目的:探讨转运RNA来源的小分子片段770（tRF-770）调控细胞骨架相关蛋白2（CKAP2）对乳腺癌细胞增殖的影响。方法:使用MINTbase数据库v2.0序列与基因组中成熟的tRNA进行比对，确认tRF-770的染色体定位；TA克隆实验鉴定tRF-770；利用TargetScan和miRBase数据库分析预测tRF-770的靶基因；利用癌症基因组图谱（TCGA）数据库数据分析CKAP2在乳腺癌中的表达情况。选择乳腺癌细胞株MDB-MA-231和MCF7，分别分为空白对照组（不予任何处理）、tRF-770过表达组（转染tRF-770过表达序列）及阴性对照组（转染阴性对照序列）；另外设立tRF-770过表达+CKAP2-HA组（共转染tRF-770过表达序列与CKAP2过表达序列）。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测乳腺癌细胞中tRF-770的相对表达量；CCK-8法检测乳腺癌细胞增殖能力并进行挽救实验；双荧光素酶报告基因实验验证tRF-770的靶基因；蛋白印迹法检测CKAP2-ERK2信号通路相关蛋白的表达情况。结果:tRF-770与9类tRNA剪切修饰的5'端完全匹配，TA克隆测序验证结果表明产物大小以及碱基与预期tRF-770序列一致。基于TCGA数据库数据分析发现CKAP2在乳腺癌组织中高表达（ t=7.21， P<0.05）。qRT-PCR检测结果显示，在MDA-MB-231细胞中，空白对照组、阴性对照组、tRF-770过表达组tRF-770相对表达量分别为1.00±0.00、2.42±0.11、3.75±0.01，差异有统计学意义（ F=1 395.00， P<0.001）；在MCF7细胞中，3组tRF-770相对表达量分别为1.00±0.00、2.45±0.21、3.26±0.16，差异有统计学意义（ F=169.30， P<0.001）；两种细胞中，与空白对照组及阴性对照组比较，tRF-770过表达组中tRF-770相对表达量均升高（均 P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果表明，tRF-770与CKAP2 mRNA 3'UTR结合。CCK-8法检测结果显示，在MDA-MB-231、MCF7细胞中，第3天和第4天tRF-770过表达组细胞增殖能力均低于空白对照组和阴性对照组（均 P<0.05）；第3天和第4天阴性对照组与tRF-770过表达组细胞增殖能力比较，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。CCK-8法挽救实验结果显示，在两株乳腺癌细胞中，tRF-770过表达+CKAP2-HA组自转染第2天起，细胞增殖能力均高于tRF-770过表达组（均 P<0.05）。蛋白质印迹法检测结果显示，两种乳腺癌细胞中，tRF-770过表达组与阴性对照组比较，CKAP2、p-ERK2、PCNA蛋白表达均下降（均 P<0.05）；ERK2蛋白在MDA-MB-231细胞中表达量变化较小，而在MCF7细胞中tRF-770过表达组蛋白表达下降。 结论:tRF-770可能通过CKAP2-ERK2信号通路抑制乳腺癌细胞增殖。

外泌体是一种具有脂质双分子层的细胞外小分子囊泡，其内包含RNA和蛋白质等生物活性物质，可在细胞间进行物质转运和信息传递。脑缺血后，神经元来源的外泌体通过调节胶质细胞的活化进而影响神经炎症的发生和发展，活化的胶质细胞则分泌含有炎性因子或炎症相关微RNA的外泌体调节神经元的存亡。研究显示，外泌体可作为脑缺血后炎性损伤的生物标志物和治疗靶点。文章阐述了外泌体的组成和功能及其在脑缺血后神经炎症中的作用和可能机制。

