目的:初步探讨抗中性粒细胞胞质髓过氧化物酶抗体相关性血管炎（MPO-AAV）患者中性粒细胞肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PAD4）表达的变化及临床意义。方法:选择39例初诊未治的MPO-AAV患者为病例组，记录患者伯明翰血管炎活动度积分（BVAS），选择39名健康志愿者为对照组。采用流式细胞术检测2组受试者外周血中性粒细胞PAD4的表达水平，ELISA法检测外周血中性粒细胞胞外陷阱（NETs）、补体C5活化片段a（C5a）及抗中性粒细胞胞质髓过氧化物酶抗体（MPO-ANCA）水平。采用 t检验比较2组间PAD4、C5a及NETs水平差异，采用Spearman相关分析和多元线性回归分析病例组内各检测指标与BVAS间关系。 结果:病例组表达PAD4中性粒细胞比例及PAD4表达的平均荧光强度（MIF）均显著高于对照组[分别为（71±11）%与（26±6）%， t=22.456， P<0.01；（33±4）与（14±4）， t=18.668， P<0.01]病例组NETs和C5a水平均高于对照组[分别为（0.62±0.22）与（0.26±0.15）， t=8.466， P<0.01；（4.6±1.0）ng/ml与（2.9±1.0）ng/ml， t=7.697， P<0.01]。相关分析结果显示病例组BVAS分别与表达PAD4的中性粒细胞百分比、PAD4的MFI、NETs、C5a和MPO-ANCA呈正相关（分别为 r=0.843， P<0.01； r=0.821， P<0.01； r=0.411 1， P<0.01； r=0.613， P<0.01； r=0.790， P<0.01）。多元线性回归分析显示表达PAD4中性粒细胞百分比和MPO-ANCA水平分别是BVAS的独立影响因素（分别为 β=0.325， t=5.889， P<0.01； β=0.796， t=4.298， P<0.01）。 结论:活动期MPO-AAV患者外周血中性粒细胞PDA4表达水平显著增强，且是影响MPO-AAV疾病活动度的独立因素，干预中性粒细胞PAD4的表达可能是MPO-AAV治疗的潜在新靶点。

类风湿关节炎（RA）是一种以慢性滑膜炎、关节软骨及骨破坏为特征的自身免疫性疾病。抗瓜氨酸化蛋白/多肽抗体（ACPAs）是RA特异性自身抗体。近年来研究发现，RA患者血清中还可以检测到针对肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PAD4）的自身抗体，该抗体具有较高的特异性，有助于RA的诊断。抗PAD4抗体与RA的临床表现、治疗反应以及预后相关，有望成为RA预后判断的生物标志物。本文就抗PAD4抗体在RA中的作用进行综述。

