值为98.57%、阴性预测值为50.00%。疾病组患者颈动脉不稳定斑块(软斑和混合斑)比例显著高于疾病对照组( P<0.05)，颈动脉稳定斑块(硬斑)比例及严重颈动脉狭窄发生率显著低于疾病对照组(均 P<0.05)。疾病组患者抗CarP抗体表达与颈动脉不稳定斑块呈正相关( P<0.05)，与颈动脉稳定斑块呈负相关( P<0.05)。 结论:抗CarP抗体在ACS患者中的高表达及其在诊断ACS时所表现的高准确度、灵敏度、特异度及阳性预测性，使其有望成为早期诊断ACS及评估预后的血清学补充指标。不仅如此，抗CarP抗体与ACS患者颈动脉粥样硬化斑块之间的相关性，更使得其有望成为预测ACS患者颈动脉粥样硬化斑块发生的重要指标。

目的:探讨表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂厄洛替尼对非增生型糖尿病视网膜病变（NPDR）的治疗作用及机制。方法:实验研究。人视网膜Müller细胞（RMC）为Moorfields眼科医院和伦敦大学学院眼科学研究所-Müller 1（MIO-M1）细胞。将MIO-M1细胞分为正常对照、高渗、高糖、高糖+二甲基亚砜（DMSO）、高糖+厄洛替尼 0.5 mmol/L、高糖+厄洛替尼 1 mmol/L和高糖+厄洛替尼 2 mmol/L组。5-乙炔-2′-脱氧尿苷（EdU）掺入实验检测厄洛替尼对高糖条件下MIO-M1细胞增殖的影响；Western印迹检测厄洛替尼对高糖条件下MIO-M1细胞活化标记胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和谷氨酰胺合成酶（GS）蛋白水平的影响。Western印迹检测厄洛替尼对高糖条件下RMC中p75神经生长因子受体（p75NTR）、波形蛋白和细胞视黄醛结合蛋白（CRALBP）蛋白水平的影响。将MIO-M1细胞分为正常对照、高糖、高糖+DMSO和高糖+厄洛替尼1 mmol/L组，采用细胞免疫荧光染色检测厄洛替尼对高糖条件下EGFR核转位的影响；免疫共沉淀检测厄洛替尼对高糖条件下MIO-M1细胞中EGFR与转录中间因子2（TIF2）之间相互作用的影响。将MIO-M1细胞分为正常对照、高糖、高糖+DMSO、高糖+Myc-DDK空载体、高糖+厄洛替尼、高糖+厄洛替尼+人双调蛋白、高糖+厄洛替尼+TIF2质粒和高糖+厄洛替尼+人双调蛋白+TIF2质粒组，采用细胞免疫荧光染色检测厄洛替尼通过EGFR/TIF2轴对高糖条件下MIO-M1细胞中EGFR与TIF2结合的影响。采用定量实时逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测通过影响高糖条件下MIO-M1细胞中EGFR与TIF2结合对细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）转录的调节作用。构建小鼠糖尿病视网膜病变（DR）模型，采用随机数字表法，按照不同喂养方式，分为正常对照、DR、DR+DMSO、DR+厄洛替尼 0.25 mg·kg -1·d -1、DR+厄洛替尼 0. 5 mg·kg -1·d -1和DR+厄洛替尼 1 mg·kg -1·d -1组，共25只小鼠，每组5只。组织免疫荧光染色检测小鼠RMC活化标记GFAP的表达水平；FITC-葡聚糖注射实验检测厄洛替尼对小鼠DR模型中视网膜血管渗漏的影响。 结果:与正常对照组（32.4%±3.0%）相比，高糖组（59.2%±3.8%）RMC中EdU阳性细胞的比例增多（ P<0.001）。与高糖组（59.2%±3.8%）相比，高糖+厄洛替尼1 mmol/L组（37.6%±4.4%）中EdU阳性细胞比例（ P<0.001）下降。与正常对照组相比，高糖组RMC中GFAP表达增高（正常对照组为1，高糖组为2.27±0.11， P<0.001），GS表达降低（正常对照组为1，高糖组为0.32±0.03， P<0.001）。