目的:探讨胶原-透明质酸-硫酸软骨素复合构建软骨组织工程三维纳米支架的可行性。方法:2012年12月至2014年6月，在川北医学院组织工程与干细胞研究所将胶原-透明质酸-硫酸软骨素溶于三氟乙醇和水混合溶剂中制成静电纺丝溶液，制备组织工程软骨纳米支架材料。扫描电镜观察其表面形貌，测定其纳米纤维直径、吸水率、表面接触角和降解率及生物学特性。兔软骨细胞种植于支架上，用细胞计数试剂盒评估细胞存活情况。结果:在静电纺丝浓度范围80～120 mg/ml，胶原-透明质酸-硫酸软骨素比例6.0∶0.5∶1.0条件下，可成功制备出组织工程软骨纳米支架，当电纺液浓度为10%时，纳米纤维直径相对均匀，无串珠形成，支架纤维直径(289.5±162.9)～(414.7±71.5) nm。经过理化检测显示：支架具有良好的亲水性，接触角最高达(34±15)°，30 d时降解比较稳定，降解率最高达68%，软骨细胞在支架上24 h存活率最高达70%。结论:以胶原-透明质酸-硫酸软骨素制备的组织工程软骨纳米支架材料有良好的物理和生物学性能，在组织工程软骨构建中有一定应用前景。

目的:探讨不同参数设定下氦气源低温常压等离子体（non-thermal atmospheric pressure plasma，NTAPP）射流处理对牙本质表面温度、润湿性以及胶原纤维微观形貌的影响，为NTAPP在口腔领域的研究和应用提供参考。方法:将NTAPP发生装置的氦气气体流量分别设定为3、4、5 L/min，放电输入功率分别设定为8、9、10、11 W，分别处理12组人牙本质试件（西安医学院第一、第二附属医院口腔科提供，每组样本量为6），采用红外热像仪连续测量NTAPP射流处理60 s内试件表面温度，绘制温度曲线。测量上述气体流量、输入功率设定下NTAPP射流处理5、10、15、20 s后牙本质和未经NTAPP处理的牙本质（阴性对照组）接触角（每组样本量均为6）。场发射扫描电镜（field emission scanning electron microscopy，FE-SEM）观察氦气气体流量为5 L/min，输入功率分别为8、9、10、11 W设定下NTAPP射流处理5、10、15、20 s的各NTAPP组及阴性对照组（未行NTAPP处理）（每组样本量均为4）牙本质试件胶原纤维的微观形貌。结果:气体流量、输入功率和处理时间对牙本质表面温度及润湿性均有显著影响（ P<0.01）。随着处理时间延长，牙本质表面温度呈上升趋势；输入功率越大，牙本质表面温度越高；气体流量越大，升温越迅速。气体流量为5 L/min、输入功率为11 W处理60 s时，牙本质试件表面温度最高，为（35.10±0.24） ℃。随着NTAPP处理时间延长，与阴性对照组牙本质表面接触角（75.57°±1.45°）相比，各NTAPP组牙本质表面接触角均显著减小（ P<0.05）；随着气体流量及输入功率增加，接触角呈减小趋势，气体流量为5 L/min、输入功率为10 W处理20 s后牙本质表面接触角最低，为13.19°±2.01°。FE-SEM显示，随着输入功率增大及处理时间延长，胶原纤维出现断裂、融合等不同程度的破坏。 结论:NTAPP处理可显著改变牙本质表面温度、润湿性及微观形貌，效果与设备的气体流量、输入功率和处理时间密切相关。

