目的:探讨血必净(XBJ)注射液对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺损伤模型的治疗机制.方法:将80只雄性Sprauge-Dawley(SD)大鼠随机分为4组:对照组、SAP模型组、XBJ低剂量治疗组、XBJ高剂量治疗组,每组20只.除对照组,各组大鼠均经胰胆管匀速逆行注射4.5％牛磺胆酸钠溶液(0.1 mL/100 g,0.05 mL/min)以诱发SAP,造模成功30 min后,将XBJ低、高剂量治疗组大鼠经尾静脉注射XBJ(剂量分别为5、20 mL/kg),对照组及模型组给予等体积生理盐水.24 h后,从每组中随机抽取10只大鼠,经尾静脉注射Evans blue检测肺组织毛细血管通透性.处死余下的各组大鼠,取腹水测量其体积;取部分胰腺及肺组织计算组织干湿重比值;苏木精-伊红(HE)染色观察胰腺、肺脏的病理改变,并进行病理评分;酶联免疫吸附法(ELISA)检测腹水淀粉酶含量;Western印迹法检测肺组织中ROCK1、MYPT1、pMLC的相对表达量.结果:SAP模型组较对照组腹水量及腹水淀粉酶含量明显升高(t=-21.73、-40.72,均P＜0.01);SAP模型组、XBJ低剂量组、XBJ高剂量组腹水量及腹水淀粉酶含量逐渐降低(F=39.66、141.78,均P＜0.01).SAP模型组较对照组,胰腺干湿重比值、肺脏干湿重比值明显降低(t=19.83、15.47,均P＜0.01),肺组织中Evans blue渗出量明显增高(t=-27.9,P＜0.01);SAP模型组、XBJ低剂量组、XBJ高剂量组胰腺干湿重比值、肺脏干湿重比值逐渐升高(F=75.19、15.47,均P＜0.01),肺组织中Evans blue渗出量逐渐降低(F=99.52,P＜0.01).对照组大鼠胰腺组织结构完整,SAP模型组大鼠胰腺病理得分明显升高(t=-42.79,P＜0.01);XBJ低剂量组、XBJ高剂量组大鼠胰腺病理得分逐渐降低(F=175.43,P＜0.01).对照组大鼠肺组织结构完整,SAP模型组大鼠病理得分明显升高(t=-37.57,P＜0.01);XBJ低剂量组、XBJ高剂量组大鼠肺组织病变减轻,病理得分逐渐降低(F=126.00,P＜0.01).SAP模型组较对照组肺组织中ROCK1、pMLC蛋白表达量明显升高(t=-16.97、-13.53,均P＜0.01),MYPT1表达量显著降低(t=23.30,P＜0.01);SAP模型组、XBJ低剂量组、XBJ高剂量组肺组织中ROCK1、pMLC蛋白表达量逐渐降低(F=84.89、50.84,均P＜0.01),MYPT1表达量显著升高(F=48.68,P＜0.01).结论:XBJ通过降低多种细胞因子及DAMPs形成,抑制ROCK1-MYPT1-pMLC信号通路活化,对SAP肺损伤起到治疗的作用.

