目的:探究海风藤分级多糖(KPSP)的抗阿尔茨海默病(AD)活性.方法:采用分级醇沉制备 3 种醇沉体积分数(40%、60%、80%)的KPSP(KPSP1～KPSP3),通过苯酚-硫酸法测定KPSP的糖含量;以CL4176秀丽隐杆线虫(以下简称线虫)为模型生物,观察KPSP对线虫寿命、瘫痪情况、应激能力及体内活性氧(ROS)自由基、超氧阴离子自由基和 β 淀粉样蛋白(Aβ)含量的影响.结果:KPSP1～KPSP3 中糖质量分数分别为(57.45±0.27)%、(65.32±1.26)%、(70.26±3.53)%,结果显示最佳质量浓度下的KPSP1～KPSP3 分别使线虫寿命延长了 38.35%、42.02%和 39.13%,在一定程度上可以减缓线虫的瘫痪速率,减少线虫体内ROS、超氧阴离子自由基和Aβ含量.结论:KPSP具有较好的抗氧化活性和抗AD活性.

目的:阐明鲜冬虫夏草冷水提取物对香烟提取物(CSE)单一刺激以及复合流感病毒感染的体外抗炎作用。方法:用紫外高效液相色谱法分析鲜冬虫夏草冷水提取物核苷类成分，硫酸-苯酚法检测样品总糖含量，超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测样品SOD活力。细胞活力检测试剂盒检测CSE和鲜冬虫夏草冷水提取物对人支气管上皮细胞(16HBE)和人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)的细胞毒性；以CSE刺激16HBE细胞48 h和THP-1细胞8 h建立炎症模型，加入不同浓度(1 000、500、250 mg/L)鲜冬虫夏草冷水提取物，用定量聚合酶链反应方法检测炎症因子mRNA的表达水平。在此基础上，构建CSE刺激48 h后感染甲型流感病毒24 h的16HBE细胞模型，以相同的方法评价药物对炎症因子mRNA表达的影响。最后，利用免疫荧光技术观察鲜冬虫夏草冷水提取物对CSE刺激16HBE致黏液蛋白5AC(MUC5AC)高分泌的抑制作用。结果:(1)鲜冬虫夏草冷水提取物总核苷含量为0.423%，总糖含量为18.69%，SOD活力为14 736.5 U/ml。(2)高、中浓度鲜冬虫夏草冷水提取物对CSE刺激16HBE细胞的白细胞介素6(IL-6)mRNA表达有明显抑制活性( t值分别为6.514、5.156， P值均<0.05)，高浓度可显著抑制MUC5AC的mRNA表达( t＝8.922， P<0.05)。(3)高、中、低浓度鲜冬虫夏草冷水提取物对CSE刺激THP-1细胞的肿瘤坏死因子α的mRNA表达均有明显抑制作用( t值分别为9.549、9.616、8.573， P值均<0.05)，对IL-6的mRNA的表达也均有抑制作用( t值分别为4.458、5.399、4.151， P值均<0.05)。(4)高浓度药物干预后，MUC5AC荧光在16HBE细胞胞浆的表达明显减少。 结论:鲜冬虫夏草冷水提取物在16HBE和THP-1细胞的炎症模型中显示出较好的抗炎活性，并且可抑制16HBE气道上皮细胞MUC5AC高分泌。本研究揭示了冬虫夏草兼具潜在治疗慢性阻塞性肺疾病炎症和黏液高分泌两大病理生理特征的药用特色。

目的 制备并表征负载黄连素的同轴静电纺丝膜,评价其体外抑制牙周致病菌和生物膜的作用.方法 采用同轴静电纺丝法制备负载黄连素的聚己内酯/明胶膜(PCL/Gel-BBR)并对其进行表征检测,黄连素负载质量分数分别为0.25%、0.5%、1.0%.通过抑菌试验评价载药膜对牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis,ATCC 33277)及具核梭杆菌(F.nucleatum,ATCC 25586)增殖的抑制作用.采用结晶紫染色法、苯酚-硫酸法、菌落计数法、活/死细菌染色等综合评价载药膜对P.gingivalis和F.nucleatum双菌种生物膜的影响.采用CCK-8法和共聚焦显微镜检测载药膜的细胞毒性.结果 同轴黄连素载药膜理化性能良好且能在体外稳定释放黄连素.1.0%黄连素载药膜可以有效抑制P.gingivalis和F.nucleatum的增殖,对双菌种生物膜的形成和活性也有抑制作用,且以上效应呈现浓度依赖性.黄连素载药膜体外生物相容性良好.结论 负载黄连素的同轴静电纺丝膜具备体外抑制牙周致病菌进而抑制生物膜形成的作用,生物相容性良好,有望用于牙周药物递送以辅助牙周炎治疗或预防牙周术后感染.