目的:探讨PIEZO1通过YAP传导机械力学信号促进胶质瘤侵袭进展的分子机制。方法:(1)标本检测：选择郑州大学第一附属医院神经外科自2015年2月至2017年3月行胶质瘤切除术的94例患者标本行免疫组化染色，检测不同级别胶质瘤组织中PIEZO1表达。(2)细胞实验：不同基质硬度条件下培养人脑胶质瘤细胞系U87、U251，通过免疫荧光染色实验检测PIEZO1和YAP表达，Western blotting实验检测PIEZO1表达。(3)慢病毒转染后细胞实验：根据有无转染短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体将细胞分为阴性对照组和sh-PIEZO1组，通过克隆形成实验、增殖、侵袭实验、Western blotting实验等方式研究PIEZO1在胶质瘤增殖、侵袭中的作用；同时采用Western blotting实验检测 PIEZO1敲低后YAP、FAK、β1-整合素等力学信号通路蛋白的表达，采用RT-PCR法检测YAP下游靶基因 CTGF、 CYR61的表达，采用免疫荧光染色检测 PIEZO1敲低后YAP的表达。 结果:(1)PIEZO1表达随胶质瘤级别升高而增高，且异柠檬酸脱氢酶( IDH)野生型患者中PIEZO1表达高于 IDH突变型。(2)随着基质硬度增加，PIEZO1及YAP表达增加。Western blotting实验结果显示，与0.2 kPa组相比，16和64 kPa组基质培养细胞PIEZO1蛋白表达明显增高，差异有统计学意义( P<0.05)。(3) PIEZO1敲低后，U87细胞形态变大、触角增多，U251细胞多呈较长梭形。与阴性对照组相比，sh-PIEZO1组细胞克隆数明显减少，各时间点增殖率明显降低，侵袭细胞计数明显减少，差异均有统计学意义( P<0.05)。同时，与阴性对照组比较，sh-PIEZO1组细胞上皮标志物钙黏附蛋白E(E-cadhein)表达明显增加，间质标志物波形蛋白、Snail及Slug表达明显降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。最后，Western blotting、RT-PCR实验及免疫荧光实验发现，敲低 PIEZO1显著增加了磷酸化(p)-YAP表达，降低了YAP胞核表达，下调了YAP下游靶基因 Cyr61和 CTGF表达，并且显著减低了β1-整合素和p-FAK水平；阴性对照组与sh-PIEZO1组组间差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:PIEZO1通过YAP调控胶质瘤对机械信号的反应，促进胶质瘤细胞增殖和侵袭，可以作为胶质瘤治疗的新靶点。

目的:探讨不同浓度的甲基丙烯酸酯（GelMA）水凝胶支架的性能，以及对大鼠髓核干细胞（NPSCs）体外增殖、分化及细胞外基质相关蛋白表达的影响。方法:（1）配置浓度为5%、10%、15% GelMA水凝胶溶液，经紫外光照射固化、冷冻干燥、喷金处理，制备相应浓度的GelMA水凝胶支架。用扫描电镜观察支架并测量孔径，使用科学表面分析仪测量支架静态水接触角，使用机械测试仪测量支架压缩模量，使用精密天平测量在37 ℃恒温箱中放置0、2、4、6、8、10、12 h时支架的含水量。（2）取6周龄雄性清洁级SD大鼠8只，体质量为80~100 g，切开椎间盘取髓核组织，分离培养NPSCs。取第3代NPSCs分别进行成骨、成软骨及成脂分化培养，分别用茜素红、阿利新蓝及油红O对三系细胞进行染色，观察NPSCs的三系分化潜能。（3）取第3代NPSCs分为无支架的对照组和5%、10%、15% GelMA水凝胶支架组，对照组加入培养基培养3 d，不同浓度GelMA水凝胶支架组紫外光照射固化后接种NPSCs，加入培养基培养7 d。各组细胞采用免疫荧光染色，观察细胞形态的变化。（4）取第3代NPSCs分别接种于紫外光照射固化后的5%、10%、15% GelMA凝胶支架中，采用细胞计数（CCK）-8试剂盒检测细胞增殖能力，采用活细胞/死细胞双染试剂盒检测细胞活力，采用免疫荧光染色检测Agg和Col Ⅱ蛋白的表达情况。结果:（1）5%、10%、15%GelMA水凝胶支架的孔径分别为（94.00±1.00）、（77.33±5.69）、（52.33±2.31）μm，水接触角分别为28.00°±2.65°、39.00°±2.65°、46.00°±1.00°，压缩模量分别为（45.77±8.66）、（64.63±3.06）、（86.07±10.73）kPa。不同浓度GelMA水凝胶支架随浓度的增高，支架的孔径减小，水接触角、压缩模量增大，差异均有统计学意义（ F=102.40、49.40、21.51， P值均<0.05）。不同浓度GelMA水凝胶支架的含水量均随时间的增加而下降；而同一时间不同浓度GelMA水凝胶支架的含水量随浓度的增高而减少，3者间含水量比较差异均有统计学意义（ P值均<0.05）。（2）NPSCs三系分化结果显示，培养的NPSCs成功分化为成骨细胞、成软骨细胞、成脂细胞，有多向分化的潜能，具备干细胞的特性。（3）水凝胶支架上NPSCs随着GelMA浓度的增加，细胞形态由正常的梭形逐渐变椭圆，细胞突伸展逐渐减弱，细胞质和细胞核比例逐渐减小，细胞聚集的集落逐渐变小。（4）NPSCs增殖实验显示：培养第1天时，不同浓度的GelMA水凝胶支架上NPSCs的光密度（OD）值差异无统计学意义（ F=1.63， P=0.272）；培养第4、7天时，随GelMA水凝胶支架浓度的增高，NPSCs的OD值均呈下降趋势，差异均有统计学意义（ F=61.48、203.20， P值均<0.001）。NPSCs活力实验显示：培养第4天时，不同浓度的GelMA水凝胶支架上NPSCs活细胞占比差异无统计学意义（ F=0.15， P=0.860）；培养第7天时，随GelMA水凝胶支架浓度的增高，NPSCs活细胞占比呈下降趋势，差异有统计学意义（ F=68.83， P<0.001）。（5）5%、10%、15%GelMA水凝胶支架中Agg蛋白的免疫荧光值分别为16.79±1.29、13.35±0.70、10.475±0.54，Col Ⅱ蛋白的免疫荧光值分别为17.17±1.49、13.32±1.65、9.53±1.01。随着GelMA水凝胶浓度的增高，Agg、ColⅡ蛋白的表达均呈下降趋势，差异均有统计学意义（ F=22.10、36.64， P值均<0.001）。 结论:5%GelMA水凝胶支架具有较好的物理特性，适合NPSCs的生长、存活，能较好地促进细胞外基质相关蛋白的表达。

