近年来不孕妇女在体外受精-胚胎移植（ in vitro fertilization and embryo transfer，IVF-ET）支持下妊娠率提高，然而部分患者在IVF-ET后未成功妊娠，提高反复种植失败（recurrent implantation failure，RIF）妊娠率成为亟待解决的难题。人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，hCG）共培养自体外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）宫腔灌注是改善RIF患者妊娠结局的新型治疗方法，在改善子宫内膜容受性及宫内微环境中发挥重要作用。本文对hCG共培养自体PBMC宫腔灌注在RIF中的应用进行综述，旨在对改善RIF妊娠结局机制进行探讨。

目的:探讨肝癌细胞来源分泌型自噬体，即一群表达自噬标志LC3B的细胞外囊泡(LC3B + extracellular vesicles, LC3B +EVs)对CD8 +T细胞功能耗竭的影响及其作用机制。 方法:流式细胞术检测肝癌患者外周血和腹水中LC3B +EVs和PD-1 +CD8 +T细胞比例并分析二者之间的相关性；分离健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)，在αCD3/CD28和IL-2培养条件下加入LC3B +EVs或经热休克蛋白90α(heat shock protein 90α，HSP90α)封闭抗体封闭后的LC3B +EVs体外诱导培养72 h，流式细胞术检测PD-1 +CD8 +T细胞和IFN-γ +CD8 + T细胞比例以及上清中IL-2、TNF-α和IFN-γ的浓度。 结果:肝癌患者血浆和腹水中LC3B +EVs及表达HSP90α的LC3B +EVs比例显著高于健康对照组和非癌性腹水组，且与PD-1 +CD8 +T细胞耗竭比例均呈显著正相关，尤其是HSP90α +LC3B +EVs。另外，体外人肝癌细胞来源的LC3B + EVs可以诱导CD8 +T细胞耗竭，当采用HSP90α封闭抗体预封闭LC3B +EVs后，CD8 +T细胞耗竭比例显著降低。 结论:肝癌细胞来源LC3B +EVs通过膜结合型HSP90α诱导CD8 +T细胞功能耗竭。

目的:探讨宫腔灌注自体外周血单个核细胞(PBMCs)结合低分子肝素助孕治疗宫腔粘连分离术后患者的临床疗效。方法:9例宫腔粘连分离术后患者在移植前48 h进行宫腔灌注自体PBMCs，移植日始结合每日皮下注射低分子肝素3 200 IU，测量子宫内膜厚度并观察妊娠结局。结果:9例患者在宫腔灌注自体PBMCs后，发现宫内膜厚度增加，其中6例宫内膜形态较前有改善；移植后7例患者临床妊娠，1例患者生化妊娠，1例患者未妊娠；7例临床妊娠中有1例患者为宫内外复合妊娠(已进行患侧输卵管妊娠手术)，另有2例患者在妊娠第7～8周B超提示胚胎停育；9例患者中4例反复种植失败患者有3例临床妊娠。目前本组患者中2例已活产，另3例正常持续妊娠中，9例患者均未发生感染、出血、血小板减少和过敏反应等不良事件。结论:宫腔灌注人自体PBMCs结合低分子肝素有益于子宫内膜容受性的提高，可改善部分宫腔粘连分离术后患者的助孕结局。

目的:建立EB病毒转化外周血B细胞系（BCL），探索其表型特点，分泌抗体、细胞因子的能力与提呈乙型肝炎病毒（HBV）抗原肽的能力。方法:分离HBV感染者外周血单个核细胞，EB病毒上清液孵育后构建BCL，流式细胞术检测CD19、CD138、CD38、CD27表达及其产生γ干扰素、白细胞介素（IL）-10、IL-6的水平。BCL加载HBV抗原肽后与体外扩增的自体T细胞共孵育，采用胞内因子染色检测T细胞产生γ干扰素水平。采用多个相关样本Friedman检验或两相关样本Wilcoxon符号秩和检验进行统计学分析。结果:与未转化的外周血B细胞相比，BCL表达CD138、CD38、CD27水平升高，差异有统计学意义（ P < 0.05），而产生IL-6水平下降，差异有统计学意义（ P < 0.01）。加载HBV抗原肽的BCL可显著增强体外扩增的自体T细胞产生γ干扰素能力，差异有统计学意义（ P < 0.01）。 结论:BCL高表达CD138、CD38和CD27，但其产生IL-6能力下降；BCL可提高HBV特异性T细胞对HBV抗原肽的免疫应答效率，作为乙型肝炎免疫研究的新工具。

