目的:利用生物信息学方法筛选外阴鳞状细胞癌(VSCC)的关键基因及分析免疫浸润特征.方法:从GEO数据库中下载VSCC相关基因表达数据,应用差异表达基因(DEGs)分析和加权基因共表达网络分析筛选出共同的DEGs,对DEGs进行富集分析.采用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白互作(PPI)网络,并通过4种算法筛选出关键基因,进行关键基因GSEA分析.应用CIBERSORT分析VSCC相关免疫细胞浸润特征及关键基因与免疫细胞的相关性.结果:共筛选出182个DEGs,DO富集主要涉及生殖器官良性肿瘤、结缔组织癌等疾病;GO和KEGG富集结果主要与表皮发育、角质化包膜、氧化应激、免疫细胞迁移等有关;PPI网络中有65个节点,90条边,筛选出6个关键基因,S100A7、SPRR2B、SPRR2G、CASP14、CDSN、ESR1,共同富集到了细胞周期、蛋白酶体信号通路.免疫浸润分析结果显示,与对照组相比,VSCC组初始B细胞、静息CD4+T记忆细胞下调(均P＜0.05),记忆B细胞、调节性T细胞、活化的NK细胞、巨噬细胞M0型、静息肥大细胞、活化的肥大细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞上调(均P＜0.05).Spearman相关性分析显示,S100A 7、SPRR2G、CASP14、CDSN均与γδT细胞呈负相关(均P＜0.05),与巨噬细胞M0型呈正相关(均P＜0.05);ESR1与巨噬细胞M0型呈负相关(P＜0.05),与静息CD4+T记忆细胞呈正相关(P＜0.05);S100A7、CASP14 与静息 CD4+T 记忆细胞呈负相关(均 P＜0.05);SPRR2G、CDSN 与 CD8+T 细胞呈负相关(均 P＜0.05).结论:S100A7、SPRR2B、SPRR2G、CASP14、CDSN、ESR1可能是VSCC潜在的生物标志物,长期慢性炎症刺激导致表皮终末分化过程异常可能是VSCC发生、发展的关键因素.

目的 探讨血清血管内皮生长因子(VEGF)及肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)]水平与肺癌患者临床分期的关系.方法 选取112例肺癌患者作为观察组,87例健康体检者作为对照组,比较两组受试者、不同临床分期肺癌患者血清VEGF、CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1水平.相关性分析采用Spearman分析;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估VEGF、CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1单独及联合检测对肺癌患者临床分期的诊断效能.结果 观察组患者血清VEGF、CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).Ⅲ～Ⅳ期肺癌患者血清VEGF、CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1水平均明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P＜0.01).ROC曲线显示,VEGF、CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1联合检测诊断肺癌患者临床分期的AUC为0.952(95％CI:0.915～0.989),均高于各指标单独检测,此时的灵敏度为0.862,特异度为0.926.血清VEGF、CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1与肺癌患者的临床分期均呈正相关(P＜0.05).结论 肺癌患者血清VEGF、CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1水平均明显升高,各指标联合检测对肺癌患者的临床分期有较高的诊断价值,且与临床分期均呈正相关.

目的 探讨克唑替尼胶囊联合长春瑞滨+顺铂(NP)方案治疗晚期非小细胞肺癌患者的疗效.方法 将104例晚期非小细胞肺癌患者根据治疗方式的不同分为NP组(n=51)和克唑替尼组(n=53).NP组患者采取NP方案治疗,克唑替尼组患者在NP组的基础上联合克唑替尼胶囊治疗.比较两组患者疗效、血清肿瘤标志物、免疫功能指标及不良反应发生情况.结果 克唑替尼组患者总有效率明显高于NP组,差异有统计学意义(P＜0.01).治疗后,两组患者癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CY-FRA21-1)水平均较治疗前降低,且克唑替尼组患者NSE、CEA、CYFRA21-1水平均低于NP组,差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗后,两组患者CD3+、CD4+水平均较治疗前升高,CD8+水平均较治疗前降低,且克唑替尼组患者CD3+、CD4+、CD8+水平均高于NP组,差异均有统计学意义(P＜0.05).两组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 克唑替尼胶囊联合NP方案可提高晚期非小细胞肺癌患者临床疗效,降低血清肿瘤标志物水平,改善患者免疫功能,且不增加不良反应.