目的 对白果仁止咳有效部位35％乙醇-水洗脱部位中多糖及多肽的含量进行测定,为白果仁的综合开发和质量控制提供科学依据.方法 采用苯酚-硫酸法、双缩脲法,建立标准曲线,并进行精密度、稳定性、重复性、加样回收率的考察.结果 白果仁35％乙醇-水洗脱部位中多糖和多肽均在浓度范围内有良好的线性关系,方法学验证RSD值均小于2％,加样回收率分别为97.96％、97.94％,多糖含量为13.99％,多肽含量为31.41％.结论 本研究建立的白果仁35％乙醇-水洗脱部位多糖和多肽含量测定方法简单可行,稳定性和重现性好.

目的:建立消渴平合剂中多糖和蔗糖、葡萄糖、果糖的含量测定方法.方法:采用苯酚-硫酸法测定消渴平合剂中多糖的含量;采用HPLC-ELSD法测定消渴平合剂中蔗糖、葡萄糖、果糖的含量,色谱柱为agilent Carbohydrate(4.6×250mm,5μm),流动相为乙腈-水(75∶25),流速1.0mL/min,柱温25℃,蒸发光放射检测器(ELSD):氮气流速1.6L/min,蒸发管温度80℃,漂移管温度60℃.结果:苯酚-硫酸法测定多糖经方法学考察,葡萄糖在2.61～36.54μg/mL浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系,平均回收率为100.66%;HPLC-ELSD法测定果糖、葡萄糖、蔗糖经方法学考察,蔗糖、葡萄糖、果糖分别在1.45～9.68μg、1.61～10.75μg、3.01～20.05μg的范围内呈良好的对数线性关系,蔗糖、葡萄糖、果糖的回收率分别为96.52%、97.38%、97.17%.结论:苯酚-硫酸法结合紫外分光光度法可以较为准确地测定该合剂中多糖含量;HPLC-ELSD法可同时快速准确地测定该合剂中蔗糖、葡萄糖、果糖的含量.

目的 探究巴西苏木素(brazilin,BN)抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物膜形成的机制,为开展中医药防治MRSA感染提供新思路.方法 建立MRSAATCC43300菌株生物膜模型,试验分为BN8、16和32 μg/mL组及对照组;通过结晶紫法测定BN对MRSA生物膜的抑制作用;刚果红平板法、硫酸-苯酚法检测BN对细胞间多糖黏附素(polysaccharide intercellular adhesion,PIA)合成的影响;使用real-time PCR(qRT-PCR)方法验证胞间黏附素操纵子icaA和icaD转录水平;分析高通量转录组测序可能存在的生物膜抑制基因;通过qRT-PCR、Western blot方法对相关基因及蛋白加以验证;通过皮下埋植静脉导管建立MRSA生物膜感染小鼠模型进一步验证BN疗效.结果 与对照组相比,不同浓度的BN组均能显著减少MRSA生物膜及PIA生成,其中在最低剂量8 μg/mLBN作用下,MRSA生物膜形成量下降40.17％(P＜0.01)、PIA减少55.56％(P＜0.01);通过qRT-PCR验证不同浓度的BN组均能显著抑制icaA和icaD基因的表达,其中在8 μg/mL浓度下,icaA和icaD基因的表达量分别比对照组降低了59.03％(P＜0.01)、48.33％(P＜0.05);高通量测序显示sarA下调-1.458 log2;qRT-PCR、Western blot结果显示,BN能显著抑制sarA转录及其蛋白表达;通过体内实验显示,BN能有效抑制小鼠体内MRSA生物膜的形成.结论 BN通过抑制SarA的表达,减少PIA的合成,进而干预生物膜的形成.

目的 探究生姜汁炮制前后江香薷多糖含量变化,以及对炮制前后多糖消炎止血抗氧化活性评价.方法 利用苯酚-硫酸法测定炮制前后江香薷多糖(JXRPs)和姜制江香薷多糖(JZJXRPs)的含量;体内通过构建大鼠足肿胀模型和体外内毒素(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型,采用细胞增殖法(MTT)选取最佳给药浓度,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞上清液中白介素-6(IL-6)、白介素-12(IL-12)、一氧化氮(NO)、白介素-4(IL-4)和白介素-10(IL-10)的表达来评价炮制前后多糖的抗炎作用;通过剪尾法观察小鼠的出血时间来评价其止血效果;最后,利用清除1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)和2,2'-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐(ABTS)的能力来评价其体外抗氧化活性能力.结果 生姜汁炮制前后江香薷多糖的含量分别为13％、22％;大鼠足肿胀结果显示,在注射角叉菜胶4 h后,与模型组相比,江香薷多糖在给药剂量为200 mg/kg出现显著性差异(P＜0.05),而姜制江香薷多糖在给药剂量为100 mg/kg时就可明显减轻大鼠足肿胀(P＜0.05);体外抗炎结果显示,炮制前后的多糖均能显著抑制细胞分泌IL-6、IL-12和NO(P＜0.01),促进细胞分泌IL-4和IL-10(P＜0.01),且炮制后作用更强.小鼠断尾止血实验结果表明,与正常组相比,江香薷多糖组可以加快止血效果但无显著性差异,而姜制江香薷多糖在中剂量时有显著性差异(P＜0.05),而高剂量有加快趋势但并无显著性差异;体外抗氧化活性结果显示炮制前后的江香薷多糖对DPPH和ABTS皆有不同程度的清除能力,其中江香薷多糖的IC50值分别为0.2215 mg/mL和0.2110 mg/mL,姜制江香薷多糖的IC50值分别为0.1651 mg/mL和0.1884 mg/mL.结论 江香薷经生姜汁炮制后可促进多糖的溶出,增加多糖含量;炮制后江香薷多糖消炎止血及抗氧化能力均比江香薷多糖强,可为江香薷多糖后续研究及临床应用奠定基础.

