目的:探讨眼睑基底细胞癌组织中亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样域蛋白-1（LRIG1）、表皮生长因子受体（EGFR）及神经胶质瘤关联癌基因同源物1（GLI1）的表达情况及其相关性。方法:病例系列报告。纳入蚌埠医科大学第一附属医院2016年1月—2020年11月病理确诊的55例眼睑基底细胞癌患者，其中男26例、女29例，年龄52~89（69.1±9.0）岁。选取55例患者手术切除后保留的癌组织标本，并随机抽取其中22例患者的癌旁正常皮肤组织标本作为对照。观察指标：（1）采用免疫组织化学染色检测并比较LRIG1、EGFR及GLI1在眼睑基底细胞癌组织与癌旁正常皮肤组织中的阳性表达率；（2）比较LRIG1、EGFR及GLI1在不同性别、不同年龄（≥65岁和<65岁）、不同肿块大小（≥2.0 cm和<2.0 cm）患者癌细胞中表达的差异。（3）分析LRIG1、EGFR及GLI1三种蛋白表达水平的相关性。结果:（1）LRIG1在眼睑基底细胞癌组织中阳性表达率为16.4%（9/55），低于在癌旁正常皮肤组织中的阳性表达率72.7%（16/22）；而EGFR和GLI1在眼睑基底细胞癌组织中阳性表达率分别为72.7%（40/55）及70.9%（39/55），均高于在癌旁正常皮肤组织中的阳性表达率31.8%（7/22）、27.3%（6/22）：差异均有统计学意义（ χ2=22.77、11.06、12.32， P值均<0.05）。（2）GLI1、EGFR、LRIG1表达在不同性别、不同年龄及不同肿块大小的患者间差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。（3）Spearman相关分析表明，55例眼睑基底细胞癌组织中，LRIG1表达分别与EGFR、GLI1表达呈负相关（ r=-0.279， P=0.039； r=-0.306， P=0.023）；EGFR表达与GLI1表达呈正相关（ r=0.499， P<0.001）。 结论:EGFR及GLI1在眼睑基底细胞癌组织中均呈高表达，LRIG1呈低表达并分别与两者呈负相关；EGFR及GLI1蛋白可能会导致眼睑基底细胞癌的发生和发展，而LRIG1对癌症的发生发展可能起抑制作用。

