动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病，相关并发症是目前全球发病和死亡最常见的原因。动脉粥样硬化病灶中的脂质和炎性物质的沉积与流出为动态的过程。淋巴管作为胆固醇逆向转运、炎症因子及坏死物质排出和组织液引流的重要通道，近年来在动脉粥样硬化疾病进程中发挥的作用越来越受到人们的重视。本文主要就淋巴循环、淋巴管在动脉粥样硬化斑块形成、进展及消退中发挥的作用等研究进展进行综述。

目的:探究胆固醇对人半月板纤维软骨细胞基质合成及降解相关基因表达的影响及其机制。方法:获取关节镜手术患者半月板组织并提取纤维软骨细胞，分为对照组（正常细胞不做处理）、阳性对照组（白介素-1 β进行退行性病变造模）和15 μg/mL组（给予15 μg/mL浓度胆固醇处理细胞）、30 μg/mL组（给予30 μg/mL浓度胆固醇处理细胞）。番红O染色、 β-半乳糖苷酶染色和酶法试剂盒分别检测半月板细胞形态及总胆固醇（TCH）含量，免疫荧光和Western blot检测Ⅰ型胶原前体 α1（COL1A1）和Ⅱ型胶原前体 α1(COL2A1)的蛋白表达，RT-qPCR检测COL1A1、COL2A1、基质金属蛋白酶（MMP）3、MMP9、MMP13，以及胆固醇流出通路相关基因的mRNA表达，如肝脏X受体 α (LXR α)、ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和ABCG1。 结果:与对照组比较，阳性对照组的人半月板细胞TCH含量无显著变化，差异无统计学意义( P>0.05)；当给予胆固醇处理后，即15 μg/mL组和30 μg/mL组人半月板细胞TCH含量较对照组显著增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与对照组相比，15 μg/mL组和30 μg/mL组LXR α、ABCA1和ABCG1的mRNA表达降低，差异均有统计学意义（ P< 0.05）。与对照组相比，阳性对照组、15 μg/mL组和30 μg/mL组半月板细胞的密度降低、分布紊乱且细胞特征逐渐减弱，明显老化。与对照组相比，15 μg/mL组和30 μg/mL组可以降低半月板细胞COL1A1和COL2A1的mRNA表达，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与对照组相比，15 μg/mL组和30 μg/mL组半月板细胞的MMP3、MMP9和MMP13的mRNA表达升高，差异均有统计学意义（ P< 0.05）。 结论:胆固醇可能通过抑制半月板细胞胆固醇流出通路，进而导致半月板细胞内胆固醇蓄积，最终引起半月板细胞发生退行性病变。

目的 运用网络药理学结合实验验证探讨雷公藤红素调控肠上皮细胞胆固醇代谢的潜在靶点及作用机制.方法 应用网络药理学筛选雷公藤红素调控肠上皮细胞胆固醇代谢的关键靶点和通路.运用Autodock Vina软件进行分子对接验证.通过构建体外肠上皮细胞高胆固醇模型,考察雷公藤红素对肠上皮细胞胆固醇代谢及其关键通路和靶点表达的影响.结果 共获得94个雷公藤红素靶点、15 415个肠道靶点、14 177个胆固醇代谢靶点.取交集得75个共有靶点.蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络筛选得到1个关键子网络.基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析发现网络中的靶点与多种生物功能相关.基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析发现,雷公藤红素调控肠道胆固醇代谢涉及多条途径,其中肠道脂质代谢的关键通路(fat digestion and absorption)与PPI网络中的关键子网络之一密切相关.分子对接结果表明,雷公藤红素与关键网络中的核心蛋白肝X受体α(liver X receptorα,LXRα)具有良好的结合亲和力.体外实验表明,雷公藤红素显著降低高胆固醇环境下肠上皮细胞脂质堆积(P＜0.05、0.01、0.001),显著上调三磷酸腺苷结合盒转运蛋白 G5 和 G8(adenosine triphosphate-binding cassette transporters G5 and G8,ABCG5/8)蛋白表达(P＜0.05、0.01),并下调 NPC1 样细胞内胆固醇转运蛋白 1(NPC1 like intracellular cholesterol transporter 1,NPC1L1)表达(P＜0.05).结论 雷公藤红素调控肠上皮细胞胆固醇代谢的作用机制可能与调节LXRα促进胆固醇流出、抑制胆固醇摄取密切相关.

