目的:观察通督启神电针法的抗抑郁作用，探讨其调控抑郁模型大鼠蛋白激酶C（PKC）/还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化应激途径的作用机制。方法:将32只SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、通督启神电针组和艾司西酞普兰组。模型组、通督启神电针组及艾司西酞普兰组采用慢性不可预知的应激建立抑郁模型。开始造模后，通督启神电针组每日施以电针治疗，15 min/次；艾司西酞普兰组灌胃艾司西酞普兰30 mg/kg。实验开始前1天和实验第28天称重，观察体重增长情况，并进行糖水偏好实验及旷场实验。采用Western blot免染总蛋白归一法检测大鼠下丘脑组织蛋白激酶Cα（PKCα）、NADPH氧化酶活化蛋白p47（p47phox）、Ras相关C3肉毒菌素物底物1（RAC1）蛋白表达，应用免疫荧光技术检测NADPH氧化酶2（NOX2）阳性面积比率；使用DCFH-DA荧光探针技术检测活性氧（ROS）含量。结果:与模型组比较，通督启神电针组和艾司西酞普兰组大鼠体重增长量升高（ P<0.01），糖水偏好指数升高（ P<0.01），旷场实验总移动距离和中心区停留时间延长（ P<0.01或 P<0.05）；下丘脑区PKCα、p47phox、RAC1蛋白表达降低（ P<0.05或 P<0.01），NOX2蛋白阳性面积比率降低（ P<0.05），ROS水平降低（ P<0.01）。 结论:通督启神电针法可改善抑郁大鼠行为方式，减少PKC/NADPH途径的氧化应激反应，减少ROS生成，从而减轻氧化应激损伤，缓解抑郁症状。

肝移植是目前终末期肝病和肝功能衰竭等唯一有效的治疗手段，而移植术后发生的再灌注损伤在一定程度上影响着肝移植的成功率。缺血再灌注损伤（IRI）包括缺血和再灌注2个阶段，其发生涉及多种病理生理机制和细胞的活化，包括氧化应激、炎症细胞因子、钙超载、线粒体损伤、中性粒细胞和Kupffer细胞活化等，而活性氧在其中发挥着重要作用。细胞内活性氧主要来源于细胞质和线粒体。两种来源之间相互作用、相互促进。近年研究发现，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶（NOX）通过产生大量的胞质活性氧，介导氧化应激、免疫细胞活化和程序性细胞死亡等，参与肝脏IRI。本文对NOX在肝脏IRI中作用的最新研究进展（包括氧化应激、免疫细胞活化、及细胞凋亡、铁死亡等程序性细胞死亡）进行综述。

目的 探索三氯异氰尿酸(TCCA)对小鼠睾丸精原细胞GC-1氧化应激和DNA甲基化的影响.方法 以TCCA 0(细胞对照),97,194和387 μmol·L-1处理GC-1细胞24 h;CCK-8法检测细胞存活率;Hoechst 33342染色检测各组细胞形态和凋亡率;流式法检测细胞周期;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞凋亡相关基因Bax和Fas、氧化应激相关基因线粒体超氧化物歧化酶(SOD2)、铁死亡相关基因谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)、核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)、DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)和DNA甲基转移酶3L(DNMT3L)mRNA表达水平;Griess法测定GC-1细胞一氧化氮(NO)含量,比色法测定丙二醛(MDA)水平;DCFH-DA荧光探针法测定GC-1细胞活性氧(ROS)水平,DNTB比色法测定还原型谷胱甘肽(GSH)含量,WST-8法测定还原型辅酶Ⅱ(NADPH)含量.结果 与细胞对照组相比,TCCA 194和387 μmol·L-1组细胞存活率降低(P<0.01),出现细胞核固缩及核碎裂,细胞凋亡率显著增加(P<0.01),细胞被阻滞在G2/M期(P<0.05);TCCA 387 μmol·L-1组细胞NO和MDA含量增加(P<0.01),ROS水平升高(P<0.01),GSH和NADPH含量降低(P<0.01),SOD2,GPX4,Nrf2,SLC7A11和DHODH mRNA表达减少(P<0.05,P<0.01);Bax,Fas,DNMT3L和DNMT3A mRNA表达增加(P<0.05,P<0.01).结论 TCCA可降低GC-1细胞存活率,抑制细胞增殖,引起细胞凋亡.其机制可能与其破坏抗氧化系统、增强氧化应激、诱导铁死亡及干扰GC-1细胞甲基化有关.

