目的:探讨眼睑基底细胞癌组织中亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样域蛋白-1（LRIG1）、表皮生长因子受体（EGFR）及神经胶质瘤关联癌基因同源物1（GLI1）的表达情况及其相关性。方法:病例系列报告。纳入蚌埠医科大学第一附属医院2016年1月—2020年11月病理确诊的55例眼睑基底细胞癌患者，其中男26例、女29例，年龄52~89（69.1±9.0）岁。选取55例患者手术切除后保留的癌组织标本，并随机抽取其中22例患者的癌旁正常皮肤组织标本作为对照。观察指标：（1）采用免疫组织化学染色检测并比较LRIG1、EGFR及GLI1在眼睑基底细胞癌组织与癌旁正常皮肤组织中的阳性表达率；（2）比较LRIG1、EGFR及GLI1在不同性别、不同年龄（≥65岁和<65岁）、不同肿块大小（≥2.0 cm和<2.0 cm）患者癌细胞中表达的差异。（3）分析LRIG1、EGFR及GLI1三种蛋白表达水平的相关性。结果:（1）LRIG1在眼睑基底细胞癌组织中阳性表达率为16.4%（9/55），低于在癌旁正常皮肤组织中的阳性表达率72.7%（16/22）；而EGFR和GLI1在眼睑基底细胞癌组织中阳性表达率分别为72.7%（40/55）及70.9%（39/55），均高于在癌旁正常皮肤组织中的阳性表达率31.8%（7/22）、27.3%（6/22）：差异均有统计学意义（ χ2=22.77、11.06、12.32， P值均<0.05）。（2）GLI1、EGFR、LRIG1表达在不同性别、不同年龄及不同肿块大小的患者间差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。（3）Spearman相关分析表明，55例眼睑基底细胞癌组织中，LRIG1表达分别与EGFR、GLI1表达呈负相关（ r=-0.279， P=0.039； r=-0.306， P=0.023）；EGFR表达与GLI1表达呈正相关（ r=0.499， P<0.001）。 结论:EGFR及GLI1在眼睑基底细胞癌组织中均呈高表达，LRIG1呈低表达并分别与两者呈负相关；EGFR及GLI1蛋白可能会导致眼睑基底细胞癌的发生和发展，而LRIG1对癌症的发生发展可能起抑制作用。

目的:观察转移性肾透明细胞癌(m-ccRCC)在经过舒尼替尼治疗后，行肾癌切除术后癌组织中胶质瘤相关癌基因同源物-2(GLI-2)的表达对预后的影响。方法:选取2016年1月至2018年12月期间就诊于我院的43例m-ccRCC患者，接受舒尼替尼治疗后行肾癌切除术，应用免疫组织化学法检测肾癌组织中GLI-2、舒尼替尼靶向分子[血管内皮生长因子受体(VEGFR)-1和VEGFR-2]和C反应蛋白(CRP)的表达。应用Kaplan-Meier分析其表达与预后的关系。应用蛋白质印迹法(Western blot)和定量聚合酶链反应(qPCR)检测舒尼替尼耐药细胞株(786-O-R)和亲本细胞株(786-O)中蛋白和mRNA的表达。分类变量采用 χ2检验。 结果:43例患者中，1例(2.33%)获得完全缓解(CR)，7例(16.28%)获得部分缓解(PR)，总体有效率为18.60%；单因素分析发现核分级、GLI-2、血管内皮生长因子(VEGF)-1、VEGFR-2和CRP水平是影响舒尼替尼治疗的无进展生存期的因素[风险比( HR)＝2.650、3.770、2.850、2.970、2.660， P<0.05)，多因素分析发现，GLI-2是影响舒尼替尼治疗的无进展生存期的因素( HR＝4.180， P<0.05)；亲本细胞株(786-O)中GLI-2的表达显著低于舒尼替尼抗性细胞株(786-O-R)。 结论:GLI-2可能参与了m-ccRCC对舒尼替尼形成耐药的过程。