厄洛替尼1 mmol/L处理降低高糖条件下RMC中GFAP的表达（分别为1.32±0.13和2.27±0.11， P<0.001），升高GS的表达（分别为0.71±0.06和0.32±0.03， P<0.001）。高糖+厄洛替尼1 mmol/L组RMC中EGFR与4′，6-二氨基-2-苯基吲哚（DAPI）的共定位比例低于高糖组（分别为52.2%±4.1%和76.4%±5.7%， P<0.001）。用EGF或TIF2抗体沉淀TIF2或EGFR，两者在高糖条件下相对于正常对照组均升高（正常对照组为1，高糖组TIF2为2.27±0.20，EGFR为2.17±0.21；均 P<0.05），并且高糖+厄洛替尼组TIF2（1.38±0.10）或EGFR（1.32±0.13）表达低于高糖组TIF2（2.27±0.20）和高糖组EGFR（2.17±0.21）（均 P<0.05）。高糖+厄洛替尼组RMC中EGFR与TIF2共定位比例（17.2%±3.9%）及Cyclin D1 mRNA水平（1.32±0.16）均低于高糖组（EGFR与TIF2共定位比例为54.6%±3.7%，Cyclin D1 mRNA水平为2.58±0.19，均 P<0.05），高糖+厄洛替尼+AREG组、高糖+厄洛替尼+Myc-DDK-TIF2质粒组和高糖+厄洛替尼+AREG+Myc-DDK-TIF2质粒组EGFR与TIF2共定位比例（分别为24.1%±1.9%、26.0%±2.3%、35.3%±2.5%）及TIF2 mRNA水平（分别为1.71±0.16、1.72±0.18、2.20±0.18）均高于高糖+厄洛替尼组（均 P<0.05）。相对于正常对照组，小鼠视网膜组织中GFAP表达在DR组中增高（正常对照组为1，DR组为3.07±0.19， P<0.001），厄洛替尼0.5 mg·kg -1·d -1处理可（1.73±0.30）显著降低DR组小鼠视网膜中GFAP的表达（ P<0.05）。相对于正常对照组（3.97±0.47），DR组（23.13±2.15）荧光素渗漏增加，DR+厄洛替尼组（11.66±1.45）与DR组相比，渗漏显著降低（均 P<0.05）。 结论:厄洛替尼抑制高糖诱导的人RMC增殖和活化，抑制RMC中EGFR入细胞核，抑制RMC中EGFR与TIF2结合，并且通过抑制EGFR与TIF2相互作用，降低RMC中Cyclin D1的转录。厄洛替尼抑制小鼠DR模型中RMC的增殖和活化，改善小鼠视网膜血管渗漏。厄洛替尼通过下调高糖条件下RMC中的EGFR/TIF2/Cyclin D1通路，抑制RMC的活化和增殖，从而缓解NPDR的进展。

目的:基于实验室常用检测指标筛选乙型肝炎病毒（HBV）阳性肝硬化患者进展为肝细胞肝癌（HCC）的影响因素，建立预测模型并检验其效能。方法:收集2010—2020年于中国医科大学附属第一医院就诊的男性乙型肝炎肝硬化患者661例（肝硬化组）和男性乙型肝炎HCC患者694例（HCC组）的病例资料进行回顾性分析，比较2组间年龄及实验室指标，包括血常规、肝功能（天门冬氨酸氨基转移酶-丙氨酸氨基转移酶比值、谷氨酰胺转移酶、总蛋白、前白蛋白、总胆汁酸、总胆红素、直接胆红素、胆碱酯酶）、HBV指标、甲胎蛋白（AFP）、纤维蛋白原（Fbg）、血钙（Ca 2+）的差异。采用多因素Logistic回归分析肝硬化进展为HCC的影响因素。以HCC高发病风险相关指标（ P<0.05）构建列线图预测模型，并通过受试者工作特征（ROC）曲线及校准曲线对模型进行验证。 结果:2组患者血常规、肝功能、HBV核心抗体（HBV-cAb）、抗HBc-IgM、AFP、Fbg、Ca 2+比较，差异有统计学意义（ P<0.05）。多因素分析显示，Ca 2+（ OR=35.770，95% CI 13.388~99.304）、HBV-cAb（ OR=0.878，95% CI 0.816~0.944）、AFP（ OR=1.002，95% CI 1.001~1.003）、Fbg（ OR=1.369，95% CI 1.202~1.564）为HCC的独立影响因素（ P<0.05），用此4个指标构建列线图预测模型，ROC曲线显示模型的曲线下面积为0.750（95% CI 0.720~0.781， P=0.126），验证组ROC曲线下面积为0.752（95% CI 0.705~0.798， P=0.098），与校准曲线贴合良好。 结论:基于Ca 2+、HBV-cAb、AFP、Fbg建立了一个HBV阳性肝硬化进展为HCC的预测模型，该模型经ROC曲线及校准曲线验证，具有良好的区分度和校准度。