目的:观察热补针法对类风湿关节炎(RA)寒证家兔膝关节滑膜炎性反应及滑膜组织、血清中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、糖酵解活性的影响,探讨热补针法治疗RA的机制.方法:选取32只新西兰兔随机分为正常组、模型组、抑制剂组、热补针法组,每组8只.采用卵蛋白联合弗氏完全佐剂诱导及低温冷冻法复制RA寒证模型.抑制剂组给予2-甲氧基雌二醇腹腔注射,热补针法组给予热补针法针刺"足三里",留针30 min.各组干预均1次/d,连续14 d.观察家兔膝关节周径及痛阈变化;采用ELISA法检测家兔血清中还原型辅酶Ⅱ(NADPH)、己糖激酶(HK2)、6-磷酸果糖激酶2/2,6-二磷酸果糖激酶3(PFKFB3)含量;HE染色法观察家兔膝关节滑膜组织形态变化;免疫组织化学法检测家兔膝关节滑膜组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-17的阳性表达;分光光度法检测家兔膝关节滑膜组织中乳酸含量;Western blot法检测膝关节滑膜组织中HIF-1α、乳酸脱氢酶(LDHA)、丙酮酸激酶 2(PKM2)蛋白表达水平.结果:干预后,与正常组比较,模型组家兔膝关节周径增大(P<0.05),痛阈值降低(P<0.05),可见滑膜细胞中度增生及炎性浸润,滑膜组织病理评分升高(P<0.05),滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17阳性表达及乳酸含量均升高(P<0.05),血清NADPH、HK2、PFKFB3含量及滑膜组织中HIF-1α、LDHA、PKM2蛋白表达水平均升高(P<0.05).与模型组比较,抑制剂组及热补针法组家兔膝关节周径缩小(P<0.05),痛阈值升高(P<0.05),滑膜增生、炎性细胞浸润均改善,滑膜组织病理评分降低(P<0.05),滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17阳性表达及乳酸含量均下降(P<0.05),血清NADPH、HK2、PFKFB3含量及滑膜组织中HIF-1α、LDHA、PKM2蛋白表达水平均下降(P<0.05).与抑制剂组比较,热补针法组家兔滑膜组织病理评分升高(P<0.05),滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17阳性表达及乳酸含量均升高(P<0.05),血清NADPH、HK2、PFKFB3含量及滑膜组织中HIF-1α、LDHA、PKM2蛋白表达水平均升高(P<0.05).结论:热补针法干预RA寒证家兔可提高痛阈,减小膝关节周径,抑制炎性反应,其作用机制与下调HIF-1α及糖酵解活性相关.

目的 研究温经通络汤含药血清对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的小鼠原代软骨细胞损伤的影响及机制.方法 采用IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞损伤模型,检测细胞中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α,软骨降解相关蛋白酶基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP9、MMP13、ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白 1 基元 4(ADAMTS4)以及糖酵解相关酶乳酸脱氢酶A(LDHA)、M2 型丙酮酸激酶(PKM2)、还原型辅酶Ⅱ氧化酶 2(NOX2)、还原型辅酶Ⅱ氧化酶 4(NOX4)的 mRNA 表达;测定细胞内MMP3、MMP13、P65、IκB-ζ、缺氧诱导因子 1α(HIF-1α)以及LDHA蛋白表达水平;进一步检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和乳酸的浓度,测定细胞内辅酶Ⅰ(NAD)的还原态(NADH)和氧化态(NAD+)的比率,以及细胞内活性氧(ROS)水平.结果 温经通络汤含药血清可显著抑制IL-1β软骨细胞内IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达(P＜0.01),降低细胞上清液中NO浓度(P＜0.05,P＜0.01),下调IκB-ζ(P＜0.05)和P65 蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).温经通络汤含药血清可显著下调MMP3、MMP9、MMP13 以及ADAMTS4 mRNA表达(P＜0.01),抑制MMP13(P＜0.05,P＜0.01)和MMP3(P＜0.05)的蛋白表达.氧化应激方面,它可显著抑制软骨细胞内ROS的产生,提高NADH/NAD+比率,降低上清液中MDA浓度,下调HIF-1α蛋白表达(P＜0.01).温经通络汤含药血清可显著降低乳酸浓度,下调LDHA、PKM2、NOX2、NOX4 的表达,降低细胞内糖酵解水平(P＜0.05,P＜0.01).结论 温经通络汤含药血清可通过抑制炎症、软骨降解、氧化应激和糖酵解,缓解IL-1β诱导的小鼠原代软骨细胞损伤,其机制可能与调控IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴有关.

