目的:初步探讨抗中性粒细胞胞质髓过氧化物酶抗体相关性血管炎（MPO-AAV）患者中性粒细胞肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PAD4）表达的变化及临床意义。方法:选择39例初诊未治的MPO-AAV患者为病例组，记录患者伯明翰血管炎活动度积分（BVAS），选择39名健康志愿者为对照组。采用流式细胞术检测2组受试者外周血中性粒细胞PAD4的表达水平，ELISA法检测外周血中性粒细胞胞外陷阱（NETs）、补体C5活化片段a（C5a）及抗中性粒细胞胞质髓过氧化物酶抗体（MPO-ANCA）水平。采用 t检验比较2组间PAD4、C5a及NETs水平差异，采用Spearman相关分析和多元线性回归分析病例组内各检测指标与BVAS间关系。 结果:病例组表达PAD4中性粒细胞比例及PAD4表达的平均荧光强度（MIF）均显著高于对照组[分别为（71±11）%与（26±6）%， t=22.456， P<0.01；（33±4）与（14±4）， t=18.668， P<0.01]病例组NETs和C5a水平均高于对照组[分别为（0.62±0.22）与（0.26±0.15）， t=8.466， P<0.01；（4.6±1.0）ng/ml与（2.9±1.0）ng/ml， t=7.697， P<0.01]。相关分析结果显示病例组BVAS分别与表达PAD4的中性粒细胞百分比、PAD4的MFI、NETs、C5a和MPO-ANCA呈正相关（分别为 r=0.843， P<0.01； r=0.821， P<0.01； r=0.411 1， P<0.01； r=0.613， P<0.01； r=0.790， P<0.01）。多元线性回归分析显示表达PAD4中性粒细胞百分比和MPO-ANCA水平分别是BVAS的独立影响因素（分别为 β=0.325， t=5.889， P<0.01； β=0.796， t=4.298， P<0.01）。 结论:活动期MPO-AAV患者外周血中性粒细胞PDA4表达水平显著增强，且是影响MPO-AAV疾病活动度的独立因素，干预中性粒细胞PAD4的表达可能是MPO-AAV治疗的潜在新靶点。

类风湿关节炎（RA）是一种以慢性滑膜炎、关节软骨及骨破坏为特征的自身免疫性疾病。抗瓜氨酸化蛋白/多肽抗体（ACPAs）是RA特异性自身抗体。近年来研究发现，RA患者血清中还可以检测到针对肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PAD4）的自身抗体，该抗体具有较高的特异性，有助于RA的诊断。抗PAD4抗体与RA的临床表现、治疗反应以及预后相关，有望成为RA预后判断的生物标志物。本文就抗PAD4抗体在RA中的作用进行综述。

目的:探讨微小RNA-4298(miR-4298)靶向抑制肽酰精氨酸脱亚胺基酶4(PADI4)表达在组蛋白去乙酰化酶抑制因子曲古抑菌素A(TSA)诱导U251细胞凋亡中的作用机制。方法:实验分为TSA组(0.2 μmol/L TSA处理)和对照组。采用CCK8法检测TSA对U251细胞增殖的影响；流式细胞术检测药物作用后U251细胞的凋亡水平；反转录PCR和蛋白质印迹法测定miR-4298干扰后PADI4基因和蛋白表达的变化；Luciferase实验测定miR-4298对PADI4的3′UTR区靶向结合与荧光素酶活性的影响；PADI4转染U251细胞，观察miR-4298对凋亡功能的拯救作用。实验各分为3组，即NC组、miR-4298 mimic组、TSA+miR-4298 mimic组以及NC组、miR-4298 inhibitor组、TSA+miR-4298 inhibitor组。结果:U251细胞经0.2 μmol/L的TSA作用4 d后，对照组的吸光度( A)值为1.168±0.148，高于TSA组的0.737±0.007，差异有统计学意义( t＝4.948， P＝0.008)。与对照组相比，经0.2 μmol/L TSA处理48 h后，U251细胞发生明显的凋亡现象(27.62%±3.49% vs. 4.99%±0.13%， t＝11.190， P<0.001)。与药物作用前相比，TSA作用48 h后，PADI4基因表达(0.386±0.020 vs. 0.903±0.021)和蛋白表达水平(0.276±0.041 vs. 0.777±0.031)均有所降低，差异均有统计学意义( t＝30.400， P<0.001； t＝16.770，) P<0.001。miR-4298在TSA诱导U251细胞凋亡的过程中表达升高(2.573±0.289 vs. 1.003±0.136； t＝8.487， P＝0.001)，并且miR-4298与PADI4的表达呈负相关( r＝-0.877， P＝0.002)。Luciferase实验证实，miR-4298对野生型PADI4的3′UTR区具有靶向结合和荧光素酶抑制作用。与NC组(0.920±0.026)相比，miR-4298 mimic组(0.413±0.049)和TSA+miR-4298 mimic组(0.213±0.035)PADI4基因相对表达水平均有所降低，差异均有统计学意义(均 P<0.001)；其蛋白表达水平变化与基因变化趋势一致。与NC组(3.78%±0.68%)相比，miR-4298 mimic组(7.96%±1.10%)和TSA+miR-4298 mimic组(13.74%±1.26%)诱导细胞凋亡的水平均有所增加，差异有统计学意义( P＝0.005； P<0.001)。与NC组(0.183±0.025)相比，miR-4298 inhibitor组(0.483±0.032)和TSA+miR-4298 inhibitor组(0.386±0.025)PADI4基因表达均有所升高，差异有统计学意义( P<0.001； P＝0.015)。蛋白表达水平变化与基因变化趋势一致。与NC组(4.96%±0.59%)相比，miR-4298 inhibitor组(23.83%±2.20%)和TSA+miR-4298 inhibitor组(9.55%±1.49%)诱导细胞凋亡的水平均有所增加，差异有统计学意义(均 P<0.001)。救援实验中，miR-4298 mimic组明显升高PADI4表达水平( P<0.001)，miR-4298 mimic+PADI4组则相对逆转PADI4表达水平( P＝0.002)。 结论:miR-4298可通过靶向调控PADI4基因表达参与U251细胞的凋亡发生过程，miR-4298可能是脑胶质瘤靶向干预治疗的靶点。