目的:探讨甲状腺功能亢进症（简称甲亢）患者在抗甲状腺药物治疗前后血清碱性磷酸酶（ALP）水平的变化及其影响因素。方法:采用病例对照研究，选取2019年1月至2022年1月在临汾市人民医院内分泌科门诊就诊的241例甲亢患者纳入甲亢组，另以同期进行健康体检的241例甲状腺功能正常者为对照组。收集所有受试者的性别、年龄、既往基础疾病史、用药史等基本信息；采集所有受试者就诊次日以及甲亢组患者抗甲状腺药物治疗6个月后清晨空腹静脉血，进行甲状腺功能指标[血清游离三碘甲腺原氨酸（FT 3）、游离甲状腺素（FT 4）、促甲状腺激素（TSH）、促甲状腺激素受体抗体（TRAb）、抗甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）、抗甲状腺球蛋白抗体（TgAb）水平]及肝功能指标[血清ALP、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）、总蛋白（TP）水平]检测；并对血清ALP水平的影响因素进行分析。 结果:甲亢组患者血清FT 3、FT 4、TRAb、TPOAb、TgAb水平均高于对照组（ Z = - 18.94、- 18.78、- 10.62、- 10.39、- 10.33，均 P < 0.001），TSH水平低于对照组（ Z = - 19.32， P < 0.001）。甲亢组血清ALP、ALT、AST、GGT、TBIL水平升高者依次为141、34、28、14、8例，分别占58.51%、14.11%、11.26%、5.81%、3.32%；在141例血清ALP水平升高者中，有104例仅ALP水平升高，37例合并ALT、AST、GGT、TBIL中的1项或多项异常；甲亢组患者血清ALP、ALT、AST、GGT、TBIL水平均高于对照组（ Z = - 14.83、- 5.10、- 2.57、- 3.30、- 12.36，均 P < 0.001），血清TP水平低于对照组（ Z = - 4.01， P < 0.001）。抗甲状腺药物治疗6个月后，甲亢组患者血清FT 3、FT 4、ALP、ALT、AST、GGT、TBIL水平较治疗前均明显较低（ Z = - 18.48、- 18.69、- 12.79、- 6.21、- 5.71、- 3.99、- 2.95，均 P < 0.001）；血清ALP水平与对照组比较，差异无统计学意义（ Z = - 1.56， P = 0.118）。Spearman相关性分析显示，甲亢组患者血清ALP水平与FT 3、FT 4、TRAb水平均呈正相关（ r = 0.54、0.59、0.36，均 P < 0.001），与TSH水平呈负相关（ r = - 0.50， P < 0.001）。Logistic回归分析结果显示，FT 4、GGT水平升高和TSH水平降低是血清ALP水平升高的独立危险因素（ OR = 1.38、1.04、0.28，均 P < 0.05）。 结论:抗甲状腺药物治疗可以改善甲亢患者血清ALP水平的异常升高，且血清FT 4、GGT、TSH水平是其独立影响因素。

1例67岁男性患者因"阵发性抽搐发作2周余"入院,诊断为抗γ-氨基丁酸B型受体(GABABR)抗体相关脑炎.入院后给予免疫治疗,治疗过程中出现癫痫持续状态、肺部感染、低蛋白血症、凝血功能异常等.临床药师结合患者病情,在免疫治疗方案的选择上给予甲泼尼龙联合静脉注射免疫球蛋白,在需要抗感染治疗时给予美罗培南(1gq8hivgtt);应用多烯磷脂酰胆碱护肝,给予氨溴索联合布地奈德改善肺功能,应用低分子量肝素钙预防血栓形成,对患者的营养和电解质平衡方面进行监护,给予患者全程化监护,最终患者病情好转出院.