目的 探寻芪银三两三验方核心用药组成的分子作用机制,通过网络药理学分析,构建"芪银三两三-药物有效成分-关键性作用靶点-靶向药相关性皮疹对应靶点"的可视化网络关系.方法 基于中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、中药作用机制在线分析系统(BATMAN-TCM),对芪银三两三验方核心用药的作用成分和有效靶点进行筛选,通过核心复方靶点垂钓,提取复方中的生物学活性成分及有效靶点.通过药物不良反应靶点分类系统(ADReCS-Target)得到靶向药相关性皮疹对应靶点.通过STRING数据库构建蛋白质相互作用可视化网络图(PPI),并应用Cytoscape3.8.2软件进行网络拓扑分析,筛选关键性作用靶点.采用DAVID v6.8数据库对关键性靶点进行通路富集,预测芪银三两三验方中核心用药组成可能的分子生物学机制.结果 经检索得到核心处方中有效生物学活性成分118种,潜在预测靶点328个,靶向药相关性皮疹对应靶点214个,将二者相互匹配得到核心处方有效成分-靶向药相关性皮疹共同作用靶点86个,其中包括8个关键性靶点;复方对210个生物学过程及81条信号通路能产生重要影响.结论 芪银三两三验方治疗靶向药相关性皮疹的潜在作用机制,可能是通过PI3K-Akt信号通路及细胞因子-细胞因子受体相互作用等信号转导,调节角质层细胞增殖与分化,修复EGFR-TKI引起的皮肤损伤,这为今后的药物研发及相关临床研究提供了参考方向.

目的 探讨猪脱细胞真皮基质(pADM)联合羧甲基纤维素钠(CMC)对角质形成细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响.方法 体外建立大鼠毛囊角质形成细胞系,实验分组:A组(空白对照)、B 组(2％CMC)、C 组(5％pAD)、D 组(5％pADM+2％CMC).细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组凝胶对角质形成细胞的活力影响.Transwell实验检测角质形成细胞的迁移能力.聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测各组EMT相关蛋白的表达变化.两组间比较采用非配对t检验,多组间比较采用单因素方差分析.结果 CCK-8实验结果显示,D组角质形成细胞活力最强(A:100.00±8.70、B:124.10±8.10、C:130.40±7.30、D:152.30±5.50),各组间比较差异有统计学意义(F=189.2,P＜0.01).Transwell实验中,各组迁移的角质形成细胞数分别为,A组为(95.889±8.638)个、B 组为(149.556±7.091)个、C 组为(172.778±7.710)个、D 组为(236.667±9.695个;与A组比较,各组间比较差异有统计学意义(F=354.9,P＜0.01),其中D组角质形成细胞迁移数最多.PCR结果显示,D组角蛋白10(CK10)、波形蛋白(Vim)及锌指蛋白(Snail)表达量最多,分别为4.69、4.25、4.52(F=125.3、146.8、100.3,P＜0.05),而 CK14 表达量最低(0.18,F=96.5,P＜0.05),差异均有统计学意义.Westem blot结果显示,D组CK10、Vim及Snail蛋白表达量最多,分别为 0.43、0.54、0.69(F=187.5、168.9、151.3,P＜0.05),而 CK14 蛋白表达量最低(0.10,F=167.4,P＜0.05),差异有统计学意义.结论 pADM及CMC均可改善角质形成细胞生物学活性,pPADM联合CMC可促进CK10、Vim及Snail的表达,并抑制CK14的表达.

目的 研究 TLR4 与 miR-21-5p 对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的影响及两者的靶向关系.方法 通过免疫组化法检测皮肤鳞状细胞癌组织中的TLR4 表达,通过Toll样受体4(TLR4)质粒和miR-21-5p inhibitor转染过表达细胞中的TLR4 和抑制细胞中miR-21-5p,通过生物信息学分析TLR4 与miR-21-5p的关系,通过RT-qPCR检测细胞中TLR4 和miR-21-5p的表达,通过CCK8 检测A431 细胞生长情况,通过Western bloting检测细胞中TLR4 和增殖分子ki-67 的表达.结果 TLR4 在皮肤鳞状细胞癌癌旁组织中表达最高,且在低分化组织中表达低于高分化组织,差异有统计学意义(P<0.05),TLR4 在A431 人皮肤鳞状细胞癌细胞中表达低于HaCaT人永生化角质形成细胞,差异有统计学意义(P<0.05).miR-21-5p可能是TLR4 的潜在miRNA靶基因.A431 细胞过表达TLR4,发现细胞增殖抑制,差异有统计学意义(P<0.05),miR-21-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).A431 细胞抑制miR-21-5p表达,发现细胞增殖抑制,差异有统计学意义(P<0.05),TLR4 表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-21-5p与TLR4 的相互调节影响A431 细胞的增殖,miR-21-5p与TLR4 的相互作用在皮肤鳞状细胞癌的细胞行为中发挥重要作用.