目的:研究孕期尼古丁暴露对子代小鼠牙釉质形成的影响及其可能的表观遗传学机制。方法:通过随机数字表法将10只C57BL/6孕鼠分为对照组（皮下注射生理盐水）及孕期尼古丁暴露（prenatal nicotine exposure，PNE）组（皮下注射尼古丁溶液），每组5只，孕鼠生产后分别收集出生后0 d（postnatal day 0，P0；P14、P25含义依此类推）、P14、P25新生小鼠，根据母代分组分为子代对照组及子代PNE组，并记录P0、P25子代小鼠体质量。采用显微CT（micro-CT）扫描分析、扫描电镜和维氏显微硬度检测对子代小鼠牙槽骨和下颌切牙进行硬组织相关参数分析。提取P25子代小鼠下颌骨组织及第3代牙上皮干细胞（dental epithelial stem cell，DESC）中的总RNA，通过实时荧光定量PCR检测成骨向及成釉向分化相关基因、增殖相关标志物和干细胞标志物的表达水平。采用石蜡切片免疫组织化学染色观察增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，Pcna）、釉原蛋白（amelogenin，Amelx）、甲基转移酶ZESTE增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2，Ezh2）、组蛋白H3第27位赖氨酸的三甲基化修饰（histone H3 trimethylated at lysine 27，H3K27me3）阳性染色分布及水平。使用细胞增殖（cell counting kit-8，CCK-8）试剂盒对外源性添加不同浓度（0.01、0.1、1 mmol/L）尼古丁以及Ezh2抑制剂GSK126的DESC进行细胞活力检测。结果:PNE组孕鼠较对照组更容易出现不良妊娠结局，P0时子代PNE组小鼠体质量［（0.99±0.02）g］显著低于子代对照组［（1.20±0.04）g］（ P<0.001）；P25时，子代PNE组小鼠体质量［（9.65±1.32）g］显著低于子代对照组［（15.26±1.70）g］（ P<0.001），死产率［（46.40±9.30）%］显著高于对照组（0）（ P<0.001）。P14和P25时，子代PNE组小鼠下颌切牙釉质矿化沉积点与第一磨牙近中面的距离数值［分别为（-1 349±45）、（-506±380）μm］均较子代对照组［分别为（-1 192±147）、（504±198）μm］显著减小（ P<0.05， P<0.001），提示矿化沉积点延迟。子代PNE组小鼠切牙釉柱及釉柱间质较对照组排列松散无序，显微硬度［（245.7±18.4）MPa］较子代对照组［（371.9±28.7）MPa］显著降低（ P<0.001）。HE染色显示子代PNE组小鼠前成釉细胞（pre-ameloblast，Pre-Am）区域排列较对照组紊乱，矿化沉积点推迟，暂时性扩增细胞（transit-amplifying cell，TA）及Pre-Am区域延长。免疫组织化学染色显示，子代PNE组小鼠唇侧颈环（labial cervical loop，LaCL）整体Pcna表达较子代对照组显著增多（ P<0.05），H3K27me3较对照组显著富集（ P<0.01），对应区域可见Ezh2表达显著增加（ P<0.01），同时成釉细胞胞质中Amelx阳性信号减弱。体外实验添加1 mmol/L 尼古丁能显著上调子代PNE组DESC的Pcna基因表达水平（ P<0.01），同时显著下调DESC标志物B淋巴瘤Mo-MLV插入蛋白1、富亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域1和成釉细胞向分化的相关基因Amelx等的基因表达水平（ P<0.05， P<0.05， P<0.01）。此外，与0 h时相比，干预24 h后1 mmol/L尼古丁可显著增强DESC的增殖活性（ P<0.001），添加10 μmol/L Ezh2抑制剂GSK126可挽救1 mmol/L尼古丁对DESC带来的增殖促进作用。 结论:孕期尼古丁暴露可能导致成釉向谱系定向分化过程延迟，致子代小鼠DESC增殖及分化异常，并且影响H3K27me3表观遗传修饰水平，造成子代牙釉质发育障碍，提示孕期尼古丁暴露是牙发育的危险环境因素。

目的:观察黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AST Ⅳ)对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型小鼠认知功能障碍和病理改变的影响,并探讨可能的调控机制.方法:将APP/PS1转基因(APPswe/PSEN1dE9)小鼠随机分为AD+AST Ⅳ组和AD组,并以C57BL/6野生型(wild-type,WT)小鼠作为对照组(WT组),灌胃治疗两个月(n= 8).应用Morris水迷宫和Y迷宫实验评价小鼠空间认知功能(n=8),尼氏染色检测神经元数量与形态,免疫荧光染色观察神经元核抗原(neuronal nuclear antigen,NeuN)和β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)水平(n=4),Western blot法检测全脑组织中神经突生长抑制因子A(neurite outgrowth inhibitor A,NogoA)、Nogo-66受体(Nogo-66 recep-tor,NgR)、p75神经营养因子受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)、含富亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域蛋白1(leucine rich repeat and immunoglobin-like domain-containing protein-1,LINGO-1)、环磷酸腺苷(cyclic ade-nosine monophosphate,cAMP)和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的表达(n=4).结果:AST Ⅳ能够显著缓解APP/PS1小鼠的认知功能障碍,提高其学习、记忆和探索功能.与WT组相比,APP/PS1小鼠大脑皮质区和海马区Aβ沉积增加(P<0.01),尼氏小体丢失严重(P<0.05或P<0.01),神经元数量减少(P<0.05);而AST Ⅳ可以显著减少Aβ沉积(P<0.05),减少尼氏小体丢失(P<0.05),增加神经元数量(P<0.05).与WT组相比,APP/PS1小鼠脑组织NogoA、NgR、p75NTR和LINGO-1表达显著增加(P<0.05或P<0.01),cAMP和PKA表达显著减少(P<0.05或P<0.01);而AST Ⅳ可以显著抑制NogoA、NgR、p75NTR和LINGO-1表达(P<0.05或P<0.01),增加cAMP和PKA表达(P<0.05).结论:AST Ⅳ通过抑制NogoA及NgR/p75NTR/LINGO-1受体复合物的表达,并上调cAMP/PKA通路,减少APP/PS1小鼠脑组织中Aβ沉积,减轻神经元损伤,从而改善认知功能和缓解学习障碍.

