胰腺癌恶性程度极高，尽管近年来胰腺癌的诊治有较大进展，晚期胰腺癌患者生存期明显延长，但5年生存率仍较低，因此迫切需要更有效的治疗手段，特别是针对胰腺癌信号通路中关键分子的调控可能是治愈胰腺癌的希望所在。蛋白质翻译后修饰是调控蛋白质结构及功能的重要方式之一，通过对不同的功能基团进行加工、转运及与底物蛋白结合，影响底物蛋白的理化性质、空间构象和结合能力，从而在定位、稳定性及活性等多个方面调控底物蛋白。研究结果显示翻译后修饰在调控胰腺癌增殖、侵袭、凋亡、细胞周期、放化疗抵抗等多个方面均发挥重要作用，进一步研究其在胰腺癌发生发展中的作用，并针对性地进行干预有可能为胰腺癌治疗提供有效治疗方法。本文重点阐述翻译后修饰在胰腺癌中的作用研究现状，并展望其临床应用前景。

目的:探索结核分枝杆菌( Mycobacterium tuberculosis， Mtb)WhiB2蛋白的作用机制。 方法:构建 Mtb中pET28a-WhiB2重组表达载体，异源表达并纯化WhiB2蛋白和包涵体WhiB2蛋白；圆二色谱和核磁共振分析包涵体WhiB2与非变性WhiB2蛋白的差异；加入Fe 2+恢复WhiB2蛋白的铁硫簇；核磁谱图分析WhiB2与WhiBMtb基因上游的启动子序列相互作用；生物信息学分析其三级结构、三级结构比对和相互作用蛋白质。 结果:复性的WhiB2与非变性WhiB2的结构基本一致，在破坏了铁硫簇的WhiB2中加入Fe 2+能够成功恢复自身的铁硫簇，WhiB2可以与WhiBMtb/WhiB2Ms基因上游的启动子序列结合。 结论:Mtb WhiB2蛋白在结核病发病机制中起关键作用，为进一步探索抗 Mtb的新型靶点提供基础资料。

目的:利用汉逊酵母系统重组表达人细小病毒B19(human parvovirus B19, B19V)主要衣壳蛋白VP2，并对VP2病毒样颗粒(virus-like particles, VLP)进行理化性质研究及免疫效果评价。方法:重组表达B19V VP2蛋白，并使其自组装成VLP；通过高密度发酵和系列层析纯化步骤获得VP2-VLP；SDS-PAGE和凝胶过滤高效液相色谱检测蛋白质纯度，动态光散射和透射电镜观察颗粒形态，并检测VP2-VLP磷脂酶活性。采用ELISA和红细胞凝集抑制试验检测小鼠体内VP2-VLP特异性IgG抗体和中和抗体水平。结果:本研究制备的重组VP2-VLP纯度大于95%，颗粒均一且形态良好，大小近似天然病毒颗粒；VLP可与特异性单克隆抗体结合，磷脂酶A2活性为阴性；吸附佐剂后的VP2-VLP能够诱导小鼠产生高滴度的特异性IgG抗体和中和抗体。结论:汉逊酵母表达系统制备的B19V VP2-VLP可作为候选靶抗原用于B19V预防性疫苗的开发。

理想的支架材料可对组织器官病损进行形态、结构和功能进行重建，因此在组织工程领域受到广泛关注。天然生物材料理论和技术的迅速发展，使其逐渐成为再生医学领域的研究热点。天然生物材料具有高仿生性和良好的生物相容性，且来源广泛，非常适合用作组织工程的支架材料。按成分和原料来源大致分为蛋白质类生物材料（胶原、明胶、丝素和纤维蛋白）、糖类生物材料（纤维素、几丁质/壳聚糖、海藻酸盐和琼脂糖）、糖胺聚糖类（透明质酸、硫酸软骨素）和脱细胞基质移植物（羊膜、小肠黏膜下层、肌腱）。不同的支架材料具有独特的天然结构和理化性质。蛋白质类生物材料多通过聚合形成网状结构影响细胞迁移分化，且有一定的机械性能，可单独制成支架或配合其他合成材料使用；糖类生物材料因高比表面积可负载大量液体，但其机械性能较差，因此常被以凝胶形式控释细胞和生长因子配合其他材料应用在肌腱组织工程中；糖胺聚糖类生物材料具有抗炎、黏弹润滑以及高水合特性，多配合合成材料增加其生物相容性和亲水性。相比天然高分子材料，脱细胞基质不但具有更相仿的细胞外结构和营养成分，而且具有一定的机械性能，可对组织器官病损进行更好的形态、结构和功能重建，因此在组织工程中越来越被受到重视。不同材料的巧妙组合，使肌腱修复展现出更好的效果，也使天然生物材料具有更广阔的临床前景和应用价值。