目的:构建早老蛋白增强子2（PSENEN）基因沉默的人永生化角质形成细胞（HaCaT）模型，探究PSENEN基因表达下调对HaCaT细胞增殖以及γ分泌酶表达的影响。方法:设计3组靶向PSENEN基因的shRNA序列，与线性化的LV3-pGLV-h1-GFP-puro载体构建慢病毒重组表达质粒，经酶切及测序鉴定后，进行慢病毒的包装、纯化和滴度测定。将HaCaT细胞分为5组进行转染：shRNA1组、shRNA2组、shRNA3组分别加入含沉默PSENEN基因的shRNA1、shRNA2、shRNA3慢病毒原液，NC组加入含阴性对照shNC慢病毒原液，空白组不加病毒液。转染完成后，荧光显微镜下观察荧光表达，流式细胞仪检测转染效率。CCK8法测定HaCaT细胞增殖活性，实时荧光定量PCR（qPCR）、Western印迹法分别检测PSENEN、呆蛋白（NCT）、早老蛋白1（PS1）、前咽缺陷蛋白1a（APH1a）mRNA、蛋白的相对表达量。统计分析采用重复测量方差分析、单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:倒置荧光显微镜下观察到shRNA1~shRNA3组、NC组均有荧光表达，流式细胞仪示转染效率均达98%以上。qPCR、Western印迹法显示，与NC组（1.054 ± 0.272、1.076 ± 0.075）相比，shRNA1、shRNA2、shRNA3组PSENEN mRNA（0.187 ± 0.010、0.163 ± 0.022、0.174 ± 0.009）、蛋白（0.219 ± 0.097、0.208 ± 0.014、0.185 ± 0.062）表达均显著降低（均 P < 0.001）。CCK8法显示，与NC组相比，shRNA1组细胞增殖活性在0、12、36、48 h均显著增高（均 P < 0.05），24和60 h差异无统计学意义（均 P > 0.05）；shRNA2、shRNA3组在0、12、24、36、48、60 h细胞增殖水平均显著高于NC组（均 P < 0.05）。shRNA1组、shRNA2组、shRNA3组、NC组、空白组间NCT、PS1、APH1a基因mRNA表达差异无统计学意义（ F值分别为8.168、4.644、1.981，均 P > 0.05），mNCT、imNCT、PS1-CTF、APH1a蛋白相对表达差异有统计学意义（ F值分别为39.268、5.929、27.842、20.663，均 P ≤ 0.01）。与NC组相比，shRNA1、shRNA2、shRNA3组mNCT、PS1-CTF、APH1a蛋白表达均显著降低（均 P < 0.01），imNCT蛋白表达变化无统计学意义（均 P > 0.05）。 结论:成功构建了PSENEN基因沉默的HaCaT细胞模型，PSENEN基因沉默会引起HaCaT细胞增殖活性增强，γ分泌酶其他亚基蛋白含量下降。

皮肤衰老是一种自然发展的过程，长期紫外线照射，会加速皮肤衰老，引起光老化。外泌体是一种具有双层磷脂膜结构，包含蛋白质、DNA、RNA、脂质等多种生物活性成分的囊泡，这些生物活性成分作用于皮肤组织可发挥抗皮肤衰老作用。概述来源不同外泌体通过抑制氧化应激、细胞凋亡、DNA损伤、炎症反应，下调MAPK/AP-1信号通路，上调TGF-β/Smad信号通路，促进成纤维细胞和角质形成细胞的增殖和迁移，减少黑色素过度生成，增强血管再生能力等方面抗皮肤衰老的研究进展。

