目的 研究Ⅶ型胶原蛋白α1(COL7A1)在肺腺癌中的表达、预后价值以及和肿瘤微环境中免疫细胞浸润的关系.方法 使用TCGA和GEO数据库的RNA-Seq数据和临床信息,分析COL7A1 mRNA表达.蛋白质组分析评估COL7A1蛋白表达.受试者工作特征(ROC)曲线用于评估COL7A1在肺腺癌的诊断价值.通过Cox回归和Kaplan-Meier生存分析评估COL7A1的预后价值,并建立了临床预测模型.TIME2.0数据库用于评估COL7A1与免疫细胞浸润的相关性.RT-qPCR验证了 COL7A1的表达情况.结果 COL7A1在肺腺癌组织中明显上调,特别是在远处转移和晚期的组织中更为明显.COL7A1具有肺腺癌诊断和预后价值,COL7A1高表达是肺腺癌的独立危险因素.构建的预测模型较TNM分期更准确.此外,COL7A1与肿瘤成纤维细胞浸润正相关,与中性粒细胞浸润负相关.结论 COL7A1在肺腺癌中高表达提示预后不良,可能成为免疫治疗的潜在靶点.

隐性遗传性营养不良型大疱性表皮松解症（RDEB）是由编码Ⅶ型胶原α-1链的COL7A1基因发生突变导致缺少有功能的Ⅶ型胶原蛋白（C7）所致，尚无有效治疗方法，支持性缓和治疗是目前唯一的治疗手段。基因治疗有望成为RDEB的有效治疗措施。本文综述了目前国际上各RDEB基因治疗临床试验的策略、进展及优缺点，展望今后的发展方向。

目的:探讨ⅩⅦ型胶原蛋白α1（COL17α1）在小鼠衰老皮肤中的表达与作用及其对人表皮干细胞（ESC）干性和增殖能力的影响，并且探讨相关微小RNA（miR）干预人ESC中COL17α1表达的机制。方法:采用实验研究方法。取2个月龄（青年）和24个月龄（老年）雄性C57BL/6J小鼠各12只，取其胸背部全层皮肤标本进行后续检测。对青年小鼠和老年小鼠全层皮肤标本，行苏木精-伊红染色后观察表皮层结构并测量表皮厚度，用透射电子显微镜观察表皮基底膜形态和半桥粒并行半桥粒计数，分别采用实时荧光定量反转录PCR（RT-PCR）法与蛋白质印迹法检测COL17α1的mRNA与蛋白表达，采用免疫荧光法观测COL17α1的蛋白表达与分布。取于解放军总医院第四医学中心行包皮切除手术的3名20~30岁健康男性术后弃用的新鲜包皮组织，提取ESC，取生长良好的细胞进行后续实验。按随机数字表法（分组方法下同）将ESC分为进行相应处理的空白对照组、转染试剂对照组、空载体质粒组、敲低COL17α1质粒组，培养48 h后，采用实时荧光定量RT-PCR法检测COL17α1的mRNA表达，采用蛋白质印迹法检测COL17α1和细胞角蛋白14（CK14）的蛋白表达，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖水平。通过DIANA、miRTarBase、miRNAMap、TargetScan、microRNA数据库筛选可能作用于 COL17α1 mRNA 3'非编码区的miR。将ESC分为转染miR模拟物阴性对照物的阴性对照组和转染前述筛选出的各miR的模拟物的各miR模拟物组，转染后48 h，通过蛋白质印迹法检测COL17α1的蛋白表达。基于基因表达综合数据库（GEO）的miR测序数据集GSE114006，使用GEO2R工具统计分析前述筛选出的可造成COL17α1蛋白表达下降的miR在30名青年（18~25岁）人和30名老年（>70岁）人皮肤中的表达。取青年小鼠和老年小鼠全层皮肤标本，采用实时荧光定量RT-PCR法检测前述老年人皮肤中表达增多的miR的表达。取2批ESC，第1批分为COL17α1野生型+miR-203b-3p阴性对照组与COL17α1野生型+miR-203b-3p模拟物组，第2批分为COL17α1突变型+miR-203b-3p阴性对照组与COL17α1突变型+miR-203b-3p模拟物组，分别转染对应序列，48 h后，采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测COL17α1的基因表达水平。组织实验中样本数均为6，细胞实验中样本数均为3。对数据行独立样本 t检验、单因素方差分析、LSD检验或Dunnett检验、Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis H检验。 结果:与青年小鼠比较，老年小鼠皮肤表皮层与真皮层分界模糊且细胞层次较少，表皮层厚度明显变薄（ Z=-2.88， P<0.01），基底膜形态不连续，表皮-真皮连接处半桥粒较少且分布不均，半桥粒数量明显减少（ Z=-2.91， P<0.01），COL17α1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低（ t值分别为10.61、6.85， P<0.01）。与青年小鼠比较，老年小鼠皮肤表皮基底层和毛囊球部的COL17α1蛋白表达均明显减少（ Z=-2.24， P<0.05）。培养48 h后，空白对照组、转染试剂对照组、空载体质粒组、敲低COL17α1质粒组ESC中COL17α1的蛋白表达水平分别为1.00±0.27、1.12±0.21、1.13±0.23、0.42±0.18。相较于空白对照组，转染试剂对照组和空载体质粒组ESC中COL17α1的mRNA和蛋白表达水平、CK14的蛋白表达水平及ESC增殖水平均未发生明显变化（ P>0.05），敲低COL17α1质粒组ESC中这些指标均明显降低（ P<0.05或 P<0.01）。miR-203a-3p、miR-203b-3p、miR-512-5p、miR-124-3p、miR-28-5p、miR-590-3p、miR-329-5p可能结合 COL17α1 mRNA的3'非编码区。转染48 h后，与阴性对照组的1.000±0.224比较，miR-329-5p模拟物组、miR-203b-3p模拟物组和miR-203a-3p模拟物组ESC中COL17α1的蛋白表达水平明显降低（0.516±0.188、0.170±0.025、0.235±0.025， t值分别为3.17、5.43、5.07， P<0.05或 P<0.01）。老年人皮肤中仅miR-203b-3p表达水平明显高于青年人（ t=3.27， P<0.01）。老年小鼠皮肤中miR-203b-3p表达水平明显高于青年小鼠（ Z=-2.88， P<0.01）。转染后48 h，COL17α1野生型+miR-203b-3p模拟物组ESC中COL17α1的基因表达水平明显低于COL17α1野生型+miR-203b-3p阴性对照组（ t=7.66， P<0.01），COL17α1突变型+miR-203b-3p模拟物组ESC中COL17α1的基因表达水平与COL17α1突变型+miR-203b-3p阴性对照组相近（ P>0.05）。 结论:COL17α1的mRNA和蛋白表达水平随小鼠年龄增长而减少，可能导致小鼠ESC脱离表皮基底膜。COL17α1的表达减少可抑制CK14的表达与ESC增殖，这可能是老年人皮肤中表皮层变薄和创面愈合减慢的原因。小鼠衰老皮肤中表达增多的miR-203b-3p可以靶向结合 COL17α1 mRNA的3'非编码区，阻碍转录后翻译过程，造成COL17α1蛋白表达减少。