目的:探讨聚醚醚酮、氧化锆、纯钛基台材料对人牙龈上皮细胞半桥粒黏附相关基因及蛋白表达的影响，以期筛选出更适合上皮附着的基台材料。方法:制备聚醚醚酮、氧化锆、纯钛试件各48枚，用扫描电镜观察各组表面形貌，用白光干涉仪测量表面粗糙度，光学接触角测量仪测量接触角。采用扫描电镜观察人牙龈上皮细胞在各组试件表面的早期黏附状态，并使用细胞计数试剂盒评估各组人牙龈上皮细胞的增殖能力，实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测各组人牙龈上皮细胞半桥粒黏附相关基因及蛋白的表达水平。结果:3组试件均呈平坦、光滑的表面形貌；聚醚醚酮组、氧化锆组和纯钛组平均粗糙度（Ra值）分别为（95.63±2.06）、（37.93±3.56）、（134.2±4.62）nm（ F=368.16， P<0.001），平均最大高度（Rz值）分别为（2.42±0.22）、（0.87±0.10）、（3.77±0.28）nm（ F=91.95， P<0.001），组间差异均有统计学意义（ P<0.05）；接触角总体差异无统计学意义（ F=0.45， P=0.658）。人牙龈上皮细胞在3组试件表面均呈扁平伸展的多边形、多角形等不规则形状，表现出典型的铺路石样。培养1和3 d时3组细胞增殖能力（ A值）差异均无统计学意义（ P>0.05）；培养5和7 d时聚醚醚酮组细胞增殖能力（ A值）均显著大于氧化锆组和纯钛组（ P<0.05）。培养3和7 d时聚醚醚酮组层粘连蛋白α3、整合素β4和胶原蛋白17的mRNA和蛋白表达水平均显著大于同时间点氧化锆组和纯钛组（ P<0.05）。 结论:聚醚醚酮相较氧化锆、纯钛基台材料更有利于人牙龈上皮细胞半桥粒的黏附。