目的:应用规律间隔成簇短回文重复序列及其相关核酸酶9系统(CRISPR/Cas9)体外实验研究修正威尔森氏症(WD)基因。方法:选用来源于DL近交系小鼠的Toxic milk小鼠(购自美国Jackson Laboratory公司)作WD模型，设计3个CRISPR来源的RNA (crRNA)-crRNA001/002/003，应用CRISPR/Cas9核糖核蛋白复合物(RNP)方法转染WD肝细胞，48 h后提取基因组DNA，聚合酶链反应(PCR)后测序检测基因编辑效率，筛选出效率最高者crRNA001，并设计相应的单链寡核苷酸(ssODN)修复模板；用crRNA001和ssODN共转染肝细胞，模板特异性引物行PCR，验证ssODN掺入。组间比较采用Student’S t检验。 结果:Sanger测序结果显示，crRNA001的编辑效率为(57.8±5.1)%。用ssODN共转染细胞后，模板特异性引物行PCR，能扩增出修正后的铜离子转运ATP酶β肽(ATP7B)基因条带；二代测序结果显示，ATP7B基因修复效率为(7.45±2.54)%。结论:CRISPR/Cas9 RNP转染能达到较高编辑效率，相应的ssODN可以高效修复缺陷ATP7B基因，为进一步的体内实验提供理论和实验基础。

目的:探讨间充质干细胞(MSC)在非小细胞肺癌(NSCLC)抵抗表皮生长因子受体抑制剂(EGFR-TKI)耐药过程中的作用及其机制。方法:HCC827及PC-9肺腺癌细胞与MSC共培养后给予吉非替尼处理，检测肺癌细胞凋亡变化；应用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测共培养刺激后MSC细胞表达生长因子及细胞因子的情况；收集培养癌旁和远端正常肺组织来源MSC并行微小核糖核酸(miRNA)表达谱检测，并采用miRNA模拟物及抑制剂进行功能验证；此外，行聚合酶链反应微阵列分析(PCR Array)检测进一步探讨MSC调控NSCLC细胞抵抗吉非替尼的机制。两组数值间比较应用非配对 t检验。 结果:肺癌来源MSC的miR-26a表达组低于正常肺组织来源MSC的miR-26a表达组(53.3%， t＝4.626， P<0.01)，而肺癌来源MSC的miR-146a表达组高于正常肺组织来源MSC的miR-146a表达组(1.83倍， t＝4.895， P<0.01)。应用Transwell体系共培养肺癌细胞和MSC 48 h后发现，肺癌细胞(HCC827细胞)来源的miR-26a表达组明显低于MSC来源的miR-26a表达组(45.7%， t＝1.866， P<0.05)；且肺癌细胞(PC-9细胞)来源的miR-26a表达组也明显低于MSC来源的miR-26a表达组(62.0%， t＝1.728， P<0.05)，同时肺癌细胞(HCC827细胞)来源的肝细胞生长因子(HGF)表达组明显高于MSC来源的HGF表达组(3.88倍， t＝2.014， P<0.05);且肺癌细胞(PC-9细胞)来源的HGF表达组也明显高于MSC来源的HGF表达组(5.29倍， t＝2.197， P<0.05)。此外，MSC培养液可促进HCC827细胞可高表达转运蛋白和药物代谢基因三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)(4.23倍)和细胞色素P450酶2C9(CYP2C9)(2.18倍)。 结论:肺癌来源的MSC通过异常表达miR-26a和miR-146a调控促肿瘤细胞因子增强NSCLC细胞对EGFR-TKI的抗药性。

转运RNA来源的小RNA（tsRNA）是一类由转运RNA特异性断裂产生的新型非编码RNA，具有多种调控机制，参与多种疾病的发生、发展过程。近年来，多项研究证实tsRNA在心血管疾病中发挥重要作用。该文主要对tsRNA生物学发生、调控机制及其在心血管疾病中的研究进展进行综述，以期为心血管疾病诊治提供新的研究方向。

细胞外囊泡(EVs)是一种由细胞分泌的、直径为30~5 000 nm的脂质囊泡。根据其不同的生成机制，EVs可以分为微囊泡、外泌体和凋亡小体等，它们通过转运脂质、蛋白质和RNA等生物活性成分，直接影响胶质瘤在内的多种肿瘤的发展。EVs在多种体液中含量丰富，对脑胶质瘤患者脑脊液和血液中的肿瘤来源EVs进行检测的方法具有微创性、可重复性和高特异性的特点，EVs检测有望成为脑胶质瘤的诊断和治疗手段。本文对EVs的生物学特性、构成及其在脑胶质瘤临床应用中的最新研究进展及其应用前景进行综述。

转运RNA衍生的小RNA(tsRNAs)是一种来源于前体或成熟转运RNA的新型非编码小RNA.近年来,越来越多的研究发现tsRNAs通过调控基因沉默、抑制翻译起始与细胞凋亡、调节核糖体发生等细胞代谢过程进而参与消化系统疾病的发生、发展.因此,tsRNAs有潜力成为消化系统疾病诊断和预后的标志物及治疗靶点,并逐渐成为生物医学领域中的研究热点.本文将简要阐述tsRNAs在消化系统疾病中的研究进展.