目的 研究帕纳替尼对胆管癌(CCA)的影响及分子作用机制.方法 将QBC939细胞分为对照组(不做任何处理)、低剂量组(0.1 μmol·L-1帕纳替尼处理)、中剂量组(0.5 μmol·L-1帕纳替尼处理)、高剂量组(1.0 μmol·L-1帕纳替尼处理)、高剂量+microRNA-92b-3组(1.0 μmol·L-1帕纳替尼处理后转染miR-92b-3p mimic)、高剂量+miR-92b-3p mimic+过表达同源结构域相互作用蛋白激酶3质粒(oe-HIPK3)组(1.0 μmol·L-1帕纳替尼处理后转染miR-92b-3p mimic 和 oe-HIPK3)、mimic-NC 组(转染 miR-92b-3p NC)、miR-92b-3p mimic组(转染miR-92b-3p mimic).用细胞计数试剂盒8检测细胞的增殖情况,用Transwell实验法检测细胞迁移,用蛋白质印迹法检测蛋白相对表达水平.结果 对照组、高剂量组、高剂量+miR-92b-3p mimic组、高剂量+miR-92b-3p mimic+oe-HIPK3组的细胞增殖率分别为(76.58±8.56)％、(61.85±7.77)％、(74.54±7.68)％和(58.63±6.87)％,细胞迁移数量分别为(185.32±20.14)、(132.33±18.99)、(168.23±19.85)和(138.66±15.95)个,磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)/PI3K比值分别为1.00±0.23、0.68±0.09、0.91±0.18 和 0.60±0.08,磷酸化蛋白激酶 B(p-AKT)/AKT 比值分别为 1.00±0.25、0.61±0.08、1.12±0.28 和0.72±0.14;高剂量组的上述指标与对照组比较,高剂量+miR-92b-3p mimic组的上述指标与高剂量组比较,高剂量+miR-92b-3p mimic+oe-HIPK3组的上述指标与高剂量+miR-92b-3p mimic组比较,在统计学上差异均有统计学差异(均P＜0.05).结论 帕纳替尼能有效抑制胆管癌的恶性生物学行为,可能与抑制miR-92b-3p水平,促进HIPK3介导的PI3K/AKT信号通路有关.

目的:探讨热疗调控TPX2表达诱导胆管癌细胞的凋亡机制。方法:在不同温度（37 ℃、40 ℃、43 ℃和46 ℃）下处理后，检测胆管癌细胞RBE的凋亡水平和细胞活力。热疗处理后，转录组高通量测序和siRNA筛选鉴定热疗调控胆管癌细胞RBE凋亡的关键分子。结果:随着温度升高（37 ℃、40 ℃、43 ℃和46 ℃），胆管癌细胞的活力降低（ P<0.05），坏死的胆管癌细胞随着温度的升高而增加（ P<0.05），细胞凋亡水平在43 ℃时达到峰值（6%±1%， P<0.05）。当敲低TPX2时，胆管癌细胞的凋亡水平上升（47%±3%比74%±3%， P<0.05）。过表达TPX2时，胆管癌细胞的凋亡水平下降（45%±3%比21%±4%， P<0.05）。热疗显著降低了TPX2、PI3K、p-PI3K和P-AKT的表达水平（ P<0.05），并增加了p21的表达和caspase3的切割（ P<0.05）；敲低TPX2后，PI3K、p-PI3K和p-AKT的表达水平显著下降（ P<0.05），p21的表达水平显著上升（ P<0.05）；过表达TPX2后，PI3K和p-AKT的表达水平显著上升（ P<0.05），p21的表达水平显著下降（ P<0.05）。 结论:热疗通过影响TPX2的表达，抑制了PI3K/AKT通路活性，减少了胆管癌细胞的细胞活力，促进了胆管癌细胞的凋亡。

