目的:研究粉防己碱(TET)对微波辐射致纹状体损伤的治疗作用及其机制。方法:以40只C57BL/6N小鼠为实验对象，采用随机数表法将小鼠分为空白对照组(C)、辐射对照组(R)、TET组(TET)和TET+辐射组(TET+R)，每组10只。接受辐射小鼠采用2.856 GHz、8 mW/cm 2微波全身辐射15 min，建立微波辐射纹状体损伤的动物模型。接受TET给药小鼠给予腹腔注射TET(60 mg/kg)，1次/d，连续3 d。采用紫外分光光度法验证TET结构。利用旷场实验，检测小鼠焦虑情绪。通过光镜和透射电镜观察纹状体组织病理学和超微结构变化。采用实时荧光定量聚合酶联反应(qPCR)检测各组小鼠纹状体电压门控钙通道(VGCC)亚型基因表达改变。 结果:微波辐射后，小鼠探索中央区域时间、路程均较辐射前明显降低( t＝4.60、5.18， P<0.01)，TET给药后显著改善( F＝1.43、4.37， P<0.05)。辐射后7 d，可见纹状体部分神经元核固缩、深染，以苍白球区(GP)较为明显。部分神经元凋亡，胶质细胞线粒体肿胀、空化，突触间隙模糊，血管周隙增宽。TET给药后上述病变均明显改善。微波辐射及TET给药对纹状体VGCC各亚型基因表达均无显著影响( P>0.05)。 结论:TET对微波辐射致小鼠焦虑样行为及纹状体组织结构损伤均具有一定治疗作用，其作用机制与纹状体VGCC基因表达无关。

目的:研究粉防己碱是否可以联合cGAMP作为cGAMP的激动剂增强cGAS-STING信号通路，从而探究粉防己碱的抗病毒功能。方法:采用不同浓度的粉防己碱联合cGAMP分别处理THP1-Lucia-ISRE及RAW-Lucia-ISRE细胞，荧光素酶报告试验探究IRF3免疫应答水平；Western blot检测cGAS-STING信号通路激活情况；实时荧光定量PCR检测IFN-β、CXCL10及CCL5的mRNA表达水平；ELISA检测IFN-β表达情况。构建稳定表达STING-GFP基因的HeLa细胞(HeLa-STNG-GFP)，粉防己碱联合cGAMP处理该细胞后，观察STING-GFP点聚集现象。Ⅰ型疱疹病毒(herpes simplex virus type 1，HSV-1)感染THP1-Lucia-ISG细胞，粉防己碱联合cGAMP处理细胞，Western blot及荧光强度探究粉防己碱的抗病毒能力。结果:粉防己碱能够增强cGAMP介导的IRF3免疫应答，与cGAMP联用可激活cGAS-STING信号通路。粉防己碱联合cGAMP处理HeLa-STNG-GFP细胞后，观察到明显的STING-GFP点聚集现象。对感染HSV-1的THP1-Lucia-ISG细胞进行粉防己碱联合cGAMP孵育，HSV-1病毒滴度、HSV-糖蛋白D/UL30的表达及HSV-GFP荧光强度均显著下降。结论:粉防己碱联合cGAMP可激活cGAS-STING信号通路从而增强宿主的抗病毒反应。

目的 克隆粉防己Stephania tetrandra苄基异喹啉类生物碱生物合成途径中的细胞色素P450 基因StCYP80G,进行生物信息学分析、表达载体构建和组织特异性表达分析.方法 设计特异性引物,从粉防己cDNA中克隆得到StCYP80G编码蛋白的基因序列;利用生物信息学在线工具预测StCYP80G蛋白的结构域、理化性质和跨膜区等分子特征;利用MEGA11.0对氨基酸进行多序列比对和系统进化关系分析;通过同源重组法构建含有 StCYP80G 基因的重组质粒;采用实时荧光定量PCR技术分析该基因在粉防己不同组织中的相对表达量.结果 StCYP80G基因开放阅读框长度为 1 458 bp,编码485 个氨基酸,蛋白质相对分子质量为 54 770,预测其具有CYP450 的保守结构域,含有跨膜结构域,可能定位在内质网上.氨基酸序列比对与系统进化树分析显示,StCYP80G 与莲 Nn CYP80G、智利桂 LsCYP80G 的序列具有同源性且一致度较高,推测StCYP80G与这 2 条序列具有相似的功能.StCYP80G基因在粉防己叶中表达量显著高于根中.质粒序列分析结果表明,重组质粒pESC-Leu-StCYP80G构建成功.结论 StCYP80G基因的克隆、生物信息学分析、重组质粒的构建、以及组织表达特异性的研究结果,为进一步探究其在苄基异喹啉类生物碱生物合成途径中的功能奠定了基础.

