目的 探究滇黄精Polygonatum kingianum传统炮制过程化学成分变化规律.方法 按照九蒸九晒法进行滇黄精炮制,应用分光光度法和HPLC测定炮制过程中总多糖、总皂苷、总多酚、总黄酮和游离氨基酸的含量.应用UPLC-MS/MS的广泛靶向代谢组学技术检测原料和炮制后的代谢产物.结果 随着炮制次数的增加,颜色逐渐加深,第3次蒸制后为深褐色,第4次至炮制结束缓慢转变为黑色.滇黄精原料具有麻味,第4蒸之后麻味消失,变为酸甜味.炮制过程中多糖和16种游离氨基酸含量降低,总皂苷、总黄酮和总多酚含量增加.广泛靶向代谢组学共检测到419个代谢物,氨基酸及其衍生物66个,脂质65个,酚酸类52个,黄酮类51个,有机酸42个,生物碱41个,核苷酸及其衍生物32个,甾体9个,木脂素和香豆素7个,异黄酮1个,萜类3个,其他类物质50个.结论 系统阐述了滇黄精九蒸九晒炮制过程中化学成分的变化,九蒸九晒对滇黄精中的化学成分影响较大,随着炮制时间的增加,氨基酸及其衍生物和生物碱类化合物的相对丰度降低,有机酸和酚酸类相对丰度增加等.该研究可为炮制滇黄精有效成分的筛选与质量评价提供参考,同时差异性成分的发现为研究滇黄精生熟饮片中差异性物质的分析提供新思路,对滇黄精的扩大开发利用有重要意义.

[目的]明确病毒侵染对滇黄精生长发育、根茎产量及品质的影响,为深入研究病毒的致病机理提供依据.[方法]以云南省滇黄精主产区曲靖和玉溪种植的4年生滇黄精田间抗病和感病植株为研究对象,比较病毒侵染后滇黄精叶绿体超微结构、叶片光合气体交换参数、叶绿素含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物氧化酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)以及块茎生物学性状和药用有效化学成分含量的变化.[结果](1)滇黄精遭受病毒侵染后,叶片细胞质中散布线状病毒粒子及其聚集形成的大量内含体,细胞内叶绿体结构严重受损,部分已发生解体;(2)感病滇黄精叶绿素发生降解,叶绿素a和b的含量分别极显著降低了 22.97％和35.38％,其叶片净光合速率、气孔导度、胞间CO2浓度分别降低了 49.75％、11.25％和5.79％,光合作用效率明显减弱;(3)感病滇黄精叶片细胞膜发生强烈的脂膜过氧化反应,MDA含量升高了 117.17％,SOD、POD、PPO、PAL活性极显著升高,其中PPO活性平均升高了 61.81％;(4)感病滇黄精地下根茎的膨大和嫩芽的生长受阻,单株鲜质量降低了49.47％,根茎中多糖的相对含量减少了 6.97％,皂苷、黄酮、总酚含量分别减少了 23.31％、15.32％、11.07％.[结论]滇黄精遭受病毒侵染后,抗氧化酶防御反应虽然被激活,但细胞膜仍严重受损,光合作用明显减弱,最终导致根茎产量和药用品质显著降低.

中药黄精为百合科、黄精属植物黄精Polygonatum sibiricum Red.、多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua或滇黄精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.的干燥根茎,用药历史悠久,性平、味甘,归脾、肺、肾经,具有养阴润肺、补脾益气、滋肾填精之功效,用于治疗肺虚燥咳、脾胃虚弱、体倦乏力、口干食少、精血不足、内热消渴等.本文对黄精的化学成分及现代药理研究进行综述,并基于其药理活性、药效物质、植物亲缘学、药材配伍、加工炮制和网络药理学等研究,预测分析了其质量标志物(quality markers,Q-marker).初步确定黄苓素、甘草素、β-谷甾醇、薯蓣皂苷元、5,4'-二羟基黄酮、3'-甲氧基大豆苷、新甘草苷和黄精多糖为黄精的质量标志物,为黄精质量控制和临床用药提供参考依据.

目的 建立DPPH法(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)黄精及炮制品抗氧化活性评价方法.方法 采用超声提取和溶剂萃取提取滇黄精及其炮制品中乙醇提取物、粗皂苷、低聚糖、粗多糖4种有效组分,考察确定DPPH法测定滇黄精抗氧化活性的最佳条件,以维生素C为阳性对照,测定比较滇黄精有效组分的抗氧化能力.结果 DPPH初始浓度为0.08 mg/mL,波长为523 nm,反应时间为60 min(或180 min)为最佳条件.滇黄精炮制后对DPPH自由基的清除率提高,各有效组分对DPPH自由基的清除率为:维生素C＞粗皂苷＞乙醇提取物＞低聚糖＞粗多糖.结论 建立的DPPH法抗氧化活性检测方法灵敏、简便、快捷,可用于滇黄精及其炮制品的质量评价.

