目的:观察抗性糊精对高脂饮食诱导的小鼠肝脏脂肪沉积及肝脏AMPK通路的影响。方法:取4周龄雄性C57BL/6小鼠36只，随机分为3组，即正常对照组，高脂饮食组和高脂饮食＋抗性糊精组(10 g·kg －1·d －1)。第12周末处死小鼠，留取血清测定三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平；留取肝脏组织，测定TG含量，并予HE和油红O染色，观察肝细胞脂肪变性和肝脏脂肪沉积；实时荧光定量PCR检测肝脏组织脂肪酸合成相关基因SREBP1、ACC、SCD1 mRNA的表达水平，Western印迹检测肝脏pAMPK、SREBP1、Fasn、ACC蛋白的表达。 结果:与正常对照组相比，高脂饮食组小鼠体重增加更显著，空腹血糖(FBG)、血清TC、LDL-C、HDL-C、ALT水平均升高( P<0.01)，血清AST也升高( P<0.05)；肝脏油红O染色可见肝脏组织脂肪沉积明显，肝脏TG含量增加( P<0.01)；SREBP1、ACC mRNA水平升高；pAMPK蛋白水平表达下降( P<0.05)。与高脂饮食组相比，抗性糊精组小鼠体重增加较少，血清TG、TC、LDL-C、HDL-C、ALT水平较低( P<0.01)，FBG降低( P<0.05)；肝脏油红O染色可见肝脏脂肪沉积减少，肝脏TG含量降低( P<0.01)；SREBP1、ACC、SCD1 mRNA水平下降；pAMPK水平增加，Fasn蛋白水平下降( P<0.01)。 结论:抗性糊精可以改善高脂饮食诱导的小鼠肝脏脂肪沉积，这一作用可能与激活AMPK通路有关。

目的:探讨血清补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白13（CTRP13）参与高糖诱导的人肝窦内皮细胞（HLSEC）滤过功能障碍的分子机制。方法:体外培养HLSEC，构建慢病毒CTRP13过表达载体（LV-CTRP13）并感染HLSEC，依据不同处理条件将细胞分为正常对照（5.5 mmol/L葡萄糖，NC）组、高糖（25 mmol/L，HG）组、NC+LV-CTRP13组、HG+LV-CTRP13组、NC+空载对照（LV-CON）组、HG+LV-CON组、HG+LV-CTRP13+盐诱导激酶1（SIK1）抑制剂（HG-9-91-01）组、HG+LV-CON+HG-9-91-01组、HG+LV-CTRP13+环磷酸腺苷调节转录共激活因子2（CRTC2）抑制剂（GW4064）组、HG+LV-CON+GW4064组。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blotting法检测CTRP13、SIK1、CRTC2、P130 Crk相关底物（P130Cas）的mRNA及蛋白表达水平。采用单因素方差分析进行组间比较。结果:与NC组相比，HG组CTRP13、SIK1、P130Cas的mRNA和蛋白表达降低，CRTC2的mRNA和蛋白表达升高（ P<0.05）。与HG+LV-CON组相比，HG+LV-CTRP13组CTRP13、SIK1、P130Cas的mRNA和蛋白表达升高，CRTC2的mRNA和蛋白表达降低（ P<0.05）。与HG+LV-CTRP13组相比，HG+LV-CTRP13+HG-9-91-01组CRTC2的mRNA和蛋白表达升高，而SIK1、P130Cas的mRNA和蛋白表达降低（ P<0.05）。与HG+LV-CTRP13组相比，HG+LV-CTRP13+GW4064组CRTC2的mRNA和蛋白表达降低，P130Cas的mRNA和蛋白表达升高（ P<0.05）。 结论:CTRP13、SIK1、CRTC2、P130Cas参与了高糖诱导的HLSEC滤过功能障碍，CTRP13过表达可以抑制高糖诱导的HLSEC滤过功能障碍，这一机制是通过SIK1/CRTC2通路实现的。