目的:研究电压门控钾离子通道Kv10.1在宫颈癌中的表达,探讨Kv10.1特异性抑制剂粉防己碱(tetrandrine,TET)单独或与顺铂(cisplatin,DDP)联合使用对宫颈癌细胞生长抑制的作用及可能的分子机制.方法:免疫组化检测宫颈癌及正常宫颈组织中Kv10.1蛋白的表达情况.不同浓度的TET、DDP单药或联合处理宫颈癌SiHa细胞24 h后,采用MTT法检测各组细胞的增殖能力,采用流式细胞技术检测细胞周期,采用Western Blot法检测各组细胞中Eag1及PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达水平.向TET组与对照组加入PI3K激动剂740Y-P,采用细胞克隆技术检测细胞生长情况,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力,采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用实时荧光定量PCR检测细胞Kv10.1表达水平,并进行统计学分析.结果:Kv10.1在宫颈癌组织中的表达明显高于正常宫颈组织,两者差异具有统计学意义(P＜0.05),TET、DDP单药及双药联合组均能抑制SiHa细胞的增殖,促进细胞凋亡,其效应呈浓度依赖性,以联合用药组效果最为显著(P＜0.05).Western Blot显示TET单药可降低Kv10.1、p-PI3K和p-Akt蛋白表达,与DDP联合作用后效果更显著(P＜0.05);与TET组相比,TET+740Y-P组克隆、侵袭、迁移细胞数量及Kv10.1表达水平均明显增高(P＜0.05);与740Y-P组相比,TET+740Y-P组克隆、侵袭、迁移细胞数量及Kv10.1表达水平明显下降(P＜0.05).结论:Kv10.1在宫颈癌组织中的表达显著上调,提示其可能与宫颈癌的发生发展相关.Kv10.1特异性抑制剂TET可抑制PI3K/Akt信号通路,下调Kv10.1,从而提高宫颈癌细胞对顺铂治疗的敏感性,为宫颈癌治疗中DDP的减毒增效提供策略.

目的:探讨中药防己有效成分—粉防己碱(tetrandrine,Tet)改善大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hem-orrhage,SAH)后早期脑损伤(early brain injury,EBI)的氧化应激反应的作用机制.方法:36 只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、粉防己碱组(Tet组),颅内血管内穿刺法建立SAH模型,Tet组术后腹腔注射Tet(20 mg/kg).测定各组SAH出血量评分、神经功能缺陷评分和脑含水量.尼氏染色和HE染色观察脑皮质区神经元的形态和数量,透射电镜观察脑组织线粒体结构变化.生化法检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量.结果:与Sham组相比,Model组镜下脑组织损伤加重,脑含水量、ROS和MDA水平升高,神经功能缺陷评分、SOD、GSH-Px水平降低(P＜0.05);相较Model组,Tet组镜下脑组织损伤减轻,脑含水量、ROS和MDA水平降低,神经功能缺陷评分、SOD、GSH-Px水平升高(P＜0.05).结论:中药防己有效成分—Tet可以抑制氧化应激反应,对大鼠SAH后早期脑损伤发挥保护作用.

[目的]探究舒肌汤治疗帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠肌张力障碍的最佳配伍比例.[方法]采用6-羟基多巴胺诱导制备大鼠PD肌张力障碍模型,以正交试验法设计实验,随机分为模型组(等体积0.9%氯化钠溶液)、舒肌汤1-16组[按L16(215)正交试验表配伍比例给药],同时设假手术组(等体积0.9%氯化钠溶液)作为对照,给药1次/d,连续28 d.采用步进试验、悬挂试验和异常不自主运动量(abnormal involuntary movement,AIM)评分检测行为学表现;透射电镜观察膈肌神经接头超微结构变化;免疫组织化学检测脑组织酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达水平.[结果]正交试验结果显示,舒肌汤最佳配伍组方为舒肌汤4组即厚朴:青风藤:粉防己:毛叶轮环藤:山梗菜(1:1:2:2:1).与假手术组比较,模型组大鼠调整步数显著下降,潜伏期和AIM评分显著升高(P<0.01);与模型组比较,舒肌汤组大鼠调整步数均显著升高、潜伏期和AIM评分均显著降低(P<0.01),其中舒肌汤4组作用效果最明显(P<0.01).透射电镜观察显示,舒肌汤可减少突触前膜囊泡、线粒体数目和突触后膜褶皱,减轻神经元结构损伤.免疫组化显示,与模型组比较,舒肌汤组大鼠TH蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),其中舒肌汤4组的TH蛋白表达水平最高(P<0.01).[结论]舒肌汤治疗PD大鼠肌张力障碍的最佳配伍比例是厚朴:青风藤:粉防己:毛叶轮环藤:山梗菜=1:1:2:2:1.