目的 探讨地黄饮子通过磷脂酰肌醇三激酶-蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)和丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路双重调节db/db小鼠视网膜胰岛素抵抗和糖代谢异常,探究地黄饮子多途径发挥治疗糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)作用的分子机制.方法 10只db/m小鼠作为空白组,30只db/db小鼠随机分为模型组、地黄饮子组(地黄饮子,30.03 g/kg)、阳性对照组(二甲双胍,0.61 g/kg).药物干预4周,每周检测小鼠体质量、空腹血糖.末次给药后进行口服糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)及胰岛素耐量试验(insulin tolerance test,ITT)并计算曲线下面积(area under the curve,AUC);葡萄糖氧化酶法检测小鼠视网膜葡萄糖含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠视网膜胰岛素含量;苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠视网膜组织病理改变;免疫组化法检测视网膜组织胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1,IRS1)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测视网膜PI3K、Akt、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated kinase,ERK)、c-Jun 氨基末端激酶(c-Jun N-terminal protein kainse,JNK)、丝裂原活化蛋白激酶p3 8抗体(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)mRNA表达量.结果 与空白对照组相比,模型组小鼠空腹血糖显著升高(P＜0.01);OGTT、ITT试验各时间点血糖均升高(P＜0.05,P＜0.01);视网膜组织水肿,新生血管生成;视网膜葡萄糖、胰岛素含量升高(P＜0.01);IRS1蛋白表达量显著升高而GLUT4蛋白表达量显著降低(P＜0.01);PI3K、Akt mRNA 表达量降低(P＜0.05,P＜0.01)、ERK、JNK、p38MAPK mRNA 表达量升高(P＜0.05,P＜0.01).地黄饮子和阳性对照药物均可降低小鼠OGTT、ITT试验AUC(P＜0.01);改善视网膜水肿,减少新生血管;降低视网膜葡萄糖、胰岛素含量(P＜0.05,P＜0.05);降低小鼠视网膜IRS1蛋白表达,提高GLUT4蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01)、升高PI3K、Akt mRNA表达量,降低ERK、JNK、p38MAPK mRNA表达量(P＜0.05,P＜0.01).结论 地黄饮子可通过激活PI3K/Akt信号通路和抑制MAPK信号通路双重调节GLUT4表达从而改善db/db小鼠视网膜胰岛素抵抗和糖代谢异常.