目的 探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白结构域1(LRIG1)在人垂体瘤组织中表达情况,并观察过表达LRIG1后对顺铂(DDP)诱导的垂体瘤细胞增殖、凋亡的影响.方法 采用免疫组织化学染色法检测45例垂体瘤患者肿瘤组织及瘤旁组织中的LRIG1表达,分析LRIG1阳性表达与患者临床病理指标的相关性.选取原代分离培养的人垂体瘤细胞,采用脂质体介导的基因转染技术将LRIG1基因过表达质粒pEGFP-N1-LRIG1转染进细胞中,筛选LRIG1过表达的细胞,同时选取转染空质粒pEGFP-N1的细胞作为对照组.两组细胞均经20 μg/mL DDP诱导48 h,流式细胞术检测细胞凋亡情况,平板克隆实验检测细胞的增殖能力,Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白BAX、胱天蛋白酶3(caspase-3)和Bcl2的相对表达量.结果 垂体瘤患者肿瘤组织中LRIG1阳性率显著低于瘤旁组织,且LRIG1在侵袭性肿瘤表达显著降低.与对照组相比,过表达LRIG1后,DDP诱导的细胞凋亡率显著增加、细胞增殖显著降低、BAX、caspase-3的水平显著增加,而Bcl2水平显著降低.结论 过表达LRIG1增加DDP诱导的人垂体瘤细胞凋亡并抑制其增殖.

富亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域(leucine-rich repeats and immuno globulin-like domains, LRIG)基因家族因有相似的结构域,成为哺乳动物同源染色体上的Kekkon-1基因.其分布广泛,在真核生物和原核生物的细胞及组织中都有所表达,如脑、皮肤、耳等.LRIG属跨膜蛋白,是新发现的生长因子信号传导负调节物和肿瘤抑制物.近年的研究认为,LRIG通过与生长因子受体相互作用并增强它们的泛素化和降解来拮抗信号传导,其异常表达是肿瘤发生的重要指标.

探讨富亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域-1(LRIG1)在胃癌中的表达及其与分化程度的关系.采用免疫组化、Western blot、RT-PCR法检测LRIG1在不同分化程度胃癌组织和细胞株中的表达,并分析其表达与分化程度的关系.结果显示LRIG1在胃癌组织和细胞株中的表达低于癌旁正常胃组织和正常胃黏膜细胞株,差异有统计学意义(P＜0.01);LRIG1在MGC-803、SGC-7901和HGC-27中的表达量依次降低,差异有统计学意义(P＜0.01);LRIG1在胃癌的发生和发展中可能起着抑癌基因的作用.

[目的]研究miR-130b-3p对膀胱癌细胞EJ增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其机制.[方法]运用Western blotting检测人膀胱癌细胞EJ、人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中富亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域(leucine-rich repeats and immuno globulin-like domains 1,LRIGl)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)的蛋白表达;将anti-miR-130b-3p组(转染anti-miR-130b-3p)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-LRIGl组(转染pcDNA-LRIGl)、anti-miR-130b-3p+si-con组(anti-miR-130b-3p和sicon共转染)、anti-miR-130b-3p+si-LRIGl组(anti-miR-130b-3p和si-LRIGl共转染),均用脂质体法转染至EJ细胞;qRT-PCR检测各组细胞中miR-130b-3p、LRIGl的mRNA表达;MTT法检测各组细胞的细胞增殖;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性.Transwell小室实验检测各组细胞的迁移、侵袭.[结果]与人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1细胞相比,人膀胱癌细胞EJ中miR-130b-3p表达显著升高,LRIGl表达显著降低(P＜0.05);抑制miR-130b-3p、过表达LRIGl均可抑制EJ细胞增殖、迁移、侵袭;LRIGl是miR-130b-3p的靶标.敲减LRIGl可逆转抑制miR-130b-3p对EJ细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用.[结论]MiR-l30b-3p可促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向LRIGl有关,该研究将可为膀胱癌的靶向治疗提供新思路.