目的:探讨聚醚醚酮、氧化锆、纯钛基台材料对人牙龈上皮细胞半桥粒黏附相关基因及蛋白表达的影响，以期筛选出更适合上皮附着的基台材料。方法:制备聚醚醚酮、氧化锆、纯钛试件各48枚，用扫描电镜观察各组表面形貌，用白光干涉仪测量表面粗糙度，光学接触角测量仪测量接触角。采用扫描电镜观察人牙龈上皮细胞在各组试件表面的早期黏附状态，并使用细胞计数试剂盒评估各组人牙龈上皮细胞的增殖能力，实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测各组人牙龈上皮细胞半桥粒黏附相关基因及蛋白的表达水平。结果:3组试件均呈平坦、光滑的表面形貌；聚醚醚酮组、氧化锆组和纯钛组平均粗糙度（Ra值）分别为（95.63±2.06）、（37.93±3.56）、（134.2±4.62）nm（ F=368.16， P<0.001），平均最大高度（Rz值）分别为（2.42±0.22）、（0.87±0.10）、（3.77±0.28）nm（ F=91.95， P<0.001），组间差异均有统计学意义（ P<0.05）；接触角总体差异无统计学意义（ F=0.45， P=0.658）。人牙龈上皮细胞在3组试件表面均呈扁平伸展的多边形、多角形等不规则形状，表现出典型的铺路石样。培养1和3 d时3组细胞增殖能力（ A值）差异均无统计学意义（ P>0.05）；培养5和7 d时聚醚醚酮组细胞增殖能力（ A值）均显著大于氧化锆组和纯钛组（ P<0.05）。培养3和7 d时聚醚醚酮组层粘连蛋白α3、整合素β4和胶原蛋白17的mRNA和蛋白表达水平均显著大于同时间点氧化锆组和纯钛组（ P<0.05）。 结论:聚醚醚酮相较氧化锆、纯钛基台材料更有利于人牙龈上皮细胞半桥粒的黏附。

