目的 研究泽泻提取物(Alisma orientale extract,AE)及其3种主要单体成分对游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)诱导的HepG2脂肪变性细胞模型的脂质代谢及氧化应激异常的改善作用及机制.方法 利用FFA(油酸-棕榈酸2∶1)建立稳定的HepG2脂肪变性细胞模型,CCK-8法测定AE、泽泻醇A、泽泻醇A-23-乙酸酯及泽泻醇A-24-乙酸酯对HepG2细胞的安全剂量;在 FFA 诱导同时给予 AE(25.00、12.50、6.25mg/L)、泽泻醇 A(50.0、25.0、12.5μmol/L)、泽泻醇 A-23-乙酸酯(25.00、12.50、6.25μmol/L)、泽泻醇A-24-乙酸酯(50.0、25.0、12.5 μmol/L)处理24h,检测细胞内脂滴的形成情况,利用生化试剂盒测定各组细胞内三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)水平,DCFH-DA检测药物对细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成的影响,采用试剂盒检测细胞内氧化应激关键指标丙二醛(malondialdehyde,MDA)、总谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;采用 Western blotting 检测过氧化物酶体增殖物激活受体 α(peroxisome proliferator-activated receptor α,PPARα)、PPAR 共激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1α,PGC-1α)、下游脂肪酸氧化和胆固醇代谢相关蛋白及核因子红细胞 2 相关因子 2/血红素加氧酶-1(nuclear factor red blood cell 2 associated factor 2/hemeoxygenase-1,Nrf2/HO-1)通路蛋白表达.结果 与对照组比较,HepG2脂肪变性细胞模型细胞内TC、TG、ROS及MDA水平显著升高(P＜0.001),SOD活性及GSH水平降低(P＜0.01、0.001);同时,细胞中PPARα、PGC-1α、肉碱棕榈酰转移酶1A(carnitine palmitoyl transferase 1A,CPT1A)、酰基辅酶 A 氧化酶 1(acyl coenzyme A oxidase 1,ACOX1)、Nrf2 及 HO-1 蛋白表达水平显著降低(P＜0.05、0.01、0.001).与模型组比较,AE、泽泻醇A及泽泻醇A-23-乙酸酯给药组细胞内脂滴、TG和TC水平显著下降(P＜0.05、0.01、0.001),AE、泽泻醇A及泽泻醇A-24-乙酸酯给药组细胞内ROS及MDA水平均显著降低(P＜0.05、0.001),SOD活性和GSH水平显著升高(P＜0.05、0.01);各给药组细胞中PPARα、PGC-1α、CPT1A、ACOX1、细胞色素P450酶7A1(cytochrome P450 enzyme 7A1,CYP7A1)、Nrf2 及 HO-1 蛋白表达水平显著上调(P＜0.05、0.01).结论 AE、泽泻醇A、泽泻醇A-23-乙酸酯及泽泻醇A-24-乙酸酯可以改善FFA诱导的HepG2脂肪变性细胞模型的脂质代谢及氧化应激异常,其机制可能是通过调控PPARα和Nrf2/HO-1通路,进而促进脂肪酸氧化及胆固醇代谢,抑制氧化应激.