目的:探讨微小RNA-4298(miR-4298)靶向抑制肽酰精氨酸脱亚胺基酶4(PADI4)表达在组蛋白去乙酰化酶抑制因子曲古抑菌素A(TSA)诱导U251细胞凋亡中的作用机制。方法:实验分为TSA组(0.2 μmol/L TSA处理)和对照组。采用CCK8法检测TSA对U251细胞增殖的影响；流式细胞术检测药物作用后U251细胞的凋亡水平；反转录PCR和蛋白质印迹法测定miR-4298干扰后PADI4基因和蛋白表达的变化；Luciferase实验测定miR-4298对PADI4的3′UTR区靶向结合与荧光素酶活性的影响；PADI4转染U251细胞，观察miR-4298对凋亡功能的拯救作用。实验各分为3组，即NC组、miR-4298 mimic组、TSA+miR-4298 mimic组以及NC组、miR-4298 inhibitor组、TSA+miR-4298 inhibitor组。结果:U251细胞经0.2 μmol/L的TSA作用4 d后，对照组的吸光度( A)值为1.168±0.148，高于TSA组的0.737±0.007，差异有统计学意义( t＝4.948， P＝0.008)。与对照组相比，经0.2 μmol/L TSA处理48 h后，U251细胞发生明显的凋亡现象(27.62%±3.49% vs. 4.99%±0.13%， t＝11.190， P<0.001)。与药物作用前相比，TSA作用48 h后，PADI4基因表达(0.386±0.020 vs. 0.903±0.021)和蛋白表达水平(0.276±0.041 vs. 0.777±0.031)均有所降低，差异均有统计学意义( t＝30.400， P<0.001； t＝16.770，) P<0.001。miR-4298在TSA诱导U251细胞凋亡的过程中表达升高(2.573±0.289 vs. 1.003±0.136； t＝8.487， P＝0.001)，并且miR-4298与PADI4的表达呈负相关( r＝-0.877， P＝0.002)。Luciferase实验证实，miR-4298对野生型PADI4的3′UTR区具有靶向结合和荧光素酶抑制作用。与NC组(0.920±0.026)相比，miR-4298 mimic组(0.413±0.049)和TSA+miR-4298 mimic组(0.213±0.035)PADI4基因相对表达水平均有所降低，差异均有统计学意义(均 P<0.001)；其蛋白表达水平变化与基因变化趋势一致。与NC组(3.78%±0.68%)相比，miR-4298 mimic组(7.96%±1.10%)和TSA+miR-4298 mimic组(13.74%±1.26%)诱导细胞凋亡的水平均有所增加，差异有统计学意义( P＝0.005； P<0.001)。与NC组(0.183±0.025)相比，miR-4298 inhibitor组(0.483±0.032)和TSA+miR-4298 inhibitor组(0.386±0.025)PADI4基因表达均有所升高，差异有统计学意义( P<0.001； P＝0.015)。蛋白表达水平变化与基因变化趋势一致。与NC组(4.96%±0.59%)相比，miR-4298 inhibitor组(23.83%±2.20%)和TSA+miR-4298 inhibitor组(9.55%±1.49%)诱导细胞凋亡的水平均有所增加，差异有统计学意义(均 P<0.001)。救援实验中，miR-4298 mimic组明显升高PADI4表达水平( P<0.001)，miR-4298 mimic+PADI4组则相对逆转PADI4表达水平( P＝0.002)。 结论:miR-4298可通过靶向调控PADI4基因表达参与U251细胞的凋亡发生过程，miR-4298可能是脑胶质瘤靶向干预治疗的靶点。

目的 探究肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)介导的中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在甲状腺癌细胞增殖、侵袭和细胞周期中的作用机制以及临床相关性研究.方法 收集60例甲状腺癌患者和60例健康受试者的外周血,ELISA检测血清中PAD4和组蛋白H3瓜氨酸化(H3cit)水平,并分析甲状腺癌患者血清中PAD4和H3cit水平与疾病进展的相关性.提取甲状腺癌患者和健康受试者外周血中性粒细胞,qRT-PCR检测PAD4 mRNA表达水平,离子霉素刺激和绿菁染色检测NETs形成水平.将NETs、GSK484与人甲状腺癌细胞株CAL-62共孵育,分为Control组、NETs组和NETs+GSK484组.采用CCK-8法、Transwell法和流式细胞术分别检测细胞增殖和侵袭水平以及细胞周期进展.结果 与健康受试者相比,甲状腺癌患者血清中PAD4和H3cit水平升高(P<0.05),且PAD4和H3cit水平呈正相关(P<0.05).甲状腺癌患者的PAD4和H3cit水平均与TNM分期有关(P<0.05).与健康受试者相比,甲状腺癌患者外周血中性粒细胞PAD4 mRNA表达及NETs形成水平升高(P<0.05).与Control组相比,NETs组细胞增殖、侵袭水平升高(P<0.05),S期细胞比例升高(P<0.05),G1期细胞比例降低(P<0.05).GSK484可抑制NETs形成.与NETs组相比,NETs+GSK484组细胞增殖、侵袭水平降低(P<0.05),S期细胞比例降低(P<0.05),G1期细胞比例升高(P<0.05).结论 PAD4介导的NETs通过激活细胞周期进展,促进甲状腺癌细胞增殖和侵袭,加速甲状腺癌疾病进展.

