目的:评价音猬因子(Shh)/胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)信号通路在睡眠剥夺致幼鼠认知功能障碍中的作用。方法:SPF级健康雄性C57BL/6小鼠48只，4周龄，体重14~16 g，采用随机数字表法分为3组( n＝16)：对照组(C组)、睡眠剥夺组(SD组)和睡眠剥夺＋Shh激动剂SAG组(SD＋SAG组)。采用多平台水环境法制备小鼠睡眠剥夺模型，每天睡眠剥夺20 h，连续10 d。SD＋SAG组于每次造模前5 min腹腔注射SAG 10 mg/kg，C组和SD组腹腔注射等量生理盐水。造模结束后随机取10只小鼠行新物体识别和Y迷宫实验，行为学实验结束后处死小鼠取海马，采用高尔基染色法测定海马CA1区树突棘密度，采用Western blot法检测Gli1和脑源性神经营养因子(BDNF)表达，采用RT-qPCR法检测Gli1和BDNF的mRNA表达。 结果:与C组比较，SD组新物体识别、Y迷宫偏好指数及海马CA1区树突棘密度降低，海马Gli1和BDNF及其mRNA表达下调( P<0.05)；与SD组比较，SD＋SAG组新物体识别、Y迷宫偏好指数及海马CA1区树突棘密度升高，海马Gli1和BDNF及其mRNA表达上调( P<0.05)。 结论:Shh/Gli1信号通路抑制，降低海马神经元突触可塑性参与了睡眠剥夺致幼鼠认知功能障碍的过程。

味觉是人类重要感官，由增龄变化、舌癌手术、放化疗等引起的味觉功能障碍可影响人生活质量，味蕾再生需求逐渐得到关注。目前，关于味觉细胞发育及更新的基础研究为味蕾再生提供了理论基础；了解味蕾再生的分子机制有助于获悉准确的作用靶点；神经再生、组织工程、细胞因子疗法等新方法试图实现味蕾的功能性再生并加速其临床转化。本文围绕舌上皮味蕾再生机制及最新的组织工程学方法进行综述，以期为味觉损伤疾病的预防和治疗提供参考，为味蕾再生提供依据。

目的:探讨神经胶质瘤相关基因同源蛋白1（GLI1）及超音刺猬蛋白（Shh）在卵巢型子宫内膜异位症（EM）恶变过程中的表达及其临床意义。方法:收集2000年4月—2018年4月在青岛大学附属医院及山东省威海市立医院行手术治疗的EM相关性卵巢上皮性癌（EAOC，即卵巢型EM恶变）患者50例（EAOC组），其年龄为（49±7）岁；另收集同期的卵巢异位子宫内膜非典型增生（aEM）患者35例（aEM组），其年龄为（44±9）岁，卵巢型EM患者50例（EM组），其年龄为（37±8）岁。实时荧光定量PCR技术及免疫组化EnVision二步法分别检测3组病变组织中GLI1、Shh mRNA和蛋白的表达，比较其在卵巢型EM恶变过程中的表达差异，分析GLI1与Shh表达的相关性，并分析GLI1及Shh表达与EAOC患者临床病理特征、预后的关系。结果:（1）实时荧光定量PCR技术检测显示，EM组、aEM组、EAOC组病变组织中GLI1 mRNA的表达水平分别为1.77±0.40、3.54±0.44、7.80±0.24，Shh mRNA的表达水平分别为0.95±0.21、3.14±0.35、5.41±0.31，EAOC组GLI1、Shh mRNA的表达水平均显著高于EM组、aEM组（ P均<0.01），EM组与aEM组分别比较，差异也均有统计学意义（ P均 <0.01）。免疫组化EnVision二步法检测显示，EM组、aEM组、EAOC组病变组织中，GLI1蛋白的高表达率分别为32%（16/50）、57%（20/35）及66%（33/50），Shh蛋白的高表达率分别为20%（10/50）、49%（17/35）、54%（27/50），3组分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.01）。EAOC组织中，GLI1 mRNA与Shh mRNA的表达呈显著正相关（ r=0.721， P<0.01），GLI1蛋白与Shh蛋白的表达也呈显著正相关（ r=0.608， P=0.001）。（2）GLI1蛋白表达与EAOC患者的血清癌抗原125（CA 125）水平、国际妇产科联盟（FIGO）分期、淋巴结转移状态、铂敏感性显著有关（ P均<0.05）；Shh蛋白表达与EAOC患者的FIGO分期、淋巴结转移状态均显著有关（ P均<0.05）。logistic回归模型多因素分析显示，FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、血清CA 125≥35 kU/L、GLI1蛋白高表达是影响EAOC患者预后的独立因素（ P均<0.05）。Kaplan-Meier法生存分析显示，在EAOC患者中，GLI1蛋白高表达、低表达患者的5年总生存率分别为12.1%、35.3%，两者比较，差异有统计学意义（ χ2 =10.73， P<0.01）；Shh蛋白高表达、低表达患者的5年总生存率为11.1%、30.4%，两者比较，差异有统计学意义（ χ2 =3.96， P=0.047）。 结论:GLI1及Shh均与卵巢型EM恶变相关，两者在促进卵巢型EM恶变方面可能有一定的作用，GLI1及Shh蛋白高表达提示EAOC患者的预后不良。