目的:探讨肉苁蓉苯乙醇苷(phenylethanoid glycosides from Cistanche deserticola,PGCD)对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的影响.方法:70 只雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组(MOD)、阿伐他汀[20 mg/(kg·d)]+依折麦布[20 mg/(kg·d)]组(A + E)及肉苁蓉苯乙醇苷组[(250、500、1000 mg/(kg·d))](L-PGCD、M-PGCD、H-PGCD),均以高脂饮食(脂肪 42%、胆固醇 0.15%)饲养,另取14 只雄性C57BL/6J小鼠喂食普通饲料作为正常对照组.12 周末,检测各组小鼠血浆三酰甘油(TG)含量和谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性.取新鲜肝组织匀浆,ELISA方法检测脂肪酸合成酶(FAS)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)等脂质代谢相关酶的含量;检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和过氧化脂质(LPO)含量;RT-PCR检测肝组织酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和肉碱棕榈酰基转移酶 2(CPT2)的基因表达.结果:与模型组相比,3 个剂量PGCD均明显降低血清和肝脏TG水平,抑制血清ALT、AST的活性,剂量依赖性地减少FAS含量,显著提升LCAD含量和GSH-Px和SOD活性,并降低MDA和LPO含量.RT-PCR实验显示,PGCD显著升高肝组织ACOX1 和CPT2 mRNA 表达.结论:肉苁蓉苯乙醇苷能够通过调控肝组织ACOX1 和CPT2 基因表达改善肝组织脂质代谢,降低肝组织的脂质沉积.

目的 使用蛋白质组学技术研究高脂饮食诱导下小鼠肾脏组织蛋白质的差异性表达.方法 22只雄性C57BL/6小鼠分为对照组(正常饮食,脂肪供能占比10％)、高脂组(高脂饮食,脂肪供能占比60％),每组11只,连续饲养24周.处死小鼠并眼眶取血,检测TC、TG、血糖(BG)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)等指标.收集肾脏组织并采用HE染色、糖原染色(PAS)和电子显微镜观察病理改变.提取肾脏组织总蛋白,使用质谱仪检测并分析两组小鼠肾脏组织中的差异表达蛋白(DEPs),采用4D非标记定量蛋白质组学技术,以差异倍数＞1.5(上调)或＜1/1.5(下调)且P＜0.05为标准筛选DEPs,对DEPs作功能注释和富集分析,通过蛋白质互作网络分析筛选核心蛋白.结果 高脂组体质量、TC、TG、BG、Scr、BUN水平均显著高于对照组(均P＜0.05).与对照组相比,高脂组肾小球体积稍大,系膜细胞和基质节段性略多,鲍曼囊壁层增厚,肾小管上皮细胞空泡变性明显.电镜检查显示高脂组小鼠足突部分融合,线粒体明显肿胀、畸形、大小不一,溶酶体样结构增多并出现自噬体.两组共鉴定出93种DEPs,其中上调蛋白49种,下调蛋白44种;DEPs主要参与脂质及碳水化合物的运输和代谢途径,显著富集的通路有过氧化物酶体和溶酶体相关通路以及初级胆汁酸生物合成、类固醇激素生物合成、肾素-血管紧张素系统等.与高脂诱导肾脏损害发生、发展密切相关的蛋白质主要有酰基辅酶A氧化酶2、载脂蛋白a4、植烷酰辅酶A羟化酶2、α-甲基酰基辅酶A消旋酶、载脂蛋白e、二羟基丙酮磷酸酰基转移酶、含胰蛋白酶域1.结论 高脂饮食诱导小鼠肾脏组织蛋白质发生改变,主要包括过氧化物酶体相关基质酶代谢通路.本研究为揭示脂质肾毒性提供了有价值的线索.

目的:探讨隐丹参酮对小鼠非酒精性脂肪性肝病的治疗效果及相关机制.方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组以及隐丹参酮低、中和高剂量组,每组 10 只.造模 8 周干预 4 周后,采集小鼠血液检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST);行组织病理学染色观察小鼠肝脏组织;检测肝脏组织总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和IL-6 等指标.Western blot法检测肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)、酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)以及过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)蛋白表达水平.结果:肝脏组织病理染色结果显示,正常组几乎无脂肪浸润,模型组小鼠肝脏组织存在大量脂肪空泡,隐丹参酮低、中和高剂量组较模型组肝脏组织病变明显改善.与正常组比较,模型组 AST、ALT、TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 水平升高,HDL-C、SOD、GSH 水平降低(均 P＜0.05).与模型组比较,隐丹参酮低、中和高剂量组ALT、AST、TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 水平降低,HDL-C、SOD、GSH 水平升高(均 P＜0.05).与正常组比较,模型组PPARα、CPT1和ACOX1蛋白表达水平降低(均 P＜0.05).与模型组比较,隐丹参酮低、中和高剂量组PPARα、CPT1和ACOX1蛋白表达水平升高(均 P＜0.05).结论:隐丹参酮对NAFLD具有治疗作用,能够改善脂质代谢,促进肝脏脂质排出,改善肝功能和减少肝脏脂质沉积,其机制可能与调节脂肪酸β-氧化、减轻炎症反应及平衡氧化应激有关.