目的:探讨ⅩⅦ型胶原蛋白(COL17)对雄激素性脱发(AGA)模型小鼠毛发生长的作用及机制。方法:将48只C57BL/6J小鼠建立AGA模型(脱去小鼠背部毛发并外涂二氢睾酮溶液)，采用随机数表法分为6组，每组8只。阴性对照组，脱毛区注射生理盐水(单点注射0.05 ml，共5个点)；阳性对照组，脱毛区外用5%米诺地尔酊，1 ml/d；COL17低、中、高浓度组，在脱毛区分别注射0.5、1.0、2.0 mg/ml的COL17(单点注射0.05 ml，共5个点)；Ⅲ型胶原蛋白(COL3)、COL17(COL3＋COL17)联合高浓度组，在脱毛区注射2.0 mg/ml的COL3和COL17(单点注射0.05 ml，共5个点)。共给药21 d，期间观察记录各组小鼠毛发生长情况；21 d后，取小鼠脱毛区皮肤及皮下组织制作病理切片行HE染色，观察毛囊数量及形态变化；取小鼠脱毛区新鲜皮肤组织行总RNA测序分析，对差异共表达基因进行基因本体论(GO)功能注释、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析和基因集富集分析(GSEA)。结果:给药21 d后，与阴性对照组相比，阳性对照组、COL17高浓度组、COL3＋COL17联合高浓度组小鼠背部脱毛面积明显缩小，HE染色显示其毛囊数量也明显增多。Pearson相关性分析、主成分分析及各组间聚类热图显示，COL17高浓度组与阳性对照组基因相关性较高( R2＝0.95， P＝0.024)，基因表达较为接近，2组有3 882个差异基因(1 705个上调，2 177个下调)，而COL3＋COL17联合高浓度组与阳性对照组基因相关性最高( R2＝0.96， P＝0.001)，基因表达最接近，2组有1 289个差异基因(385个上调，904个下调)；KEGG分析显示，与阴性对照组相比，阳性对照组、COL17高浓度组及COL3＋COL17联合高浓度组小鼠均上调了与毛发生长相关的Wnt信号通路、细胞黏附分子及hedgehog信号通路；GO富集分析提示COL17高浓度组及COL3＋COL17联合高浓度组中皮肤发育、毛发周期循环相关基因上调；GSEA富集分析发现，COL17高浓度组成纤维细胞增殖、白介素1分泌相关基因表达上调，而COL3＋COL17联合高浓度组成纤维细胞迁移、凋亡细胞清除及加速活性氧的代谢相关基因表达上调。 结论:局部注射2.0 mg/ml的COL17对AGA模型小鼠毛发生长具有一定促进作用，且联合注射2.0 mg/ml的COL3后效果更显著，激活Wnt信号通路可能是COL17促毛发生长的主要机制之一。