目的:探讨严重烫伤大鼠骨骼肌中腺苷一磷酸活化蛋白激酶（AMPK）的表达和磷酸化水平变化及其在严重烫伤大鼠骨骼肌萎缩中的作用。方法:采用实验研究方法。将100只6周龄雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假伤组和烫伤组，每组50只。测量2组大鼠体重后，烫伤组背部造成30%体表总面积Ⅲ度烫伤，假伤组模拟致烫伤。伤后6 h及1、3、5、7 d，每组各取10只大鼠，测量体重及趾长伸肌和比目鱼肌重量。伤后6 h及1、3、5、7 d，收集2组大鼠胫骨前肌，采用实时荧光定量反转录PCR法检测肌肉萎缩盒F蛋白（MAFbx）和肌肉特异性环指蛋白1（MuRF1）mRNA表达；采用高效液相色谱法检测腺苷一磷酸（AMP）、腺苷二磷酸和ATP含量，并计算AMP/ATP比值及能荷；采用蛋白质印迹法检测AMPK-α及磷酸化AMPK-α（p-AMPK-α）蛋白表达，并计算p-AMPK-α/AMPK-α比值；2组各时间点样本数均为4。对数据行析因设计方差分析及LSD检验。结果:伤前及伤后各时间点，2组大鼠体重相近（ P>0.05）。伤后6 h，烫伤组大鼠趾长伸肌重量为（0.107±0.007）g，明显重于假伤组的（0.086±0.007）g（ P<0.01）；伤后3 d，烫伤组大鼠趾长伸肌重量为（0.083±0.016）g，明显轻于假伤组的（0.102±0.005）g（ P<0.01）。2组大鼠伤后各时间点比目鱼肌重量相近（ P>0.05）。与假伤组比较，烫伤组大鼠伤后6 h胫骨前肌MAFbx mRNA及伤后6 h和1 d胫骨前肌MuRF1 mRNA表达明显上调（ P<0.01）。与假伤组比较，烫伤组大鼠伤后6 h和7 d胫骨前肌AMP/ATP比值明显升高（ P<0.05或 P<0.01），能荷明显下降（ P<0.01）。伤后各时间点，2组大鼠胫骨前肌AMPK-α蛋白表达相近（ P>0.05）。伤后6 h和7 d，烫伤组大鼠胫骨前肌p-AMPK-α/AMPK-α比值明显高于假伤组（ P<0.05或 P<0.01）。 结论:严重烫伤后大鼠骨骼肌能荷下降，AMP/ATP比值升高，激活AMPK；伤后早期AMPK的活化与MAFbx和MuRF1表达上调和骨骼肌重量下降一致，可能是严重烫伤大鼠骨骼肌萎缩发生的分子机制之一。

目的:观察二甲双胍（MET）是否通过激活AMP活化蛋白激酶（AMPK）来抑制转化生长因子-β 1（TGF-β 1）/Smad3信号通路，从而减轻百草枯（PQ）中毒所致小鼠肺纤维化。 方法:按随机数字表法将雄性C57BL/6J小鼠分为对照组（Control组）、PQ中毒模型组（PQ组）、MET干预组（PQ+MET组）、AMPK激动剂组（PQ+AICAR组）和AMPK抑制剂组（PQ+MET+CC组）。经腹膜腔一次性注射20 mg/kg PQ溶液1 mL建立PQ中毒小鼠模型；Control组注射等量生理盐水。制模后2 h，PQ+MET组灌胃200 mg/kg MET溶液2 mL，PQ+AICAR组经腹膜腔注射200 mg/kg腺苷类似物AICAR溶液2 mL，PQ+MET+CC组灌胃200 mg/kg MET溶液2 mL后经腹膜腔注射20 mg/kg复合物C（CC）溶液1 mL，Control组和PQ组灌胃生理盐水2 mL；均每日1次，连续干预21 d。每组取10只小鼠用于计算21 d存活率；剩余小鼠于制模后21 d麻醉取肺组织，苏木素-伊红（HE）染色和Masson染色后于光镜下观察肺组织病理学改变，并对肺纤维化程度进行Ashcroft评分；检测肺组织羟脯氨酸含量以及丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）等氧化应激指标；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肺组织E-钙黏蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、TGF-β 1、磷酸化Smad3（p-Smad3）蛋白表达。 结果:与Control组比较，PQ组小鼠21 d存活率明显降低；肺组织出现明显纤维化改变，Ashcroft评分显著升高；肺组织羟脯氨酸、MDA含量以及α-SMA、TGF-β 1、p-Smad3蛋白表达均明显升高，SOD活性以及E-cadherin、p-AMPK蛋白表达均明显降低。与PQ组比较，PQ+MET组和PQ+AICAR组小鼠21 d存活率明显提高（70%、60%比20%，均 P<0.05）；肺组织纤维化程度明显减轻，Ashcroft评分显著降低（分：1.50±0.55、2.00±0.63比6.67±0.52，均 P<0.05）；肺组织羟脯氨酸、MDA含量以及α-SMA、TGF-β 1、p-Smad3蛋白表达均明显降低〔羟脯氨酸（mg/L）：2.03±0.11、3.00±0.85比4.92±0.65，MDA（kU/g）：2.06±1.48、2.10±1.80比4.06±1.33，α-SMA/GAPDH：0.23±0.06、0.16±0.06比1.00±0.09，TGF-β 1/GAPDH：0.28±0.03、0.53±0.05比0.92±0.06，p-Smad3/GAPDH：0.52±0.04、0.69±0.06比1.11±0.10，均 P<0.05〕，SOD活性以及E-cadherin、p-AMPK蛋白表达均明显升高〔SOD（μmol/g）：39.76±1.35、33.03±1.28比20.08±1.79，E-cadherin/GAPDH：0.91±0.08、0.72±0.08比0.26±0.04，p-AMPK/GAPDH：0.62±0.04、0.60±0.01比0.20±0.04，均 P<0.05〕。而加入AMPK抑制剂CC后，MET的这些保护作用受到抑制。 结论:MET能有效减轻PQ中毒小鼠肺纤维化程度，其作用机制可能与激活AMPK并抑制TGF-β 1/Smad3信号通路相关，而这一效应可以被AMPK抑制剂CC所抑制。