目的 观察微小RNA-590-3p(miR-590-3p)对结直肠癌(CRC)细胞顺铂(DDP)耐药的影响,并探讨其可能的机制.方法 在CRC细胞系SW480、SW620、HCT116中选择miR-590-3p表达最高的SW620细胞构建DDP耐药株(DDP/SW620).取SW620、DDP/SW620细胞,采用CCK-8法检测并计算DDP作用后的半数抑制浓度(IC50),采用实时荧光定量PCR法检测miR-590-3p表达.将DDP/SW620细胞分为miR-590-3p inhibitor组和NC组,分别转染miR-590-3p inhibitor和NC质粒,计算DDP作用后的IC50.采用TargetScan7.1软件和双荧光素酶报告实验预测miR-590-3p的靶基因为富含亮氨酸的重复序列和免疫球蛋白样结构域蛋白1(LRIG1).取miR-590-3p inhibitor组和NC组细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测LRIG1、耐药相关基因MDR1和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 DDP/SW620细胞DDP的IC50、miR-590-3p相对表达量均高于SW620细胞,二者比较P均<0.05.miR-590-3p inhibitor组DDP的IC50、miR-590-3p相对表达量均低于NC组,两组比较P均<0.05.miR-590-3p inhibitor组细胞凋亡率及LRIG1、Bax蛋白相对表达量均高于NC组,MDR1和Bcl-2蛋白相对表达量均低于NC组(P均<0.05).结论 miR-590-3p可促进CRC细胞发生DDP耐药,其机制可能与负性调控LRIG1进而促进MDR1表达及减少细胞凋亡有关.

目的:探讨富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)基因在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达、相关信号通路及其与患者预后的关系.方法:依靠癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析LRIG1基因mRNA在NSCLC患者癌组织和癌旁组织中的表达水平;依靠蛋白相互作用(STRING)数据库构建LRIG1蛋白-蛋白相互作用网络,并对相关蛋白功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路进行富集.同时分析比较LRIG1基因表达与NSCLC患者总生存期和无疾病进展生存期的关系.选取手术治疗的96例NSCLC患者,采用免疫组织化学法检测LRIG1蛋白在癌组织和癌旁组织中的表达,对数据库分析结果进行验证.结果:LRIG1基因在癌旁正常组织中表达水平较高,而在癌组织中表达较低;与LRIG1蛋白相互作用较为紧密的10蛋白相互作用网络富集显著(P<0.001);共表达分析显示,L-型电压依赖性钙离子通道α1D亚基(CACNA1D)基因与LRIG1基因正向共表达最为明显(r=0.51,P<0.05),而G蛋白信号转导调节因子20(RGS20)基因与LRIG1基因负向共表达最为明显(r=–0.49,P<0.05);LRIG1基因生物学过程、细胞成分和分子功能主要分别富集于表皮生长因子受体信号通路的负调控、胞质囊泡部和磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶活性等;LRIG1基因主要富集于癌症中的蛋白多糖、内吞作用、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K-AKT)信号通路、Ras相关蛋白1(RAP1)信号通路、癌症的途径和ras等肿瘤相关信号通路;LRIG1基因mRNA高表组患者的总生存期高于低表达组[(风险比(HR)=0.74,P<0.05)],而两组的无疾病进展生存期差异无统计学意义(HR=1.0,P=0.97);LRIG1蛋白在NSCLC癌旁组织的阳性表达率显著高于癌组织(P<0.05).LRIG1蛋白高表达与NSCLC患者临床分期、肿瘤大小及纵膈淋巴结转移有关(P<0.05).结论:LRIG1基因在NSCLC癌组织中低表达,并与患者肿瘤大小、淋巴结转移及总生存期有关.