目的:探究miR-130a-5p靶向Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)对牙槽骨成骨细胞(Alveolar osteoblast,AOB)增殖、凋亡、成骨分化的影响及其机制.方法:将AOB分为NC组、miR-NC组、miR-130a-5p组、miR-130a-5p+Runx2组和miR-130a-5p+SHH组.双荧光素酶报告验证miR-130a-5p对Runx2、Sonic hedgehog(SHH)的调控关系;CCK-8及EdU染色检测细胞增殖能力;AnnexinV-FITC/PI法检测细胞凋亡能力;ALP染色、茜素红染色检测细胞成骨分化能力;RT-qPCR检测miR-130a-5p、Runx2、SHH、神经胶质瘤关联癌基因同源物1(Gli1)mRNA水平;Western Blot检测增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,Bax)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(Osteocalcin,OCN)、骨形态发生蛋白2(Bone morphogenetic protein 2,BMP2)、Runx2、SHH、Gil1水平.结果:miR-130a-5p靶向调控Runx2、SHH.过表达miR-130a-5p后,细胞24 h、48 h、72 h OD值及EdU阳性率降低,细胞凋亡率升高,成骨分化能力降低,miR-130a-5p、Bax蛋白水平升高,Runx2、PCNA、Ki67、Bcl-2、ALP、OCN、BMP2蛋白及SHH、Gil1 mRNA和蛋白水平均降低(P＜0.05).过表达miR-130a-5p和Runx2或过表达miR-130a-5p和SHH可减弱过表达miR-130a-5p对细胞增殖、凋亡、成骨分化的影响.结论:miR-130a-5p靶向Runx2抑制AOB增殖和成骨分化,并促进AOB凋亡,其可能通过抑制SHH信号通路发挥作用.

目的 比较幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染与非Hp感染的慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)患者胃黏膜病理状态与刺猬蛋白-细胞表面受体Ptch-G蛋白偶联受体样蛋白Smo-胶质瘤相关癌基因同源蛋白Gli(Hedgehog信号通路,Hh-Ptch-Smo-Gli)及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶/核因子κB/转录信号转导子和转录活化子1(NOX/NF-κB/STAT1)信号通路相关因子表达差异,探究Hp促进CAG"炎癌转化"的生物学机制.方法 纳入符合标准的43名CAG患者,分为CAG伴Hp感染组(Hp+CAG组,n=21)、CAG不伴Hp感染组(Hp-CAG组,n=22),观察两组患者胃黏膜苏木精-伊红(HE)染色组织形态学改变,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测胃黏膜NOX1、NOX2、NOX4、STAT1、P65、p-P65相对表达量;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测胃黏膜胶质瘤相关癌基因同源蛋白1 mRNA(Gli1 mRNA)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白2 mRNA(Gli2 mRNA)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白3 mRNA(Gli3 mRNA)、音猬因子mRNA(Shh mRNA)、G蛋白偶联受体样蛋白mRNA(Smo mRNA)、细胞表面受体Ptch mRNA(Ptch mRNA)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1 mRNA(NOX1 mRNA)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2 mRNA(NOX2 mRNA)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4 mRNA(NOX4 mRNA)、核因子κB mRNA(NF-κB mRNA)水平.结果 两组患者胃组织HE染色结果:Hp+CAG组患者胃黏膜上皮细胞部分坏死脱落,表面欠光整,腺体数量减少,排列紊乱,可见肠上皮化生,固有层内可见弥漫性淋巴细胞、中性粒细胞浸润;Hp-CAG组患者淋巴细胞和中性粒细胞浸润程度较Hp+CAG组轻.RT-qPCR检测结果:与Hp-CAG组相比,Hp+ CAG组患者胃黏膜Gli1 mRNA、Shh mRNA、Smo mRNA、Ptch mRNA水平显著降低(P<0.01);Gli2 mRNA、Gli3 mRNA、NOX1 mRNA、NOX2 mRNA、NOX4 mRNA、NF-κB mRNA水平显著增高(P<0.01).Western blot检测结果:与Hp-CAG组相比,Hp+CAG组患者胃黏膜NOX1/GAPDH(内参)、NOX2/GAPDH、NOX4/GAPDH、p-P65/GAPDH相对表达量明显增高(P<0.01),STAT1水平显著降低(P<0.01),两组P65/GAPDH相对表达量的差异没有统计学意义(P>0.05).结论 Hp感染后可能通过抑制Hh-Ptch-Smo-Gli信号通路,并使NOX/NF-κB/STAT1信号通路异常活化,导致胃黏膜长期炎症,促进萎缩及肠上皮化生,增加癌变风险.