目的 从蛋白糖基化修饰角度探讨壳寡糖(COS)减弱动脉粥样硬化(AS)斑块形成的机制.方法 将 40 只ApoE-/-小鼠随机分为对照组和COS组.对照组饲给予高脂饲料 12 周,COS组给予高脂饲料+COS(每天灌胃,500 mg/kg)12 周.全自动生化分析仪检测两组小鼠的血脂水平并对主动脉斑块切片进行HE和油红O染色.凝集素芯片、液相色谱-串联质谱、酶联免疫吸附试验检测血清中糖蛋白变化.胆固醇酯流出实验和游离胆固醇酯测定实验评价清道夫受体B类成员 1(SRBI)糖基化修饰位点改变对巨噬细胞胆固醇流出量的影响.结果 COS显著降低小鼠TC和LDL-C水平(P＜0.05),但对TG、HDL-C、ApoA1 和ApoB100 无影响.与对照组相比,COS组主动脉内膜厚度和斑块大小明显变薄、变小(P＜0.05).两组小鼠血清中变化最明显的小扁豆凝集素(LCA)结合蛋白分子量为 80～90 ku,清道夫受体B类成员 1 为其中之一.COS促进了细胞内胆固醇的流出,抑制了游离胆固醇酯的积累(P＜0.05).SRBI敲低或N108 糖基化位点突变可抑制COS引起的胆固醇流出,增加细胞内游离胆固醇的积累(P＜0.05).结论 COS通过增加SRBI糖基化水平促进脂质外排,从而减少动脉粥样硬化的形成.

目的 应用二维斑点追踪技术(2D-STI)评价代谢综合征(MS)患者右室收缩功能,探讨其与心外膜脂肪厚度(EAT)的关系.方法 选取65例MS患者(MS组)及同期健康体检者35例(对照组),收集各代谢因素包括年龄、性别、体质量指数(BMI)、腰围身高比(WtHR)、收缩压、舒张压、空腹血糖(Glu)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC);应用常规超声心动图获取右室流出道近端内径(RVOT prox)、右室基底部内径(RV-B)、右室中部内径(RV-M)、右室长径(RV-L)、三尖瓣前叶瓣环收缩期位移(TAPSE)、三尖瓣环收缩期运动速度(S')、三尖瓣口舒张早期与晚期峰值流速比值(E/A)、三尖瓣口舒张早期峰值流速与三尖瓣环舒张早期运动峰值速度比值(E/e')、EAT、右室面积变化率(FAC);2D-STI技术获取右室整体纵向应变(RVGLS)、右室游离壁应变(RVFWS),比较两组上述参数的差异;分析RVFWS与各代谢因素之间的相关性.应用多元线性回归分析RVFWS的独立影响因素;采用Bootstrap自助抽样法分析临床指标是否介导EAT与RVFWS之间的关联.结果 两组心率及各代谢因素比较显示,与对照组比较,MS组BMI、收缩压、舒张压、WtHR、Glu、TG、LDL-C、TC均增高,HDL-C减低,差异均有统计学意义(均P<0.05);两组年龄、性别、心率比较差异均无统计学意义.两组超声心动图参数比较显示,与对照组比较,MS组E/e'、EAT均增高,TAPSE、RVGLS、RVFWS均减低,差异均有统计学意义(均P<0.05);其余超声心动图参数比较差异均无统计学意义.MS组RVFWS与EAT、年龄、收缩压、舒张压、BMI、WtHR、Glu、TG、LDL-C、TC均呈负相关,与HDL-C呈正相关(均P<0.05);EAT、收缩压、Glu、TG、HDL-C均为RVFWS的独立影响因素(均P<0.05);EAT对RVFWS有直接影响,且收缩压、Glu、TG、HDL-C部分介导EAT对RVFWS的影响.结论 2D-STI能敏感、准确地评价MS患者早期右室收缩功能.EAT为RVFWS的独立影响因素,可通过循环代谢部分介导其对右室功能产生影响.