患者女性，87岁。发现左眼内眦不规则肿物7年。患者身体状况不适合行根治性手术。手术活体组织检查确诊左眼内眦基底细胞癌。患者口服HedgeHog抑制剂靶向治疗6个月，肿瘤体积减小约90%，病情改善，肿瘤稳定，持续随访。

胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)与多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的发生发展有关,而与IR相关的胰岛素信号通路异常会引起卵巢局部代谢紊乱,进而影响卵泡发育及卵子质量.PCOS卵巢颗粒细胞中胰岛素作用的经典通路,包括磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路和丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路;与炎症相关的通路包括Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路等;氧化应激相关通路包括核转录因子红系2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)途径和GTP酶免疫相关蛋白7(GTPase of immunity-associated protein 7,GIMAP7)/音猬因子(sonic hedgehog,SHH)途径;与脂质代谢相关的通路如激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)通路等.明确PCOS患者卵巢颗粒细胞中IR相关信号转导通路,增进PCOS病理生理机制的认识,进一步为PCOS的治疗提供新思路.

目的 探究微小RNA-92a(miR-92a)调控音猥因子(SHH)途径对心肌缺血再灌注(I/R)损伤后促血管再生的影响及机制.方法 从1～3 d龄SD大鼠中培养原代心肌细胞后建立心肌细胞缺氧/复氧模型,将其分成心肌细胞常氧培养组和心肌细胞I/R组.miR-92a模拟物(mimic)和拮抗剂(inhibitor)转染入大鼠原代心肌细胞,使miR-92a过表达或低表达,分成对照组、I/R组、miR-92a mimic组和miR-92a inhibitor组.细胞计数法8测 定各组细胞活力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,ELISA和QT-PCR测定血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和血管生成素1等血管新生因子表达,Western blot法测定SHH信号通路蛋白表达.结果 心肌细胞I/R组miR-92a表达显著高于心肌细胞常氧培养组(3.89±0.29 vs 1.53±0.19,P＜0.01).对照组、miR-92a inhibitor组、I/R 组和 miR-92a mimic 组 SHH 蛋白(0.57±0.13 vs 0.51±0.11 vs 0.24±0.03 vs 0.14±0.02,P＜0.01)、Smooth-ened 蛋白(0.53±0.12 vs 0.49±0.10 vs 0.14±0.04 vs 0.09±0.01,P＜0.01)、神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白 1(0.56±0.14 vs 0.50±0.13 vs 0.15±0.03 vs 0.08±0.01,P＜0.01)和神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白 2(0.58±0.11 vs 0.49±0.12 vs 0.18±0.02 vs 0.11±0.03,P＜0.01)比较差异有统计学意义.结论 miR-92a在心肌I/R损伤中异常高表达,抑制miR-92a表达可激活SHH信号通路有效促进血管再生因子表达.

目的 观察缺氧状态下人视网膜色素上皮(hRPE)细胞中音猥因子(Shh)与血管内皮生长因子(VEGF)表达的关系.方法 传代培养hRPE细胞,取对数生长期3～6代细胞用于实验.将hRPE细胞分为正常对照组、缺氧实验组及环巴明抑制组.缺氧实验组加入100 μmol/L CoCl2,环巴明抑制组于制作缺氧状态前lh加入20μnnol/L的环巴明进行预处理.3组细胞培养4、8、12、24 h.采用荧光定量聚合酶链反应检测3组hRPE细胞中Shh、VEGF mRNA表达.采用酶联免疫吸附法检测正常对照组、缺氧实验组细胞培养上清液中Shh、VEGF蛋白表达.采用Pearson相关性分析法分析缺氧实验组hRPE细胞中Shh、VEGF mRNA表达与蛋白表达之间的关系.结果 正常对照组可见少量Shh、VEGF mRNA及蛋白表达.缺氧实验组Shh、VEGFmRNA及蛋白表达较正常对照组明显增加,差异有统计学意义(F=178.364、183.732、77.456、91.572,P＜0.01).环巴明抑制组Shh、VEGF mRNA表达较缺氧实验组明显降低,差异有统计学意义(F=68.745、121.834,P＜0.01).相关性分析结果显示,缺氧实验组hRPE细胞中Shh蛋白表达与VEGF蛋白表达呈正相关(r=0.942,P＜0.05);Shh mRNA表达与VEGF mRNA表达呈正相关(r=0.970,P＜0.01).环巴明抑制组hRPE细胞中Shh mRNA表达与VEGF mRNA表达无相关性(r=0.915,P＞0.05).结论 缺氧状态下hRPE细胞中Shh与VEGF表达呈正相关.

