目的:探讨曲古抑菌素A对膀胱癌细胞凋亡及细胞周期进程的影响及机制。方法:使用5637细胞(购自上海中国科学院细胞所)作为研究细胞，使用含有低、中、高浓度曲古抑菌素A的RPMI 1640培养基培养5637细胞24、48、72 h。然后检测各组细胞相对存活率、凋亡率、处于各细胞周期阶段的细胞比例以及细胞周期相关蛋白表达。采用方差检验和 t检验。 结果:随着药物浓度升高和药物作用时间延长，5637细胞相对生存率[空白组：100.00%、100.00%、100.00%；低剂量组：(90.45±18.56)%、(80.45±12.25)%、(65.45±8.65)%；中剂量组：(71.02±9.56)%、(63.45±6.12)%、(50.42±6.35)%；高剂量组：(52.14±6.25)%、(42.11±5.14)%、(20.25±3.25)%]( F＝11.483、9.244、8.264， P<0.01)，细胞凋亡率显著升高；随着药物浓度增加处于亚G 1期细胞所占比例显著升高，p21蛋白显著升高，磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及细胞周期蛋白D显著降低。低剂量组和中剂量组细胞处于S期细胞比例显著低于空白组。 结论:曲古抑菌素A可以通过抑制p-Akt信号通路促进膀胱癌细胞凋亡同时也可以通过促进p21蛋白表达抑制细胞周期进程。

目的:探讨黑色素瘤相关抗原C2(MAGE-C2)在乳腺正常组织、良性病变组织和癌组织中的表达、表达机制及临床意义。方法:分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法检测60例乳腺正常组织、60例乳腺良性病变组织和60例乳腺癌组织中MAGE-C2 mRNA和蛋白的表达，分析其与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。以DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)干预人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231后，采用RT-PCR法检测MAGE-C2 mRNA表达的变化。结果:乳腺癌组织中MAGE-C2 mRNA阳性表达率为61.7%(37/60)，MAGE-C2蛋白阳性表达率为58.3%(35/60)，乳腺正常组织和良性病变组织中未见MAGE-C2 mRNA及蛋白的表达。MAGE-C2蛋白表达与乳腺癌的病理类型、组织学分级、脉管瘤栓有关(均 P<0.05)。MAGE-C2蛋白表达阳性乳腺癌患者的无复发生存率低于MAGE-C2蛋白表达阴性的患者( χ2＝4.467， P＝0.035)。多因素Cox回归分析显示，临床分期( HR＝4.715， P＝0.004)、淋巴结转移( HR＝3.827， P＝0.023)和MAGE-C2蛋白表达( HR＝4.229， P＝0.026)是乳腺癌患者无复发生存的独立影响因素。对照组和TSA组乳腺癌细胞中未见MAGE-C2 mRNA表达，5-aza-CdR组乳腺癌细胞中可见MAGE-C2 mRNA表达(MCF-7细胞为0.2914±0.0274，MDA-MB-231细胞为0.4808±0.0288)，联合应用5-aza-CdR和TSA可使乳腺癌细胞中MAGE-C2 mRNA表达进一步增加(MCF-7细胞为1.0357±0.0644，MDA-MB-231细胞为1.6013±0.0675)。 结论:MAGE-C2是肿瘤特异性抗原，其表达与乳腺癌患者的不良预后有关，DNA甲基化和组蛋白乙酰化可能是调控MAGE-C2基因表达的重要机制。

