目的 评价北豆根配方颗粒质量.方法 制备 15 批标准汤剂和 3 批配方颗粒,测定出膏率及木兰花碱、蝙蝠葛苏林碱、蝙蝠葛碱含量、转移率,建立HPLC特征图谱,聚类分析进行化学模式识别.结果 3 批配方颗粒出膏率为15.1%～16.6%,木兰花碱、蝙蝠葛苏林碱、蝙蝠葛碱含量分别为18.93～19.39、9.42～9.60、6.79～6.85 mg/g,三者从饮片到配方颗粒的转移率分别为 34.42%～35.25%、43.81%～44.65%、27.27%～27.51%;特征图谱中有 7 个特征峰,相似度均大于 0.95,与标准汤剂一致性良好,并符合相关限度要求.15 批标准汤剂聚为 2 类,吉林、河北、山东产药材可用于配方颗粒制备.结论 该方法合理可靠,可为北豆根配方颗粒质量控制、临床应用提供参考.

目的:研究蝙蝠葛Menispermum dauricum DC.根茎中的化学成分及其生物活性.方法:运用各种正、反相色谱技术对蝙蝠葛根茎的醇提物进行分离纯化,通过各种波谱学手段鉴定化合物结构,并对其进行细胞毒活性测试和抗炎活性评价.结果:从蝙蝠葛根茎 95%乙醇提取物中分离得到 10 个生物碱,分别鉴定为:6-acetyl-5,6-di-hydro-1,2-dimethoxy-4H-dibenzo[de,g]-quinoline(1)、sinotumine G(2)、齐兰西夫林碱(3)、amurolin(4)、木兰花碱(5)、N-demethyl-N-formyldehydronuciferine(6)、thalifoline(7)、O-甲基黄堇碱(8)、pecrassipine B(9)、O-甲基蝙蝠葛碱(10).活性筛选结果表明,化合物 1、4、7 有一定活性.结论:化合物 1 为新天然产物,化合物 2、3 为首次从该属植物中分离得到.化合物 4 对MCF-7细胞、SMMC-7721 细胞有抑制作用,化合物 7 对 5 种人癌细胞有抑制作用.化合物 1 一定程度上可抑制LPS诱导RAW264.7 巨噬细胞释放NO,具有一定的抗炎作用.

目的 探讨蝙蝠葛苏林碱(DAS)对胶质瘤U251和U87细胞生长与增殖的影响及其分子机制.方法 用2.5、5.0和10.0 μmol/L DAS(DAS组)、10.0 μmol/L替莫唑胺(TMZ组)和空白对照(对照组)处理U251和U87细胞.采用CCK-8法检测DAS对细胞活力的影响,细胞集落形成和Edu实验检测DAS对细胞增殖的影响,流式细胞术检测DAS对细胞凋亡的影响,透射电镜观察自噬小体的形成,Western blotting检测DAS对胶质瘤细胞凋亡、自噬和Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响.结果 CCK-8结果显示,与对照组比较,不同浓度DAS组胶质瘤细胞活力逐渐降低(P<0.05),DAS组细胞活力低于TMZ组(P<0.05).胶质瘤U251和U87细胞IC50分别为5.11 μmol/L和6.35 μmol/L.Edu和克隆结果显示,DAS能抑制胶质瘤细胞增殖,且随着药物浓度升高细胞增殖逐渐减少(P<0.05).流式细胞术结果显示,DAS能诱导胶质瘤细胞凋亡,且随着药物浓度升高细胞凋亡增加(P<0.05).DAS能增加胶质瘤细胞Bax、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、p-AKT、p-mTOR蛋白相对表达量(P<0.05),降低抗凋亡Bcl-2蛋白相对表达量(P<0.05).透射电镜结果显示,DAS能增加胶质瘤细胞中自噬囊泡(P<0.05).结论 DAS可以抑制胶质瘤细胞活力与增殖,并促进胶质瘤细胞凋亡,这可能与DAS激活Akt/mTOR信号通路抑制自噬有关.

在全面阐述胰腺癌中医病因病机及中药单体概念的基础上,总结了大黄素、大黄酸、穿心莲内酯、雷公藤甲素、蝙蝠葛酚性碱等中药单体在胰腺癌肿瘤抑制中的作用,认为其作用是发挥具体机制,包括干扰胰腺癌细胞及干细胞中多个异常信号通路、靶基因等,这能为中药治疗胰腺癌的临床应用及研究提供参考.

