目的:探讨高压氧可否预防化疗相关外周神经痛(CIPNP)，同时，以脊髓大麻素受体(CBRs)为主要靶点，探讨其作用机制。方法:75只雄性SD大鼠按随机数字表法分为5组，即空白对照组、模型对照组、高压氧干预组、高压氧＋AM630组及高压氧＋AM251组，每组15只。CIPNP模型采取紫杉醇腹腔注射法建立，所有干预组从第1次紫杉醇注射开始，隔日应用高压氧干预，共5次。高压氧＋AM630组和高压氧＋AM251组于每次高压氧干预前分别给予大麻素Ⅱ型受体(CBR2)阻滞剂AM630和大麻素Ⅰ型受体(CBR1)阻滞剂AM251腹腔注射。行为学测试使用von fery纤维毛分别于实验开始前及实验期间每隔7 d测试大鼠机械缩足阈值(MWT)；应用Western blotting检测脊髓CBR1、CBR2的表达；应用免疫组化及Western blotting检测脊髓星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达；应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测脊髓炎性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果:与空白对照组相比，模型对照组MWT明显降低，差异有统计学意义( P<0.01)，实验第21天差异最明显[(15.46±2.83)g vs.( 4.33±3.53)g]，差异有统计学意义( P<0.01)；脊髓GFAP、IL-1β、TNF-α表达均明显升高，差异有统计学意义( P<0.05或 P<0.01)。与模型对照组相比，高压氧干预组MWT及脊髓CBR2均明显升高，差异有统计学意义( P<0.05)；脊髓GFAP、IL-1β、TNF-α表达均明显降低，差异有统计学意义( P<0.05)；腹腔注射AM630可逆转上述作用，而腹腔注射AM251无类似作用。 结论:高压氧可以预防紫杉醇诱导的CIPNP，其机制可能与高压氧激活脊髓CBR2，并进一步阻断脊髓胶质细胞活化及炎性细胞因子表达有关。

目的:探讨丙泊酚缓解大鼠皮下注射氯喹所致瘙痒的可能机制.方法:建立SD大鼠氯喹瘙痒模型并确定给药时间;18只皮下注射氯喹所致瘙痒模型成功的大鼠随机分为NS组、I组、P组,分别于皮下注射氯喹5 min后经颈内静脉导管注入生理盐水80 μL/kg、脂肪乳剂80 μL/kg、丙泊酚0.8 mg/kg.另随机抽取6只大鼠设为C组,于颈背部皮下和颈内静脉导管注射与其余3组同等体积生理盐水.在颈内静脉注射相应药物16 min后处死,用Western blot检测脊髓中香草素受体亚型1(TRPV1)以及大麻素受体1(CB1)受体的表达情况.结果:与NS组和I组相比,P组大鼠脊髓中TRPV1受体表达含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),而C组、NS组、I组之间差异无统计学意义;CB1受体表达水平高于C组、NS组及I组,差异有统计学意义(P<0.05),而C组、NS组、I组之间差异无统计学意义.结论:丙泊酚可明显缓解大鼠皮下注射氯喹所致瘙痒,其可能通过增加大鼠脊髓中TRPV1以及CB1受体表达发挥止痒作用.

目的:离体条件下,观察大麻素CB2受体激动剂AM1241对嘌呤P2Y受体激动剂ADPβS诱发的脊髓背角小胶质细胞P2Y12和P2Y13受体mRNA表达以及炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α释放的影响.方法:培养纯化新生SD大鼠(＜3 d)脊髓背角小胶质细胞,荧光定量PCR技术检测AM1241(10-5 mol/L,1h)对ADPβS(10-5mol/L,3h)诱发的背角小胶质细胞P2Y12和P2Y13受体mRNA表达的影响;ELISA技术检测AM1241(10-5 mol/L,1 h)对ADPβS(10-5 mol/L,3h)诱发的小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-α释放的影响.结果:与正常对照组相比,ADPβS(10q mol/L,3 h)可以刺激脊髓背角小胶质细胞P2Y12和P2Y13受体在mRNA水平表达上调(P＜0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α释放相应增加(P＜0.05).AM1241(10-5 mol/L,1h)几乎完全阻断ADPβS刺激小胶质细胞P2Y12和P2Y13受体mRNA表达上调以及IL-1β、IL-6和TNF-α释放的效应(P＜0.05);AM1241的这种抑制效应可以被CB2受体拮抗剂AM630(10-5 mol/L,1 h)反转(P＜0.05).结论:大麻素CB2受体激活可以抑制ADPβS诱发的脊髓背角小胶质细胞P2Y12和P2Y13受体mRNA水平表达上调以及IL-1β、IL-6和TNF-α释放.