目的:探讨西维来司钠是否能够通过抑制中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）进而减少黏蛋白5AC（MUC5AC）在肝内胆管上皮细胞中的表达，为治疗肝内胆管结石（IBDS）提供新的潜在治疗思路。方法:①生信分析：基于基因表达数据库（GEO）对胆结石及胆囊炎的测序数据进行差异基因分析，筛选中性粒细胞及黏蛋白相关的显著差异基因，使用基因与蛋白质相互作用检索数据库（STRING）进行蛋白互作分析，以预测NE基因与MUC5AC是否存在互作关系。②动物实验：将18只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、胆管炎模型组和西维来司钠治疗组，每组6只。结合预实验于大鼠右前叶肝脏一次性注射1.25 mg/kg脂多糖（LPS）建立胆管炎大鼠模型；假手术组肝脏注射等体积生理盐水。建模后，西维来司钠治疗组尾静脉注射西维来司钠100 mg/kg；假手术组和胆管炎模型组尾静脉注射等体积生理盐水；每日1次，连续给药5 d。2周后处死大鼠取肝胆管组织，光镜下观察肝胆管组织病理学改变；免疫组织化学染色检测肝胆管组织NE和MUC5AC表达；蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肝胆管组织NE、MUC5AC、Toll样受体4（TLR4）的蛋白表达。③细胞实验：将原代人肝内胆管上皮细胞株（HiBEpiC）传代后分为空白对照组、NE组（10 nmol/L NE）、NE+西维来司钠低剂量组（10 nmol/L NE+1×10 -8 g/L西维来司钠1 mL）、NE+西维来司钠中剂量组（10 nmol/L NE+1×10 -7 g/L西维来司钠1 mL）、NE+西维来司钠高剂量组（10 nmol/L NE+1×10 -6 g/L西维来司钠1 mL）。培养48 h后收集细胞，行5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷（EdU）检测细胞增殖活性；酶联免疫吸附试验（ELISA）和Western blotting检测细胞MUC5AC的表达。 结果:①生信分析：NE基因（ELANE）与MUC5AC存在互作关系。②动物实验：光镜下显示，胆管炎模型组肝细胞水肿，肝细胞呈弥漫性点、灶状坏死，汇管区纤维组织及肝内胆管增生与炎症细胞浸润；西维来司钠治疗组肝小叶结构清晰，周围炎症细胞浸润程度较胆管炎模型组减轻。免疫组织化学染色显示，胆管炎模型组NE和MUC5AC较假手术组明显高表达，西维来司钠治疗组NE和MUC5AC表达较胆管炎模型组有所下降〔NE（ A值）：5.23±2.02比116.67±23.06，MUC5AC（ A值）：5.40±3.09比23.81±7.09，均 P<0.05〕。Western blotting检测结果显示，胆管炎模型组肝胆管组织NE、MUC5AC和TLR4的蛋白表达均较假手术组显著升高；西维来司钠治疗组肝胆管组织NE、MUC5AC和TLR4的蛋白表达较胆管炎模型组显著下降（NE/β-actin：0.38±0.04比0.70±0.10，MUC5AC/β-actin：0.37±0.03比0.61±0.05，TLR4/β-actin：0.39±0.10比0.93±0.15，均 P<0.05）。③细胞实验：荧光显微镜下显示，各组HiBEpiC细胞的增殖状态良好，阳性细胞比例无明显差异。ELISA法和Western blotting检测结果显示，NE组细胞MUC5AC表达较空白对照组显著升高；NE+西维来司钠各剂量组细胞MUC5AC表达较NE组显著下降，且随西维来司钠浓度升高呈下降趋势，以高剂量组变化最明显〔MUC5AC（μg/L）：3.46±0.20比6.33±0.52，MUC5AC/β-actin：0.45±0.07比1.75±0.10，均 P<0.05〕。 结论:LPS作用后可致胆管炎大鼠NE、MUC5AC表达上调，西维来司钠可通过抑制NE减少肝内胆管上皮细胞MUC5AC的表达，为IBDS的治疗提供新的方向。

成纤维细胞生长因子受体（FGFR）2基因融合是胆管癌发生的重要机制。靶向FGFR2的药物成为晚期胆管癌的主要治疗方法。以英菲替尼和培米替尼为代表的三磷酸腺苷竞争性FGFR抑制剂可有效延缓肿瘤进展，延长患者生存期，是FGFR2融合型晚期胆管癌患者的首选药物。然而，几乎所有经英菲替尼治疗的晚期胆管癌患者最终都产生耐药，需要联用其他药物治疗。福巴替尼可作为发生V564F突变的英菲替尼耐药性胆管癌患者的后线药物；对于丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路异常激活所致英菲替尼耐药胆管癌患者，MAPK抑制剂与热休克蛋白90抑制剂可作为新的治疗选择。