目的:研究富硒灵芝粗提物对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠脂代谢、肝功能及炎症反应的改善作用.方法:将120只大鼠随机分为正常对照组(n=20,生理盐水)和造模组(n=100).正常对照组大鼠喂养普通饲料,造模组大鼠喂养高脂饲料.4周后,造模组大鼠腹腔注射链脲佐菌素溶液(30 mg/kg)复制T2DM模型.将造模成功的90只大鼠再次随机分为模型对照组(生理盐水)、阳性对照组(二甲双胍,200 mg/kg)和富硒灵芝粗提物低、中、高剂量组(300、600、1200 mg/kg,以提取物计),每组18只.灌胃给药,每天1次,每周周一至周六给药.分别于给药4、8周后各组均取一半大鼠,检测其血清中葡萄糖、胰岛素水平,并计算胰岛抵抗指数;采用酶联免疫吸附法检测其血清中肝功能指标[天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)]、血脂指标[游离脂肪酸(FFA)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]和炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β]水平;苏木精-伊红染色后,通过显微镜观察其肝组织病理学变化;并分别采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法和Western blot法检测其肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)的mRNA和蛋白表达水平.结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠在给药4、8周后血清中葡萄糖、胰岛素含量显著增加(P<0.01),胰岛素抵抗指数显著升高(P<0.01);血清中肝功能指标、血脂指标和炎症因子水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);肝细胞肿胀呈圆形,且体积较正常对照组明显增大,肝脏有不同程度的脂肪变性及空泡样变,并伴随有少量炎细胞浸润现象;肝组织中PPARα、ACOX1的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01).与模型对照组比较,除富硒灵芝粗提物低剂量组大鼠给药4周后的胰岛素抵抗指数和血清中AST、ALT、IL-6、IL-1β水平以及给药8周后血清中葡萄糖、胰岛素、ALT水平和给药4、8周后4个血脂指标水平降低不显著外(P>0.05),其余各组大鼠在给药4、8周后上述血清指标水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);给药4、8周后大鼠肝组织病理学变化不同程度减轻;各给药组大鼠给药4、8周后肝组织中PPARα、ACOX1的蛋白和mRNA表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01).结论:富硒灵芝粗提物可上调肝组织中PPARα和ACOX1蛋白和mRNA的表达,促进蓄积的脂肪酸排出,明显改善T2DM模型大鼠脂肪酸代谢、炎症反应和肝功能.