目的:探讨COBE Spectra血细胞分离机不同采集程序采集儿童自体外周血造血干细胞的效果。方法:回顾性分析苏州大学附属儿童医院2018年7月至2020年1月采用COBE Spectra血细胞分离机单个核细胞（MNC）或全自动外周血干细胞（AutoPBSC）程序采集自体外周血造血干细胞的10例患儿临床资料，年龄3~10岁，体质量15~31 kg。MNC组5例，AutoPBSC组5例。结果:共采集自体外周血造血干细胞25次，平均采集2.5次（1~4次），MNC组采集10次，AutoPBSC组采集15次。采集前干细胞数[中位数（范围）]MNC组为19.3/μl（3.5~129.0/μl），AutoPBSC组为9.4/μl（2.2~38.7/μl）；单次采集获得CD34 +细胞数MCN组为1.22×10 6/kg（0.18×10 6/kg~6.30×10 6/kg），AutoPBSC组为0.85×10 6/kg（0.13×10 6/kg~2.64×10 6/kg）。相关性分析显示，采集获得CD34 +细胞数和采集前干细胞数呈正相关（AutoPBSC组： r=0.921， P<0.01；MNC组： r=0.833， P=0.003）。采集效率MNC组为5.4%（3.4%~11.2%），AutoPBSC组为10.4%（4.7%~13.9%），差异有统计学意义（ Z=2.163， P=0.031）。 结论:COBE Spectra血细胞分离机AutoPBSC程序采集儿童自体外周血造血干细胞的效果优于MNC程序。

目的:探讨外周血造血干细胞动员过程中外周血CD34 +细胞计数的变化趋势及其对采集时机选择和采集结果的影响。 方法:收集2012年4月至2017年3月在山西省肿瘤医院行自体外周血造血干细胞动员的62例血液病患者临床资料，采用化疗联合粒细胞集落刺激因子（G-CSF）的动员方案，监测外周血及采集物中白细胞计数（WBC）、单个核细胞计数（MNC）及CD34 +细胞计数，并进行相关性分析，同时应用受试者工作特征（ROC）曲线确定最佳采集阈值。 结果:62例患者共采集136例次，获得MNC（5.66±1.11）×10 8/kg，CD34 +细胞计数（2.15±1.20）×10 6/kg。外周血CD34 +细胞计数在应用G-CSF后第4、5天达最高峰，之后呈下降趋势。产物中CD34 +细胞计数与采集当天外周血CD34 +细胞计数具有相关性（ r=0.879， P<0.01），与采集当天外周血WBC及MNC产物中MNC亦具有相关性（均 P<0.05）。应用ROC曲线得出采集当天外周血CD34 +细胞计数>23/μl为最佳采集阈值，85.2%符合阈值的患者可以一次采集成功。 结论:外周血CD34 +细胞计数的变化趋势可指导临床把握干细胞采集的最佳时机，外周血CD34 +细胞计数是预测采集产物中CD34 +细胞计数的可靠参考指标。外周血CD34 +细胞计数>23/μl可作为采集阈值。