目的:探讨抗氨基甲酰化蛋白(carbamylated protein,CarP)抗体在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中的表达水平及应用价值.方法:回顾2018年12月至2019年6月就诊于新疆维吾尔自治区人民医院风湿免疫科的RA患者、非RA患者以及体检中心健康对照人群的人口学资料、实验室检查结果及肌肉骨骼超声结果,采用间接酶联免疫吸附试验测定各研究对象血清中抗CarP抗体的浓度并进行统计学分析.结果:共纳入259例研究对象,其中RA组158例(包括血清阴性RA 45例),非RA组59例,健康对照组42例.RA组患者抗CarP抗体浓度[8.31(5.22,15.26)U/mL]高于非 RA 组[4.50(3.35,5.89)U/mL]及健康对照组[3.46(2.76,4.92)U/mL];非RA组抗CarP抗体浓度与健康对照组相比,差异无统计学意义(P=0.10).受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析抗CarP抗体诊断RA的灵敏度58.2％、特异度93.1％,抗CarP抗体、抗环瓜氨酸多肽(cyclic peptide containing citrulline,CCP)抗体及类风湿因子(rheumatoid factor,RF)三者联合检测时灵敏度 82.3％、特异度96.5％.抗CarP抗体在血清阴性RA患者中的阳性率为44.4％(20/45).单因素Logistic回归分析显示,年龄、C 反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、RF、葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,GPI)、抗CCP抗体、抗CarP抗体是RA发生的危险因素;多因素Logistic回归分析发现,抗CCP抗体、抗CarP抗体是RA发生的独立危险因素.Spearman相关性分析发现,抗CarP抗体与肿胀关节数、压痛关节数、ESR、28个关节的疾病活动度评分(disease activity score for 28 joints,DAS28)、临床疾病活动指数(clinical disease activity index,CDAI)、简化疾病活动指数(simplified disease activity index,SDAI)无明显相关性(P＞0.05).有骨侵蚀RA组患者(88例)抗CarP抗体浓度高于无骨侵蚀RA组(70例),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:抗CarP抗体对RA的诊断有一定的价值.RF、抗CCP抗体、抗CarP抗体三者联合检测可提高其诊断价值,抗CarP抗体可能是血清阴性RA的有效辅助诊断工具.RA患者血清中高水平的抗CarP抗体浓度可能提示骨侵蚀风险增加,应早期干预治疗,但仍需进一步队列研究随访观察.

背景 临床工作中冠心病(CAD)经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后患者合并甲状腺功能异常十分常见,慢性病共病模式下对于心脏结构及功能的影响尚不明确.目的 探讨甲状腺功能异常对CAD-PCI术后患者心脏结构及功能的影响.方法 本研究数据来源于"新疆维吾尔自治区人民医院心血管专科大数据分析平台-医渡云",检索 2013-2022 年CAD-PCI术后患者的临床资料,检测甲状腺功能、心脏超声和生化指标,依据诊断标准分为临床甲状腺功能亢进组(n=263),临床甲状腺功能减退组(n=357),同时抽取 300 例甲状腺功能正常患者作为甲状腺功能正常组(n=300).采用Spearman秩相关分析探究甲状腺功能与心脏结构、功能的相关性.采用多因素Logistic回归分析和非条件多因素Logistic回归分析探究心脏收缩及舒张功能不全的影响因素.绘制受试者工作特征(ROC)曲线判断甲状腺功能指标对心脏功能不全的诊断价值并计算ROC曲线下面积(AUC).结果 3 组患者年龄、性别、舒张压(DBP)、收缩压(SBP)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、胱抑素C(CysC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、B型钠尿肽(BNP)、空腹血糖(GLU)、脂蛋白a(LPa)、甲状腺素(T4)、游离甲状腺素(FT4)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)比较,差异有统计学意义(P<0.05).3组患者主动脉内径(AOd)、右心室内径(RVd)、左心室舒张末期内径(LVDd)、左心室收缩末期内径(LVSd)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室射血分数(LVEF)、每搏输出量(SV)比较,差异有统计学意义(P<0.05).Spearman秩相关分析结果显示:LVEF与FT3、T3 