目的:观察CB1受体在坐骨神经缩窄性损伤(CCI)所致的神经痛中的作用及对CCI大鼠脊髓背角HCN4通道表达的影响.方法:7 ～8周龄SD大鼠分为4组:(1)sham组(假手术组);(2)CCI组;(3)CP55940+ CCI组;(4) AM251+ CP55940+ CCI组.采用yon Frey电子测痛仪测定各组大鼠损伤侧机械缩足阈值(MWT);免疫印迹法检测损伤侧L4～L6脊髓背角HCN4的表达.结果:CCI术后1～14d大鼠MWT明显降低,呈现稳定的机械痛敏;鞘内给予大麻素受体激动剂CP55940(0.05mg/kg)可显著升高CCI大鼠MWT(P ＜0.05);预先给予CB1受体拮抗剂AM251 (0.05 mg/kg)可明显阻断CP55940的镇痛效果(P＜0.05).免疫印迹检测结果显示,CCI大鼠损伤侧L4～L6脊髓背角HCN4通道表达明显增加(P＜0.05);鞘内给予CP55940可显著降低CCI大鼠的HCN4表达(P＜0.05),CP55940抑制HCN4表达的效应可被AM251阻断(P＜0.05).结论:脊髓CB1受体激活对外周神经损伤导致的神经痛具有良好的镇痛作用,其镇痛效应可能与抑制神经痛大鼠脊髓背角HCN4通道表达有关.

β-石竹烯(BCP)是大麻素受体2型(CB2)选择性激动剂,具有广泛的生物活性,如抗炎、镇痛、神经保护、抗肿瘤、防治肝损伤等,具体表现为减少炎症过程中促炎性细胞因子形成、降低Akt、环氧化酶的蛋白表达产生抗炎作用;通过兴奋CB2受体及激活内源性阿片镇痛系统发挥镇痛作用;通过激动脊髓等中枢系统的CB受体,减轻脑缺血再灌注损伤,对神经变性疾病具有神经保护作用;对多种肿瘤细胞具有细胞毒性,能抑制肿瘤的生长转移并促进癌细胞凋亡;通过抑制肝HMG-CoA还原酶活性、下调TLR4和RAGE信号等途经减轻肝损伤、保护肝脏免受脂质损伤.BCP还具有抗糖尿病、防治骨质疏松、调节血脂等作用,且安全性较高.

目的 观察补阳还五汤对紫杉醇诱导的大鼠外周神经痛的预防作用,并以脊髓大麻素受体为主要靶点,探讨其作用机制.方法 将50只SD大鼠随机分为对照组、模型组、预防组、AM630组、AM251组,每组10只.除对照组外,其余各组于实验第1,3,5,7天分别腹腔注射紫杉醇2 mg/kg;预防组在建模的同时每天予补阳还五汤2.5 g/(kg·d)灌胃干预14 d;AM630组在预防组的基础上于每天灌胃前予3 mg/kg大麻素Ⅱ型受体(CBR2)阻滞剂AM630腹腔注射;AM251组在预防组的基础上于每天灌胃前予1.5 mg/kg大麻素Ⅰ型受体(CBR1)阻滞剂AM251腹腔注射.每7 d记录1次各组大鼠体质量,并使用von fery纤维丝测试各组大鼠机械缩足阈值(MWT),共观察28 d;实验观察28 d后使用RT-PCR检测各组大鼠脊髓组织中CBR1、CBR2、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达水平.结果 实验第7,14,21,28天,各组大鼠体质量增量比较差异均无统计学意义(P均>0.05).模型组实验第7,14,21,28天的MWT均显著低于同期对照组(P均<0.05);预防组、AM251组实验第14,21,28天的MWT均显著高于同期模型组(P均<0.05),但AM630组与模型组比较、预防组与AM251组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).模型组CBR2、CBR1、GFAP mRNA表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),IL-1β、TNF-αmRNA表达水平明显高于对照组(P均<0.05);预防组和AM251组CBR2 mRNA表达水平明显高于模型组(P均<0.05),IL-1β、TNF-αmRNA表达水平均明显低于模型组(P均<0.05);AM630组与模型组比较、预防组与AM251组比较各相关蛋白mRNA表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 补阳还五汤可以预防紫杉醇诱导的外周神经痛,机制可能与其激活脊髓CBR2,并进一步抑制脊髓IL-1β、TNF-α等炎症细胞因子的表达有关.