目的:观察原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)患者外周血和肝脏浸润的自然杀伤样B(natural killer-like B, NKB)细胞变化，分析IL-18在体外对NKB细胞水平的影响和机制。方法:入组43例HCC患者和21例健康对照者(normal control, NC)，采集抗凝外周血，分离血浆和外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)，16例接受手术治疗的HCC患者，取肿瘤组织和癌旁组织，分离肝脏内淋巴细胞(intrahepatic lymphocyte, IHL)。酶联免疫吸附试验检测血浆IL-12、IL-18和IL-18结合蛋白(IL-18 binding protein, IL-18BP)水平，流式细胞术检测PBMC和IHL中CD3 -NKp46 +CD19 +NKB细胞比例和NKB细胞中IL-18 +细胞比例。使用重组人IL-18(1 ng/ml和10 ng/ml)对PBMC和IHL进行刺激培养，检测NKB细胞比例和NKB细胞中IL-18 +细胞比例变化，并检测培养上清中IL-18BP水平变化和NKB细胞中磷酸化核因子-κB(nuclear factor-κB, NF-κB)的变化。组间比较采用 t检验、单因素方差分析或LSD- t检验。 结果:血浆IL-12水平在HCC组和NC组之间的差异无统计学意义( P＝0.245)，HCC组血浆IL-18水平低于NC组[(224.30±58.89) pg/ml vs (327.00±52.27) pg/ml， P<0.000 1]，HCC组血浆IL-18BP水平高于NC组[(4.42±0.97) ng/ml vs (0.92±0.18) ng/ml， P<0.000 1]。HCC组外周血NKB细胞比例低于NC组[(2.68±1.23)% vs (8.88±2.95)%， P<0.000 1]，NKB细胞中IL-18 +细胞比例亦低于NC组[(54.42±12.60)% vs (69.74±12.65)%， P<0.000 1]。肿瘤组织IHL中NKB细胞比例低于癌旁组织[(2.89±0.86)% vs (4.66±1.17)%， P<0.000 1]，NKB细胞中IL-18 +细胞比例亦低于癌旁组织[(51.50±13.18)% vs (62.13±9.24)%， P＝0.013]。重组人IL-18刺激后培养上清中IL-18BP分泌水平降低( P<0.05)。1 ng/ml IL-18刺激对PBMC和IHL中NKB细胞比例、NKB细胞中IL-18 +细胞比例、NKB细胞中磷酸化NF-κB水平均无影响( P>0.05)，而10 ng/ml IL-18刺激不但提升NKB细胞比例和NKB细胞中IL-18 +细胞比例，还可诱导NKB细胞中磷酸化NF-κB水平升高( P<0.01)。 结论:高浓度IL-18在体外可能通过抑制HCC患者IL-18BP表达促进NF-κB磷酸化，可能发挥正反馈作用，诱导NKB细胞活化和IL-18分泌。

目的:探讨人源化B细胞成熟抗原（BCMA）嵌合抗原受体T细胞（CAR-T细胞）治疗鼠源BCMA CAR-T后疾病再进展的难治性多发性骨髓瘤（RRMM）患者临床疗效及安全性。方法:采集两例患者自体外周血单个核细胞，制备BCMA CAR-T细胞，FC方案（氟达拉滨+环磷酰胺）预处理后分别予鼠源/人源化BCMA CAR-T细胞输注。输注后监测CAR-T细胞扩增、细胞因子变化及不良反应。体外试验检测鼠源/人源化BCMA CAR-T转染效率、对MM细胞株的杀伤活力及炎症细胞因子释放水平。结果:例1及例2输注鼠源CAR-T后3个月分别为完全缓解（CR）及疾病稳定（SD）。16个月及18个月后出现疾病再进展，且例1出现髓外病变，输注人源化BCMA CAR-T细胞挽救治疗后，分别达到部分缓解（PR）及非常好的部分缓解（VGPR）的疗效，例1髓外病变4个月消失。两例患者在人源化BCMA CAR-T细胞治疗期间，CAR-T细胞体内扩增峰值、体内持续时间均较鼠源输注期间水平升高。人源化BCMA CAR-T治疗期间IL-6、IL-8、IFN-γ、IL-10及TNF-α峰值高于鼠源CAR-T峰值。两例患者输注鼠源CAR-T期间细胞因子释放综合征（CRS）均为1级，无神经系统毒性（ICANS）；人源化CAR-T治疗例1 CRS为3级，ICANS为2级，支持对症治疗后好转，例2 CRS 2级，无ICANS发生。体外试验证实48 h效靶比为1∶1时，人源化BCMA CAR-T、鼠源CAR-T细胞分别与例1、例2患者共培养，BCMA +肿瘤细胞残余比例分别为（17.38±5.18）%对（28.27±4.58）%、（13.25±1.62）%对（22.77±1.77）%，人源化BCMA-CAR-T对原代MM的细胞毒作用优于鼠源CAR-T细胞（ P<0.001），且IFN-γ、TNF-α及IL-6释放水平均高于鼠源CAR-T细胞（ P值均<0.001）。 结论:鼠源BCMA CAR-T治疗后复发进展的RRMM患者再次输注人源BCMA CAR-T可能有效且安全性可控。

