磁分离是从生物样本中富集特定目标物的常用方法.传统特异性磁分离方法一般通过将抗体与磁珠偶联获得免疫磁珠的方式用于特定目标物的捕获,但由于抗体有成本高、捕获目标物后不易释放等缺点,免疫磁珠难以满足众多研究领域对同时满足目标物大批量、高特异性富集的需求.核酸适配体同抗体一样具备目标物高特异性捕获的能力,相较抗体具有制备成本低、结构简单和化学稳定性高等优点,更适合用来大批量、高特异性富集特定目标物,因此在本研究中,本文利用石墨烯对单链和双链核酸的吸附能力不同的特性,以CD63适配体为例设计了一套可以将适配体展示于石墨烯表面并用于捕获、富集和释放目标物的方法.该设计主要包括2个单元,一是可以贴附于石墨烯表面并将CD63适配体展示于石墨烯外的双链寡核苷酸支架,二是采用与支架足部序列互补的单链寡核苷酸,将所捕获的目标物从石墨烯表面解吸附.本研究首先以氧化石墨烯(GO)纸为石墨烯界面,通过对支架或CD63蛋白等进行荧光标记,并对比支架释放前后及CD63蛋白捕获前后GO纸表面荧光强度变化表示其支架释放效果与CD63蛋白捕释情况,随后应用氨基修饰的石墨烯壳铁氮磁珠搭载CD63适配体双链支架,用于捕获细胞裂解液中CD63蛋白.结果表明,该支架可以将适配体展示于石墨烯表面捕获CD63蛋白并可以可控释放,使用挑选的改性石墨烯磁珠搭载该适配体双链支架,可以用于细胞裂解液中CD63蛋白的捕获.该方法有望实现多种蛋白质的特异性富集或通过捕获外泌体膜蛋白而富集外泌体等多种用途.

目的 研究小鼠下肢缺血再灌注损伤(IRI)时小檗碱对骨骼肌及肾脏中UCP2表达及线粒体动力学的影响.方法 将30只雄性昆明小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组及低、中、高剂量小檗碱干预组(n=6).各实验组小鼠使用止血带构建双下肢缺血再灌注损伤模型,并腹腔注射不同剂量的小檗碱溶液,阳性对照组使用生理盐水替代.使用苏木素-伊红(HE)染色检测骨骼肌、肾脏病理情况,PCR及Western blot检测线粒体解偶联蛋白2(UCP2)、线粒体分裂蛋白1(FIS1)、线粒体动力蛋白相关蛋白1(DRP1)、线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)的基因和蛋白表达水平,并检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的变化.结果 当小鼠下肢缺血再灌注损伤后,骨骼肌、肾脏均出现炎性细胞浸润,骨骼肌的细胞结构出现损伤性变化;同时,骨骼肌中UCP2、FIS1、DRP1的基因和蛋白表达水平及GSH、SOD水平明显升高(P<0.05),Mfn1、Mfn2的基因和蛋白表达水平及MDA水平明显降低(P<0.05),肾脏中UCP2、DRP1的基因与蛋白表达上升存在差异性(P<0.05).小檗碱可上调UCP2在骨骼肌的基因表达,以及在肾脏中的蛋白表达(P<0.05),同时,DRP1的基因和蛋白水平在肾组织中受到明显抑制(P<0.05),而在骨骼肌中无明显变化.结论 小鼠下肢缺血再灌注损伤导致受损部位出现剧烈的氧化应激损伤,线粒体动力学失衡,并引起肾脏的炎性损害.小檗碱对骨骼肌、肾脏IRI的治疗作用可能是通过抑制氧化应激损伤,其中对肾脏的保护作用还可能与上调UCP2后抑制DRP1表达从而限制线粒体分裂、减缓损伤发展有关.