目的:探讨微小RNA-4298(miR-4298)靶向抑制肽酰精氨酸脱亚胺基酶4(PADI4)表达在组蛋白去乙酰化酶抑制因子曲古抑菌素A(TSA)诱导U251细胞凋亡中的作用机制。方法:实验分为TSA组(0.2 μmol/L TSA处理)和对照组。采用CCK8法检测TSA对U251细胞增殖的影响；流式细胞术检测药物作用后U251细胞的凋亡水平；反转录PCR和蛋白质印迹法测定miR-4298干扰后PADI4基因和蛋白表达的变化；Luciferase实验测定miR-4298对PADI4的3′UTR区靶向结合与荧光素酶活性的影响；PADI4转染U251细胞，观察miR-4298对凋亡功能的拯救作用。实验各分为3组，即NC组、miR-4298 mimic组、TSA+miR-4298 mimic组以及NC组、miR-4298 inhibitor组、TSA+miR-4298 inhibitor组。结果:U251细胞经0.2 μmol/L的TSA作用4 d后，对照组的吸光度( A)值为1.168±0.148，高于TSA组的0.737±0.007，差异有统计学意义( t＝4.948， P＝0.008)。与对照组相比，经0.2 μmol/L TSA处理48 h后，U251细胞发生明显的凋亡现象(27.62%±3.49% vs. 4.99%±0.13%， t＝11.190， P<0.001)。与药物作用前相比，TSA作用48 h后，PADI4基因表达(0.386±0.020 vs. 0.903±0.021)和蛋白表达水平(0.276±0.041 vs. 0.777±0.031)均有所降低，差异均有统计学意义( t＝30.400， P<0.001； t＝16.770，) P<0.001。miR-4298在TSA诱导U251细胞凋亡的过程中表达升高(2.573±0.289 vs. 1.003±0.136； t＝8.487， P＝0.001)，并且miR-4298与PADI4的表达呈负相关( r＝-0.877， P＝0.002)。Luciferase实验证实，miR-4298对野生型PADI4的3′UTR区具有靶向结合和荧光素酶抑制作用。与NC组(0.920±0.026)相比，miR-4298 mimic组(0.413±0.049)和TSA+miR-4298 mimic组(0.213±0.035)PADI4基因相对表达水平均有所降低，差异均有统计学意义(均 P<0.001)；其蛋白表达水平变化与基因变化趋势一致。与NC组(3.78%±0.68%)相比，miR-4298 mimic组(7.96%±1.10%)和TSA+miR-4298 mimic组(13.74%±1.26%)诱导细胞凋亡的水平均有所增加，差异有统计学意义( P＝0.005； P<0.001)。与NC组(0.183±0.025)相比，miR-4298 inhibitor组(0.483±0.032)和TSA+miR-4298 inhibitor组(0.386±0.025)PADI4基因表达均有所升高，差异有统计学意义( P<0.001； P＝0.015)。蛋白表达水平变化与基因变化趋势一致。与NC组(4.96%±0.59%)相比，miR-4298 inhibitor组(23.83%±2.20%)和TSA+miR-4298 inhibitor组(9.55%±1.49%)诱导细胞凋亡的水平均有所增加，差异有统计学意义(均 P<0.001)。救援实验中，miR-4298 mimic组明显升高PADI4表达水平( P<0.001)，miR-4298 mimic+PADI4组则相对逆转PADI4表达水平( P＝0.002)。 结论:miR-4298可通过靶向调控PADI4基因表达参与U251细胞的凋亡发生过程，miR-4298可能是脑胶质瘤靶向干预治疗的靶点。

目的:研究丁酸钠、曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)及腺病毒E1A相关的 300 kD蛋白(adenoviral E1A binding protein of 300 kD,P300)介导的组蛋白乙酰化在人非小细胞肺癌A549 细胞及人支气管上皮BEAS-2B细胞中对哮喘易感的解整合素-金属蛋白酶 33(a disintegrin and metalloproteinase 33,ADAM33)基因表达的影响.方法:将A549 细胞及BEAS-2B 细胞分别分为丁酸钠对照组(双蒸水处理)和 1、2.5、5 mmol/L 丁酸钠组,TSA 对照组(0.1%二甲基亚砜处理)和 0.2、0.4、0.8 μmol/L TSA组,按照组别分别予以相应处理;另将BEAS-2B细胞分为对照组(转染P300 突变质粒)和P300 组(转染P300 表达质粒);采用双荧光素酶报告基因法分析ADAM33 启动子活性的变化,实时荧光定量PCR(quantitative real time-PCR,qRT-PCR)检测ADAM33 mRNA表达,蛋白质印迹法检测ADAM33 蛋白表达.结果:在人非小细胞肺癌A549 细胞中,与对照组相比,1 mmol/L丁酸钠组及 0.2 μmol/L TSA组ADAM33 基因启动子活性明显降低(P＜0.01);在BEAS-2B细胞中,与对照组相比,1 mmol/L丁酸钠组及0.2 μmol/L TSA组ADAM33 基因启动子活性、mRNA及蛋白相对表达水平明显降低(P＜0.05 或P＜0.01).加大丁酸钠、TSA 药物浓度,ADAM33 表达无显著差异.在人支气管上皮 BEAS-2B 细胞中,与对照组相比,P300 组ADAM33 启动子活性、mRNA和蛋白相对表达水平明显降低(P＜0.05).结论:丁酸钠、TSA通过组蛋白乙酰化降低人非小细胞肺癌A549 细胞和人支气管上皮BEAS-2B细胞中ADAM33 表达,P300 通过组蛋白乙酰化降低人支气管上皮BEAS-2B细胞中ADAM33 表达.