昆虫的几丁质酶对昆虫的生长发育致关重要,是生物农药的重要靶标.本研究使用高通量测序技术对迁飞性害虫黏虫Mythimna separata的中肠和表皮组织进行了转录组测序、序列组装、功能注释及差异表达基因分析...对转录组数据库中鉴定出的几丁质酶基因进行了理化性质的预测,包括cDNA长度、蛋白质分子量、氨基酸序列、等电点、不稳定系数、跨膜结构和蛋白结构域等.使用MEGA软件构建了黏虫和其他昆虫几丁质酶的系统进化树,并通过q-PCR验证了黏虫基因在不同组织和发育阶段的表达模式.通过中肠与表皮的转录组测序,获得了19.42 Gb 的数据,在 COG、GO、KEGG、KOG、Pfam、Swissprot、eggNOG、nr 数据库注释到了25 236 个 Unigene;基因表达分析结果表明,中肠和表皮的差异表达基因共有3 137个,其中中肠高表达基因有1 872个,表皮高表达基因有1 265个.从转录组数据中鉴定出9个几丁质酶基因,其中7个是新的几丁质酶基因,这些基因的cDNA长度在1 362～9 816 bp,SMART结构预测表明几丁质酶含有1个或多个催化结构域.构建的系统进化树将昆虫几丁质酶基因分为9个亚家族.q-PCR结果表明MsCht2、MsCht5、MsCht6、MsCht7、MsIDGF1在表皮中表达量较高,MsCht4、MsCht11和MsChi-H在中肠中表达量较高,与转录组数据一致;多数几丁质酶基因在蛹期或预蛹期表达量最高,而MsCht4在5龄期表达量最高,在蛹期表达量很低.黏虫几丁质酶基因表达上存在不同的差异,不同的几丁质酶基因可能具有不同的功能.本研究筛选出了7个新的几丁质酶基因,为黏虫的生物防治提供了新的靶标.研究结果为进一步研究黏虫几丁质酶的功能奠定了基础.

[目的]油菜素唑抗性因子(brassinazole-resistant,BZR)是植物特有的转录因子,对植物的生长发育起着至关重要的作用.从甜瓜全基因组范围内鉴定CmBZR基因家族成员,分析其相关基因的表达模式,为进一步探究甜瓜BZR基因家族的生物学功能提供基础.[方法]基于甜瓜全基因组数据,通过BLAST对甜瓜BZR家族基因进行鉴定,利用生物信息学的方法分析了该家族蛋白的理化性质、基因染色体分布、基因结构、蛋白质结构域、系统进化以及启动子顺式作用元件,并利用荧光定量PCR验证BZR家族基因在甜瓜不同组织及不同生长发育时期果实中的表达情况.[结果]甜瓜中共鉴定到 6 个BZR基因,系统进化分析可将其分为 5 个亚家族,CmBZR基因分布于第 3、7、8、11 和 12 染色体上.所有的BZR蛋白质都具有保守的结构域.CmBZR基因启动子区域显著富集与生长发育、激素信号转导和非生物逆境胁迫相关的顺式作用元件.CmBEH1-4 在茎、两性花以及子房中高表达,在生长期、成熟期、呼吸跃变期和呼吸跃变后期果实中也均有表达.[结论]在全基因组范围内从甜瓜中系统鉴定出6个甜瓜CmBZR基因家族成员,不同基因在甜瓜的各个组织和不同的生长发育时期均有表达,且表达模式存在差异.

目的 克隆粉防己Stephania tetrandra苄基异喹啉类生物碱生物合成途径中的细胞色素P450 基因StCYP80G,进行生物信息学分析、表达载体构建和组织特异性表达分析.方法 设计特异性引物,从粉防己cDNA中克隆得到StCYP80G编码蛋白的基因序列;利用生物信息学在线工具预测StCYP80G蛋白的结构域、理化性质和跨膜区等分子特征;利用MEGA11.0对氨基酸进行多序列比对和系统进化关系分析;通过同源重组法构建含有 StCYP80G 基因的重组质粒;采用实时荧光定量PCR技术分析该基因在粉防己不同组织中的相对表达量.结果 StCYP80G基因开放阅读框长度为 1 458 bp,编码485 个氨基酸,蛋白质相对分子质量为 54 770,预测其具有CYP450 的保守结构域,含有跨膜结构域,可能定位在内质网上.氨基酸序列比对与系统进化树分析显示,StCYP80G 与莲 Nn CYP80G、智利桂 LsCYP80G 的序列具有同源性且一致度较高,推测StCYP80G与这 2 条序列具有相似的功能.StCYP80G基因在粉防己叶中表达量显著高于根中.质粒序列分析结果表明,重组质粒pESC-Leu-StCYP80G构建成功.结论 StCYP80G基因的克隆、生物信息学分析、重组质粒的构建、以及组织表达特异性的研究结果,为进一步探究其在苄基异喹啉类生物碱生物合成途径中的功能奠定了基础.