及TSH呈正相关(P<0.05);AOd与FT3 和T3 呈正相关,与TgAb和TSH呈负相关(P<0.05);LVDd与FT3 呈正相关,与TgAb和TSH呈负相关(P<0.05);LVSd与FT3、T3、T4 和TSH呈负相关(P<0.05);SV与FT3、T3 呈正相关,与TgAb呈负相关(P<0.05);RVd与FT3 呈正相关,与TSH呈负相关(P<0.05);室间隔厚度(IVSd)与TgAb呈负相关(P<0.05);LVEDV与FT3 呈正相关,与TgAb和TSH呈负相关(P<0.05);左心室后壁厚度(LVPWd)与TgAb呈负相关(P<0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,FT3、TSH是心脏收缩功能不全的影响因素(P<0.05),T4 是心脏舒张功能不全的影响因素(P<0.05).ROC曲线结果显示FT3 和TSH预测心脏收缩功能不全的AUC分别为0.621(95%CI=0.581～0.662)和0.632(95%CI=0.594～0.670);T4 预测心脏舒张功能不全的AUC为 0.590(95%CI=0.510～0.670).分层分析结果显示:FT3 对心脏收缩功能不全的影响在年龄和性别之间无差异(P趋势>0.05),TSH对心脏收缩功能不全的影响在年龄和性别之间存在差异(P趋势<0.05),FT3、TSH对心脏收缩功能的保护作用在女性和≥60 岁人群中更显著(P<0.05);T4 对心脏舒张功能不全的影响在年龄和性别之间存在差异(P趋势<0.05).结论 甲状腺功能异常可以显著影响CAD-PCI术后患者心脏的结构和功能,其中FT3、TSH主要影响心脏收缩功能,T4 主要影响心脏舒张功能.应更关注女性和<60 岁人群中甲状腺功能对心脏功能的影响,避免舒张功能不全及高排低阻型心力衰竭的发生.

目的:多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是好发于中老年的浆细胞恶性肿瘤,发病机制尚不清楚.由于其多发、复发、耐药的特点,MM仍是一种无法治愈的疾病.氨基酸代谢异常是MM的重要特征之一.氨基酸重要的代谢途径是作为基本原料参与蛋白质合成.氨酰转移核糖核酸合成酶(aminoacyl transfer ribonucleic acid synthetase,ARS)基因是蛋白质合成过程中的关键调节基因.本研究旨在探究在MM中异常表达的氨基酸代谢关键因子ARS通过调控氨基酸代谢影响MM生长的分子机制.方法:对应基因编号合并基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中基因表达谱GSE5900数据集及GSE2658数据集数据,对ARS家族基因表达数据进行标准化处理.采用GSEA_4.2.0软件分析健康供者(healthy donor,HD)与MM患者基因富集的差异.采用GraphPad Prism 7绘制基因热图并进行数据分析.采用Kaplan-Meier及Cox回归模型分别对ARS家族基因表达与MM患者预后情况进行单因素及多因素回归分析.收集7例MM初诊患者的骨髓样本,使用CD138抗体磁珠分选获得CD138+、CD138-细胞,采用real-time RT-PCR分析ARS在MM临床样本中的表达情况.以人B淋巴细胞GM12878细胞,人MM细胞系ARP1、NCI-H929、OCI-MY5、U266、RPMI 8266、OPM-2、JJN-3、KMS11、MM1.s细胞为研究对象,采用real-time RT-PCR及蛋白质印迹法分析ARS在MM细胞系中的表达情况.利用短发夹核糖核酸(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒构建基因敲减质粒(VARS-sh组),将其与空载质粒(scramble组)分别转染HEK 293T细胞后进行病毒包装,分别感染ARP1、OCI-MY5细胞并建立稳定表达的细胞系,分别采用细胞计数法和流式细胞术检测敲减缬氨酰tRNA合成酶(valyl-tRNA synthetase,VARS)基因对MM细胞增殖和凋亡的影响.根据VARS表达将GEO数据分为高表达组和低表达组,通过生物信息学分析探索VARS影响的下游通路,采用飞行时间质谱(gas chromatography time-of-flight/mass spectrometry,GC-TOF/MS)及高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)分别检测临床患者骨髓样本CD138+细胞及敲减VARS基因的ARP1、OCI-MY5细胞及上清液中缬氨酸含量.