目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对顺铂(DDP)致卵巢早衰模型大鼠的影响及机制.方法:取动情周期正常的雌性大鼠并将其随机分为对照组、模型组、VAP干预组,每组各10只.模型组和VAP干预组通过连续20 d腹腔注射DDP(4 mg·kg-1·d-1)建立卵巢早衰大鼠模型,干预组同时连续20 d灌胃VAP(400 mg·kg-1·d-1).HE染色观察卵巢形态学表现,并对各级发育卵泡计数.ELISA检测血清雌二醇(E2)、促卵泡生成素(FSH)、抗穆勒管激素(AMH)水平.生化法检测卵巢组织中谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平.探针标记法检测卵巢组织中活性氧(ROS)水平.普鲁士蓝染色观察卵巢组织中铁蓄积情况并检测亚铁离子(Fe2+)水平.免疫组化和Western blot检验卵巢组织中溶质载体家族7成员11(SCL7A11)、谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)和酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)的表达.通过生育力监测观察各组大鼠生育能力.结果:与对照组相比,模型组卵巢萎缩,铁蓄积(P<0.01),各级发育卵泡和总卵泡减少(P<0.05),闭锁卵泡增多(P<0.01),产仔数减少(P<0.01),血清E2、AMH水平降低(P<0.01),FSH水平提高(P<0.01),卵巢组织中GSH水平、SCL7A11和GPX4蛋白表达均降低(P<0.05),Fe2+、MDA和ROS水平及ACSL4蛋白表达均升高(P<0.01).与模型组相比,VAP能改善DDP导致的上述指标改变(P<0.01).结论:鹿茸多肽可改善顺铂致卵巢早衰大鼠的卵巢功能、维持正常的卵泡发育并提高其生育能力,机制可能与脂质过氧化反应和铁死亡有关.

目的 探讨间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)治疗对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠铁死亡状况及关键调控蛋白表达的影响.方法 记录每日小鼠体质量和行为表现,切片染色观察小鼠脊髓中炎症及脱髓鞘情况.通过检测还原型谷胱甘肽还原酶(reduced glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)及总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)观察小鼠组织中铁死亡状况,并检测转铁蛋白受体-1(transferrin receptor 1,TFR1)、酰基辅酶A合酶-4(acyl-CoA synthetase long-chain family 4,ACSL4)、谷胱甘肽过氧化酶-4(glutathione peroxidase 4,GPX4)及铁死亡抑制蛋白 1(ferroptosis suppressor protein,FSP1)等调控蛋白的表达.结果 MSCs可以有效改善EAE小鼠体质量下降和症状表现.病理水平上,MSCs注射可以改善小鼠脊髓中炎细胞浸润及脱髓鞘.MSCs注射后,EAE小鼠脊髓和脑GSH含量升高(P<0.01,P<0.05)、脊髓T-SOD活力升高(P<0.01),脑中MDA含量下降(P<0.05).MSCs治疗可以降低 EAE小鼠脊髓和脑中TFR1(P<0.05,P<0.01)、ACSL4 蛋白表达(P<0.05,P<0.001),提高脊髓和脑中FSP1 蛋白表达(P均<0.05)和脑中GPX4 蛋白表达(P<0.05).结论 MSCs通过调节铁代谢、脂代谢和促进活性氧清除来抑制EAE小鼠中铁死亡,发挥治疗作用.