运用网络药理学探究海巴戟治疗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的机制及实验验证研究.利用CMAUP、TCMSP、SwissADME数据库检索并筛选海巴戟的活性成分,分别在GeneCards、OMIM、TTD、PharmGKB及Drugbank数据库中设置筛选条件检索去重后得到AS靶点.通过STRING数据库构建蛋白互作网络(PPI),采用R语言对交集靶点进行GO和KEGG富集分析.构建THP-1源性巨噬细胞模型进行体外实验验证,通过CCK-8实验筛选海巴戟给药浓度,采用油红O染色和22-NBD-Cholesterol细胞荧光方法检测海巴戟干预后模型细胞内胆固醇含量的变化,再使用RT-PCR、WB实验检测和验证所预测的信号通路.结果显示从海巴戟中共筛选出活性成分59个,靶点332个,参与治疗AS的交集靶点154个,包括PPARG、MMP9、IL-6、CCL2等;GO富集分析得到2 844个条目,前10个条目主要包括调节细胞膜受体与核受体等生物学功能,KEGG富集分析得到182个条目,前20个条目主要包括脂质代谢与动脉粥样硬化、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路等.在验证实验中,首先利用CCK-8实验筛选出了合适的海巴戟浓度(10、20、40 μg/mL),油红O染色和22-NBD-Cholesterol细胞荧光结果显示海巴戟可促进THP-1源性巨噬细胞内胆固醇流出,且呈剂量依赖性;RT-PCR、WB结果显示海巴戟可激活PPARγ信号通路,增加PPARγ和ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)的表达.GW9662阻断PPARγ信号通路后海巴戟促进THP-1源性巨噬细胞内胆固醇的流出能力下降,且PPARγ和ABCA1表达随之下调.因此,运用网络药理学结合实验验证揭示海巴戟可能通过激活PPARγ信号通路促进THP-1源性巨噬细胞胆固醇的流出而改善AS.

背景:研究表明,阿托伐他汀可以上调血红素氧合酶1表达,增强细胞抗炎症及抗氧化损伤能力.但阿托伐他汀是否可以通过诱导血红素氧合酶1表达调控巨噬细胞极化、抑制炎症、减少胆固醇蓄积尚不明确.目的:探讨阿托伐他汀通过诱导血红素氧合酶1表达对氧化修饰型低密度脂蛋白刺激的RAW264.7巨噬细胞极化、炎症状态及胆固醇水平的影响和相关机制.方法:先将体外培养RAW264.7细胞随机分为6组,分别给予不同浓度的阿托伐他汀孵育24 h,检测血红素氧合酶1蛋白表达量及细胞活性,摸索阿托伐他汀的最适剂量用于后续研究.另将RAW264.7细胞随机分为对照组、阿托伐他汀组、血红素氧合酶1抑制组,分别用纯培养基、阿托伐他汀20 μmol/L及阿托伐他汀20 μmol/L+锌原卟啉Ⅸ 10 μmol/L预先孵育细胞24 h,再加入50 mg/L的氧化修饰型低密度脂蛋白孵育48 h.流式细胞术检测巨噬细胞极化结果;ELISA法检测转化生长因子β、白细胞介素10、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α等炎症因子的分泌水平;Western blot检测血红素氧合酶1、LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、P62、PPARγ、ABCA1的表达量;氧化酶法检测细胞内胆固醇含量并用油红O染色评价胞内脂滴的蓄积程度.结果与结论:①阿托伐他汀可呈剂量依赖性诱导巨噬细胞血红素氧合酶1蛋白表达;②氧化修饰型低密度脂蛋白可诱导巨噬细胞主要向M1极化并分泌促炎因子,增加胞内胆固醇蓄积;③与对照组相比,阿托伐他汀干预后巨噬细胞血红素氧合酶1蛋白表达增加,细胞转向M2型极化且主要分泌转化生长因子β、白细胞介素10等抗炎因子,同时,PPARγ、ABCA1、LC3Ⅱ/Ⅰ等反映胆固醇外排及自噬的信号分子表达增加,胞内胆固醇及脂滴含量均显著减少(P﹤0.05);④同步加入锌原卟啉Ⅸ预处理的血红素氧合酶1抑制组则显著逆转了阿托伐他汀组的上述改变;⑤结果表明,阿托伐他汀可能通过上调血红素氧合酶1的表达促进氧化修饰型低密度脂蛋白刺激的巨噬细胞向M2型极化、抑制炎症,并通过上调PPARγ/ABCA1信号通路和增强自噬等增加胞内胆固醇流出,降低细胞内脂质蓄积.