目的:探讨抗菌肽生物功能化TiO 2纳米管的抗菌性能及其对人角质形成细胞黏附、迁移等生物学行为的影响。 方法:采用阳极氧化法在光滑钛片（光滑钛组）表面构建TiO 2纳米管阵列（纳米管组），通过物理吸附方式将抗菌肽（LL-37）加载至TiO 2纳米管表面（抗菌肽组）。每组采用简单随机抽样法抽取3个试样，借助场发射扫描电镜、原子力显微镜、接触角测量仪、荧光标记和荧光酶标仪观察各组试样表面形貌、粗糙度、亲水性以及抗菌肽释放特点。将人角质形成细胞分别培养于3组钛试样表面，每组设置3个重复，场发射扫描电镜观察细胞黏附形态，细胞免疫荧光染色观察黏附数量；细胞计数试剂盒检测细胞增殖能力；划痕实验分析细胞迁移特点，评价各组钛试样对HaCaT细胞生物学行为的影响。将牙龈卟啉单胞菌（ Porphyromonas gingivalis，Pg）接种至3组钛试样表面，每组设置3个重复，场发射扫描电镜观察细菌形态，活死细菌染色法测定细菌活力，评价各组钛试样对Pg的抑制作用。 结果:抗菌肽组试样表面可见均匀排列的纳米管阵列，管口处有颗粒状抗菌肽覆盖。纳米管组和抗菌肽组钛试样表面粗糙度［分别为（20.40±3.10）和（19.10±4.11）nm］和亲水性（接触角分别为22.4°±3.1°和25.3°±2.2°）均比光滑钛组［粗糙度为（2.30±0.18）nm，接触角为71.8°±1.7°］显著增加（ P<0.05）。抗菌肽的释放表现为早期的突释（1~4 h）和长期（1~7 d）的缓释过程。免疫荧光显示，HaCaT细胞接种至钛试样表面0.5和2.0 h后，纳米管和抗菌肽组钛试样表面细胞黏附数量均比光滑钛组显著增加（ P<0.05）；细胞计数结果显示，接种1、3及5 d后各组细胞增殖活性差异均无统计学意义（ P>0.05）；划痕实验显示，与光滑钛和纳米管组相比，划痕后24 h时抗菌肽组钛试样表面愈合率最高［（96.4±4.9）%］（ F=35.55， P<0.001），抗菌肽组钛试样24 h即可形成单层细胞并填充划痕。体外细菌共培养实验显示，相比于光滑钛组，纳米管和抗菌肽组钛试样表面细菌皱缩明显，抗菌肽组钛试样表面可见明显的菌体破裂；活死细菌染色显示，抗菌肽组钛试样表面绿色荧光强度为各组最低（ F=66.54， P<0.001）。 结论:抗菌肽生物功能化TiO 2纳米管材料具备良好的抗菌性能，有利于人角质形成细胞的黏附及迁移。

目的:探讨3D打印技术制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物珊瑚羟基磷灰石纳米氧化锌（PLGA/CHA/n-ZnO）新型骨修复支架的工艺参数，并研究其对牙周膜干细胞（PDLSC）的生物相容性。方法:将PLGA与CHA/n-ZnO粉末按4∶1质量比混合，通过生物挤出3D打印技术制备PLGA/CHA/n-ZnO复合骨修复支架，通过X射线衍射仪、扫描电镜（SEM）、电子万能试验机、压汞仪和接触角测量仪对支架样件的相关理化性能进行检测分析，并通过体外细胞黏附实验观察PDLSC在支架表面黏附情况与生长状态。结果:成功制备出3种不同形态PLGA/CHA/n-ZnO三维复合骨修复支架。X射线衍射仪检测支架可见碳酸钙、羟基磷灰石与氧化锌吸收峰；SEM观察支架表面粗糙，可见不同尺寸孔径结构；电子万能试验机分析计算得出支架压缩强度为（12.31 ± 4.80）MPa，弹性模量为（31.18 ± 12.30）MPa；压汞仪测得支架孔径分布为5 nm ~ 350 μm；静态接触角测量仪测试得出支架接触角为（75.73 ± 5.54）°；体外实验可见PDLSC黏附于支架表面，生长状态良好。结论:本研究为PLGA/CHA/n-ZnO三维复合骨修复支架负载PDLSC新型组织工程骨的研制奠定了实验基础。