转运RNA来源的小RNA(tsRNA)是一类由转运RNA特异性断裂产生的新型非编码RNA,具有多种调控机制,参与多种疾病的发生、发展过程.近年来,多项研究证实tsRNA在心血管疾病中发挥重要作用.该文主要对tsRNA生物学发生、调控机制及其在心血管疾病中的研究进展进行综述,以期为心血管疾病诊治提供新的研究方向.

目的 研究长链非编码RNAH19(lncRNAH19)对高脂应激作用下巨噬细胞脂质蓄积的作用及其机制.方法 采用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育人THP-1细胞来源的巨噬细胞,用H19小干扰RNA(H19 siRNA)处理观察其对脂质蓄积的影响.THP-1细胞分为对照组(常规培养)、ox-LDL组、siRNA阴性对照(NC siRNA)联合ox-LDL处理组、H19 siRNA联合ox-LDL处理组.油红O染色测定细胞中的脂质积聚,酶法测定胆固醇浓度;ATP试剂盒检测细胞ATP含量;比色法检测细胞氧化应激指标、采用ELISA检测细胞上清液中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平.Western blot法检测ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活子1α(PGC-1α)、核因子κB p-p65(NF-κBp-p65)的蛋白表达.结果 敲低H19显著抑制细胞内脂质蓄积,降低总胆固醇(TC)和胆固醇酯(CE)含量,CE/TC比值显著降低.敲低H19显著减轻高脂应激导致的细胞损伤,包括ATP含量增加,氧化应激水平降低并减少MCP-1的水平.敲低H19上调THP-1细胞中ABCA1、PPARα和PGC-1α的蛋白表达,下调NF-κB信号通路.结论 敲低H19通过上调THP-1细胞PGC-1α表达、下调NF-κB信号通路促进胆固醇逆转运、抑制炎症反应进而减缓脂质蓄积.

目的:建立吉非替尼获得性耐药非小细胞肺癌细胞株,并筛选和分析耐药前后差异表达的环状RNA (circular RNA,circRNA).方法:利用吉非替尼敏感性非小细胞肺癌细胞株H292(简称为H292_S),采用逐步加药法建立吉非替尼获得性耐药株(命名为H292_R).CCK-8法检测吉非替尼对2种细胞增殖的抑制作用;RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq)法筛选2种细胞中差异表达的circRNA.实时荧光定量PCR法验证RNA-seq结果,并结合统计学和生物信息学方法对差异circRNA来源基因的生物学功能进行分析.结果:吉非替尼对H292_S和H292_R细胞增殖的半数抑制浓度分别为(108.63±0.32)nmol/L和(982.37±2.62) nmol/L,2者间差异有统计学意义(P值均＜ 0.05),耐药细胞H292_R对吉非替尼的耐药指数为9.04.2种细胞中存在36个差异表达circRNA,其中耐药细胞中24个circRNA表达上调(P值均＜ 0.05),12个circRNA表达下调(P值均＜0.05):GO富集分析发现,异常表达的circRNA主要涉及调节细胞生长增殖、蛋白转运和基因转录等生物学过程;KEGG通路分析发现,异常circRNA的信号通路主要涉及细胞质DNA感受通路、核因子κB (nuclear factor-kappa B,NF-κB)、胞吞和凋亡等通路.实时荧光定量PCR法验证2种细胞中差异表达circRNAhsa_circ_ 0000567和hsa_circ_ 0000620的表达水平差异,结果显示耐药细胞中这2个circRNA水平均明显上调(P值均＜0.05),与RNA-seq结果相符.结论:筛选出吉非替尼获得性耐药相关的差异表达circRNA,这有助于更深入地阐明菲小细胞肺癌耐药的机制,并可能为其早期诊断提供生物学标志.