目的:探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷/曲古抑菌素A(5-Aza/TSA)介导的DNA去甲基化/组蛋白乙酰化处理对B细胞来源的非霍奇金淋巴瘤B细胞表型的影响.方法:构建含有G418抗性的CD19特异性启动eGFP表达载体,转染霍奇金(阴性对照)和非霍奇金淋巴瘤细胞,并筛选目的序列稳定整合的克隆,比较CD19启动子在2组细胞中的活性.流式细胞术检测5-Aza/TSA处理对2组细胞GFP表达水平的影响.分离Eμ-myc转基因小鼠非霍奇金淋巴瘤原代细胞并鉴定其B细胞表型,通过流式细胞术检测5-Aza/TSA对其B细胞表面抗原CD19等表达水平的影响.结果:5-Aza/TSA表观遗传处理能够降低人非霍奇金淋巴瘤细胞中外源性CD19启动子的转录活性,并沉默小鼠原代非霍奇金淋巴瘤细胞表面B细胞特异性抗原的表达.结论:DNA甲基化和组蛋白去乙酰化对人类及小鼠B细胞来源的非霍奇金淋巴瘤B细胞表型稳定有重要作用.

目的:研究曲古抑菌素A(TSA)对青光眼滤过术(GFS)术后滤过道瘢痕化细胞模型Ⅰ型胶原蛋白表达的影响.方法:构建GFS术后滤过道瘢痕化细胞模型,RT-PCR、Western blotting法分别检测600 nmol/L TSA对组蛋白乙酰基转移酶Ⅰ型胶原蛋白mRNA及蛋白表达的影响.结果:RT-PCR、Western blotting均证实600 nmol/L TSA对Ⅰ型胶原蛋白在基因转录及蛋白表达水平有抑制作用(P<0.01和P<0.05).结论:TSA能减弱GFS术后滤过道瘢痕化细胞模型中Ⅰ型胶原纤维基因转录及蛋白表达水平.

目的 探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycitydine,5-Aza-dC)联合曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对胃癌细胞株SNU-1中DLC-1基因的甲基化水平和mRNA表达的影响.方法 应用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)和实时荧光定量PCR,检测5-Aza-dC单药或联合TSA作用于SNU-1细胞后,DLC-1基因的甲基化水平及DLC-1基因mRNA表达量.结果 对照组中DLC-1基因呈甲基化状态;5-Aza-dC药物干预组DLC-1基因出现明显的非甲基化条带,甲基化条带亮度减弱;TSA组条带无明显变化;5-Aza-dC+ TSA组DLC-1基因甲基化条带明显减弱,且出现非甲基化条带.5-Aza-dC组DLC-1 mRNA表达量是对照组的2.22倍,TSA组DLC-1 mRNA表达量是对照组的2.20倍,5-Aza-dC+ TSA组DLC-1 mRNA表达量是对照组的4.50倍(P＜0.05).结论 5-Aza-dC能诱导胃癌细胞系SNU-1中DLC-1基因去甲基化,与TSA联用可提高DLC-1 mRNA表达.