目的:探究1例复发性念珠菌性颈部淋巴结炎患者的遗传学病因及抗真菌免疫功能。方法:采用二代测序技术筛查患者及父母真菌病易感基因，提取患者及6例健康对照者外周血单个核细胞（PBMC）以及中性粒细胞，与白念珠菌进行体外共培养，采用Western印迹检测患者PBMC中胱天蛋白募集域蛋白9（CARD9）表达水平，酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6、IL-17A、IL-1β和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的分泌水平，菌落计数法检测中性粒细胞处理后白念珠菌存活率。两组间均数比较采用 t检验。 结果:患者CARD9基因存在2号外显子c.68C>A（p.S23X）和6号外显子c.820dupG（p.D274Gfs*61）复合杂合突变，两突变分别来自其父母。Western印迹显示，健康对照组PBMC中CARD9蛋白相对表达水平为0.41 ± 0.07，而患者表达缺如。热灭活白念珠菌孢子刺激后，患者PBMC的TNF-α、IL-6、IL-17A、IL-1β和GM-CSF分泌水平均低于健康对照组（ P < 0.001）。体外培养30、120 min时，与患者中性粒细胞共培养的白念珠菌存活率（78.00%、74.00%）均高于健康对照（70.91% ± 1.75%、34.55% ± 5.35%），差异有统计学意义（ t值分别为3.743、6.988， P <0.05）。 结论:1例复发性念珠菌颈部淋巴结炎患者CARD9基因存在复合杂合突变，导致CARD9蛋白表达缺如，该患者存在抗白念珠菌免疫功能缺陷。

目的:分析复发/难治性急性B淋巴细胞白血病（R/R B-ALL）自体CD19嵌合抗原受体T细胞（CAR-T细胞）制备过程中，培养体系中残留白血病细胞导致CD19 CAR转入白血病细胞的特征和体外杀伤研究。方法:①收集30例接受CD19 CAR-T细胞治疗的R/R B-ALL患者及6例健康志愿者外周血单个核细胞（PBMC）；②流式细胞术分析R/R B-ALL患者PBMC经CD3磁珠分选后及体外培养过程中体系白血病细胞残留情况；③患者及健康志愿者PBMC CD3 + T细胞转染CD19 CAR及CD22 CAR慢病毒，制备CD19 CAR-T、CD22 CAR-T细胞；④复苏Nalm-6细胞株，CD19 CAR慢病毒转染Nalm-6细胞，制备CD19 CAR-Nalm-6细胞，同时转染患者原代ALL细胞；⑤流式细胞术检测转染率；⑥CCK-8法检测细胞增殖；⑦乳酸脱氢酶（LDH）法检测CD19 CAR-T、CD22 CAR-T细胞对Nalm-6细胞及CD19 CAR-Nalm-6细胞杀伤活性。 结果:①30例接受CD19 CAR-T细胞治疗的R/R B-ALL患者中，2例CD3 + T细胞中发现3.32%、2.04%的白血病细胞残留，随体外培养时间延长，在培养第4天，白血病细胞完全消失。②体外培养中CD19 CAR-Nalm-6细胞增殖率高于Nalm-6细胞。③效靶比为1∶1且共培养24、48、72 h，CD19 CAR-T细胞对Nalm-6细胞的杀伤活性高于CD19 CAR-Nalm-6细胞；与CD19 CAR-T细胞相比，CD22 CAR-T细胞对CD19 CAR-Nalm-6细胞的杀伤活性更高。④相同效靶比情况，单独应用CD22 CAR-T细胞对CD19 CAR-Nalm-6细胞的杀伤活性高于CD19 CAR-T联合CD22 CAR-T细胞。 结论:CD19 CAR-T细胞制备过程中培养体系残留白血病细胞可能会导致CD19 CAR被引入白血病细胞中而导致CD19 CAR-T细胞治疗失败，在细胞制备过程中需要检测培养体系中白血病细胞的残留情况。CD22 CAR-T细胞治疗可作为上述情况的挽救治疗措施之一。