目的:评估类风湿关节炎（RA）患者中抗PAD2自身抗体（α-PAD2）和抗PAD4自身抗体（α-PAD4）联合检测的临床应用价值。方法:本研究收集了2018年11月至2019年11月北京大学人民医院住院的RA患者148例和非RA的关节炎对照（DC组）35例。同时收集了2019年6—7月北京大学人民医院体检的健康体检者44名。通过ELISA方法检测血清中α-PAD2和α-PAD4水平。根据需要，采用Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis（KW）检验、χ2检验或Fisher精确检验进行统计学分析。相关性分析采用逻辑回归模型。 结果:α-PAD2和α-PAD4在RA组、DC组及HC组中的阳性率分别为26.4%（39/148）和20.9%（31/148）、5.7%（2/35）和5.7%（2/35）、4.5%（2/44）和2.3%（1/44）。α-PAD4阳性的RA患者较α-PAD4阴性患者病程更长（17.3±13.2年比8.6±10.2年， P<0.001），其肺间质性疾病（ILD）发生率更高（54.8%比25.6%， P=0.002）。α-PAD2与RA-ILD间未发现显著相关（ OR：0.797， P=0.579），而α-PAD4与RA-ILD间存在显著相关（ OR：3.521， P=0.002）。对于血清阳性的RA患者，α-PAD4抗体仅与RA-ILD呈现弱相关（ OR：2.324， P=0.046），而联合检测α-PAD2和α-PAD4，即α-PAD2阴性同时α-PAD4阳性可以显著提高其与RA-ILD的相关性（ OR：4.059， P=0.007）。 结论:α-PAD2存在于RA中，其对于RA的诊断具有一定的潜在价值。此外，α-PAD2联合α-PAD4检测可以增强α-PAD4对于RA-ILD风险的预测价值。因此，α-PAD2作为RA新的潜在生物标志物，可能作为现有RA血清学标志物的重要补充。

肽基精氨酸脱亚胺酶（PAD）是一类可以介导修饰翻译后的蛋白质瓜氨酸化的钙依赖性半胱氨酸水解酶家族，目前发现家族中包括：PADI1、PADI2、PADI3、PADI4和PADI6。本文详述了人类PAD家族各成员的结构特征、具有的相关疾病区域特点及研究进展。

目的 探究肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)介导的中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在甲状腺癌细胞增殖、侵袭和细胞周期中的作用机制以及临床相关性研究.方法 收集60例甲状腺癌患者和60例健康受试者的外周血,ELISA检测血清中PAD4和组蛋白H3瓜氨酸化(H3cit)水平,并分析甲状腺癌患者血清中PAD4和H3cit水平与疾病进展的相关性.提取甲状腺癌患者和健康受试者外周血中性粒细胞,qRT-PCR检测PAD4 mRNA表达水平,离子霉素刺激和绿菁染色检测NETs形成水平.将NETs、GSK484与人甲状腺癌细胞株CAL-62共孵育,分为Control组、NETs组和NETs+GSK484组.采用CCK-8法、Transwell法和流式细胞术分别检测细胞增殖和侵袭水平以及细胞周期进展.结果 与健康受试者相比,甲状腺癌患者血清中PAD4和H3cit水平升高(P<0.05),且PAD4和H3cit水平呈正相关(P<0.05).甲状腺癌患者的PAD4和H3cit水平均与TNM分期有关(P<0.05).与健康受试者相比,甲状腺癌患者外周血中性粒细胞PAD4 mRNA表达及NETs形成水平升高(P<0.05).与Control组相比,NETs组细胞增殖、侵袭水平升高(P<0.05),S期细胞比例升高(P<0.05),G1期细胞比例降低(P<0.05).GSK484可抑制NETs形成.与NETs组相比,NETs+GSK484组细胞增殖、侵袭水平降低(P<0.05),S期细胞比例降低(P<0.05),G1期细胞比例升高(P<0.05).结论 PAD4介导的NETs通过激活细胞周期进展,促进甲状腺癌细胞增殖和侵袭,加速甲状腺癌疾病进展.