目的:以云南道地药材滇黄精为研究对象,测定不同蒸晒条件下多糖和还原糖含量的变化,确定炮制工艺后,通过秀丽隐杆线虫(以下简称线虫)自然衰老和氧化应激模型,探究其对线虫寿命、体长、应激能力和抗氧化能力的影响.方法:通过苯酚-硫酸法和 3,5-二硝基水杨酸法分别测定炮制过程中滇黄精多糖与还原糖含量的变化;建立线虫自然衰老和氧化应激等模型,观察不同给药浓度下秀丽隐杆线虫寿命、脂褐素含量、急性热应激能力、抗氧化应激能力等指标的改变.结果:滇黄精"二蒸二晒"后所含多糖和还原糖质量分数均最高,分别为4.792%和 27.040%;相较于对照组,"二蒸二晒"组卵期 8 d线虫脂褐素含量降低 24.11%(P＜0.01);选择"二蒸二晒"为滇黄精炮制工艺并提取多糖,结果显示质量浓度为 0.05、1.00、20.00 mg·mL-1 的滇黄精多糖分别使线虫寿命增长 14.62%、51.90%(P＜0.05)、12.02%(P＜0.05);8 h急性热应激条件存活率分别提高 17.63%、43.90%(P＜0.01),降低 9.01%(P＜0.05);急性氧化应激条件存活率分别提高 0.82%、42.54%(P＜0.05)、33.78%(P＜0.05).结论:滇黄精"二蒸二晒"后多糖和还原糖含量最高,是较佳的炮制工艺;滇黄精多糖可延长线虫寿命,提高其抗应激能力.

[背景]根际微生物直接或间接影响药用植物的生长发育和品质形成,通过改善土壤理化性质来提高益生菌多样性,促进植物病虫害的生物防治和提高植物产量、品质.[目的]探究栽培土壤中添加辣椒秸秆对滇黄精生长质量和根际细菌群落结构的影响.[方法]收集种植滇黄精无处理土壤(CK)、添加腐熟辣椒秸秆改良肥土壤(X)、添加商品复合肥土壤(Y)的根际附着土样,测量滇黄精生长质量,并通过高通量测序对其根际细菌群落进行功能和结构解析.[结果]X处理的滇黄精生长质量显著优于CK处理,而且与Y处理无显著差异,其中多糖含量和根系活力明显提高,分别较 Y 处理提高了 24.48%和 56.98%.同时显著增加了种植土壤的有机质和孔隙度.在根际细菌群落分析中,相对丰度最高的是变形菌门(Proteobacteria),占比分别为CK的 34.8%、X的 34.6%、Y的 41.3%,其中Y处理显著高于其他处理.其次是绿弯菌门(Chloroflexi),X处理为 10.2%,高于CK处理(8.7%)和Y处理(5.8%).t检验中秸秆处理蓝细菌门Cyanobacteria丰度显著高于对照,芽单胞菌门(Gemmatimonadetes)和脱硫杆菌门(Desulfobacteria)显著高于化肥处理.三元相图(属水平)表明,CK处理中以Verrucomicrobium和Lysobacter丰度最高.X处理中以JG30-KF-AS9 丰度最高.Y处理中是Pseudomonas和Mitochondria丰度最高.各处理间α多样性指数无显著差异.冗余分析表明,有机质和总孔隙度是影响秸秆处理细菌群落变化的主要驱动力,clusters of orthologous groups of proteins(COG)功能预测表明秸秆处理显著提高了 COG 功能数目,其特有COG数目为 81,显著高于CK处理(3 个)和Y处理(7 个).[结论]秸秆处理提高了滇黄精生长质量,改变了根际微生物群落,使相关有益微生物显著富集.这为特定环境因子下发掘新的功能类群微生物和有益微生物介导植物对环境的响应与微生物协同机制研究起到积极作用,同时也为生产中滇黄精优质栽培提供新的见解.

黄精是中国传统的中药材,主要分布于北温带和北亚热带,广泛分布于我国南方广大地区.随着对黄精药理、药物化学及临床研究的逐步深入,黄精属植物的活性部位及有效成分的研究也为新药研发所重视.着重对黄精资源、化学成分、主要药理活性进行总结.黄精的多种化学成分,包括多糖、甾体皂苷、三萜、生物碱、木脂素、黄酮、植物甾醇等,其中多糖和甾体皂苷类成分在黄精中量较大,为其主要药效成分.在此基础上,比较黄精、滇黄精和多花黄精中的主要化学成分的差异性,为确定黄精质量标志物提供依据;并研究黄精多糖、甾体皂苷和异黄酮类化合物对主要药效的贡献.建议开展黄精质量标准和质量标志物研究,选择质优的黄精进行黄精多糖、甾体皂苷和异黄酮类化合物的定性、定量分析,为定量标准的制定提供科学数据.