目的:探讨马钱苷通过调节蛋白激酶 B(AKT)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子-E2 相关因子 2(Nrf2)通路改善氧葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的神经元铁死亡的机制.方法:将神经元分为对照组、OGD/R组、OGD/R+L-马钱苷组、OGD/R+M-马钱苷组、OGD/R+H-马钱苷组、OGD/R+H-马钱苷+ML385组.透射电子显微镜观察神经元线粒体形态;检测铁含量、谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)活性、4-羟基壬烯醛(4-HNE)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)/氧化型谷胱甘肽(GSSG),还原型辅酶Ⅱ(NADPH)/辅脱氢酶Ⅱ(NADP+)及乳酸脱氢酶(LDH)含量;使用 CM-H2DCFDA、C11-BODIPY581/591 分别检测细胞内和脂质活性氧(ROS)水平;四唑盐(MTT)试剂盒检测细胞活性;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测 B细胞淋巴瘤 2(Bcl-2)、Bcl相关 X蛋白(Bax)、剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶 3(cleaved Caspase-3)、磷酸化的蛋白激酶 B(p-AKT)/AKT、磷酸化的腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)/AMPK、Nrf2蛋白表达.结果:OGD/R组神经元线粒体出现碎片化现象,嵴减少,线粒体膜密度有所增加.与对照组比较,OGD/R组GSH/GSSG、NADPH/NADP+、SOD、GPX4相对活性、细胞活力以及Bcl-2水平、p-AKT/AKT、p-AMPK/AMPK、Nrf2水平下降(P<0.05),Fe2+含量、细胞内ROS水平、脂质ROS水平以及 4-HNE、MDA水平、LDH释放量、Bax以及cleaved Caspase-3水平上升(P<0.05);马钱苷处理后神经元线粒体中的线粒体嵴变得较为完整,碎片化现象消失,OGD/R+L-马钱苷组、OGD/R+M-马钱苷组、OGD/R+H-马钱苷组较 OGD/R 组 GSH/GSSG、NADPH/NADP+、SOD、GPX4 相对活性、细胞活力以及 Bcl-2 水平、p-AKT/AKT、p-AMPK/AMPK、Nrf2水平上升(P<0.05),Fe2+含量、细胞内ROS水平、脂质ROS水平以及4-HNE、MDA水平、LDH释放量、Bax以及 cleaved Caspase-3水平下降(P<0.05),且随着马钱苷剂量的增加,改善效果更显著;OGD/R+H-马钱苷+ML385组以上指标与OGD/R组趋势一致.结论:马钱苷可能通过调节AKT/AMPK/Nrf2通路改善OGD/R诱导的神经元铁死亡.