[目的]探究参七虫草方对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的影响,探讨其干预特发性肺纤维化(IPF)炎症反应、延缓肺纤维化的机制.[方法]将140只雄性SD大鼠随机分成 5组:空白组、模型组、参七虫草方组、吡非尼酮组、精氨酸脱亚胺酶组,每组 28 只.除空白组外,其余 4 组大鼠均采用气管内滴注博来霉素(BLM)的方法建立IPF大鼠模型.空白组及模型组大鼠予 0.9%氯化钠溶液灌胃,其余 3 组分别予参七虫草方、吡非尼酮灌胃及精氨酸脱亚胺酶腹腔注射,于药物干预第7、14、21、28 天分 4批处死大鼠.苏木精-伊红(HE)、Masson染色法观察肺组织病理变化;流式细胞术分别检测各组大鼠肺组织单细胞悬液中调节性T淋巴细胞(Th)1/Th2、自然杀伤T细胞(NKT细胞)阳性率;酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清中转化生长因子-β1(TGF-β1)及白细胞介素-10(IL-10)的相对表达水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测各组大鼠肺组织中磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(P-MEK)、磷酸化ERK(P-ERK)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)及活化蛋白酶-1(AP-1)的相对表达水平.[结果]与模型组比较,各治疗组大鼠肺组织中炎症细胞浸润及蓝色胶原沉积均有不同程度改善,但随时间推移,肺纤维化仍逐渐进展.与空白组比较,模型组大鼠相同时间点肺组织单细胞悬液中Th1/Th2 降低(P<0.05),NKT细胞阳性率升高(P<0.01),血清中TGF-β1 表达水平上升(P<0.01),IL-10 表达水平下降(P<0.01),肺组织中P-MEK、P-ERK、NF-κB p65 及AP-1 的表达水平增加(P<0.01).与模型组比较,各治疗组大鼠相同时间点肺组织单细胞悬液中Th1/Th2 无明显差异(P>0.05),NKT细胞阳性率降低(P<0.01),血清中TGF-β1 表达水平下降(P<0.01),IL-10表达水平上升(P<0.01),肺组织中P-MEK、P-ERK、NF-κB p65 及AP-1 的表达水平降低(P<0.01).[结论]参七虫草方可能通过抑制MAPK/ERK信号通路,提高IPF模型大鼠血清中IL-10 的表达水平,降低TGF-β1的表达水平,同时下调肺组织中NF-κB p65、AP-1 的表达水平,从而减轻炎症细胞浸润及胶原沉积,改善IPF病情进展.

目的 观察参七虫草方对肺纤维化大鼠精氨酸琥珀酸盐合成酶-1(ASS1)/src酪氨酸激酶(src)/信号转导和转化激活因子3(STAT3)通路相关因子表达的影响,探讨其治疗肺纤维化的作用机制.方法 选择120只SPF级SD雄性大鼠,采用随机数字表法分为5组:空白组、模型组、参七虫草方组、吡非尼酮组、精氨酸脱亚胺酶(ADI)腹腔注射组(24只/组).除空白组以外,4组均使用一次性气管内滴注博来霉素(BLM)诱导制备特发性肺纤维化的大鼠模型.造模成功后,参七虫草组予参七虫草方汤剂(0.423 g/kg)灌胃;吡非尼酮组予溶于生理盐水的吡非尼酮胶囊粉末(10 mL·kg-1·d-1)灌胃2次;ADI腹腔注射组予以2.25 mg/(kg·d)腹腔注射,1次/3 d;空白组、模型组分别以10 mL/(kg·d)生理盐水灌胃;给药疗程28 d.于第7、14、21、28天分4批处死大鼠,分离肺组织并计算肺指数.采用苏木素-伊红、马松染色观察大鼠肺组织的组织病理学;吉姆萨染色分析BALF中不同种类的炎症细胞;采用酶联免疫吸附测定法检测血清趋化因子配体2(CCL2)、转化生长因子β1(TGF-β1)的含量;蛋白免疫印迹法测定肺组织src、p-srcTry529、STAT3、p-STAT3Try705的蛋白表达;采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测肺组织ASS1、src、STAT3的表达水平.结果 参七虫草组、吡非尼酮组和ADI腹腔注射组各时间点中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞均低于同一时间点的模型组(P<0.05).在相同时间点,参七虫草组、吡非尼酮组和ADI腹腔注射组大鼠血清CCL2、TGF-β1水平均低于模型组(P<0.05).参七虫草组、吡非尼酮组和ADI腹腔注射组的p-srcTry529、p-STAT3Try705蛋白表达水平及肺组织ASS1、src、STAT3 mRNA均低于同一时间点的模型组(P<0.05).结论 参七虫草方可以缓解大鼠的肺纤维化程度,其机制可能通过调控ASS1/src/STAT3信号通路的活化从而缓解BLM大鼠肺纤维化的炎症反应.