目的:探究不同妊娠时期棕色脂肪组织(brown adipose tissue，BAT)的基因表达及代谢能力变化。方法:建立C57BL/6J小鼠正常妊娠动物模型，以同周龄未妊娠小鼠为对照组，观察妊娠各时期BAT组织形态变化，检测产热标志物解偶联蛋白1(UCP1)表达，揭示脂肪棕色化及线粒体标志基因的mRNA水平变化；此外选取妊娠早期和晚期小鼠BAT进行转录组测序(RNA sequencing, RNA-seq)，筛选随妊娠进程的差异表达基因，并开展基因本体(gene ontology, GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)分析。结果:随妊娠进展，BAT脂滴显著增大，产热标志蛋白UCP1表达下降( P<0.01)，脂肪棕色化标志基因Ucp1、2型脱碘酶(Dio2)、过氧化物酶增殖体激活受体γ辅激活因子1α(Pgc1α)以及线粒体标志基因细胞色素C(CytC)均显著下调( P<0.001)，以妊娠晚期组减弱最为显著。RNA-seq共筛选出差异表达基因1 298个，其中906个基因在妊娠晚期上调、392个基因下调，GO及KEGG通路分析显示差异表达基因在脂质代谢、性类固醇激素、炎症因子等多种生物调节功能通路富集。 结论:小鼠妊娠晚期BAT出现脂滴变大、产热活性与代谢能力降低现象，BAT基因表达在妊娠不同时期存在显著差异，因此BAT代谢能力降低可能是引发妊娠期代谢异常的重要原因。

人类表皮生长因子受体2（HER-2）基因是一种原癌基因，多种妇科恶性肿瘤中均存在一定比例的HER-2基因相关变异，部分研究发现HER-2蛋白高表达或基因扩增与不良预后相关。近年来，抗HER-2治疗在乳腺癌、非小细胞肺癌、结直肠癌等肿瘤取得积极进展。多项研究尝试将传统抗HER-2疗法应用于妇科恶性肿瘤的治疗，但疗效不尽如人意。可喜的是，新型靶向HER-2的抗体偶联药物（ADC）德曲妥珠单抗在HER-2表达的多种难治性实体瘤中展现出显著且持久的疾病缓解能力，对子宫颈癌、子宫内膜癌和卵巢上皮性癌的疗效尤著。这一突破性发现或将为晚期、复发性妇科恶性肿瘤带来新的治疗方法。本文综述了妇科恶性肿瘤中HER-2基因的变异情况、抗HER-2治疗的探索以及靶向HER-2蛋白的ADC的最新进展，以期启发临床对HER-2检测和靶向HER-2治疗的再思考。

目的:建立可以体现胰腺癌恶病质主要特征的小鼠模型，研究其表型、代谢和恶病质相关分子表达变化。方法:将裸鼠随机分为对照组（6只）和肿瘤组（6只）。肿瘤组裸鼠腹腔注射人胰腺癌细胞Panc01建立胰腺癌恶病质模型，密切记录其体重、食物摄入、抓力及体成分变化。2周后处死并解剖小鼠，观察腹腔内肿瘤转移情况。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测小鼠肌肉和脂肪组织中恶病质相关分子的基因表达情况，以及外周血中相关炎症因子表达情况。结果:肿瘤组小鼠出现明显恶病质表型，表现为食物摄入、瘦体重和抓力减少，并在骨骼肌和心肌中观察到其肌肉分解代谢增强。出现下丘脑炎症反应，白色脂肪组织解偶联蛋白1表达增多，血液学结果异常，包括白细胞增多和贫血。结论:人胰腺癌细胞Panc01腹腔注射裸鼠是研究胰腺癌恶病质的可靠模型，它再现了胰腺癌过程的关键特征，并诱导了广泛的恶病质表现。因此，该模型适合于探索胰腺癌恶病质相关生理系统的机制研究以及新疗法的临床前研究。