目的 基于小窝蛋白1(caveolin-1,Cav1)/音猬因子(sonic hedgehog,Shh)信号通路探讨补阳还五汤对脑缺血后星形胶质细胞转分化的作用机制.方法 雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组及补阳还五汤低、中、高剂量(9.25、18.50、39.00 g/kg)组和丁苯酞(54mg/kg)组,除假手术组外,其余各组采用大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)法复制脑缺血模型,给予药物干预21 d后,采用神经行为学评分、苏木素-伊红染色及免疫组化评估补阳还五汤疗效.随后将雄性野生(WT)小鼠及Cav1-/-(KO)小鼠分别随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤(18.5g/kg)组,造模前7d予以脑内注射GFAP-EGFP腺相关病毒,采用MCAO法制备脑缺血模型,给予药物干预21 d.采用免疫荧光检测缺血侧皮质区星形胶质细胞转分化情况,Western blotting法检测缺血侧皮质区Shh、平滑同源物(smootened,Smo)及神经胶质瘤关联癌基因同源物1(glioma associated oncogene homolog 1,Gli1)的蛋白表达,qRT-PCR法检测神经分化因子acoete-scute同系物 1(achaete-scute complex homolog 1,Ascl1)、神经源性分化因子 1(neurogenic differentiation 1,NeuroD1)、神经源性分化因子 2(neurogenic differentiation 2,NeuroD2)、神经元素 1(neurogenin-1,Ngn1)、神经元素 2(neurogenin-2,Ngn2)及配对盒基因2(paired box gene 2,Pax2)的表达.结果 与模型组比较,补阳还五汤各剂量组及丁苯酞组的神经行为学评分显著降低(P＜0.05、0.01),缺血侧皮质区病理损伤明显改善,NeuN表达明显上升(P＜0.05、0.01).此外,补阳还五汤低剂量组和补阳还五汤中剂量组的神经行为学评分及NeuN的表达有显著差异(P＜0.01),而补阳还五汤中、高剂量组及丁苯酞组之间无明显差异.与同基因型模型组比较,WT、KO补阳还五汤组小鼠缺血侧皮质区EGFP-NeuN共定位明显增加(P＜0.01),Shh、Smo 及 Gli1 蛋白表达明显上升(P＜0.05、0.01),神经分化因子 Ascl1、NeuroD1、NeuroD2、Ngn1、Ngn2及Pax2表达明显上升(P＜0.05、0.01).与WT模型组及WT补阳还五汤组比较,KO模型组及KO补阳还五汤组小鼠缺血侧皮质EGFP-NeuN共定位明显下降(P＜0.01),Shh、Smo及Gli1蛋白表达明显下降(P＜0.05),神经分化因子Ascl1、NeuroD1、NeuroD2、Ngn1、Ngn2及Pax2表达明显下降(P＜0.05、0.01).结论 补阳还五汤能够促进脑缺血后星形胶质细胞向神经元转分化,其作用机制可能与通过Cav1调控Shh信号通路,上调各神经分化因子的表达有关.