目的:探讨川芎嗪对急性脊髓损伤(SCI)模型大鼠基因表达的影响.方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组(A组,6只),模型组(B组,不同时间点各6只,共12只)和川芎嗪干预组(C组,不同时间点各6只,共12只).B、C组大鼠参照改良Allen's法复制急性SCI模型.造模后,C组大鼠腹腔注射川芎嗪100 mg/kg,A、B组大鼠腹腔注射等容生理盐水,每日1次,持续7 d或14 d(分别记为B7 d、B14 d组和C7 d、C14 d组).分别于造模前和造模后7、14 d对各组大鼠进行BBB评分,并行脊髓标本苏木精-伊红、尼氏染色观察;采用转录组测序技术分析A组与B组、B组与C组大鼠脊髓标本中的差异表达基因(DEGs),借助基因本体(GO)数据库和KEGG数据库进行GO和KEGG信号通路富集分析.结果:与A组比较,B组大鼠造模后7、14 d的BBB评分均显著降低(P<0.05),其脊髓组织中的神经细胞和尼氏体数量明显减少;与B组比较,C组大鼠上述时间点的BBB评分均显著升高(P<0.05),其脊髓组织中的神经细胞和尼氏体数量有所增多.A组和B7 d组、A组和B14 d组、B7 d组和C7 d组、B14 d组和C14 d组大鼠的DEGs分别有886、1404、70、66个,组间表达变化趋势相反的基因包括Ncmap、Prx、Gabrq、Gabrg2等.各组间DEGs富集的细胞部位、分子功能、生物学过程各有不同,主要涉及溶泡、溶酶体、质膜部分、同型蛋白结合、免疫应答、离子通道活性、免疫反应(A组和B组),基底外侧质膜、外脱氧核糖核酸酶活性、对干扰素γ的反应(B7 d组和C7 d组),以及细胞外区、受体调节活性、含酚化合物代谢过程(B14 d组和C14 d组)等;同时,DEGs富集于细胞因子-细胞因子受体相互作用(A组和B组),细胞黏附分子、补体和凝血级联、Hedgehog信号通路(B7 d组和C7 d组),逆行内源性大麻素信号、神经活性配体-受体相互作用、过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路、γ-氨基丁酸(GABA)能突触(B14 d组和C14 d组)等信号通路.结论:川芎嗪对急性SCI模型大鼠的保护作用可能与其参与炎症反应、免疫应答/调节、离子通道、细胞因子-细胞因子受体相互作用、神经活性配体-受体相互作用、GABA能突触活性调节等有关.

目的 观察补阳还五汤对紫杉醇(paclitaxel,PTX)诱导的大鼠外周神经痛(PTX-induced peripheral neuropathic pain,PIPNP)的治疗作用,并探究其对脊髓大麻素Ⅱ型受体(CBR2)-脊髓星形胶质细胞(GFAP)-炎症因子(TNF-α、IL-β)通路的影响.方法 将60只雄性SD大鼠平均分为对照组、模型组、治疗组和AM630组4组,每组15只.除对照组外,其余各组于实验第1、3、5、7天分别腹腔注射PTX2 mg/kg,于第14天建立稳定的外周神经痛模型.治疗组在建模后予补阳还五汤2.5 g/kg灌胃连续治疗14天.AM630组在治疗组的基础上每天于灌胃前予CBR2阻滞剂AM630腹腔注射3 mg/kg.疼痛行为学测试采用UP and Down法测试大鼠机械缩足阈值(mechanical withdraw threshold,MWT).采用免疫组化、Western Blot检测CBR2和GFAP表达情况,采用ELISA试剂盒检测脊髓炎症因子IL-1β和TNF-α蛋白含量.结果 与对照组比较,模型组MWT值显著降低(P＜0.01);与模型组比较,治疗组MWT显著增高(d20～d28,P＜0.05,P＜0.01),AM630组MWT差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,模型组CBR2表达差异无统计学意义(P＞0.05),GFAP、TNF-α、IL-β表达量均增高(P＜0.01);与模型组比较,治疗组CBR2表达量增加(P＜0.01),GFAP、TNF-α、IL-β表达量均降低(P＜0.01),AM630组以上蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 补阳还五汤可治疗PIPNP,其可通过激活CBR2并下调GFAP活化和炎症因子释放介导镇痛作用.