肝内胆管癌（ICC）是发病率居第2位的原发性肝癌，近年来该病的发病率上升。ICC通常起病隐匿，导致确诊较晚。目前肝切除是ICC唯一被证实有效的根治性治疗措施，但切除率低，远期疗效不理想。局部治疗联合系统性化疗是目前晚期或不可切除ICC的主要治疗方法，但效果较差。随着对ICC基因表达谱研究的深入及二代测序技术的进展，多个异常信号转导通路（RAS/MAPK、MET、EGFR）及基因突变（FGFR2、IDH1/2）等潜在治疗靶点相继被发现。虽然目前尚无针对ICC的靶向药物获得批准使用，但已有百余项应用范围包括ICC的靶向药物单用或联合化疗的临床试验，部分显示良好的应用前景。随着ICC分子分型研究的进展，个体化的靶向治疗可能是ICC新的治疗突破点。

目的:鉴定并筛选胆管癌差异性甲基化基因以预测胆管癌患者的预后。方法:选择2019年10月至2020年5月福建省立医院8例胆管癌患者胆管癌组织及癌旁组织进行850K甲基化测序分析，获取差异性甲基化基因。从癌症基因组图谱（TCGA）数据库中下载2018年36例患者胆管癌全基因组甲基化数据及临床信息，从基因表达综合（GEO）数据库下载2012年胆管癌甲基化数据（GSE32879），从GEPIA2数据库下载2018年TCGA数据库胆管癌总生存（OS）及无病生存（DFS）差异生存基因组数据。联合送检样本850K甲基化测序分析的差异甲基化位点（DMP）和差异甲基化区域（DMR）结果、TCGA和GEO数据库中甲基化基因以及胆管癌生存基因，在Sangerbox VENN工具中进行多数据集合分析，交集筛选得出共同差异性甲基化基因。在Sangerbox中运用最小 P值法确定基因表达的临界值，分为差异性甲基化基因高、低表达组，比较两组胆管癌患者OS、DFS、疾病特异性生存（DSS）、无病间隔（DFI）、无进展间隔（PFI）。进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。 结果:8例患者的胆管癌组织与癌旁组织850K甲基化测序共鉴定出121 954个DMP，DMR中共鉴定出差异性甲基化基因1 399个；交集鉴定得出共同预后相关基因氨基葡萄糖（N-乙酰）转移酶1（GCNT1）和神经营养受体酪氨酸激酶3（NTRK3）。GCNT1在胆管癌组织中表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（ P=0.040）；NTRK3在胆管癌组织中表达高于癌旁组织，差异无统计学意义（ P=0.790）。采用最小 P值法，以GCNT1及NTRK3联合表达情况预测胆管癌患者预后，按两基因表达量总和排序，以排序的30%为临界值时，胆管癌高表达组及低表达组间DFS差异最为显著（ P<0.001）；两组间OS差异无统计学意义（ P=0.065）。GO功能分析结果显示，GCNT1与蛋白质糖基化、大分子糖基化、糖化、糖蛋白生物合成过程、糖蛋白代谢过程、转移酶活性和转移糖基、蛋白质O-聚糖基化、O-聚糖加工等有关；NTRK3与神经营养素信号通路、Ras信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制、ErbB信号通路、磷脂酶D信号通路、癌症中枢碳代谢、自然杀伤细胞介导的细胞毒性等有关。KEGG分析结果显示，GCNT1主要与黏蛋白型O-聚糖生物合成、代谢途径等系统功能相关联，NTRK3主要与细胞表面受体通路、细胞内信号转导、刺激反应的正向调节、跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号通路、酶联受体蛋白信号通路、MAPK信号通路级联及调节、蛋白质磷酸化信号转导等系统功能相关联。 结论:胆管癌差异性甲基化基因GCTNT1、NTRK3表达对胆管癌患者预后有一定预测作用。