目的 探究Cl-amidine对巨噬细胞M1型极化的影响以及其对强直性脊柱炎(AS)的临床指导意义.方法 选择60例AS患者,根据疾病活动度评分将患者分为低AS疾病组和高AS疾病组,同期纳入30例健康受试者作为对照组.EILSA检测三组人群血清PAD4、iNOS和骨形成指标BGP水平,皮尔逊相关系数分析肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)、一氧化氮合酶(iNOS)和骨钙素(BGP)的相关性;流式细胞术检测3组人群外周血M1型巨噬细胞(CD68+CD86+)比例.培养THP-1单核细胞系,体外诱导为M1型巨噬细胞,期间加入Cl-amidine共孵育,分组为:M0组、M1组、M1+Cl-amidine组,Western blot检测各组细胞PAD4和iNOS蛋白表达水平.RNA-seq检测M1组、M1+Cl-amidine组细胞差异表达基因并进行KEGG分析,Western blot检测JAK3、p-JAK3、STAT5、p-STAT5蛋白表达水平.结果 与对照组相比,低AS疾病组PAD4、iNOS水平升高,BGP水平降低,M1型巨噬细胞比例升高;与低AS疾病组相比,高AS疾病组PAD4、iNOS水平升高,BGP水平降低,M1型巨噬细胞比例升高.PAD4水平与iNOS水平呈正相关,PAD4、iNOS水平与BGP水平呈负相关.与MO组相比,M1组PAD4和iNOS蛋白表达升高;与M1组相比,M1+Cl-amidine组有163个基因表达上调,272个基因表达下调.上调基因主要参与JAK-STAT信号通路.与M1组相比,M1+Cl-amidine 组 iNOS、p-JAK3/JAK3、p-STAT5/STAT5 蛋白表达降低.结论 PAD4 和 M1 型巨噬细胞水平与AS疾病程度呈正相关.PAD4抑制剂Cl-amidine可能通过JAK3-STAT5信号通路抑制巨噬细胞向M1极化,该作用机制有助于AS临床治疗的研究.

目的 研究p16、肽酰基精氨酸脱亚胺酶(PADI)4 在食管癌组织中的表达及其与放射治疗后预后的相关性.方法 选取58 例接受放射治疗的食管癌患者,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法对癌组织中p16 和PADI4 表达水平的进行测定.所有患者采用三维适形放疗,并对临床放疗效果进行评价.分析p16 和PADI4 表达水平与患者临床病理特征相关性及其与放射治疗后预后的关系.结果 与癌旁组织相比,p16 在癌组织中表达水平明显较低,PADI4 在癌组织中表达水平明显较高(P＜0.05),p16 在癌组织中表达水平与PADI4 表达水平呈显著负相关(r=-0.874,P＜0.001).58 例食管癌患者放射治疗后,21 例完全缓解,33 例部分缓解,4 例无效.放疗不同敏感性患者癌组织中p16 和PADI4 的表达水平比较差异均有统计学意义(P＜0.05).完全缓解患者癌组织中p16 表达水平显著高于部分缓解患者和无效患者(P＜0.05),部分缓解患者癌组织中p16 表达水平显著高于无效患者(P＜0.05).完全缓解患者癌组织中PADI4 表达水平显著低于部分缓解患者和无效患者(P＜0.05),部分缓解患者癌组织中PADI4 表达水平显著低于无效患者(P＜0.05).食管癌患者癌组织中p16 和PADI4 表达水平与TNM分期、浸润程度及淋巴结转移有密切关系(P＜0.05).对58 例食管癌患者随访3 年,死亡例数28 例,存活例数30 例,3 年中的生存率为51.72%.其中 p16 高表达组和p16 低表达组 3 年存活率差异有统计学意义(P＜0.05).PADI4 高表达和低表达组3 年生存率比较差异显著(P＜0.05).结论 p16、PADI4 有望成为监测放疗敏感性的监测指标,且与放射治疗后预后的关系密切.

目的:制备介孔二氧化硅纳米载体(MSN)并包载肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)小干扰RNA(PADI4-siRNA-MSN),阐明PADI4-siRNA-MSN对类风湿关节炎成纤维滑膜细胞(RA-FLS)凋亡的影响.方法:采用模板法合成MSN,包被阳离子聚合物聚乙烯亚胺(PEI)及荧光标记分子罗丹明B(RhB),检测其表征,包括粒径、Zeta电势、荧光和形貌.设计并合成2对FAM标记的针对PADI4基因编码区的干扰核苷酸链(si-944、si-1225)及阴性对照si-NC,制备PADI4-siRNA-MSN和si-NC-MSN,转染RA-FLS,流式细胞术(FCM)鉴定转染率.采用荧光定量PCR、蛋白印迹技术检测转染48 h后,干扰组和阴性对照组细胞PADI4表达量,FCM检测细胞凋亡率,激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察PADI4-siRNA-MSN胞内分布.所有数据采用配对t检验进行分析.结果:MSN经表征检测显示已成功制备并包被RhB、PEI,FCM结果显示转染率为93.3％(si-944)和91.9％(si-1225).si-NC组中的PADI4 mRNA水平为1.23±0.27;si-944、si-1225干扰组中分别为0.35±0.12、0.44±0.12,均显著低于阴性对照组(P<0.05).蛋白印迹结果与PCR结果一致.与si-NC组细胞凋亡率(8.83±0.15)相比,si-944和si-1225组细胞凋亡率(11.72±0.82,13.00±1.42)显著增加(P<0.05).CLSM结果显示PADI4-siRNA-MSN分布于核周.结论:PADI4-siRNA-MSN成功制备,并转染RA-FLS,有效沉默PADI4基因,显著增加RA-FLS的凋亡率.PADI4-siRNA-MSN在抑制RA-FLS增殖、促进凋亡中具有一定的应用前景.