目的:观察口服小分子胶原蛋白肽，对面部皮肤年轻化的有效性及安全性。方法:2018年11月至2019年2月，北京友谊医院皮肤科门诊纳入66名女性健康志愿者，年龄35～50(42.89±4.44)岁，随机分为试验组和对照组，每组各33名。试验组口服素颜新季胶原蛋白肽；对照组口服肽多健胶原蛋白粉，两组均为每天5 g，共12周。于口服前，服用后1、2、4、12周用VISIA皮肤检测仪采集图像及CK多功能皮肤测试仪采集数据，同时记录志愿者整体满意度及不良反应。结果:61名志愿者完成本研究。口服胶原蛋白12周后，两组较口服前角质层含水量均有增加(65.41±10.60比59.82±9.26)，经皮失水量、皱纹、纹理、毛孔、红色区、紫质均有减少(19.19±4.24比21.50±5.10; 7.38±3.67比8.98±6.67; 5.55±3.07比6.60±4.84; 16.94±9.30比17.95±8.85; 21.92±4.60比22.11±5.34; 10.31±7.03比11.62±8.58)，口服前后7项观察指标比较，差异有统计学意义( P<0.05)。试验组与对照组相比，角质层含水量差异有统计学意义( t＝2.317， P＝0.024)，余6项指标组间差异虽无统计学意义，但试验组改善程度均优于对照组。斑点、紫外线色斑、棕色斑3项指标，两组口服前后比较，差异均无统计学意义。口服12周后试验组与对照组满意度分别为86.67%、61.29%，差异有统计学意义( χ2＝5.074， P＝0.024)。两组不良反应发生率比较，差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:口服小分子胶原蛋白肽效果优于胶原蛋白粉，可改善皮肤纹理，保湿，志愿者满意度高，是面部年轻化的手段之一。

目的:研究含有金盏花提取物的温和倍护防晒乳对儿童皮肤日晒的防护效果、安全性及耐受性。方法:2022年7 - 8月以首都医科大学附属北京儿童医院为中心招募健康儿童，采用单中心、随机、平行对照临床研究方法，入组3 ~ < 18岁健康儿童200例，按照1∶1的比例随机分为A组（左侧涂抹试验品、右侧涂抹对照品）或B组（右侧涂抹试验品、左侧涂抹对照品），涂抹后进行阳光暴露活动，在阳光暴露前后对颞部、上臂伸侧和前臂伸侧部位进行皮肤测试评估。试验品为含有金盏花提取物的温和倍护防晒乳[防晒系数（SPF）50+，长波紫外线防晒系数（PA）++++]，对照品为含有甘草提取物的婴儿防晒霜（SPF35，PA++）。采用双侧差异量表评估日晒后症状，采用红斑评分评估晒后红斑情况，采用MPA10多功能皮肤测试平台检测评估部位黑色素及红斑值、含水量及经表皮失水量（TEWL）。观察记录相关不良事件。计量资料比较采用配对 t检验或Wilcoxon配对样本秩和检验，计数资料比较采用卡方检验（Fisher精确检验）。 结果:198例受试者完成研究及访视，男100例（50.5%），女98例（49.5%）；年龄3 ~ 17（8.11 ± 0.23）岁，A组、B组各99例。颞部、前臂伸侧和上臂伸侧日晒后对照侧症状更明显的受试者例数多于试验品侧（颞部：11例比4例，上臂伸侧：16例比2例，前臂伸侧：33例比3例），两侧频次差异均有统计学意义（均 P < 0.001）。3个测试区域试验侧和对照侧红斑评分差异均无统计学意义（ P > 0.05）。上臂和前臂部试验侧日晒后与日晒前黑色素值差值（3.57 ± 2.41、1.74 ± 1.68）均低于对照侧（9.50 ± 2.21、8.13 ± 1.87），颞部、上臂和前臂部试验侧日晒后与日晒前角质层含水量差值[7.72（-2.19，19.44）、9.56 ± 1.37、9.05 ± 1.37]均高于对照侧[-3.25（-13.54，9.94）、3.63 ± 1.32、3.73 ± 1.31]，差异有统计学意义（均 P < 0.001）。3个测试区域试验侧和对照侧日晒后与日晒前红斑值、TEWL差值差异均无统计学意义（ P > 0.05）。研究期间1例（0.51%）的对照侧发生一过性荨麻疹，无严重不良事件发生。 结论:含金盏花提取物的温和倍护防晒乳对3 ~ < 18岁健康儿童日晒后黑化的防护优于对照品，且耐受性较好，不良反应发生率低。