目的:探讨鸢尾素(Irisin)对成骨细胞炎性反应的保护作用及其机制。方法:2018年8月至2019年4月，往小鼠成骨细胞(MC3T3-E1，购自北京北纳生物公司)加入鸢尾素预处理后，再经脂多糖(LPS)刺激。实验分为6组：对照组(Control组)、LPS(5 mg/L)、LPS＋Irisin(25 μg/L)、LPS＋Irisin(50 μg/L)、LPS＋Irisin(100 μg/L)和LPS＋Irisin(200 μg/L)组。用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖，2’，7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧自由基(ROS)含量，流式细胞术检测线粒体活性与细胞凋亡率，蛋白质印迹法(Western blot)检测单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶-α (AMPK-α)、p-AMPK-α与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达。两组比较采用 t检验，多组比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，两两比较采用LSD检验。 结果:(1)与Control组比较(0.864±0.021)，LPS组细胞增殖明显下降(0.719±0.018)，而100 μg/L(0.760±0.033)与200 μg/L(0.809±0.025) Irisin预处理组细胞增殖的明显增加( F＝23.625， P<0.05)，差异有统计学意义；(2)与Control组比较(286.600±33.448)，LPS组ROS含量显著增加(402.600±42.694)，而Irisin预处理组(25～200 μg/L)(323.400±27.437、322.600±28.325、309.000±42.936、307.800±24.045)明显抑制ROS形成( F＝6.986， P<0.01)，差异有统计学意义；(3)与Control组比较，LPS刺激后明显降低线粒体活力[(31.800±3.242)%、(15.667±1.804)%， t＝7.532， P<0.01]，细胞凋亡率显著增加[(7.610±0.229)%、(14.057±1.631)%， t＝6.777， P<0.01]，差异有统计学意义。p-AMPK-α表达显著降低[(0.546±0.178)、(0.186±0.093)， t＝6.777， P<0.01]，而Caspase-3水平明显升高[(0.212±0.031)、(0.324±0.026)， t＝4.811， P<0.01]，差异有统计学意义；(4)与LPS处理组比较，Irisin＋LPS组中MC3T3-E1线粒体活性明显升高[(10.157±0.774)%、(27.500±1.572)%， t＝17.145， P<0.01]，细胞凋亡率显著减少[(11.927±0.385)%、(7.017±1.080)%， t＝7.417， P<0.01]，p-AMPK-α表达显著升高[(0.356±0.059)、(0.551±0.044)， t＝4.567， P<0.05]，凋亡蛋白Caspase-3显著下降[(0.384±0.071)、(0.202±0.031)， t＝4.051， P<0.05]，差异均有统计学意义。 结论:Irisin抑制LPS诱导的小鼠成骨细胞凋亡，这一机制可能与激活AMPK信号有关。