目的:探讨腺病毒36型(Ad36)诱导分化的脂肪细胞中，长链非编码RNA(LncRNA)00602促进棕色化的可能作用。方法:根据Ad36感染与否，将肥胖患者分为Ad36阴性组和Ad36感染组。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测2组患者网膜脂肪组织中LncRNA00602 mRNA表达水平变化，并分析其与同组患者腰臀比、收缩压、舒张压、空腹血糖、三酰甘油等指标的相关性。采用HE染色检测Ad36阴性组和Ad36感染组网膜脂肪组织中脂肪细胞大小，qRT-PCR及Western印迹法检测2组患者网膜脂肪组织中解偶联蛋白1(UCP1)、PR结构域蛋白16(PRDM16)的mRNA及蛋白质表达水平。分离、培养人脂肪源性干细胞(hADSC)，利用Ad36诱导hADSC分化，并分为对照组和LncRNA00602敲低组，在敲低LncRNA00602后第0、2、4天，采用氟硼二吡咯(BODIPY)及线粒体红色荧光(Mito-Tracker Red)分别对细胞内脂滴和线粒体进行荧光染色，同时用qRT-PCR及Western印迹法检测UCP1、PRDM16表达水平的变化。结果:Ad36感染组中LncRNA00602基因表达水平高于Ad36阴性组(均 P<0.05)，Ad36阴性组中LncRNA00602表达水平与以上临床指标相关性无统计学意义，而Ad36感染组LncRNA00602表达水平与血清空腹血糖、三酰甘油呈负相关( r分别为-0.522、-0.486， P<0.05)；HE染色显示，Ad36感染组平均脂肪细胞面积小于Ad36阴性组，同时UCP1、PRDM16基因表达水平均高于阴性组(均 P<0.05)。在细胞水平，敲低LncRNA00602后第2、4天，LncRNA00602敲低组脂肪细胞的脂滴面积大于对照组，同时线粒体数量较对照组减少，差异均有统计学意义( P<0.05或 P<0.01)；与对照组相比，LncRNA00602敲低组脂肪细胞棕色化标志基因UCP1、PRDM16 mRNA和蛋白质表达水平均显著降低(均 P<0.05)。 结论:Ad36诱导的脂肪细胞分化中，LncRNA00602可能正向调控了UCP1、PRDM16的表达和脂滴的代谢变化，并引起脂肪细胞棕色化的发生。

嗅觉受体是G蛋白偶联受体家族成员之一，参与调节机体代谢、伤口愈合、肿瘤发生等生理病理过程。近年来研究表明，位于肝脏、脂肪、胰腺、肠道、骨骼肌等组织器官的嗅觉受体在肥胖及相关代谢性疾病中发挥重要作用。在肥胖患者中，嗅觉受体通过调节脂代谢、肠道菌群，促进胰高糖素样肽-1分泌、缓解炎症抵抗肥胖。另外，嗅觉受体还可以通过调控葡萄糖稳态、炎症反应等影响肥胖相关代谢性疾病的发生发展。该文就嗅觉受体与肥胖、2型糖尿病、非酒精性脂肪性肝病的关系及相关机制进行综述，以期为肥胖及相关代谢性疾病诊治提供新思路。

目的:设计合成 68Ga-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)-半胱氨酸-天冬氨酸-缬氨酸(CDV)-Nb109，探讨其用于检测不同肿瘤中程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-L1)表达水平的潜力。 方法:采用基因工程技术将CDV引入单域抗体Nb109序列的尾部，通过马来酰亚胺-半胱氨酸定点偶联策略，将马来酰亚胺-DOTA与CDV-Nb109(物质的量比1∶1)反应制备前体DOTA-CDV-Nb109，随后进行 68Ga标记并用PD-10脱盐柱纯化。建立人黑色素瘤A375、人源性PD-L1转染的A375-hPD-L1及人胶质瘤U87荷瘤裸鼠模型，通过稳定性分析、细胞摄取和microPET显像评价 68Ga-DOTA-CDV-Nb109的诊断价值。采用单因素方差分析和最小显著差异 t检验分析数据。 结果:68Ga-DOTA-CDV-Nb109放射化学产率为(69.79±4.69)%，放化纯大于97%，摩尔活度为(12.85±1.51) GBq/μmol。 68Ga-DOTA-CDV-Nb109与A375-hPD-L1细胞具有较强的亲和力，解离常数( Kd)为(66.43±17.89) nmol/L。 68Ga-DOTA-CDV-Nb109在A375-hPD-L1细胞[(3.17±0.15)百分加入放射性剂量(%AD)]、U87细胞[(2.08±0.03) %AD]中的摄取明显高于A375细胞[(1.21±0.14) %AD； F＝82.87， t值：15.23、9.98， P值：<0.001、0.003]。 68Ga-DOTA-CDV-Nb109在A375-hPD-L1[(5.21±0.35)每毫升百分注射剂量率(%ID/ml)]和U87[(3.44±0.69) %ID/ml]荷瘤裸鼠肿瘤中的摄取显著高于A375荷瘤裸鼠[(2.17±0.36) %ID/ml； F＝249.72， t值：35.70、3.43，均 P<0.001]。 结论:成功制得定点标记的PET探针 68Ga-DOTA-CDV-Nb109，可无创、动态监测不同肿瘤中PD-L1表达水平的变化，在PD-L1免疫检查点阻断治疗潜在受益患者筛选方面具有应用潜力。