目的:探讨人参皂苷Rg1改善游离脂肪酸(FFA)诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)HepG2细胞脂质摄取和氧化的作用及机制.方法:将HepG2细胞分为空白组,模型组,人参皂苷Rg1低、高剂量组(25,50 μmoi·L-1).1 mmol· L-1游离脂肪酸处理HepG2细胞24 h构建非酒精性脂肪肝细胞模型,25,50 μmol· L-1人参皂苷Rg1处理24 h.细胞增殖及毒性检测-8(CCK-8)检测人参皂苷Rg1对HepG2细胞活性的影响,微量法检测细胞内甘油三酯(TG)含量,油红O染色观察脂滴聚集情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测与脂质摄取和氧化相关基因与蛋白的表达情况.结果:与空白组比较,模型组细胞内TG含量及脂滴聚集吸光度显著增加(P＜0.01);与模型组比较,人参皂苷Rg1组细胞内TG含量及脂滴聚集吸光度显著降低(P＜0.01).Real-time PCR和Western blot结果均显示,与空白组比较,模型组过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARy),脂肪酸结合蛋白1(FABP1),脂肪酸转运蛋白2/5(FATP2/5)和脂肪酸转运酶(CD36)mRNA和蛋白的表达明显升高(P＜0.05),过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα),肉毒碱棕榈酰基转移酶1(CPT1)和酰基辅酶A氧化酶1 (ACOX1)mRNA和蛋白的表达明显降低(P＜0.05);与模型组比较,人参皂苷Rg1组PPARγ,FABP1,FATP2,FATP5和CD36 mRNA和蛋白的表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01),PPARα,CPT1和ACOX1 mRNA和蛋白的表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论:人参皂苷Rg1可通过降低脂质摄取和增强脂质氧化减少NAFLD细胞模型脂质蓄积.

[目的]探讨葱白提取物通过诱导过氧化物酶体增殖物受体γ辅助激活因子1α(PGC-1α)活化非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠线粒体代谢的机制.[方法]采用高脂饮食造模,将48只雄性大鼠随机分为空白组、模型组、葱白组、空转组、转染组、转染加葱白组,并运用小干扰RNA技术抑制PGC-1α的表达,实验检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测大鼠肝脏乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)、肉毒碱棕榈酰基转移酶-1(CPT-1)mRNA的表达情况,观察肝脏组织病理改变,蛋白质印迹法(Western Blot)验证线粒体合成相关蛋白PGC-1α、核呼吸因子1(NRF-1)、线粒体转录因子A(TFAM)和线粒代谢相关蛋白细胞色素c氧化酶B(COX-B)、细胞色素c氧化酶合成蛋白(SCOX)、中链酰基辅酶A脱氢酶(MCAD)的表达.[结果]与空白组相比,模型组大鼠肝脏出现明显脂肪变性;葱白提取物可降低TC、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平(P<0.01),同时ACCase mRNA表达水平降低(P<0.01),CPT-1 mRNA表达水平升高(P<0.01),缓解脂肪肝变性,并上调PGC-1α、NRF-1、TFAM、COX-B、SCOX、MCAD蛋白的表达(P<0.01).同时,与模型组相比,在转染加葱白组的大鼠中上述检测指标,未见明显变化.[结论]PGC-1α是葱白提取物治疗NAFLD的重要靶点.葱白提取物可通过上调PGC-1α改善NAFLD模型大鼠线粒体功能,维持线粒体呼吸链稳定,从而起到活化线粒体代谢以及改善脂肪肝变性的效果.

目的:探讨决明子蒽醌苷对非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠脂酸β氧化途径关键酶过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶1(peroxidase acyl coenzyme A oxidase 1,ACOX1)和肉毒碱棕榈酰转移酶I(carnitine palmitoyl transferase 1A,CPT1A)表达的影响.方法:将60只SD大鼠适应性喂养10天后,随机分为正常组、模型组、阳性药物(多烯磷脂酰胆碱)组及决明子蒽醌苷低、中、高剂量组,每组10只,高脂高糖饮食8周成功构建NAFLD模型,给予相应治疗8周后处死大鼠,收集大鼠血清和肝脏,检测大鼠血脂、肝功能、肝脏病理学以及肝脏组织中ACOX1和CPT1A的mRNA和蛋白表达水平.结果:与正常组相比,模型组大鼠肝功能指标谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(as-partate aminotransferase,AST)、血脂指标甘油三酯(triglyceride,TG)和胆固醇(total cholesterol,TC)均升高(P<0.05);与模型组比较,决明子蒽醌苷3个剂量组和阳性药物组肝功能及血脂指标均降低(P<0.05),高剂量组低于阳性药物组(P<0.05).HE染色正常组大鼠肝脏细胞大小均一,分布均匀,模型组出现明显的脂肪空泡和炎症反应,决明子蒽醌苷3个剂量组和阳性药物组均可以减少肝脏脂肪浸润.与正常组比较,ACOX1和CPT1A、模型组及决明子蒽醌苷3个剂量组和阳性药物组均降低(P<0.05);与模型组比较,决明子蒽醌苷3个剂量组和阳性药物组ACOX1和CPT1A均升高(P<0.05),高剂量组高于阳性药物组(P<0.05).结论:决明子蒽醌苷可以通过增加脂酸β氧化途径关键酶ACOX1和CPT1A mRNA以及蛋白表达水平,促进肝脏脂肪颗粒排出,最终改善肝功能.