目的:研究胆道闭锁肝纤维化过程中Shh信号通路核转录因子Gli1/Gli2在肝上皮-间充质转化(epithelial mesenchymal transition，EMT)中的调控作用，为阐明胆道闭锁肝纤维化的机制提供依据。方法:选择2018年1月至2018年12月经手术证实为胆道闭锁Ⅲ型患儿的肝活检组织标本10例作为胆道闭锁组，年龄在1~3月龄。以相同年龄段无肝胆系统畸形死亡新生儿尸检肝组织5例作为正常对照组。应用实时荧光定量聚合酶链(RT-qPCR)反应及蛋白质印迹法检测肝组织中Gli1/Gli2、EMT关键调控因子Snail/Slug及EMT特征性细胞因子的表达。另将2周龄BALB/c小鼠处死后分离肝内胆管上皮细胞mIBEC，按处理方式不同分为正常对照组、干扰对照组、过表达对照组、Gli1-shRNA组、Gli1过表达组、Gli2-shRNA组、Gli2过表达组。其中，正常对照组加入等体积培养基，干扰对照组加入空白慢病毒，过表达对照组加入空白腺病毒，Gli1-shRNA组应用Gli1-shRNA沉默Gli1，Gli2-shRNA组应用Gli2-shRNA沉默Gli2，Gli1过表达组应用Gli1腺病毒过表达Gli1，Gli2过表达组应用Gli2腺病毒过表达Gli2。应用RNA干扰技术研究Shh信号通路关键转录因子Gli1/Gli2表达对EMT过程的调控作用。采用单因素方差分析和LSD- t检验对数据进行统计学分析。 结果:RT-qPCR检测结果显示，胆道闭锁组患儿肝组织Gli2、Snail、Vimentin、α-SMA mRNA相对表达量分别为10.96±6.21、7.37±4.09、8.85±2.37和7.35±4.09，较对照组肝组织4.46±1.24、3.34±0.95、4.49±2.07和3.38±0.93均明显升高，组间比较，差异有统计学意义( P<0.05)。胆道闭锁组患儿肝组织E-cadherin相对表达量为3.00±1.29，较对照组4.96±1.91明显降低，组间差异亦有统计学意义( P<0.05)。应用RNA干扰技术沉默Gli2基因后，Gli2-shRNA组小鼠肝内胆管上皮细胞mIBEC中Snail、Vimentin、α-SMA mRNA相对表达量分别为2.23±0.67、3.11±1.07和2.74±0.61，较干扰对照组5.21±0.88、3.67±1.04和3.46±1.24明显降低，组间比较，差异有统计学意义( P<0.05)。Gli2-shRNA组小鼠肝内胆管上皮细胞mIBEC中E-cadherin mRNA相对表达量为9.09±1.29，较干扰对照组4.36±0.85表达明显升高，组间比较，差异有统计学意义( P<0.05)。过表达Gli2基因后，Gli2过表达组小鼠肝内胆管上皮细胞mIBEC中Snail、Vimentin、α-SMA mRNA相对表达量分别为9.89±2.06、14.51±3.63、12.41±3.00，较过表达对照组4.32±0.78、4.58±0.95、4.09±1.03明显升高，组间比较，差异有统计学意义( P<0.05)。Gli2过表达组小鼠肝内胆管上皮细胞mIBEC中E-cadherin mRNA相对表达量为2.30±0.39，较过表达对照组6.09±1.40表达降低，组间比较，差异有统计学意义( P<0.05)。沉默及过表达Gli1基因未见明确EMT特征细胞因子表达变化趋势。免疫荧光检测显示沉默Gli2基因表达后mIBEC中绿色荧光(胆管上皮细胞标记物CK19)增强，过表达Gli2基因后橙色荧光(间质细胞标记物α-SMA)增强。 结论:Shh信号通路在胆道闭锁肝纤维化中具有的重要作用，信号通路关键转录因子Gli2可显著调控肝内胆管上皮细胞EMT过程。

目的:探讨胆囊板入路（CPA）右肝蒂鞘外解剖法在微创解剖性肝切除术（MIALR）中的应用价值。方法:采用回顾性队列研究方法。收集2020年8月至2022年8月南方医科大学南方医院收治的42例原发性肝癌行腹腔镜右半肝切除术患者的临床病理资料；男36例，女6例；年龄为（55±13）岁。42例患者中，25例术中采用CPA右肝蒂鞘外解剖法，设为CPA组；17例术中采用传统入路右肝蒂鞘外解剖法，设为传统入路组。观察指标：（1）手术情况。（2）术后情况。正态分布的计量资料以 x±s表示，组间比较采用 t检验。偏态分布的计量资料以 M（ IQR）表示，组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料以绝对数表示，组间比较采用 χ2检验或Fisher确切概率法。