目的 探究粉防己碱上调人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)表达对逆转肝细胞癌细胞顺铂耐药的作用.方法 将Huh7/DDP细胞分为空白对照组、NC组、a组、b组.空白对照组不接受任何处理,仅用正常培养基培养;NC组在正常培养基中加入16 μmol·L-1顺铂;a组在正常培养基中加入16 μmol·L-1顺铂,添加5 μmol·L-1粉防己碱;b组在正常培养基中加入16 μmol·L-1顺铂,并添加5 μmol·L-1粉防己碱,同时过表达PTEN.用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法评估细胞存活率,用免疫荧光法检测PTEN基因的表达情况,以及多药耐药相关蛋白(MRP)-3和MRP-5的表达情况.结果 空白对照组、NC组、a组和b组的细胞存活率分别为(98.74±9.26)％、(55.08±6.38)％、(35.17±4.87)％和(24.06±4.16)％,PTEN 表达水平分别为 1.00±0.13、1.03±0.13、1.58±0.17 和 2.18±0.24,MRP-3 蛋白表达水平分别为1.00±0.08、1.03±0.14、0.71±0.07 和0.48±0.04,MRP-5 蛋白表达水平分别为 1.00±0.11、0.97±0.12、0.63±0.07 和 0.40±0.05.空白对照组的上述指标与NC组比较,a组的上述指标与b组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 粉防己碱通过上调PTEN表达来逆转肝细胞癌细胞顺铂耐药的作用,并发现其能抑制耐药相关蛋白MRP-3和MRP-5的表达.

目的 痛舒方为治疗痛经的临床常用方,为了提高治疗效果,本研究将该散剂改良为凝胶膏剂,并考察其体外透皮吸收性能,为其开发和利用提供科学依据.方法 建立综合评分标准,结合单因素实验与响应面法确定凝胶膏剂的基质用量.进行体外透皮实验,以延胡索乙素、芍药苷、粉防己碱、乌药醚内酯为评价指标,考察加入不同比例氮酮促渗剂对凝胶膏剂体外透皮渗透量的影响.结果 痛舒凝胶膏剂基质的最优处方为聚丙烯酸钠0.50 g、甘氨酸铝0.1 g、保湿剂8.00 g(甘油∶丙二醇=8∶2)、酒石酸0.1 g、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、明胶1.75g(CMC-Na∶明胶=1∶3),体外透皮吸收实验结果表明,透皮促渗剂比例为3％时药物透皮效果最好.结论 用最优处方制备的痛舒凝胶膏剂,具有骨架型缓释制剂的特性,为痛舒方外用新剂型的开发奠定了基础.

目的 比较防己黄芪汤中活性成分在大鼠体内的药动学行为,并研究防己黄芪汤及其主要入血成分粉防己碱抑制刀豆球蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导T淋巴细胞增殖的作用机制.方法 采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测大鼠ig不同剂量防己黄芪汤及粉防己碱后,入血成分在不同时间点的血药浓度,并分析其药动学行为.采用MTT法和3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测防己黄芪汤对T淋巴细胞毒性及增殖的抑制作用;采用ELISA法测定上清液中白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、IL-2、γ-干扰素(γ-interferon,IFN-γ)水平;采用流式细胞仪检测调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)数量.结果 防己黄芪汤在大鼠体内主要入血成分为防己诺林碱、木兰花碱、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、黄芪甲苷、甘草次酸和粉防己碱.除防己诺林碱外,其他6个成分在体内的吸收具有剂量相关性.粉防己碱、防己诺林碱和甘草次酸在体内吸收速率慢,消除速率慢,驻留时间长[平均滞留时间(MRT)＞10 h、清除率(CL)＜8 L/(h·kg)];木兰花碱、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和甘草苷在体内具有吸收和消除速度快、体内驻留时间短的特点[达峰时间(tmax)＜1 h、MRT＜5.2 h、CL＞50U(h·kg)].与单一成分给药相比,防己黄芪汤中的粉防己碱的吸收程度明显增加,而消除速率明显降低.防己黄芪汤可以抑制T淋巴细胞的增殖,还可降低细胞上清液中促炎因子IL-2、IL-17和IFN-γ水平(P＜0.05、0.01),增加Treg的分化数量(P＜0.05、0.01),防己黄芪汤主要入血成分之一粉防己碱可降低细胞上清液中IL-17水平并增加Treg分化数量(P＜0.05、0.01).结论 君药防己和黄芪的特征成分是防己黄芪汤的主要入血成分;君药防己含有的粉防己碱与防己黄芪汤中其他成分存在协同作用.防己黄芪汤可抑制T淋巴细胞的增殖,其作用机制可能是通过调节Treg的增殖分化过程,使激活的免疫反应受到影响,而防己黄芪汤中的粉防己碱可能起到重要作用.

尘肺病是我国最严重的职业病,其防治措施一直受到广泛关注.尘肺病是肺组织结构破坏、肺功能受损的间质纤维化性疾病.汉防己甲素(粉防己碱)和尼达尼布有明确延缓尘肺病纤维化进展的作用,因此应该重视尘肺病尤其快进型矽肺的抗纤维化治疗.全面健康管理,早期开展抗纤维化治疗,积极预防和治疗肺结核等并发症及合并症,定期康复治疗和训练,尘肺病患者基本可以保持正常的生活质量和相对健全的社会活动能力.