[目的]WRKY是植物特异性转录因子家族之一,参与植物多种生命活动,但在草莓中鲜见WRKY70相关报道.深入解析WRKY70同源基因在草莓响应胁迫过程中的作用,加快分子育种技术应用,培育新草莓种质资源.[方法]用同源克隆法从'红颜'草莓果实中克隆得到FaWRKY70基因,用生物信息学分析其保守结构域、理化性质、蛋白质结构及进化关系等,并结合qRT-PCR数据进行表达模式分析.[结果]FaWRKY70基因全长1 020 bp,编码339个氨基酸;同源基因比对发现,FaWRKY70与苹果、牡丹等同科物种氨基酸序列相似度较高,且同源基因多与植物对生物、非生物胁迫响应相关,暗示FaWRKY70可能参与草莓抵御胁迫的过程;FaWRKY70在草莓不同器官中均有表达,且差异显著,在花中表达量最高,在果实中最低;水杨酸处理后,FaWRKY70基因快速响应,表达量在3 h后达到最高,随后逐渐降低;茉莉酸甲酯处理后FaWRKY70基因受诱导响应程度小,整体呈下调趋势.[结论]FaWRKY70能通过不同响应方式参与草莓生命活动及激素信号转导过程.

目的 研究人CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding proteins,C/EBP β)原核表达载体的构建和蛋白表达,并通过生物信息学分析其结构和生物学功能.方法 收集对数生长期的肝癌细胞SMMC-7721,通过TRIzol法提取SMMC-7721细胞内总RNA,并以RNA为模板采用RT-PCR获得C/EBP β基因的编码序列,通过同源重组的方法将目的基因与原核表达质粒pET-28a(+)相连接,经过大肠杆菌转化、抗性筛选、质粒提取、酶切和DNA测序获得重组质粒pET-28a(+)-C/EBPβ.将重组质粒导入大肠杆菌BL21中,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogal,IPTG)诱导C/EBP β重组蛋白表达,采用镍离子亲和层析法纯化C/EBP β融合蛋白,通过蛋白免疫印迹验证目的蛋白并分析C/EBP β的蛋白纯度.同时对人C/EBP β编码的蛋白质进行理化性质、亲水/疏水性、二级结构以及磷酸化位点等生物信息学分析.结果 通过RT-PCR成功获得人C/EBP β基因,构建的pET-28a(+)-C/EBP β重组质粒经测序鉴定C/EBP β DNA序列完全正确,表明重组pET-28a(+)-C/EBPβ质粒构建成功.C/EBP β蛋白是一个性质不稳定的亲水蛋白质,由345个氨基酸组成,分子量为36.105 kD,等电点为8.55.其是一种胞内蛋白质,主要分布在细胞质和细胞核.对其结构分析发现:无规则卷曲是其主要的二级结构,为60.87％.蛋白免疫印迹结果显示通过亲和层析纯化后获得较高纯度的C/EBP β.结论 本实验成功克隆并构建人pET-28a(+)-C/EBP β重组质粒,获得较高纯度的C/EBP β,为进一步C/EBP β蛋白功能的研究和抗体的制备奠定了良好的基础.

超氧化物歧化酶(SOD)在植物细胞中广泛存在,主要分为Mn-SOD,Fe-SOD以及Cu/Zn-SOD 3大类,它们可以在细胞中发挥不同的防御作用,增强植物的耐受力.此外在蓝细胞和海洋生物中存在的Ni-SOD有待探究.该研究根据SOD所包含金属离子的不同对其理化性质和作用机制进行分析;阐述了在干旱、盐碱、冷害等胁迫下SOD在植物中发挥的作用,并对该酶在未来植物生长发育进程中的作用进行展望,为有关逆境环境下植物生长发育机制的研究提供参考.