等级资料比较采用非参数秩和检验。 结果:（1）手术情况。两组患者均顺利完成腹腔镜右半肝切除术，切缘均为阴性。CPA组患者手术时间，术中出血量，解剖目标肝蒂时间，解剖右前肝蒂主干例数及时间，解剖右后肝蒂主干例数及时间，肝蒂损伤，肝组织损伤，解剖操作空间（大、小）分别为150.00（130.00）min，100.00（100.00）mL，472.00（201.00）s，10例，366.00（94.75）s，9例，564.00（138.50）s，2例，2例，25、0例；传统入路组患者上述指标分别为140.00（113.00）min，100.00（125.00）mL，670.00（107.00）s，8例，663.00（136.00）s，7例，783.00（189.00）s，8例，5例，2、19例；两组患者解剖目标肝蒂时间、解剖右前肝蒂主干时间、解剖右后肝蒂主干时间、肝蒂损伤、解剖操作空间比较，差异均有统计学意义（ Z=-4.809、-3.254、-3.188， χ2 =6.493、34.314， P<0.05），手术时间、术中出血量、解剖右前肝蒂例数、解剖右后肝蒂例数、肝组织损伤比较，差异均无统计学意义（ Z=-0.282、-0.412， χ2=0.095、0.002、1.976， P>0.05）。（2）术后情况。两组患者均无术后出血；CPA组患者术后第3天丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、总胆红素、凝血酶原时间，术后胆漏，肿瘤病理学类型（肝细胞癌、肝内胆管癌）分别为68.00（48.50）U/L，52.00（35.50）U/L，28.30（12.35）mmol/L，12.40（2.40）s，2例，21、4例；传统入路组患者上述指标分别为58.00（25.00）U/L，41.00（19.50）U/L，26.80（14.25）mmol/L，12.50（2.95）s，5例，15、2例；两组患者术后第3天丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、总胆红素、凝血酶原时间，术后胆漏比较，差异均无统计学意义（ Z=-1.218、-1.488、-0.205、-0.320， χ2 =1.976， P>0.05），肿瘤病理学类型比较，差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:CPA右肝蒂鞘外解剖法用于MIALR安全、可行。

目的:通过动物实验对比肠内延伸型胆管支架（enteral extended biliary stent，EEBS）和传统塑料支架置入前后的胆道菌群变化，初步探索EEBS在预防支架堵塞中的可能机制。方法:12只健康巴马小型猪采用简单随机方法分为传统塑料支架组（ n=6）和EEBS组（ n=6），在支架置入前及置入后4周拔除支架时采集胆汁标本进行16S rRNA基因测序，分析比较不同支架置入前后胆汁菌群结构及多样性。 结果:12只实验猪均未发生急性胆管炎、穿孔、出血、死亡等并发症，支架置入8 d后内镜复查两组支架均已脱落，于此时采集胆汁标本进行菌群分析。两组实验猪的胆道菌群在门水平主要是变形菌门、厚壁菌门和拟杆菌门。Alpha多样性分析显示传统塑料支架组支架置入后Shannon指数（ P=0.004）和Simpson指数（ P=0.008）较前显著减小；Beta多样性分析也提示传统塑料支架置入前后菌群结构发生显著变化（Anosim： R=0.514 8， P=0.011）。EEBS组支架置入前后Observed species指数（ P=0.095）、Chao1指数（ P=0.136）、Shannon指数（ P=0.353）和Simpson指数（ P=0.227）及Beta多样性（Anosim： R=0.059 3， P=0.187）差异均无统计学意义。差异菌LEfSe分析显示，传统塑料支架组支架置入后脆弱拟杆菌、变形菌门-γ变形菌纲-肠杆菌目-肠杆菌科-埃希_志贺菌属-大肠埃希菌丰度显著升高，EEBS组支架置入后脱硫菌门-脱硫菌纲-脱硫菌目-脱硫菌科-嗜胆菌属丰度显著升高。 结论:EEBS短期置入后胆道菌群变化较小，可能通过延长反流路径达到了预防肠胆反流的效果。