目的:分析口腔黏膜鳞癌细胞增殖过程中Maspin基因甲基化的调控作用机制,为相关研究及临床治疗提供借鉴.方法:鳞状细胞癌HIOEC-B(a)P细胞系随机分为4组:5-氮-2-脱氧胞苷+曲古抑菌素A(ADC+TSA)阴性组、低(0.1 μmol/L+0.05μmol/L)、中(1μ,mol/L+0.5 μmol/L)和高剂量组(10 μmol/L+5 μ,mol/L).以正常口腔黏膜上皮细胞作为对照组.实时定量PCR检测各组细胞Maspin基因的甲基化程度,MTT法检测各组细胞的增殖情况,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色检测细胞凋亡.采用SPSS20.0软件包对数据进行单因素方差分析.结果:与对照组相比,癌细胞的Maspin基因甲基化程度显著增强(P＜0.01),与阴性组相比,中剂量和高剂量组Maspin基因甲基化程度显著减弱(P＜0.05,P＜0.01),低、中、高剂量组的细胞增殖抑制率显著高于阴性组(P＜0.05,P＜0.01).随着药物剂量的提高,细胞凋亡程度逐渐增加(P＜0.05).结论:Maspin基因甲基化可能参与口腔黏膜鳞癌细胞的增殖过程.

目的 GATA-1是在红系分化过程中发挥关键作用的转录因子,实验观察1,2,4-苯三醇对K562细胞GATA-1基因mRNA表达的影响,以及DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)的干预作用.方法 培养的K562细胞先经5、10和20μmol/L的1,2,4-苯三醇处理72 h,然后经氯化高铁血红素诱导后,应用联苯胺染色法检测细胞血红蛋白合成情况,采用反转录PCR检测细胞GATA-1的mRNA表达水平.培养的K562细胞先经20 μmol/L的1,2,4-苯三醇处理24或48 h后,或加入5-aza-CdR共同孵育48 h,或加入TSA共同孵育24 h,然后经氯化高铁血红素诱导后,采用反转录PCR检测细胞GATA-1的mRNA表达水平.结果 当K562细胞经5、10和20 μmol/L的苯三醇处理后,氯化高铁血红素诱导下的GA TA-1 mRNA表达水平分别只有对照组的91.1％、52.7％和23.2％,红系分化率分别只有对照组的93.3％、85.9％和65.5％.如果在20μmol/L的苯三醇处理24 h后加入5-Aza-CdR共同孵育48 h,氯化高铁血红素诱导的GA TA-1 mRNA表达水平相对于单纯苯三醇处理组有明显回升,达到对照组水平的80.0％.如果在20 μmol/L的苯三醇处理48 h后加入TSA共同孵育24 h,氯化高铁血红素诱导的GATA-1mRNA表达水平相对于单纯苯三醇处理组有明显回升,达到对照组水平的78.0％.结论 1,2,4-苯三醇可引起K562细胞GATA-1基因转录抑制,而DNA甲基化和组蛋白去乙酰化的表观遗传修饰方式的改变可能参与其中.

为探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A (Trichostatin A, TSA) 对刀豆素A (Concanavalin A, Con A) 诱导的小鼠急性肝炎的保护作用及可能的作用机制, 本研究利用Caspase 3活性试剂盒、流式细胞分析仪和酶联免疫法 (ELISA) 来分别检测Con A注射后12 h的小鼠肝组织中Caspase 3活性、CD4+/CD69+淋巴细胞比例变化和血清中干扰素 (IFN)-γ、肿瘤坏死因子 (TNF)-α水平.结果与模型组相比, TSA给药组小鼠血清转氨酶活性显著降低, IFN-γ、TNF-α水平明显降低;肝脏炎症损伤程度明显减轻, 肝组织中Caspase 3活性显著降低.与模型组相比, TSA给药组小鼠肝组织中CD4+/CD69+比例显著降低.该研究表明曲古抑菌素A对刀豆素A诱导的急性肝炎具有保护作用, 该作用可能与抑制肝脏T细胞介导的免疫反应有关.