目的 评价大鼠神经病理性痛时脊髓Sonic hedgehog (Shh)信号通路与炎症反应的关系.方法 清洁级健康雄性SD大鼠48只,8周龄,体重250～ 300 g,采用随机数字表法分为4组(n=12):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)、二甲基亚砜组(D组)和Shh信号通路特异性抑制剂环巴明组(CP组).NP组、D组和CP组采用坐骨神经分支选择性损伤法制备大鼠神经病理性痛模型.分别于造模前1d、造模后1和7d时测定机械缩足反应阈(MWT).造模候7dMWT测定结束后处死大鼠,取L4-6脊髓组织,采用Western blot法测定Shh、Patched (Ptch)、Smoothened(Smo)及锌指转录因子(Gli1)的表达;采用ELISA法测定TNF-α及IL-1μ的含量.结果 与S组比较,NP组、D组和CP组MWT降低,脊髓组织Shh、Ptch、Smo和Gli1表达上调,TNF-α和IL-13含量升高(P＜0.05);与NP组比较,CP组MWT升高,脊髓组织Shh、Ptch、Smo和Gli1表达下调,TNF-α和IL-1β含量降低(P＜0.05),D组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Shh信号通路参与大鼠神经病理性痛形成和维持的机制与抑制脊髓炎症反应有关.

目的 评价异氟醚后处理对大鼠脑缺血再灌注时血管生成的影响及Shh信号通路在其中的作用.方法 清洁级健康雄性SD大鼠32只,6～8周龄,体重220～280 g,采用随机数字表法分为4组(n=8):假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I∕R组)、异氟醚后处理组(ISO组)和异氟醚后处理+Shh信号通路特异性抑制剂环巴胺组(ISO+CYC组).采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,缺血1.5 h,再灌注24 h.再灌注24 h时,行神经功能缺陷评分,然后处死大鼠取脑组织,TTC染色法测量脑梗死体积,尼氏染色法观察病理学变化,Western blot法测定脑皮质神经胶质瘤相关癌基因同源物(Gli1)、血管内皮生长因子(VEGF)和抗人原始造血细胞抗原(CD34)的表达水平.结果 与Sham组比较,I∕R组和ISO组神经功能缺陷评分和脑梗死体积升高,脑皮质Gli1、VEGF和CD34的表达上调(P<0.05);与I∕R组比较,ISO组神经功能缺陷评分和脑梗死体积降低,脑皮质Gli1、VEGF和CD34的表达上调(P<0.05),脑组织病理学损伤减轻,ISO+CYC组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与ISO组比较,ISO+CYC组神经功能缺陷评分和脑梗死体积升高,脑皮质Gli1、VEGF和CD34的表达下调(P<0.05).结论 异氟醚后处理减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的机制与激活Shh信号通路,促进血管生成有关.

目的 评价远隔缺血预处理对大鼠再灌注性心律失常的影响及音猬因子(Shh)/胶质瘤相关癌基因同源物1 (Gli1)信号通路在其中的作用.方法 清洁级健康雄性SD大鼠40只,6～8周龄,体重220～280 g,采用随机数字表法分为4组(n=10):假手术组(Sham组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)、远隔缺血预处理组(RIPC组)和环巴胺+远隔缺血预处理组(CYC+RIPC组).采用结扎左冠状动脉左前降支30 min再灌注2h的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型.RIPC组于右侧腹股沟处以止血带阻断下肢血流10 min后,松开止血带恢复灌注30 min,随后制备心肌缺血再灌注损伤模型.CYC+RIPC组于心肌缺血前30 min腹腔注射Shh特异性抑制剂环巴胺10 mg/kg,随即进行远隔缺血预处理.记录室性心律失常发生情况.再灌注120 min时取血样,采用7600型全自动生化分析仪测定血清CK-MB和cTnI浓度.取血结束后,取缺血区心肌组织,采用ELISA法检测TNF-α含量,观察心肌组织病理学形态,采用TUNEL法确定心肌细胞凋亡指数(AI),采用免疫荧光法观察心肌组织Shh和Gli1的表达部位,采用Western blot法测定心肌组织Shh和Glil的表达水平.结果 与Sham组比较,I/R组心律失常发生率和发作次数升高,发作总时间延长,心律失常评分升高,血清cTnI和CK-MB浓度、心肌TNF-α含量及AI升高,Shh和Gli1表达上调(P＜0.05),心肌组织病理学损伤严重;与I/R组比较,RIPC组心律失常发生率和发作次数降低,发作总时间缩短,血清cTnI和CK-MB浓度、心肌TNF-α含量及AI降低,Shh和Glil表达上调(P＜0.05),心肌组织病理学损伤减轻,CYC+RIPC组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与RIPC组比较,CYC+RIPC组心律失常发生率和发作次数升高,发作总时间延长,血清cTnI和CK-MB浓度、心肌TNF-α含量及AI升高,Shh和Glil表达下调(P＜0.05).结论 远隔缺血预处理可减轻大鼠再灌注性心律失常,机制与激活Shh/Glil信号通路有关.