目的 探讨PCSK9对小鼠肝脏脂肪变性的机制.方法 以腺相关病毒8.2(adeno-associated virus 8.2,AAV8.2)为载体构建绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和人源PCSK9经尾静脉转染至小鼠肝脏表达.将36只C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为空白组、GFP组和PCSK9组,每组各12只,共饲养24周.通过苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色观察肝脏组织形态,天狼星红染色(sirius red staining,SRS)观察肝脏纤维化程度,油红0(oil red O,ORO)染色观察肝脏脂质浸润程度.通过酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清PCSK9、白细胞介素(interleukin,IL)-1β,流式细胞术检测肝脏单核细胞胞内炎性细胞因子,包括IL-2、IL-4、γ-干扰素(interferon-γ,INF-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、颗粒酶B(granulase B,GrB).免疫组化检测肝组织巨噬细胞标志物CD68阳性细胞百分比.Western blot法检测PCSK9干预小鼠单核-吞噬细胞白血病细胞(RAW264.7)细胞胆固醇流出蛋白、清道夫受体相关蛋白、NF-κB信号通路相关蛋白表达.结果 PCSK9组小鼠肝脏组织脂滴总量、脂肪变性、空泡化、纤维化程度明显增加或增强(P＜0.001).免疫组化检测结果显示,PCSK9组巨噬细胞标志物CD68阳性细胞百分比显著高于GFP组及空白组(P＜0.05).流式细胞术检测结果显示,PCSK9组IL-2、TNF-α在CD4+、CD8+细胞亚群百分比明显高于高脂GFP组(P＜0.05),而IL-4、INF-γ,GrB在组间各细胞群中比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Western blot法检测结果显示,与空白组比较,PCSK9显著降低LDLR水平,升高 ATP 结合盒转运体 A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、清道夫受体 B(scavenger receptor B,SRB 或 CD36)、Toll样受体 4(Toll-like receptor 4,TLR4)、磷酸化 IκBα 激酶(phosphorylated inhibit kappa B α kinase,p-IκBα)、磷酸化 p65 蛋白(phosphorylated p65,p-p65)蛋白水平(P＜0.05).结论 PCSK9介导NF-κB信号通路致小鼠肝脏脂肪代谢失衡及炎性细胞因子浸润加速了肝脏脂肪变性.

目的 观察血管生成素1(Ang-1)通过LXRα调节THP-1源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、ABCG1表达和胆固醇流出.方法 160 nmol/L佛波酯诱导人THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育,使其荷脂形成泡沫细胞,常规体外培养细胞;实验分为对照组和Ang-1处理组;液体闪烁计数仪检测细胞胆固醇流出水平,高效液相色谱检测细胞内脂质成分,实时荧光定量PCR和Western blot检测ABCA1、ABCG1表达;LXRα激动剂T0901317或抑制剂GGPP分别处理THP-1源性泡沫细胞.结果 Ang-1显著抑制THP-1源性泡沫细胞胆固醇流出,下调ABCA1、ABCG1表达;LXRα激活剂拮抗Ang-1对AB-CA1、ABCG1表达及胆固醇流出的抑制作用.结论 Ang-1可能通过抑制LXRα表达,降低ABCA1和ABCG1表达水平,减少THP-1源性泡沫细胞内胆固醇流出.

目的 探讨分拣受体Sortilin对THP-1巨噬细胞内脂质代谢的影响.方法 用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育THP-1巨噬细胞.Western blot检测荷脂后THP-1巨噬细胞中Sortilin表达变化;THP-1巨噬细胞Sortilin高表达和沉默后,液体闪烁计数仪检测胞内胆固醇流出,高效液相色谱法检测细胞内脂质含量,油红O染色观察胞内脂滴情况.结果 THP-1巨噬细胞Sortilin表达呈ox-LDL剂量和时间依赖性增加;以50 mg/L ox-LDL处理24 h后THP-1巨噬细胞Sortilin表达水平达到高峰.与对照组相比,Sortilin过表达后巨噬细胞胆固醇流出减少,胞内脂质含量增加且脂滴明显增多,而Sortilin沉默后则刚好出现相反的结果.结论 Sortilin抑制巨噬细胞内胆固醇流出,促进胞内脂质蓄积.