目的 探讨结直肠癌组织中酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)、双特异性磷酸酶14(DUSP14)蛋白表达变化及临床意义.方法 选择手术治疗的98例CRC患者,术中取癌和癌旁组织(距肿瘤边缘>2 cm).用免疫组化染色法检测组织中ACOX1、DUSP14蛋白,用Spearman秩相关分析CRC癌组织中ACOX1与DUSP14蛋白表达的相关性,以及二者表达与临床病理参数的关系;对患者进行随访,记录其生存状况,Cox回归模型分析CRC预后的影响因素.结果 CRC癌组织、癌旁组织中ACOX1蛋白阳性表达率分别为24.49%(24/98)、84.69%(83/98),二者比较差异有统计学意义(P<0.05).CRC癌组织、癌旁组织中DUSP14蛋白阳性表达率分别为79.59%(78/98)、12.24%(12/98),二者比较差异有统计学意义(P<0.05).CRC癌组织中ACOX1与DUSP14蛋白表达呈负相关(rs=-0.792,P<0.05).与TNM分期Ⅰ、Ⅱ期,高中分化及无淋巴结转移的CRC组织比较,TNM分期Ⅲ期、低分化程度及淋巴结转移的CRC组织中ACOX1蛋白阳性表达率低,DUSP14蛋白阳性表达率高(P均<0.05).CRC患者随访期间死亡42例,3年总生存率为57.14%(56/98).ACOX1蛋白表达阳性与阴性患者3年生存率分别为87.50%(21/24)、47.30%(35/74),二者比较差异有统计学意义(P<0.05);DUSP14蛋白表达阳性与阴性患者3年生存率分别为48.72%(38/78)、90.00%(18/20),二者比较差异有统计学意义(P<0.05).ACOX1蛋白表达阴性、DUSP14蛋白表达阳性、TNM分期Ⅲ期及淋巴结转移为CRC患者预后的危险因素(P均<0.05).结论 CRC中ACOX1低表达、DUSP14高表达,二者表达变化与肿瘤发展及预后有关.

[背景]血管内皮损伤是振动引发手臂振动病(HAVD)的重要环节,长时间振动暴露可导致血管内皮细胞功能障碍及细胞损伤,细胞铁死亡有可能是振动诱导血管内皮细胞损伤并导致HAVD的重要机制之一.[目的]探究振动是否可诱导体外血管内皮细胞铁死亡相关指标发生改变.[方法]将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为振动组以及对照组.振动组是对HUVEC施加125 Hz、6.5 m·s-2 频段的振动,并且分为四组:1 d 2 h组、1 d 4 h组、2 d 2 h组、2 d 4 h组;对照组除了不接触振动外,其他条件均与实验组相同.待细胞融合至 80%时,对照组与同组别实验组同时收获.采用细胞亚铁比色法测试盒、还原型谷胱甘肽(GSH)比色法测试盒、微量丙二醛(MDA)测试盒分别检测不同振动时间和频次对HUVEC内铁、还原型GSH、MDA含量的影响;使用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞铁死亡相关基因酰基辅酶A合成酶长链家族成员 4(ACSL4)、肿瘤蛋白 53(P53)、重组人铁蛋白重链(FTH1)和谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)mRNA的表达情况;使用蛋白免疫印迹法(WB)检测HUVEC铁死亡相关蛋白表达水平.[结果]与对照组相比,振动可诱导HUVEC铁含量增加且存在剂量-效应趋势.与对照组相比,振动组的HUVEC细胞内还原型GSH含量随着振动时间和频次的增加而减少,并且存在剂量-效应趋势.与对照组相比,1 d 2 h、1 d 4 h和 2 d 4 h振动组的HUVEC细胞内MDA含量增加,且1 d 2 h和 1 d 4 h振动组中MDA含量随时间增加而增加.RT-PCR结果显示,与 1 d 2 h组相比,1 d 4 h组ACSL4、P53表达水平上升.与 2 d对照组相比,振动 2 d 2 h组和 2 d 4 h组ACSL4表达水平上升,振动2 d 4 h组P53 mRNA表达水平上升.与1 d对照组相比,振动1 d 2 h组内皮细胞FTH1、GPX4 mRNA的表达水平下降.WB结果显示,与对照组相比,振动 1 d 2 h组内皮细胞铁死亡相关蛋白ACSL4的表达水平上升;1 d 2 h组和 2 d 4 h组中P53的表达水平上升;振动1 d 4 h组、2 d 2 h组GPX4的表达水平下降,且振动2 d 2 h组相对于振动1 d 2 h组的下降更加明显.上述差异均具有统计学意义(P<0.05).[结论]振动可诱导体外血管内皮细胞中的铁含量升高,GSH的减少和MDA的增加,以及铁死亡相关基因ACSL4、P53、FTH1、GPX4 mRNA和蛋白表达改变.