目的 分析缺血性脑卒中基因芯片数据,筛选出与缺血性脑卒中发病密切相关的基因.方法 下载GEO数据库中有关缺血性脑卒中患者的数据,筛选出显著意义的差异表达基因,采用(DAVID)工具进行GO基因功能分析和(KEGG)通路富集分析,再应用STRING软件对差异表达基因构建蛋白-蛋白互作网络,使用Cytoscape软件分析和找寻与缺血性脑卒中发病相关的基因.结果 检索到GSE22255和GSE16561两个缺血性脑卒中的数据集,共有99个外周血标本.以P<0.05,差异倍数>1.0倍为条件筛选差异表达基因,共得到61个差异表达基因,其中表达上调58个,下调3个.GO功能注释显示这些差异表达基因主要参与炎症反应、免疫反应、中性粒细胞趋化生物过程;主要分子功能为化学因子活性、蛋白结合、细胞因子活性等;KEGG通路显示这些差异表达基因主要参与类风湿性关节炎通路、肿瘤坏死因子通路、Toll样受体通路.蛋白-蛋白互作网络和Cytoscape分析显示人类白细胞抗原(HLA)-DRB1、肽酰基精氨酸脱亚胺酶(PADI)4、IgG-Fc片段低亲和力受体(FCGR)3B、肿瘤坏死因子(TNF)、细胞因子信号抑制物(SOCS)3在缺血性脑卒中发病中与其他差异表达基因关联度最高.结论 缺血性脑卒中发病过程中伴随着多个基因的差异表达,这些基因参与了多种细胞功能和信号通路,其中HLA-DRB1、PADI4、FCGR3B等与缺血性脑卒中的发病密切相关.

白血病是血液系统的常见病和多发病,定向诱导白血病细胞分化是治疗白血病的重要策略之一.肽酰基精氨酸脱亚胺酶(PAD/PADI)是催化精氨酸转化为瓜氨酸的关键酶,在白血病诱导分化过程中起关键作用.国内外学者在白血病诱导分化的机制及策略方面开展了众多研究.本文对诱导白血病细胞定向分化为粒细胞、树突状细胞及巨噬细胞的研究概况及PADI4在白血病细胞定向分化中的机制研究进展作一综述.

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4向粒细胞分化过程中肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)的表达变化及其是否参与炎性因子的表达.方法:建立ATRA诱导的NB4细胞分化模型,采用Wright-Giemsa染色观察细胞形态学变化;采用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b的表达;RT-PCR方法检测PADI4基因转录水平的表达;Western bolt方法检测PADI4翻译水平的表达;ELISA检测培养液中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β的表达;siRNA技术干扰PADI4表达后ELISA检测TNF-α和IL-1β的表达.结果:ATRA诱导后NB4细胞胞浆增多,核浆比例降低,核有凹陷,杆状和分叶现象增多.流式细胞术检测结果显示细胞表面分子CD11b表达明显升高(P＜0.01).在分化模型中,RT-PCR及Western blot检测结果显示PADI4转录水平和翻译水平表达均明显升高(P＜0.05).ELISA方法检测培养液中TNF-α和IL-1 β的表达水平明显升高(P＜0.05),而siRNA技术干扰PADI4表达后TNF-α和IL-13的表达水平明显下降(P＜0.05).结论:ATRA诱导NB4细胞向粒细胞分化过程中PADI4的表达升高,同时PADI4参与了NB4细胞分化过程中炎性因子的表达.