[目的]本研究旨在通过建立团花绢野螟Diaphania glauculalis成虫触角转录组数据库,挖掘化学感受相关基因,为团花绢野螟成虫触角的化学感受机制及绿色防控技术提供理论基础.[方法]使用Illumina NovaSeq 6000平台对团花绢野螟成虫触角转录组进行测序,使用Trimmomatic和Trinity对测序所得的原始数据进行剪切、组装得到转录组数据;比对CDD,KOG,COG,NR,NT,PFAM和KEGG等数据库获得基因注释信息,筛选鉴定出化学感受相关基因;使用TPM(transcripts per million)评估化学感受相关基因的表达量;应用最大似然法构建团花绢野螟化学感受相关基因系统发育树.[结果]团花绢野螟雄成虫触角转录组测序获得52 705 124条unigenes,雌成虫触角转录组测序获得55 391 610条unigenes.通过与NR数据库比对注释,团花绢野螟成虫触角转录组注释unigenes共24 192条,其中与亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis的同源序列最多,有10 679条.有14 313条unigenes被注释到204 289条GO功能条目,其中113 387条unigenes注释到生物学进程,70 115条unigenes注释到细胞组分,20 787条unigenes注释到分子功能.有10 721条unigenes注释到KOG数据库25个分类的11 968功能条目.有12 892条unigenes被注释到KEGG数据库5类代谢通路,归属于33个通路,其中注释到信号转导通路的unigenes最多,有1 500条unigenes,进而筛选鉴定到136个化学感受相关基因,包括31个气味结合蛋白(odorant-binding protein,OBP)基因、24 个化学感受蛋白(chemosensory protein,CSP)基因、50 个气味受体(odorant receptor,OR)基因、20个离子型受体(ionotropic receptor,IR)基因、9个味觉受体(gustatory receptor,GR)基因和2个感觉神经元膜蛋白(sensory neuron membrane protein,SNMP)基因.[结论]本研究首次构建了团花绢野螟成虫触角转录组数据库,阐述了化学感受相关基因的种类和数量,为团花绢野螟化学感受基因功能分析及化学感受机制奠定分子基础,进而为基于昆虫化学感受反应机制开发新的绿色防控技术提供理论支撑.

[目的]明确黑水虻Hermetia illucens成虫触角感器的超微结构,探究其雌雄成虫对气味物质的嗅觉反应.[方法]利用透射电子显微镜观察黑水虻成虫触角感器的超微结构,再分别采用触角电位测量系统和Y型嗅觉仪测试雌雄成虫对异戊酸、乳酸、乙酸乙酯和壬醛4种气味物质的触角电位(electroantennogram,EAG)反应和行为响应.[结果]黑水虻成虫触角上的毛形感器表皮壁厚,壁上无孔,内部感器淋巴液中有神经树突;腔锥形感器腔内有多分支的锥形突起,锥形突起的表皮壁薄,壁上有微孔,内部感器淋巴液中有神经树突.EAG测试结果表明,所测试的4种气味物质在各浓度下都能引起雌雄黑水虻成虫明显的EAG反应,不同气味物质引起的反应随浓度变化呈现不同趋势.其中,雌雄成虫对异戊酸的EAG反应均最大,二者的EAG反应相对值均随浓度升高而升高;雌成虫对乳酸的EAG反应随浓度升高先升高后降低,雄成虫对乳酸的EAG反应趋势则相反;对于乙酸乙酯和壬醛两种气味物质的EAG反应,随着测试浓度的升高,黑水虻雌成虫的EAG反应呈现出先降低后升高的趋势,而雄成虫的EAG反应则各不相同且无规律.行为选择测试结果表明,0.001-0.1 μg/μL乳酸对黑水虻雌成虫有显著的吸引作用,0.1 μg/μL异戊酸对雄成虫有显著的吸引作用.[结论]黑水虻成虫触角鞭节上的毛形感器可能为温湿度感器,腔锥形感器可能为嗅觉感器.黑水虻雌雄成虫的触角均对高浓度的异戊酸比较敏感;低浓度的乳酸、异戊酸对黑水虻成虫具有一定的引诱作用,有作为引诱剂成分的潜力.

[目的]了解横坑切梢小蠹幼虫触角和口器上化学感器的类型、数量和分布.[方法]应用扫描电子显微镜观察了横坑切梢小蠹末龄幼虫头部形态及触角和口器上的化学感器.[结果]横坑切梢小蠹幼虫触角仅有1 节,着生有2 类6 种感器,分别为锥形感器1～2 和末梢锥形感器1～4;下颚须和下唇须均为2 节,共发现有 3 类 5 种感器,包括锥形感器 3、指形感器、末梢锥形感器 2、4 和 5.锥形感器 1～3 表面具多孔,为典型的嗅觉器官;末梢锥形感器顶端具孔,应为味觉感器;指形感器为下颚须特有,每侧仅有 1个,光滑、无孔表面可能意味其具有声音感知功能.[结论]横坑切梢小蠹末龄幼虫头部化学感器数量少,分布模式简单,且集中分布在触角、下颚须和下唇须的端部,研究将为深入理解横坑切梢小蠹幼虫取食及其相关行为提供科学依据.