结果:基因富集分析结果表明:与HD相比,tRNA加工相关的基因在MM中显著富集(P<0.0001).进一步筛选tRNA加工通路相关子集发现胞质氨酰tRNA合成酶家族基因在MM中显著富集(P<0.0001).基因表达热图结果表明GEO数据中ARS家族基因除丙氨酰tRNA合成酶(alanyl-tRNA synthetase,AARS)、精氨酰tRNA合成酶(arginyl-tRNA synthetase,RARS)、丝氨酰tRNA合成酶(seryl-tRNA synthetase,SARS)外,其余ARS家族基因均在MM中高表达(均P<0.01),且随着意义未明单克隆丙种球蛋白血症(monoclonal gammopathy of undetermined significance,MGUS)到MM的发展进程,基因表达水平逐渐增加.Kaplan-Meier生存情况单因素分析结果表明甲硫氨酰tRNA合成酶(methionyl-tRNA synthetase,MARS)、天冬酰胺基tRNA合成酶(asparaginyl-tRNA synthetase,NARS)、VARS高表达组与低表达组MM患者预后情况差异均具有统计学意义(均P<0.05).Cox回归模型多因素分析结果表明:VARS的高表达与MM的总生存时间异常有关(HR=1.83,95%CI 1.10～3.06,P=0.021);NARS(HR=0.90,95%CI 0.34～2.38)及MARS(HR=1.59,95%CI 0.73～3.50)的高表达均对MM患者的总生存时间无影响(均P>0.05).Real-time RT-PCR及蛋白质印迹法结果表明VARS、MARS和NARS在临床患者CD138+MM细胞及MM细胞系中均高表达(均P<0.05).细胞计数法及流式细胞术结果表明,敲减VARS的MM细胞增殖能力被显著抑制(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.05).生物信息学分析结果表明除包括细胞周期在内的通路受VARS调控外,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸分解代谢通路被上调.非靶向代谢组学数据表明:与HD相比,MM患者的CD138+MM细胞中缬氨酸含量降低(P<0.05).HPLC结果表明:与scramble组相比,VARS-shRNA组的ARP1细胞与培养基上清液及OCI-MY5培养基上清液中缬氨酸含量均增加(均P<0.05).结论:VARS在MM中异常高表达,且与MM患者的不良预后相关.VARS可通过影响缬氨酸代谢调控促进MM细胞的生长.

以'富士'和'嘎啦'苹果(Malus pumila)叶片总RNA为模板,利用反转录PCR(RT-PCR)技术,克隆N-乙酰基-5-羟色胺-O-甲基转移酶(ASMT)基因,通过DNAMAN、MEGA 5.1、ProtParam等生物信息学软件对基因cDNA序列、系统进化关系、理化性质等进行分析,将克隆的苹果ASMT基因与表达载体pET32a连接,构建原核表达载体并转入大肠杆菌(Escherichia coli)表达菌株Rosetta(DE3)中,优化原核表达条件,用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测融合蛋白的可溶性,用蛋白免疫印迹法(western blot)和酶活性测定验证目的蛋白的表达.结果表明,获得了苹果ASMT的全长cDNA序列,命名为MpASMT1(GenBank登记号MF135479).该基因开放阅读框(ORF)为1077 bp,编码358个氨基酸.MpASMT1编码蛋白的理论分子量约为39.7 kDa,等电点为5.42,是非分泌型、疏水的稳定蛋白;其263位组氨酸(His)为催化位点,225位谷氨酸为底物S-腺苷甲硫氨酸结合位点.多序列比对及系统发生树分析表明,MpASMT1编码的氨基酸序列与珠美海棠(M.zumi)MzASMT1(KJ123721)同源性最高,相似性达99.2%,其次为葡萄(Vitis vinifera)ASMT(LOC100248671),氨基酸序列相似性为66.4%.原核表达结果显示,经0.25~2.0 mmol·L-1异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导的重组质粒可特异性表达分子量约58 kDa的融合蛋白,且低温条件(15和25°C)能够提高该蛋白的可溶性表达;west-ern blot分析表明融合表达蛋白能与His单克隆抗体特异性结合,纯化蛋白的酶活性为7.8 pmol·mg-1(蛋白),进一步证实MpASMT1编码蛋白成功表达.