目的:探讨毛蕊花糖苷(VB)对脑出血(ICH)小鼠的脑保护作用及其是否与抑制Toll样受体4(TLR4)介导的急性炎性反应有关。方法:采用8周龄C57BL/6雄性小鼠进行研究，其中野生型40只，TLR4基因敲除(TLR4 －/－)20只。按照完全随机方法将野生型小鼠分为假手术组、ICH组，ICH后VB治疗组(ICH＋VB 15 mg/kg或30 mg/kg)，将TLR4 －/－组小鼠分为TLR4 －/－＋ICH组和TLR4 －/－＋ICH＋VB(30 mg/kg)组，每组小鼠均为10只。采用右侧纹状体注射细菌胶原酶Ⅶ的方法构建ICH模型。模型建立成功(改良Garcia评分≤10分)后分别于小鼠腹腔注射VB(15 mg/kg或30 mg/kg)或等体积生理盐水，1次/d，连续3 d。采用改良Garcia评分评价脑功能损伤情况；取脑组织切片后计算脑血肿面积以评估出血量，采用干湿比法计算脑组织含水量；采用TUNEL染色法检测脑组织细胞凋亡率；采用免疫荧光染色(IF)法检测脑组织Iba-1的相对表达量；采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验和蛋白质免疫印迹法(WB)检测TLR4及其下游炎症介质[核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)1β及IL-6]的表达。比较野生型小鼠组间及TLR4 －/－小鼠组间上述指标的差异。取出生2 h内的TLR4 －/－乳鼠皮质组织培养原代神经元，采用Transwell小室将神经元与小鼠小胶质细胞株(BV2细胞)共培养，并分别用红细胞裂解物及红细胞裂解物＋VB(50 μmol/L)处理24 h，采用IF法观察神经元NeuN蛋白的表达。 结果:与ICH组相比，VB治疗组(尤其是ICH＋VB 30 mg/kg组)小鼠的致良Garcia评分均显著升高(均 P<0.05)；假手术组、ICH组、ICH＋VB 15 mg/kg组、ICH＋VB 30 mg/kg组脑出血量分别为0 mm 3、(7.33±1.99)mm 3、(3.19±0.47)mm 3、(1.66±0.26)mm 3，脑组织含水量分别为(79.00±0.50)%、(85.00±0.75)%、(81.50±0.50)%、(80.25±0.25)%，神经元的凋亡率分别为(4.8±2.0)%、(38.7±6.8)%、(21.5±6.9)%、(9.8±4.2)%，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。IF结果显示，ICH组脑组织Iba-1的相对表达量明显高于VB治疗组(均 P<0.05)。qRT-PCR和WB结果显示，与ICH组比较，VB治疗组的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA和蛋白的相对表达量均降低(均 P<0.05)。TLR4 －/－＋ICH＋VB组与TLR4 －/－＋ICH组比较，改良Garcia评分、脑组织含水量、神经元凋亡率的差异均无统计学意义(均 P>0.05)。与BV2细胞共培养的TLR4 －/－乳鼠神经元加入红细胞裂解物与加入红细胞裂解物＋VB处理后NeuN蛋白的表达差异无统计学意义( P＝0.872)。 结论:VB可改善ICH后小鼠的神经功能缺损，减少ICH量、减轻脑水肿程度及抑制细胞凋亡，其机制可能与通过抑制TLR4信号通路，减少小胶质细胞的激活以及促炎细胞因子的释放有关。

目的:检测1个显性营养不良型大疱性表皮松解症家系基因突变情况。方法:先证者男，20岁,自出生后四肢反复出现水疱、破溃、色素沉着、瘢痕、指（趾）甲变形等。该家系3代共5例患者，均有典型皮损。提取该家系14名成员（包括5例患者）和100名无亲缘关系健康对照的外周血标本，对先证者行全外显子组测序，选定相关的突变位点，在家系中用Sanger测序验证该突变位点。结果:基因测序示，先证者及其他4例患者COL7A1基因的第107号外显子均存在错义突变（c.7885G>A），导致第2629位氨基酸由甘氨酸变为精氨酸（p.G2629R），9名健康亲属和100名健康对照未发现该突变。该家系中该突变与显性营养不良型大疱性表皮松解症共分离，在Pubmed、HGMD、ClinVar等多种数据库查询未见收录，考虑该突变为新发错义突变，其编码的氨基酸改变Ⅶ型胶原蛋白结构，从而影响蛋白功能。结论:在该显性营养不良型大疱性表皮松解症家系COL7A1基因107号外显子发现了新的错义突变，扩展了COL7A1基因突变数据库。

目的:总结线状IgA大疱性皮病（LABD）患者的临床、免疫血清学和治疗特点。方法:回顾性收集2016—2023年就诊于中国医学科学院皮肤病医院诊断为LABD的患者资料，分析其临床、免疫血清学和治疗特征。结果:共纳入LABD患者26例，女14例、男12例，年龄[ M（ Q1， Q3]为32（11，48）岁。26例患者中12例（46.2%）表现为典型的花环样红斑、水疱，14例（53.8%）表现不典型，即非花环样排列的红斑、水疱。直接免疫荧光检查阳性率为73.7%（14/19）。盐裂皮肤-间接免疫荧光（ss-IIF）检查阳性率为53.8%（14/26），均表现为IgA伴或不伴IgG沉积在表皮侧。免疫印迹实验检测到IgA抗体阳性率为88.5%（23/26），18例（69.2%）患者血清IgA可识别相对分子质量120 000的线状IgA抗原1（LAD-1），其中4例IgA同时识别BP180；1例（3.8%）IgA识别表皮提取物中相对分子质量约170 000的蛋白；1例（3.8%）IgA识别表皮提取物中BP230和相对分子质量为140 000的蛋白；1例（3.8%）IgA可识别相对分子质量为290 000的Ⅶ型胶原。21例患者对氨苯砜治疗反应良好，1例疗效欠佳，1例不耐受，此2例使用托法替布亦不能达到完全缓解；3例使用米诺环素、秋水仙碱、柳氮磺吡啶等治疗有效。 结论:本组LABD患者中青年多见，LAD-1是最常见的靶抗原，免疫印迹实验检测IgA抗体的阳性率较免疫荧光检测法高，是鉴别诊断的重要手段。虽然LABD对氨苯砜反应良好，但仍需探索其他安全有效的药物。