目的:评估肾周脂肪解耦连蛋白1（UCP1）表达对肾透明细胞癌（ccRCC）患者预后的影响。方法:选取2013年2月至10月及2015年3月至10月收治的行后腹腔镜根治性肾切除术的ccRCC患者共98例，通过术前CT图像评估肾周脂肪厚度及黏连度。术后RT-qPCR检测肿瘤周围肾周脂肪UCP1，依据肾周脂肪UCP1 mRNA值，将患者分成高UCP1表达组（42例）与低UCP1组表达组（56例）。比较两组患者的一般临床资料、肾周脂肪厚度及黏连度，进一步采用Kaplan-Meier曲线评估两组间无进展生存期（PFS）的差异。采用单变量和多变量Cox回归分析确定PFS的潜在独立预后因素。结果:高UCP1表达组的肾周脂肪厚度、肾周脂肪黏连比例、Fuhrman分级中Ⅲ~Ⅳ级比例和T分期中>T2期比例高于低UCP1表达组[（13.84±2.41）vs（10.75±1.99），42.86% vs 16.07%，28.57% vs 8.93%，21.43% vs 5.36%； P值分别为0.000，0.003，0.011，0.037]。随访期间（中位时间62.0个月），15例患者（12例高UCP1表达组，3例低UCP1表达组）发生肿瘤进展。Kaplan-Meier曲线显示，高UCP1表达组较低UCP1表达组PFS更差（71.43% vs 94.64%， P=0.001）。Cox回归分析显示，高UCP1表达和高T分期与低PFS显著相关（ β=1.334， RR=3.796，95% CI=1.009~14.280， P=0.048； β=2.886， RR=17.930，95% CI=5.538~58.047， P=0.000）。 结论:肾周脂肪UCP1表达增加可能为ccRCC患者肿瘤进展的独立危险因素。术后联合肾周脂肪棕色化评估可能有助于临床更好的判断ccRCC患者的预后。

目的:探讨解偶联蛋白2(UCP2)在小鼠海马神经元HT22细胞构建的脑出血模型中的表达规律及其与细胞凋亡、氧化应激反应及线粒体分裂/融合动态平衡之间的关系。方法:将体外培养的HT22细胞分为对照组、造模后3 h组、造模后6 h组、造模后12 h组、造模后24 h组，后4组细胞加入终浓度为10 μmol/L的氯化血红素分别处理3 h、6 h、12 h、24 h，对照组加入等量溶剂处理24 h。采用磷脂结合蛋白(Annexin V)-FITC/碘化丙啶(PI)细胞凋亡检测试剂盒检测5组细胞凋亡率。采用荧光探针法检测5组细胞的活性氧(ROS)水平。采用Western blotting检测5组细胞UCP2，凋亡相关蛋白活化的半胱天冬酶3(cleaved caspase3)、抗凋亡蛋白β细胞淋巴瘤/白血病基因2(bcl2)，线粒体分裂/融合蛋白Fis1、Drp1、Opa1、Mfn2的表达。结果:与对照组比较，造模后3 h组、造模后6 h组、造模后12 h组、造模后24 h组细胞凋亡率、ROS水平、UCP2的表达、凋亡相关蛋白cleaved caspase3的表达及线粒体分裂蛋白Drp1、Fis1的表达均增高，抗凋亡相关蛋白bcl2的表达及线粒体融合蛋白Opa1、Mfn2的表达均减少，差异均有统计学意义( P<0.05)。并且造模后3 h组、造模后6 h组、造模后12 h组、造模后24 h组细胞凋亡率、ROS水平、UCP2、cleaved caspase3、Drp1和Fis1的表达均依次增高，bcl2、Opa1和Mfn2的表达均依次减少，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:UCP2在HT22细胞构建的脑出血模型中表达量的增加具有时间依赖性，且与细胞凋亡程度、氧化应激反应水平、线粒体分裂/融合动态平衡具有密切关系。