目的:研究甘露聚糖结合凝集素(mannose-binding lectin, MBL)对3T3-L1脂肪细胞分化过程中自噬的调节及其机制，为靶向自噬在固有免疫上预防肥胖及相关病理改变提供可行性。方法:体外培养3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化。油红O染色分析细胞分化成熟及脂滴积累情况，CCK-8法检测不同浓度MBL(0、1、5、10 μg/ml)对不同分化阶段细胞增殖能力的影响，Western blot分析MBL(10 μg/ml)对不同分化阶段细胞自噬关键因子LC3B、Beclin1和p62蛋白的表达，油红O染色观察MBL干预下脂滴蓄积的改变，Western blot、qRT-PCR检测不同浓度MBL干预下自噬关键因子蛋白质及mRNA表达水平，基于自噬性降解的自噬流分析来进一步说明自噬活性，Western blot分析单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号分子的表达及磷酸化。结果:油红O染色结果显示经过10 d诱导的3T3-L1前脂肪细胞可达到完全分化状态；CCK-8结果表明实验组各浓度MBL(1～10 μg/ml)对不同分化阶段细胞增殖无影响；Western blot及qRT-PCR检测发现在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中，MBL处理组自噬相关蛋白及mRNA表达水平增强，并呈一定浓度依赖关系；油红O染色显示不同分化阶段脂肪细胞内脂滴在MBL干预下呈不同程度的减少；荧光显微镜检测结果进一步证实MBL通过增加自噬体的合成增强脂肪细胞自噬活性；并且在MBL干预下，AMPK的磷酸化水平明显上调，mTOR的磷酸化水平明显下调，同样呈现浓度依赖关系。结论:MBL通过AMPK/mTOR信号通路加快3T3-L1脂肪细胞分化过程中的自噬进程，降低脂质积累，为治疗肥胖及其相关代谢疾病提供了一种潜在的功能途径。

目的:观察甲基化转移酶Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白（WTAP）在缺氧/复氧（H/R）诱导的心肌细胞损伤中的调节作用及其分子机制。方法:①实验一：将H9C2心肌细胞分为空白对照组和H/R模型组。采用H/R诱导H9C2细胞建立心肌缺血/再灌注（I/R）损伤模型；空白对照组不进行处理。采用N6-甲基腺苷（m6A）RNA甲基化测定试剂盒检测m6A水平；分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测甲基化转移酶〔WTAP、甲基转移酶样蛋白（METTL3、METTL14）〕的基因和蛋白表达水平。②实验二：将H9C2心肌细胞分为空白对照组、H/R+sh-NC组、H/R+sh-WTAP组。H/R+sh-WTAP组转染sh-WTAP以敲降WTAP表达，其余各组制模方法同实验一。转染48 h后，采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用Western blotting检测WTAP、活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、活化多聚二磷酸腺苷酸核糖聚合酶（PARP）、转录激活因子4（ATF4）、蛋白激酶RNA样内质网激酶（PERK）、磷酸化PERK（p-PERK）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的蛋白表达水平；采用免疫荧光染色观察ATF4阳性表达情况。③实验三：将H9C2心肌细胞分为空白对照组、H/R+sh-NC组、H/R+sh-WTAP和H/R+sh-WTAP+ATF4组。H/R+sh-WTAP+ATF4组用过表达质粒ATF4转染H9C2心肌细胞，其余各组制模方法同实验二。采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用Western blotting检测ATF4、CHOP、活化caspase-3和活化PARP的蛋白表达水平。结果:①实验一：H/R模型组m6A甲基化水平较空白对照组显著上调。RT-qPCR检测结果显示，H/R模型组METTL3、METTL14和WTAP基因表达水平均较空白对照组显著上调，以WTAP上调最显著；Western blotting检测结果呈相同趋势。提示甲基化转移酶WTAP的表达水平在H/R诱导的心肌细胞中显著上调。②实验二：H/R+sh-WTAP组细胞凋亡水平较H/R+sh-NC组明显减少〔（14.16±1.58）%比（24.51±2.38）%， P<0.05〕。Western blotting检测结果显示，H/R+sh-WTAP组WTAP、活化caspase-3、活化PARP、p-PERK、ATF4和CHOP的蛋白表达水平均较H/R+sh-NC组显著下调。荧光显微镜下显示，H/R+sh-WTAP组ATF4阳性信号较H/R+sh-NC组显著减弱〔（19.36±1.81）%比（32.83±2.69）%， P<0.01〕。提示敲降WTAP可抑制H/R诱导的心肌细胞凋亡和内质网应激。③实验三：H/R+sh-WTAP+ATF4组细胞凋亡水平较H/R+sh-WTAP组显著增加〔（26.61±2.76）%比（17.14±0.87）%， P<0.05〕。Western blotting检测结果显示，H/R+sh-WTAP+ATF4组ATF4、CHOP、活化caspase-3和活化PARP的蛋白表达水平较H/R+sh-WTAP组显著上调。提示过表达ATF4可逆转sh-WTAP对H/R诱导的心肌细胞中内质网应激和细胞凋亡的抑制作用。 结论:甲基化转移酶WTAP可调节ATF4表达，介导细胞凋亡和内质网应激，促进H/R诱导的心肌细胞损伤。