目的 研究泽泻提取物(Alisma orientale extract,AE)及其3种主要单体成分对游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)诱导的HepG2脂肪变性细胞模型的脂质代谢及氧化应激异常的改善作用及机制.方法 利用FFA(油酸-棕榈酸2∶1)建立稳定的HepG2脂肪变性细胞模型,CCK-8法测定AE、泽泻醇A、泽泻醇A-23-乙酸酯及泽泻醇A-24-乙酸酯对HepG2细胞的安全剂量;在 FFA 诱导同时给予 AE(25.00、12.50、6.25mg/L)、泽泻醇 A(50.0、25.0、12.5μmol/L)、泽泻醇 A-23-乙酸酯(25.00、12.50、6.25μmol/L)、泽泻醇A-24-乙酸酯(50.0、25.0、12.5 μmol/L)处理24h,检测细胞内脂滴的形成情况,利用生化试剂盒测定各组细胞内三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)水平,DCFH-DA检测药物对细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成的影响,采用试剂盒检测细胞内氧化应激关键指标丙二醛(malondialdehyde,MDA)、总谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;采用 Western blotting 检测过氧化物酶体增殖物激活受体 α(peroxisome proliferator-activated receptor α,PPARα)、PPAR 共激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1α,PGC-1α)、下游脂肪酸氧化和胆固醇代谢相关蛋白及核因子红细胞 2 相关因子 2/血红素加氧酶-1(nuclear factor red blood cell 2 associated factor 2/hemeoxygenase-1,Nrf2/HO-1)通路蛋白表达.结果 与对照组比较,HepG2脂肪变性细胞模型细胞内TC、TG、ROS及MDA水平显著升高(P＜0.001),SOD活性及GSH水平降低(P＜0.01、0.001);同时,细胞中PPARα、PGC-1α、肉碱棕榈酰转移酶1A(carnitine palmitoyl transferase 1A,CPT1A)、酰基辅酶 A 氧化酶 1(acyl coenzyme A oxidase 1,ACOX1)、Nrf2 及 HO-1 蛋白表达水平显著降低(P＜0.05、0.01、0.001).与模型组比较,AE、泽泻醇A及泽泻醇A-23-乙酸酯给药组细胞内脂滴、TG和TC水平显著下降(P＜0.05、0.01、0.001),AE、泽泻醇A及泽泻醇A-24-乙酸酯给药组细胞内ROS及MDA水平均显著降低(P＜0.05、0.001),SOD活性和GSH水平显著升高(P＜0.05、0.01);各给药组细胞中PPARα、PGC-1α、CPT1A、ACOX1、细胞色素P450酶7A1(cytochrome P450 enzyme 7A1,CYP7A1)、Nrf2 及 HO-1 蛋白表达水平显著上调(P＜0.05、0.01).结论 AE、泽泻醇A、泽泻醇A-23-乙酸酯及泽泻醇A-24-乙酸酯可以改善FFA诱导的HepG2脂肪变性细胞模型的脂质代谢及氧化应激异常,其机制可能是通过调控PPARα和Nrf2/HO-1通路,进而促进脂肪酸氧化及胆固醇代谢,抑制氧化应激.

目的:探讨肉苁蓉苯乙醇苷(phenylethanoid glycosides from Cistanche deserticola,PGCD)对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的影响.方法:70 只雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组(MOD)、阿伐他汀[20 mg/(kg·d)]+依折麦布[20 mg/(kg·d)]组(A + E)及肉苁蓉苯乙醇苷组[(250、500、1000 mg/(kg·d))](L-PGCD、M-PGCD、H-PGCD),均以高脂饮食(脂肪 42%、胆固醇 0.15%)饲养,另取14 只雄性C57BL/6J小鼠喂食普通饲料作为正常对照组.12 周末,检测各组小鼠血浆三酰甘油(TG)含量和谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性.取新鲜肝组织匀浆,ELISA方法检测脂肪酸合成酶(FAS)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)等脂质代谢相关酶的含量;检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和过氧化脂质(LPO)含量;RT-PCR检测肝组织酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和肉碱棕榈酰基转移酶 2(CPT2)的基因表达.结果:与模型组相比,3 个剂量PGCD均明显降低血清和肝脏TG水平,抑制血清ALT、AST的活性,剂量依赖性地减少FAS含量,显著提升LCAD含量和GSH-Px和SOD活性,并降低MDA和LPO含量.RT-PCR实验显示,PGCD显著升高肝组织ACOX1 和CPT2 mRNA 表达.结论:肉苁蓉苯乙醇苷能够通过调控肝组织ACOX1 和CPT2 基因表达改善肝组织脂质代谢,降低肝组织的脂质沉积.