本文研究银杏内酯B(ginkgolide B)对非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝脏中长链脂肪酸代谢相关酶蛋白过氧化物酶体增殖剂激活受体α(peroxisome proliferators-activated receptors α,PPARα)、长链特异性酰基辅酶A脱氢酶(long-chain specific acyl-CoA dehydrogenase,LCAD)、肉毒碱棕榈酰转移酶-1(carnitine palmitoyl transterase-1,CPT-1)和脂酰辅酶 A 氧化酶 1(acyl coenzyme A oxidase 1,ACOX1)表达的影响.动物福利和实验过程均遵循云南中医药大学动物伦理委员会的规定.成功建立非酒精性脂肪性肝病大鼠模型,将大鼠随机分为模型组、辛伐他汀组、银杏内酯B低、中和高剂量组,给予相应药物治疗4周.检测肝脏病理学指标并测定血液血脂、转氨酶和抗氧化指标,采用Western blot和RT-PCR法检测肝脏PPARα、LCAD、CPT-l和ACOX1蛋白及mRNA水平.结果显示:①肝脏组织病理学显示,模型组大鼠肝脏切片出现明显的结构紊乱,细胞核受到挤压,同时有明显的脂肪空泡,各治疗组相较于模型组明显好转;②与正常组相比,模型组大鼠肝功能、血脂指标明显升高,抗氧化指标则明显降低,与模型组相比,各治疗组均明显改善;③与正常组相比,模型组大鼠肝脏组织中PPARα、ACOX1、CPT-1和LCAD蛋白及mRNA表达均明显降低,相较于模型组,各治疗组均明显上调.本研究发现银杏内酯B可通过调节长链脂肪酸代谢相关蛋白PPARα、ACOX1、CPT-1和LCAD的表达,同时提高机体抗氧化能力,进而降低血脂并改善肝功能,保护肝脏.

目的 首次报道1例国内ACOX1基因突变致过氧化物酶体酰基辅酶A氧化酶缺乏症患儿,结合文献综述其临床特征.方法 与结果男性患儿,出生时肌张力偏低、生长发育迟缓并出现抽搐发作1次,3岁时出现神经功能退化并快速进展至无法独坐、独自站立和行走,语言表达能力倒退;体格检查可见特殊面容、锥体束征及小脑损害.头部MRI显示双侧脑干和小脑对称性脱髓鞘改变;血清极长链脂肪酸(VLCFAs)水平升高.全外显子组测序,患儿存在ACOX1基因c.1589A＞ G(p.His530Arg)纯合突变,其父母均携带ACOX1基因c.1589A＞ G(p.His530Arg)杂合突变,但无临床症状,符合家系共分离现象;根据美国医学遗传学和基因组学会(ACMG)指南,该变异为可能致病突变.患儿最终诊断为过氧化物酶体酰基辅酶A氧化酶缺乏症.结论 对于新生儿期发病的肌张力低下、癫痫发作和生长发育迟缓,若头部MRI显示小脑、脑干等对称性异常信号,应高度警惕过氧化物酶体病,阳性家族史、VLCFAs水平升高和基因检测可明确诊断.