目的:观察二甲双胍对慢性支气管哮喘(哮喘)动物模型的气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的影响及机制。方法:使用OVA致敏法制备慢性哮喘模型，末次激发48 h后处死大鼠，使用酶消化法进行ASMCs的原代分离培养。对原代培养的ASMCs的一磷酸腺苷活化的蛋白激酶α1(AMPK-α1)、S期激酶相关蛋白(SKP-2)的表达使用shRNA进行干扰，之后采用Western blot检测AMPK/mTOR通路相关蛋白的表达。结果:在原代培养的ASMCs中，二甲双胍可激活AMPK通路，能明显抑制ASMCs的增殖；雷帕霉素亦可明显抑制细胞的增殖，两者均存在明显的量效关系( P值均<0.05)。沉默AMPK基因表达后，可使ASMCs增殖增加( P<0.01)，进一步分析发现mTOR及下游的p70s6k磷酸化增加( P<0.05)，从而上调SKP-2基因表达( P<0.05)、下调P21基因表达( P<0.01)；沉默SKP-2基因表达，再干扰AMPK基因的表达，可逆转其促进细胞增殖的作用( P<0.01)。 结论:AMPK/mTOR通路对ASMCs增殖的调节是通过调节SKP2表达，进而影响P21水平实现的。二甲双胍作为AMPK的激动剂，有潜在的抑制哮喘患者气道平滑肌增生、进而改善气道重塑的作用。

AMP活化蛋白激酶（AMPK）是一种广泛存在于真核细胞生物中且进化上保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。在调控细胞能量代谢方面，AMPK作为能量代谢激酶具有极其重要的作用。当机体处于低能量状态时，AMPK对细胞内腺嘌呤核苷酸水平的变化作出反应，与一磷酸腺苷（AMP）或二磷酸腺苷（ADP）结合后被激活。激活的AMPK可调控各种代谢过程，包括脂质、葡萄糖代谢和细胞自噬。AMPK可通过磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1（mTORC1）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-失调51样激酶1（ULK1）和Ⅲ型磷脂酰肌醇3-激酶-空泡分选蛋白34（PIK3C3-VPS34）复合物中的自噬相关蛋白直接促进细胞自噬；也可通过调节叉头框蛋白O3（FOXO3）、溶酶体功能的转录因子EB（TFEB）和溴结构域蛋白4（BRD4）等转录因子下游自噬相关基因的表达间接促进细胞自噬；还可调节线粒体自噬，诱导受损的线粒体分裂，促进自噬反应向受损线粒体转移。AMPK另一个功能是调控线粒体健康，可通过刺激线粒体生物发生参与并调控线粒体内稳态的各个方面。本综述讨论了AMPK信号通道作为细胞响应能量应激和调控线粒体的中心，对线粒体生物学和内环境稳态的重要调控作用，重点介绍了AMPK在调节细胞自噬和线粒体自噬过程中的关键作用，以及调控线粒体稳态的研究进展。

自噬是真核细胞中广泛存在的一种分解代谢途径，在固有免疫和适应性免疫中发挥着重要作用，特别是在HBV感染中，自噬扮演着不可或缺的角色。因此，探究自噬与HBV感染之间的关系，寻求新的作用靶点和药物，可以促进HBV相关疾病的治疗。本文就自噬在HBV感染中的作用及研究现状作一综述。