目的 使用蛋白质组学技术研究高脂饮食诱导下小鼠肾脏组织蛋白质的差异性表达.方法 22只雄性C57BL/6小鼠分为对照组(正常饮食,脂肪供能占比10％)、高脂组(高脂饮食,脂肪供能占比60％),每组11只,连续饲养24周.处死小鼠并眼眶取血,检测TC、TG、血糖(BG)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)等指标.收集肾脏组织并采用HE染色、糖原染色(PAS)和电子显微镜观察病理改变.提取肾脏组织总蛋白,使用质谱仪检测并分析两组小鼠肾脏组织中的差异表达蛋白(DEPs),采用4D非标记定量蛋白质组学技术,以差异倍数＞1.5(上调)或＜1/1.5(下调)且P＜0.05为标准筛选DEPs,对DEPs作功能注释和富集分析,通过蛋白质互作网络分析筛选核心蛋白.结果 高脂组体质量、TC、TG、BG、Scr、BUN水平均显著高于对照组(均P＜0.05).与对照组相比,高脂组肾小球体积稍大,系膜细胞和基质节段性略多,鲍曼囊壁层增厚,肾小管上皮细胞空泡变性明显.电镜检查显示高脂组小鼠足突部分融合,线粒体明显肿胀、畸形、大小不一,溶酶体样结构增多并出现自噬体.两组共鉴定出93种DEPs,其中上调蛋白49种,下调蛋白44种;DEPs主要参与脂质及碳水化合物的运输和代谢途径,显著富集的通路有过氧化物酶体和溶酶体相关通路以及初级胆汁酸生物合成、类固醇激素生物合成、肾素-血管紧张素系统等.与高脂诱导肾脏损害发生、发展密切相关的蛋白质主要有酰基辅酶A氧化酶2、载脂蛋白a4、植烷酰辅酶A羟化酶2、α-甲基酰基辅酶A消旋酶、载脂蛋白e、二羟基丙酮磷酸酰基转移酶、含胰蛋白酶域1.结论 高脂饮食诱导小鼠肾脏组织蛋白质发生改变,主要包括过氧化物酶体相关基质酶代谢通路.本研究为揭示脂质肾毒性提供了有价值的线索.

目的:探讨隐丹参酮对小鼠非酒精性脂肪性肝病的治疗效果及相关机制.方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组以及隐丹参酮低、中和高剂量组,每组 10 只.造模 8 周干预 4 周后,采集小鼠血液检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST);行组织病理学染色观察小鼠肝脏组织;检测肝脏组织总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和IL-6 等指标.Western blot法检测肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)、酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)以及过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)蛋白表达水平.结果:肝脏组织病理染色结果显示,正常组几乎无脂肪浸润,模型组小鼠肝脏组织存在大量脂肪空泡,隐丹参酮低、中和高剂量组较模型组肝脏组织病变明显改善.与正常组比较,模型组 AST、ALT、TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 水平升高,HDL-C、SOD、GSH 水平降低(均 P＜0.05).与模型组比较,隐丹参酮低、中和高剂量组ALT、AST、TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA 水平降低,HDL-C、SOD、GSH 水平升高(均 P＜0.05).与正常组比较,模型组PPARα、CPT1和ACOX1蛋白表达水平降低(均 P＜0.05).与模型组比较,隐丹参酮低、中和高剂量组PPARα、CPT1和ACOX1蛋白表达水平升高(均 P＜0.05).结论:隐丹参酮对NAFLD具有治疗作用,能够改善脂质代谢,促进肝脏脂质排出,改善肝功能和减少肝脏脂质沉积,其机制可能与调节脂肪酸β-氧化、减轻炎症反应及平衡氧化应激有关.