目的 探讨脊髓2型大麻素受体(CB2R)与小胶质细胞活化对神经病理性疼痛小鼠痛觉过敏的影响.方法 若干健康雄性C57/BL小鼠随机分为6组:假手术组、脊神经结扎(SNL)组、SNL+CB2R激动剂(AM1241)组、SNL+小胶质细胞抑制剂(米诺环素)组、SNL+CB2R小干扰RNA(siRNA)组(SNL+siRNA组)、SNL+CB2R小干扰RNA+小胶质细胞抑制剂组(SNL+siRNA+米诺环素组).采用SNL方法建立神经病理性疼痛小鼠模型.采用蛋白质印迹法检测小鼠脊髓组织中CB2R和小胶质细胞活化特异蛋白钙离子结合调节因子1(IBA-1)的蛋白表达,Von Frey纤维丝测定小鼠机械性痛阈,免疫荧光观察脊髓背角IBA-1荧光定量表达,qRT-PCR测定小鼠脊髓透析液中炎性因子释放水平,电生理技术观察CB2R激动剂对脊髓背角自发性抑制性突触后电流(sIPSC)的影响.结果 与假手术组相比,SNL组小鼠脊髓组织中CB2R表达减少(P<0.0125),痛阈降低(P<0.0167),IBA-1荧光定量和蛋白表达均增高(P均<0.0083),炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达均增加(P均<0.0083).鞘内注射CB2R激动剂AM1241或小胶质细胞抑制剂米诺环素后,与SNL组相比,SNL+AM1241、SNL+米诺环素组小鼠的痛阈均升高(P均<0.0083),IBA-1荧光定量和蛋白表达均降低(P均<0.0083),TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达均减少(P均<0.0083).siRNA靶向干扰CB2R表达后,与SNL组相比,SNL+siRNA组小鼠的痛阈降低(P<0.0083),IBA-1荧光定量和蛋白表达均增加(P均<0.0083),TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达均增加(P均<0.0083);而鞘内注射米诺环素逆转了siRNA靶向干扰CB2R表达导致的上述变化(P均<0.0083).AM1241体外干预能够增强小鼠脊髓背角sIPSC的频率和振幅,与干预前相比差异均有统计学意义(P均<0.05),而米诺环素持续处理抑制了AM1241对sIPSC的增强效应.结论 CB2R通过抑制脊髓小胶质细胞活化减轻神经炎症反应、增强抑制性电活动,减轻小鼠神经病理性疼痛的痛觉过敏.

目的:观察电针对谷氨酸钠碘乙酸(MIA)诱导的膝骨性关节炎(KOA)慢性疼痛大鼠脊髓背角CB2R及MAPK信号通路相关蛋白表达的影响,从脊髓水平探讨电针治疗KOA慢性疼痛的中枢机制.方法:选取32只SD雌性大鼠,16只左膝关节腔注射MIA法复制KOA慢性疼痛模型,分为模型组(MIA)、电针组(MIA+EA),8只左膝关节腔注射生理盐水为盐水组(Saline),另设8只健康大鼠作为空白组(Blank).MIA注射14 d后,MIA+EA组行电针干预,选取7个时间点对大鼠进行行为学评价,包括机械痛缩足阈(MWT)和大鼠热缩足潜伏期(TWL),评价模型制备情况及电针镇痛效应;ELISA检测L3-L5脊髓背角中IL-1β及TNF-ɑ含量,Western blot检测L3-L5脊髓背角CB2R及MAPK信号通路相关蛋白p-P38、p-ERK和CREB表达.结果:注射MIA 3 d后,模型组大鼠MWT和TWL较空白组显著下降(P<0.001);与模型组相比,电针干预可明显提高MWT和TWL(P<0.001).模型组脊髓背角IL-1β和TNF-α含量较空白组明显升高(P<0.01),电针可降低IL-1β和TNF-α含量(P<0.01).模型组脊髓背角CB2R蛋白表达较空白组上调(P<0.001),p-P38、p-ERK和CREB蛋白表达较空白组显著下调(P<0.01);MIA+EA组脊髓背角CB2R蛋白表达较空白组和模型组均显著上调(P<0.001),p-P38、p-ERK和CREB蛋白表达较模型组显著下调(P<0.01).结论:脊髓敏化参与MIA诱导的KOA慢性疼痛,电针抑制KOA慢性痛的脊髓机制可能与电针激活脊髓背角CB2受体抑制MAPK信号通路相关.