[目的]探讨滇黄精对急性肺损伤模型大鼠的炎性因子及体内氧自由基的影响.[方法]50只雄性SD大鼠随机分为5组,包括正常对照组(NCG)、模型组(NMG)和滇黄精低(LLG)、中(MLG)、高剂量(HLG)实验组(5、10、15 mg/kg),每组10只.气管内滴灌脂多糖(LPS,5 mg/kg)方法建立急性肺损伤(ALI)模型大鼠,造模成功4 h后给模型大鼠腹腔注射不同浓度的滇黄精水提液,24 h后采集动脉血,检测大鼠的动脉血氧分压(PaO2)、肺泡灌洗液中炎性细胞的数量、丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)浓度以及谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性.酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)的含量.取肺部组织检测肺生理相关指标肺系数(LI)、肺含水率[(W-D)/W]以及左肺湿/干质量比(W/D),以期探讨滇黄精对急性肺损伤模型大鼠的炎性因子和氧自由基影响.[结果]与空白对照相比,模型组大鼠的LI、W/D、(W-D)/W指数低,而注射了滇黄精的实验组比模型组高(P<0.01),PaO2结果相反,这种趋势有剂量依赖性;模型组大鼠的各种炎性细胞数量比空白对照组高(P<0.01),而各实验组大鼠炎性细胞数量低于模型组(P<0.05),高剂量组数量明显低于中剂量组(P<0.05).炎性因子检测结果表明,模型鼠的IL-1β、IL-6、TGF-α水平高于空白对照组,IL-10比空白组低(P<0.05),而实验组大鼠的IL-1β、IL-6、TGF-α水平比模型组高(P<0.05),IL-10水平低于模型组,高剂量组与中剂量组相比,差异有统计学意义(P<0.01).模型组大鼠肺泡灌洗液中MDA和MPO水平明显高于空白对照组,SOD和GSH-Px活性低(P<0.05),实验组大鼠MDA、MPO水平低于模型组,SOD、GSH-Px活性明显高于模型组(P<0.05),高剂量组和中剂量组相比,差异具有统计学意义(P<0.05).[结论]中药滇黄精可以有效缓解LPS诱导急性肺损伤性大鼠的肺部损伤症状,改善炎症反应水平,减轻ALI大鼠肺组织的氧自由基损伤,而且这种效应有剂量依赖性.

目的:建立2015年版《中国药典》中3种基原黄精的多糖指纹图谱,探讨黄精基原物种多糖的差异,为黄精药材质量评价和临床应用提供参考.方法:采用水提醇沉法提取黄精药材中的多糖,经三氟乙酸(TFA)水解和1-苯基-3-甲基5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生后,采用HPLC建立3种黄精的色谱指纹图谱;并利用相似度(SA)分析,聚类分析(HCA)和主成分分析方法(PCA)对指纹图谱进行分析,研究3种基原黄精物种多糖的差异.结果:3种基原黄精的多糖PMP-HPLC指纹图谱存在差异,3个物种中均未检测到D-甘露糖,L-鼠李糖和L-岩藻糖,但均含有D-半乳糖醛酸,D-盐酸氨基葡萄糖,D-半乳糖,D-葡萄糖,D-木糖.PCA和HCA分析表明,黄精与多花黄精的多糖色谱指纹较为接近,而滇黄精与二者差异明显.结论:3种法定基原黄精物种的多糖组成存在差异,在临床应用中,应考虑物种对临床应用可能产生的影响.所建立PMP-HPLC方法简便、准确、重复性好,可用于3种黄精药材的多糖的差异研究.

目的 对滇黄精及其习用药材轮叶黄精进行多糖组织化学和含量测定研究,明确两种药材多糖的积累和分布特征,比较两者多糖含量的差异,为滇黄精及其习用品资源的挖掘和综合开发利用提供参考依据.方法 采用徒手切片法制作两种药材不同器官的横切片,利用组织化学定位方法对多糖进行定位分析.以醇提法提取根茎多糖,采用蒽酮-硫酸为显色剂、紫外-可见分光光度法测定多糖含量.结果 在两种药材不同的器官及组织中,多糖主要分布在根、根茎的皮层薄壁细胞、黏液细胞、维管束及其鞘细胞中;茎的维管束和纤维束环中;叶肉细胞及叶脉维管束中.根茎多糖分布最多,其次是叶片,根和茎中分布则较少.两种药材多糖含量差异不大,滇黄精多糖含量略高于轮叶黄精.结论 组织化学定位和蒽酮-硫酸显色法适用于研究和分析黄精类药材多糖的分布和含量测定.民间习用轮叶黄精有一定的合理性,应加强对其化学成分、安全性及疗效等方面的研究.