目的 探讨普伐他汀(Pra)对子痫前期(PE)样小鼠模型中长链3-羟基酰基辅酶A脱氢酶(LCHAD)的调节作用.方法 将32只C57BL/6J小鼠随机于孕7~18 d每天注射亚硝基左旋精氨酸甲酯以建立PE样模型(即PE),或同期注射等剂量生理盐水为正常对照(即Con),再分别于孕8 d始每天Pra灌胃(PE+Pra、Con+Pra组)或生理盐水灌胃(PE+N、Con+N组);孕鼠共4组,每组各8只.于孕18 d时收集孕鼠的肝脏及胎盘组织.通过蛋白印迹法、实时荧光定量PCR技术、免疫组化法检测,并比较LCHAD在各组孕鼠肝脏及胎盘中的表达.结果(1)PE+N组孕鼠的动脉压自孕8 d至孕18 d逐渐升高,而PE+Pra组孕鼠自孕10 d始开始下降;PE+N组孕鼠孕18 d时的24 h尿蛋白量[(1494±201) μg]明显高于Con+N组[(935±128)μg],两组比较,差异有统计学意义,(P<0.01),也明显高于PE+Pra组孕鼠[(981±116)μg,P<0.01].(2)蛋白印迹法:PE+N组孕鼠的肝脏及胎盘LCHAD蛋白的表达水平(肝脏:0.64±0.11,胎盘:0.48±0.06)明显低于Con+N组(肝脏:1.06±0.10,胎盘:0.60±0.10;P均<0.01),也明显低于PE+Pra组(肝脏:0.99±0.04,胎盘:0.60±0.08;P均<0.01).(3)实时荧光定量PCR技术:PE+N组孕鼠的肝脏及胎盘LCHAD mRNA的表达水平(肝脏:0.621±0.128,胎盘:0.646±0.129)明显低于Con+N组(肝脏:1.007±0.130,胎盘:1.004±0.103;P均<0.01),而与PE+Pra组(肝脏:0.693±0.678,胎盘:0.662±0.183)比较,差异无统计学意义(P均>0.05).(4)免疫组化法:4组孕鼠肝脏组织中均有LCHAD蛋白的广泛表达,在胎盘组织中以迷路滋养层绒毛干外层绒毛滋养细胞及合体滋养细胞中表达最多.LCHAD蛋白在PE+N组孕鼠的表达水平(肝脏:0.062±0.016,胎盘:0.147±0.018)明显低于Con+N组(肝脏:0.126±0.013,胎盘:0.183±0.024;P均<0.05),也明显低于PE+Pra组(肝脏:0.111±0.017,胎盘:0.174±0.027;P均<0.05).结论 Pra可上调PE样模型孕鼠肝脏及胎盘LCHAD蛋白的表达水平,其可能为调节PE临床表现的机制.

目的:研究富硒灵芝粗提物对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠脂代谢、肝功能及炎症反应的改善作用.方法:将120只大鼠随机分为正常对照组(n=20,生理盐水)和造模组(n=100).正常对照组大鼠喂养普通饲料,造模组大鼠喂养高脂饲料.4周后,造模组大鼠腹腔注射链脲佐菌素溶液(30 mg/kg)复制T2DM模型.将造模成功的90只大鼠再次随机分为模型对照组(生理盐水)、阳性对照组(二甲双胍,200 mg/kg)和富硒灵芝粗提物低、中、高剂量组(300、600、1200 mg/kg,以提取物计),每组18只.灌胃给药,每天1次,每周周一至周六给药.分别于给药4、8周后各组均取一半大鼠,检测其血清中葡萄糖、胰岛素水平,并计算胰岛抵抗指数;采用酶联免疫吸附法检测其血清中肝功能指标[天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)]、血脂指标[游离脂肪酸(FFA)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]和炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β]水平;苏木精-伊红染色后,通过显微镜观察其肝组织病理学变化;并分别采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法和Western blot法检测其肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)的mRNA和蛋白表达水平.结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠在给药4、8周后血清中葡萄糖、胰岛素含量显著增加(P<0.01),胰岛素抵抗指数显著升高(P<0.01);血清中肝功能指标、血脂指标和炎症因子水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);肝细胞肿胀呈圆形,且体积较正常对照组明显增大,肝脏有不同程度的脂肪变性及空泡样变,并伴随有少量炎细胞浸润现象;肝组织中PPARα、ACOX1的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01).与模型对照组比较,除富硒灵芝粗提物低剂量组大鼠给药4周后的胰岛素抵抗指数和血清中AST、ALT、IL-6、IL-1β水平以及给药8周后血清中葡萄糖、胰岛素、ALT水平和给药4、8周后4个血脂指标水平降低不显著外(P>0.05),其余各组大鼠在给药4、8周后上述血清指标水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);给药4、8周后大鼠肝组织病理学变化不同程度减轻;各给药组大鼠给药4、8周后肝组织中PPARα、ACOX1的蛋白和mRNA表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01).结论:富硒灵芝粗提物可上调肝组织中PPARα和ACOX1蛋白和mRNA的表达,促进蓄积的脂肪酸排出,明显改善T2DM模型大鼠脂肪酸代谢、炎症反应和肝功能.