目的 探究微小RNA-92a(miR-92a)调控音猥因子(SHH)途径对心肌缺血再灌注(I/R)损伤后促血管再生的影响及机制.方法 从1～3 d龄SD大鼠中培养原代心肌细胞后建立心肌细胞缺氧/复氧模型,将其分成心肌细胞常氧培养组和心肌细胞I/R组.miR-92a模拟物(mimic)和拮抗剂(inhibitor)转染入大鼠原代心肌细胞,使miR-92a过表达或低表达,分成对照组、I/R组、miR-92a mimic组和miR-92a inhibitor组.细胞计数法8测 定各组细胞活力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,ELISA和QT-PCR测定血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和血管生成素1等血管新生因子表达,Western blot法测定SHH信号通路蛋白表达.结果 心肌细胞I/R组miR-92a表达显著高于心肌细胞常氧培养组(3.89±0.29 vs 1.53±0.19,P＜0.01).对照组、miR-92a inhibitor组、I/R 组和 miR-92a mimic 组 SHH 蛋白(0.57±0.13 vs 0.51±0.11 vs 0.24±0.03 vs 0.14±0.02,P＜0.01)、Smooth-ened 蛋白(0.53±0.12 vs 0.49±0.10 vs 0.14±0.04 vs 0.09±0.01,P＜0.01)、神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白 1(0.56±0.14 vs 0.50±0.13 vs 0.15±0.03 vs 0.08±0.01,P＜0.01)和神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白 2(0.58±0.11 vs 0.49±0.12 vs 0.18±0.02 vs 0.11±0.03,P＜0.01)比较差异有统计学意义.结论 miR-92a在心肌I/R损伤中异常高表达,抑制miR-92a表达可激活SHH信号通路有效促进血管再生因子表达.

目的 基于音猬因子(Shh)途径分析山药提取物对老龄慢性萎缩性胃炎大鼠的干预作用.方法 选取 12 月龄的雄性SD老龄大鼠 50 只,随机分为空白对照组(A组)、慢性萎缩性胃炎模型组(B组)、低剂量山药提取物组(C组)、中剂量山药提取物组(D组)、高剂量山药提取物组(E组),每组 10 只.第 2 周至 12 周对B、C、D组进行造模,造模成功 14 w时,给予B、C、D组山药提取物灌胃治疗,各组灌胃浓度依次为0.25、0.50、0.75 g/ml,剂量为10 ml/kg,连续灌胃5 w.A组不做处理,B组灌胃等体积生理盐水.第 20 周,收集、分析各组一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、胃分泌功能及微循环胃血流量、Shh通路蛋白表达.结果 与A组相比,B组胃液分泌量、胃液酸度、胃蛋白酶活性明显降低(P<0.05);与B组相比,C、D、E组以上指标明显升高,且E组升高水平最优(P<0.05).与A组相比,B组胃体部与幽门部血流量、胃血流量明显减少(P<0.05);与B组相比,C、D、E组以上指标明显增加,且E组增加水平最优(P<0.05);与A组相比,B组NO、MDA表达明显升高,SOD、GSH-Px表达明显降低(P<0.05);与B组相比,C、D、E组NO、MDA表达明显降低,SOD、GSH-Px表达明显升高(P<0.05).与A组相比,B组Shh、蛋白质调控基因(Ptch)1、平滑受体蛋白(Smo)、神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白(Gli)1 蛋白表达明显降低,Gli2、Gli3 蛋白表达明显升高(P<0.05);与B组相比,C、D、E组Shh、Ptch1、Smo、Gli1 蛋白表达明显升高,Gli2、Gli3 蛋白表达明显降低,且E组变化幅度最优(P<0.05).结论 山药提取物可通过重新激活抑制状态Shh信号通路,改善老龄慢性萎缩性大鼠的胃黏膜病理改变,改善大鼠胃微循环血流量及氧化应激反应,同时调节胃液、胃酸、胃蛋白的分泌,抑制病情进展.

目的 探讨白藜芦醇(RSV)对人胆囊癌GBC-SD细胞的凋亡、侵袭能力和上皮间充质转化(EMT)的影响及其发生机制.方法 体外培养GBC-SD细胞,随机分成空白组和RSV低、中、高剂量组(0,20,50,100 μmol·L-1 RSV).通过Annexin V FITC/PI双染流式分析细胞凋亡情况,RT-PCR检测B淋巴细胞瘤-2 基因(Bcl-2)、Bcl-2 相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶 3(Caspase 3)mRNA表达水平,Transwell侵袭实验检测GBC-SD细胞侵袭能力,Western blotting检测EMT标志物钙黏蛋白E(E-cadherin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达水平和Hedgehog信号通路成员神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白 1(Gli1)、Gli2、音猬因子(Shh)的表达.再将GBC-SD细胞随机分为空质粒组、Gli1 过表达质粒组、Gli1 过表达质粒+RSV组,通过Western blotting检测Gli1 蛋白过表达情况,Annexin V-FITC/PI双染流式和Transwell侵袭实验分别检测上述各组的凋亡水平和侵袭能力.结果 与空白组相比,RSV各剂量组细胞凋亡率、Bax和Caspase 3 mRNA表达显著升高(P＜0.05 或P＜0.01),细胞侵袭能力显著降低(P＜0.01);RSV中、高剂量组Bcl-2 mRNA表达显著降低(P＜0.01).与空白组相比,RSV高剂量组E-cadherin蛋白表达水平显著升高,N-cadherin、Vimentin、Gli1、Gli2 和Shh蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).与转染空质粒+RSV组相比,Gli1过表达质粒+RSV组细胞的凋亡率降低,侵袭能力增加(P＜0.001).结论 RSV促进GBC-SD细胞凋亡、抑制GBC-SD细胞侵袭及EMT,其作用机制可能与抑制Hedgehog信号相关.