胰腺癌是最具破坏性的恶性肿瘤之一,其发病机制复杂,与遗传易感性、慢性胰腺炎、信号通路基因突变等因素密切相关.磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路是经典的癌症信号通路,在胰腺癌细胞中被异常激活.近年来研究发现,中药单体在胰腺癌治疗中表现出特殊活性,是治疗胰腺癌的潜在药物.本文基于PI3K/Akt信号通路总结中药单体干预胰腺癌的作用机制发现,生物碱类(如青藤碱、白鲜碱、蝙蝠葛碱等)、萜类(如柴胡皂苷A、乌药内酯、异土木香内酯等)、酚类(如6-姜酮酚、姜黄素、紫檀芪等)、黄酮类(如非瑟酮、山柰酚、槲皮素等)、醌酮类(β-羟基异戊酰紫草素、大黄酸、赤芝酮等)中药单体,可通过抑制PI3K/Akt信号通路,抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移,调节自噬和凋亡,进而抑制胰腺癌的病理进程.

目的 对洋紫荆Bauhinia variegate的化学成分进行研究.方法 综合利用Sephadex LH-20、Chromatorex C18、Diaion HP20SS等柱色谱分离技术进行分离纯化,并综合应用HR-ESI-MS、NMR、ECD等多种波谱方法鉴定化合物结构.结果 从洋紫荆花的甲醇提取物中分离得到8个化合物,分别鉴定为4,6-二羟基亚环己基乙腈-8-β-D-葡萄糖苷(1)、L-色氨酸(2)、咖啡酸甲酯(3)、对羟基苯甲酸β-D-吡喃葡萄糖酯苷(4)、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(5)、山柰酚-3-O-β-芸香苷(6)、山柰酚-5-O-[α-L-鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷](7)、kaempferol 3-O-β-glucopyranosyl(1 →2)[α-rhamnopyranosyl(1 →6)]-β-glucopyranoside(8).结论 化合物1为新化合物,命名为蝙蝠葛氰苷G,化合物2～6、8为首次从洋紫荆中分离得到.

目的 探讨蝙蝠葛酚性碱(PAMD)灌胃对大鼠脑缺血再灌注损伤的预防作用及其机制.方法 将36只大鼠随机分为假手术组、模型组、PAMD组,每组12只.PAMD组先每日给予50 mg/kg的PAMD灌胃1周,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃.PAMD组和模型组采用大脑中动脉线栓法制作局灶性脑缺血模型,持续栓塞2 h后再灌注4 h.假手术组不栓塞大脑中动脉.各组均采用Zea Longa 6级评分法行神经功能损伤评分;取各组再灌注侧脑组织行2,3,5-氯化三苯基四氢唑(TTC)染色观察脑梗死情况并测算脑梗死体积.采用Western blotting法检测各组再灌注脑皮层组织中的N-甲基-D-门冬氨酸受体调节亚基NR2B和磷酸化的NR2B(p-NR2B).结果 PAMD组、模型组、假手术组神经功能损伤评分分别为(0.84 ±0.26)、(2.41 ±0.72)、0分.PAMD组、模型组神经功能损伤评分高于假手术组(P均<0.05),PAMD组神经功能损伤评分低于模型组(P<0.05).肉眼可观察到模型组、PAMD组再灌注侧有不同程度的梗死灶,对侧无梗死灶,梗死区域与大脑中动脉所支配的脑区一致.PAMD组、模型组缺血再灌注侧脑梗死体积大于假手术组(P均<0.05);PAMD组再灌注侧脑梗死体积小于模型组(P<0.05).PAMD组、模型组、假手术组再灌注侧脑皮质NR2B相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05).PAMD组、模型组再灌注侧脑皮质p-NR2B相对表达量高于假手术组(P均<0.05),PAMD组再灌注侧脑皮质p-NR2B相对表达量低于模型组(P<0.05).结论 PAMD灌胃对大鼠脑缺血再灌注损伤有预防作用;其机制可能与抑制NR2B磷酸化有关.