目的 探讨仙茅苔黑酚龙胆二糖苷(orcinol gentiobioside,OGB)对氧化应激诱导的破骨细胞(osteoclasts,OCs)的作用及机制.方法 可溶性核因子-κB受体活化因子配体(soluble receptor activator of nuclear factor-KB ligand,sRANKL)联合H2O2诱导RAW264.7细胞,建立氧化应激诱导的OCs模型;CCK-8法检测OCs活力;抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色测定OCs的数目;磷酸苯二钠法测定OCs的TRAP活性;免疫荧光法观察OCs的F-actin环结构和形态,以及p65和核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)的核转位;ELISA法测定OCs相关的生化指标;Western blotting检测骨吸收关键蛋白及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和Nrf2通路相关蛋白的表达.结果 OGB显著抑制氧化应激诱导的OCs的形成和分化(P＜0.01),并抑制TRAP活性、F-actin环的形成及其骨吸收作用(P＜0.05、0.01),下调骨吸收关键蛋白c-Fos、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP9)的表达(P＜0.05、0.01),降低活性氧(reactiveoxygen species,ROS)和还原型辅酶 Ⅱ(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶 4(NADPH oxidase 4,NOX4)的活性(P＜0.05、0.01),增加抗氧化酶血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase 1,NQO1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(gamma-glutamyl cysteine synthetase,γ-GCS)的活性(P＜0.05、0.01),增强 OCs 中 Nrf2 的表达和核转位,抑制肿瘤坏死因子受体相关蛋白 6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)的募集、核因子-κB 抑制因子 α(inhibitor of NF-κB-α,IκBα)的降解,并阻止p65的磷酸化和核转位(P＜0.05).结论 OGB能够通过调控NF-κB和Nrf2通路,抑制氧化应激诱导的OCs形成分化和骨吸收作用.

啤酒酵母的自溶会影响啤酒的风味和品质,对酵母自溶的调控是工业啤酒生产的迫切需求.前期在啤酒酵母自溶的研究中发现柠檬酸循环相关基因对酵母自溶有较大影响.为探究柠檬酸循环中异柠檬酸脱氢酶基因调控对自溶的影响,在典型拉格啤酒酵母(Saccharomyces pastorianus H.)Pilsner中对IDP1和IDP2基因进行了破坏和过表达.结果发现IDP1基因的破坏能提高酵母的抗自溶能力,自溶 96 h抗自溶指数为 8.40,比原始菌提高了 1.5 倍.IDP1基因的破坏提高还原型辅酶Ⅱ(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)的供应,NADPH/NADP+的比值为1.94,发酵结束时胞内ATP水平比原始菌提高 1.8 倍,活性氧(reactive oxygen species,ROS)相比原始菌减少 10%.IDP2基因的缺失造成酵母快速自溶和NADPH供应的减少,自溶 96 h抗自溶指数为 4.03,NADPH/NADP+的比值为 0.89.发酵结束时胞内 ATP水平相比原始菌减少 8%,ROS是原始菌的 1.3 倍.本研究进一步阐释了柠檬酸循环相关基因对酵母自溶的调控机理,为选育自溶性能可控的优良酵母提供了理论基础.

从氧化应激角度对中药活性成分防治蒽环类药物心脏毒性作用机制的研究进行总结,以期为蒽环类药物心脏毒性的防治与进一步药物开发提供参考.中药活性成分主要通过保护线粒体功能、抑制铁死亡、抗硝基氧化应激、调控还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶、增强抗氧化防御、抗脂质过氧化等机制,以及调控Nrf2、AMPKα、SIRT、UCP、Bmi-1等多个信号因子来减轻蒽环类药物心脏毒性.

心血管疾病是一种慢性炎症性疾病,血管壁炎症反应贯穿心血管疾病的全过程.1-磷酸鞘氨醇(S1P)与靶细胞表面的1-S1P受体(S1PR)结合,激活不同的细胞内信号途径而影响细胞的增殖、凋亡、迁移、分化、血管生成和创伤愈合等,本文就S1P及其受体对血管炎症的影响进行综述.1 S1P概述1.1 S1P的生成、代谢及转运S1P是磷脂代谢的重要代谢产物,其前体物质鞘氨醇主要由软脂酰乙酰辅酶(Co)A及丝氨酸在磷酸吡哆醛、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)+H及黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)等辅酶参与下合成,也可由神经酰胺在神经酰胺酶作用下脱酰胺键生成.鞘氨醇通过鞘氨醇激酶(SPHK)1和SPHK2磷酸化生成S1P.SPHK1对鞘氨醇和二氢鞘氨醇具有高度特异性,主要表达在细胞质,当受到激活时由细胞质移位至质膜.此外,约8％的胞内SPHK1释放到胞外,以局部合成S1P作用于自身或旁细胞表面的S1PRs.SPHK2磷酸化底物广泛,包括鞘氨醇、二氢鞘氨醇、4-羟双氢鞘氨醇和FTY720,主要表达于细胞核,也有部分表达于胞质及胞膜.