目的 构建一株具备干细胞表型的胶质母细胞瘤细胞系Y1203,用于研究肿瘤细胞干性维持以及治疗耐药的潜在机制.方法 Y1203 细胞来源于一位 49 岁女性胶质母细胞瘤患者复发再手术切除的肿瘤组织.使用Y1203 细胞构建人源胶质母细胞瘤原位及皮下移植(patient derived tumor xenograft,PDX)模型.采用流式细胞术检测不同代数Y1203 细胞的细胞周期.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测Y1203 细胞的干细胞标志物转录因子SOX-2(transcription factor SOX-2,SOX2)和细胞黏附分子分化抗原簇-44(cluster of differentiation-44,CD44)表达.基于转录组测序技术(RNA sequencing,RNA-Seq)比较Y1203 细胞和U87 细胞表达谱差异.结果 短串联重复序列(short tandem repeats,STR)鉴定确认Y1203 细胞与患者肿瘤组织同源,且其与ExPASy数据库中涵盖的常见细胞系完全不同.基因检测结果提示异柠檬酸脱氢酶 1(isocitrate dehydrogenase 1,IDH1)无突变,端粒酶反转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)启动子突变,原癌基因(B-Raf proto-oncogene,BRAF V600E)、抑癌基因(tumor protein p53,TP53)和转录调控因子(ATRX chromatin remodeler,ATRX)基因突变.人胶质母细胞瘤细胞系Y1203 可实现在体外无限增殖并用于建立PDX模型.与其他胶质瘤细胞系相比,Y1203 细胞中高表达的肿瘤干细胞标志物为SOX2 和CD44,并显著富集胶质瘤干细胞相关通路.结论 人胶质母细胞瘤细胞系Y1203 分化低,恶性程度较高,对放射性治疗和化学治疗抵抗性强,具有胶质母细胞瘤干细胞特性.该细胞系的建立为胶质母细胞瘤临床前研究提供了实验基础.

目的:探讨Klf10沉默对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,HPDLCs)受力后骨向分化的影响.方法:分离培养HPDLCs,RNA干扰沉默Klf10的表达,用离心加力法对细胞加载机械力,并予hedgehog信号通路特异性激动剂purmorphamine进行干预.采用ELISA法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测各组细胞Klf10 mRNA和蛋白表达水平,并检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA和蛋白的表达情况;利用Western免疫印迹法检测hedgehog信号转导通路成员胶质瘤相关癌基因同源物1(glioma-associated oncogene homolog 1,GLI1)和Ptch1 (patched-1)的蛋白表达.采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析.结果:机械力诱导6h后,Klf10、Runx2、OPN和OCN mRNA和蛋白的表达显著升高,ALP活性升高,GLI1和Ptch1蛋白表达升高(P＜0.05).与空白组相比,转染Klf10 siRNA组Klf10 mRNA和蛋白水平显著降低(P＜0.05).同时,Klf10 siRNA显著抑制ALP活性,下调Runx2、OPN和OCN mRNA和蛋白的表达,抑制GLI1和Ptch1蛋白表达(P＜0.05).Purmorphamine显著抑制Klf10 siRNA沉默介导的成骨分化效应(P＜0.05).结论:Klf10沉默可以抑制机械力作用下HPDLCs的骨向分化,可能与调节hedgehog信号转导通路有关.