目的 探究Cl-amidine对巨噬细胞M1型极化的影响以及其对强直性脊柱炎(AS)的临床指导意义.方法 选择60例AS患者,根据疾病活动度评分将患者分为低AS疾病组和高AS疾病组,同期纳入30例健康受试者作为对照组.EILSA检测三组人群血清PAD4、iNOS和骨形成指标BGP水平,皮尔逊相关系数分析肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)、一氧化氮合酶(iNOS)和骨钙素(BGP)的相关性;流式细胞术检测3组人群外周血M1型巨噬细胞(CD68+CD86+)比例.培养THP-1单核细胞系,体外诱导为M1型巨噬细胞,期间加入Cl-amidine共孵育,分组为:M0组、M1组、M1+Cl-amidine组,Western blot检测各组细胞PAD4和iNOS蛋白表达水平.RNA-seq检测M1组、M1+Cl-amidine组细胞差异表达基因并进行KEGG分析,Western blot检测JAK3、p-JAK3、STAT5、p-STAT5蛋白表达水平.结果 与对照组相比,低AS疾病组PAD4、iNOS水平升高,BGP水平降低,M1型巨噬细胞比例升高;与低AS疾病组相比,高AS疾病组PAD4、iNOS水平升高,BGP水平降低,M1型巨噬细胞比例升高.PAD4水平与iNOS水平呈正相关,PAD4、iNOS水平与BGP水平呈负相关.与MO组相比,M1组PAD4和iNOS蛋白表达升高;与M1组相比,M1+Cl-amidine组有163个基因表达上调,272个基因表达下调.上调基因主要参与JAK-STAT信号通路.与M1组相比,M1+Cl-amidine 组 iNOS、p-JAK3/JAK3、p-STAT5/STAT5 蛋白表达降低.结论 PAD4 和 M1 型巨噬细胞水平与AS疾病程度呈正相关.PAD4抑制剂Cl-amidine可能通过JAK3-STAT5信号通路抑制巨噬细胞向M1极化,该作用机制有助于AS临床治疗的研究.

目的 探讨精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)介导的瓜氨酸化组蛋白H3(H3cit)在脓毒症相关急性肾损伤(AKI)中的作用机制.方法 将30 只C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组和给药组,每组10 只.给药组连续7d灌胃PAD4 抑制剂BB-Cl-amidine,其余两组予同体积生理盐水.7 d后对模型组和给药组小鼠腹腔注射脂多糖(LPS)构建AKI模型.24 h后处死小鼠,检测各组小鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、H3cit水平,尿液中尿微量白蛋白(UALb)/肌酐(Cr)比值水平,以及肾组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,并分析SCr、BUN、UALb/Cr比值水平与H3cit水平的相关性.应用HE染色法检测各组小鼠肾脏损伤病理情况.采用Western blot法检测肾脏PAD4 和H3cit蛋白表达水平.采用HEK293T细胞进行实验,设置空白组、LPS组、LPS+BB-Cl-amidine组,通过Western blot法检测各组PAD4 和H3cit蛋白表达水平,通过CCK-8 法检测各组细胞增殖水平.结果 在动物实验中,与对照组比较,模型组小鼠血清SCr、BUN和H3cit水平升高,尿UALb/Cr比值升高,肾组织MDA水平升高、SOD水平降低,肾脏病理损伤加重,PAD4 和H3cit蛋白表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05).与模型组比较,给药组小鼠血清中SCr、BUN和H3cit水平降低,尿UALb/Cr比值降低,肾组织MDA水平降低、SOD水平升高,肾脏病理损伤缓解,H3cit蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).H3cit水平与SCr、BUN、UALb/Cr比值水平呈正相关(P＜0.05).在细胞实验中,与空白组比较,LPS组细胞PAD4 和H3cit蛋白表达升高,细胞增殖水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与LPS组比较,LPS+BB-Cl-amidine组细胞H3cit蛋白表达降低,细胞增殖水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PAD4 介导的H3cit可促进脓毒症相关AKI的发展,抑制PAD4 活性可以有效减少肾脏细胞损伤.