目的:以云南道地药材滇黄精为研究对象,测定不同蒸晒条件下多糖和还原糖含量的变化,确定炮制工艺后,通过秀丽隐杆线虫(以下简称线虫)自然衰老和氧化应激模型,探究其对线虫寿命、体长、应激能力和抗氧化能力的影响.方法:通过苯酚-硫酸法和 3,5-二硝基水杨酸法分别测定炮制过程中滇黄精多糖与还原糖含量的变化;建立线虫自然衰老和氧化应激等模型,观察不同给药浓度下秀丽隐杆线虫寿命、脂褐素含量、急性热应激能力、抗氧化应激能力等指标的改变.结果:滇黄精"二蒸二晒"后所含多糖和还原糖质量分数均最高,分别为4.792%和 27.040%;相较于对照组,"二蒸二晒"组卵期 8 d线虫脂褐素含量降低 24.11%(P＜0.01);选择"二蒸二晒"为滇黄精炮制工艺并提取多糖,结果显示质量浓度为 0.05、1.00、20.00 mg·mL-1 的滇黄精多糖分别使线虫寿命增长 14.62%、51.90%(P＜0.05)、12.02%(P＜0.05);8 h急性热应激条件存活率分别提高 17.63%、43.90%(P＜0.01),降低 9.01%(P＜0.05);急性氧化应激条件存活率分别提高 0.82%、42.54%(P＜0.05)、33.78%(P＜0.05).结论:滇黄精"二蒸二晒"后多糖和还原糖含量最高,是较佳的炮制工艺;滇黄精多糖可延长线虫寿命,提高其抗应激能力.

目的:制备洋葱多糖后进行抗氧化和美白功效的研究.方法:按1∶20的料液比沸水提取洋葱3 h后,冷却至室温过滤取上清液,将上清液浓缩至200 mL后缓慢加入800 mL 95%乙醇静置过夜,抽滤沉淀,冷冻干燥得洋葱粗多糖.采用硫酸-苯酚法测多糖纯度,测定不同浓度的洋葱多糖对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除能力,利用斑马鱼胚法进行美白功效的测定.结果:水提醇沉法获得洋葱粗多糖得率为7.47%,纯度为42.11%.浓度为10 mg/mL以上的洋葱粗多糖溶液具有较好的羟基自由基清除能力,清除率达74.70%以上,但洋葱粗多糖的超氧阴离子自由基清除能力效果不显著.0.5 mg/mL的样品溶液具有明显的美白功效,其黑色素生成抑制率和酪氨酸酶活性抑制率分别为95.58%、75.72%.结论:洋葱粗多糖具有一定的抗氧化和美白功效,为天然功效原料在化妆品中的应用提供了理论依据.

目的:比较南、北五味子果实多糖含量及组成成分的差异.方法:采用热水回流提取法提取南、北五味子多糖,减压浓缩,运用大孔树脂分离纯化得南北五味子总多糖.采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,采用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,采用硫酸-咔唑法测定糖醛酸含量.采用红外光谱、高效阴离子交换色谱法联用脉冲安培检测器HPAEC-PAD法初步表征南、北五味子多糖化学结构.结果:南五味子多糖出膏率为5.56%,北五味子多糖出膏率为10.6%.南五味子多糖中总糖、糖醛酸和蛋白质的含量分别为57.82%、29.1%和1.7%;北五味子多糖中总糖、糖醛酸和蛋白质含量分别为 67.07%、22.05%和0.7%.红外光谱表明南、北五味子多糖中均具有糖醛酸结构.结论:北五味子多糖提取率及总多糖、蛋白质含量高于南五味子,南五味子中糖醛酸含量高于北五味子;可根据化学成分的差异指导南、北五味子的临床使用.