患者女,73 岁,面颈部丘疹水疱 2 年.皮损组织病理示:表皮下水疱,疱液内中性粒细胞浸润.皮肤直接免疫荧光:基底膜带IgG、C3(+).盐裂皮肤直接免疫荧光示:真皮侧IgG、C3(+).酶联免疫吸附试验检测血清抗Ⅶ型胶原抗体弱阳性.诊断:Brunsting-Perry型获得性大疱性表皮松解症.予口服醋酸泼尼松片和甲氨蝶呤片,治疗2 周后皮损明显好转.随访2 年,泼尼松逐渐减量,未见复发.

目的 探讨毛蕊花糖苷(VB)对脑出血(ICH)小鼠的脑保护作用及其是否与抑制Toll样受体4(TLR4)介导的急性炎性反应有关.方法 采用8周龄C57BL/6雄性小鼠进行研究,其中野生型40只,TLR4基因敲除(TLR4-/-)20只.按照完全随机方法将野生型小鼠分为假手术组、ICH组,ICH后VB治疗组(ICH+VB15mg/kg或30mg/kg),将TLR4-/-组小鼠分为TLR4-/-+ICH组和TLR4-/-+ICH+VB(30 mg/kg)组,每组小鼠均为10只.采用右侧纹状体注射细菌胶原酶Ⅶ的方法构建ICH模型.模型建立成功(改良Garcia评分≤10分)后分别于小鼠腹腔注射VB(15 mg/kg或30 mg/kg)或等体积生理盐水,1次/d,连续3 d.采用改良Garcia评分评价脑功能损伤情况;取脑组织切片后计算脑血肿面积以评估出血量,采用干湿比法计算脑组织含水量;采用TUNEL染色法检测脑组织细胞凋亡率;采用免疫荧光染色(IF)法检测脑组织Iba-1的相对表达量;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验和蛋白质免疫印迹法(WB)检测TLR4及其下游炎症介质[核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子a(TNF-α)、白细胞介素(IL)1β及IL-6]的表达.比较野生型小鼠组间及TLR4-/-小鼠组间上述指标的差异.取出生2 h内的TLR4-/-乳鼠皮质组织培养原代神经元,采用Transwell小室将神经元与小鼠小胶质细胞株(BV2细胞)共培养,并分别用红细胞裂解物及红细胞裂解物+VB(50 μmol/L)处理24 h,采用IF法观察神经元NeuN蛋白的表达.结果 与ICH组相比,VB治疗组(尤其是ICH+VB30 mg/kg组)小鼠的致良Garcia评分均显著升高(均P＜0.05);假手术组、ICH组、ICH+VB 15 mg/kg组、ICH+VB 30 mg/kg 组脑出血量分别为0 mm3、(7.33±1.99)mm3、(3.19±0.47)mm3、(1.66±0.26)mm3,脑组织含水量分别为(79.00±0.50)％、(85.00±0.75)％、(81.50±0.50)％、(80.25±0.25)％,神经元的凋亡率分别为(4.8±2.0)％、(38.7±6.8)％、(21.5±6.9)％、(9.8±4.2)％,差异均有统计学意义(均P＜0.05). IF结果显示,ICH组脑组织Iba-1的相对表达量明显高于VB治疗组(均P＜0.05).qRT-PCR和WB结果显示,与ICH组比较,VB治疗组的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6 的mRNA和蛋白的相对表达量均降低(均P＜0.05). TLR4-/-+ICH+VB组与TLR4-/-+ICH组比较,改良Garcia评分、脑组织含水量、神经元凋亡率的差异均无统计学意义(均P＞0.05).与BV2细胞共培养的TLR4-/-乳鼠神经元加入红细胞裂解物与加入红细胞裂解物+VB处理后NeuN蛋白的表达差异无统计学意义(P=0.872).结论 VB可改善ICH后小鼠的神经功能缺损,减少ICH量、减轻脑水肿程度及抑制细胞凋亡,其机制可能与通过抑制TLR4信号通路,减少小胶质细胞的激活以及促炎细胞因子的释放有关.