目的:了解汗衣台抗HBV有效成分及对HepG2.2.15细胞HBVcccDNA和HBVDNA的影响.方法:对汗衣台分离提取及HPLC-ESI-MS/MS测定,发现6种含量较高的有效成分:古伦宾、异古伦宾、掌叶防己碱、蝙蝠葛碱、非洲防已碱、药根碱.予各有效成分标准品不同浓度作用于2.2.15细胞,孵育9天,取上清ELISA法测定HBsAg和HBeAg含量;荧光定量PCR法检测HBVDNA;提取细胞总DNA并以PSAD醇消化后选择性荧光定量PCR法检测HBVcccDNA;后两者抑制率做相关性分析.结果:全部浓度的异古伦宾(10～ 160μ mol/L)、非洲防己碱(10 ～ 160μmol/L)、蝙蝠葛碱(0.25 ～ 10μmol/L)、药根碱(20 ～ 320μmol/L)以及40～160μmol/L浓度的古伦宾、50～ 400μmol/L掌叶防己碱对HBsAg有明显抑制作用,40～ 160μ mol/L浓度非洲防己碱、5μmol/L蝙蝠葛碱、80～320μmol/L药根碱及200～400μmoL/L的掌叶防己碱对HBeAg有明显抑制作用;全部浓度的异古伦宾、药根碱,20～160μmol/L的古伦宾、160μmol/L非洲防己碱及400μmol/L浓度掌叶防己碱、5～10μmol/L蝙蝠葛碱对HBVDNA具有抑制作用,抑制率均不高;所有有效成分在较低浓度以上对HBVcccDNA均具有抑制作用,抑制率普遍较高,呈剂量依赖性,160 μmol/L的非洲防己碱抑制率39.55％超过干扰素21.44％,200μmol/L的掌叶防己碱抑制率29.55％超过干扰素及拉米夫定24.6％;HBVDNA与HB-VcccDNA相关性比较情况复杂,趋势一致但程度差异较大.结论:汗衣台6种主要成分均具有不同程度的抗HBV作用,均可视为抗HBV的有效成分.6种有效成分不同程度抑制HBVDNA复制,对HBVcccDNA的抑制呈剂量依赖性;上清HBVDNA检测并不能完全代表细胞内HBVcccDNA情况.

目的:探讨蝙蝠葛苏林碱(DS)对人胚肾细胞(HEK293)上表达的L-型钙通道Cav1.2的作用.方法:采用脂质体转染法,将L-型钙通道Cav1.2蛋白基因转染到HEK293细胞上,全细胞膜片钳技术记录L-型钙电流ICav1.2,观察DS对L-型钙通道电生理特性的影响.结果:DS在1,3,10 μmol·L-1浓度范围内呈浓度依赖性抑制ICav1.2电流,其抑制率分别为(14.68 ± 4.02)%、(32.37 ± 6.63)% 和(59.63 ± 5.23)%;3 μmol·L-1的DS对ICav1.2的抑制率与相同浓度的伊拉地平比较,其抑制强度约为伊拉地平的40%.结论:DS可浓度依赖性抑制HEK293细胞上表达的Cav1.2,其作用强度比特异性L-型钙通道阻断药伊拉地平要弱.

目的:基于网络药理学筛选中药葛根抗高脂蛋白血症的活性成分,预测葛根抗高脂蛋白血症的潜在作用靶点及信号通路,探讨其作用机制.方法:采用TCM数据库收集葛根的化学成分;采用Drugbank数据库基于结构相似性原理,筛选与葛根药效分子结构相似的药物,并预测其作用靶点;采用OMIM数据库筛选高脂蛋白血症的相关蛋白.借助STRING数据库和Cytoscape 3.6.0软件构建疾病蛋白-靶点网络、药物活性成分-靶点-疾病蛋白网络.通过网络拓扑分析和聚类分析法预测葛根治疗高脂蛋白血症的关键蛋白.通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)对靶点进行通路富集分析,预测葛根抗高脂蛋白血症的关键信号通路.结果:葛根抗高脂蛋白血症的主要活性成分有7种,即4-甲氧基葛根素、黄豆苷、大豆黄素4'-7二葡萄糖苷、蝙蝠葛碱、γ-谷甾醇和甲基对羟基肉桂.葛根治疗高血蛋白脂症有20个潜在作用靶点,即酪氨酸蛋白激酶(Src)、核因子κB(NF-κB)、过氧化物体增殖物激活受体(PPARs)、雌激素受体α(Esr1)、芳香烃受体(AHR)、载脂蛋白A(APOAⅠ、APOAⅡ、APOAⅤ)、载脂蛋白B(APOB)、载脂蛋白C(APOCⅠ、APOCⅡ)、载脂蛋白E(APOE)、低密度脂蛋白受体(LDLR)、脂蛋白脂肪酶(LPL)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、溶血磷脂酸(LPA)、糖基磷脂酰肌醇高密度脂蛋白结合蛋白1(GPIHBP1)、纤维蛋白原A(FGA)、细胞色素P450(Cyp158A2)和雄激素受体(AR).KEGG通路有8条,主要是PPAR信号转导通路.结论:采用网络药理学筛选出葛根治疗高脂蛋白血症的7种可能的药效分子,通过活性成分-靶点-疾病网络特征分析,得到20个潜在治疗靶点和8条相关通路,借此预测葛根可能通过PPARs、AR、LDLR等受体和相关蛋白调节胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白(LDL)的代谢,以发挥抗高脂蛋白血症的作用.