目的:评价胆碱能生物标记物与老年患者术后谵妄(POD)的关系。方法:收集2018年7月至2019年9月本院择期在脊椎-硬膜外阻滞下行全膝/髋关节置换术患者，年龄65～85岁，体重50～80 kg，ASA分级Ⅰ～Ⅲ级。收集患者一般临床资料，于麻醉前取肘静脉血5 ml，采用ELISA法检测血浆胆碱乙酰转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、丁酰胆碱酯酶(BuChE)、TNF-α和IL-6浓度。于术前1 d、术后入恢复室、术后1、3和7 d(或出院前)同一时段进行神经心理学测试，术前采用简明智力状态检查量表(MMSE)评估术前认知状态，术后采用CAM法和MDAS法评估POD的发生情况，根据是否发生POD分为POD组(P组)和非POD组(NP组)。采用logistic回归分析筛选POD的危险因素。结果:NP组349例，P组57例，POD发生率为14.0%。与NP组比较，P组患者年龄、术前并存基础疾病(≥3种)、血浆ChAT、TNF-α和IL-6浓度升高，AChE和BuChE浓度降低( P<0.05)。logistic回归分析结果显示，血浆AChE、BuChE、ChAT浓度变化和高龄是发生POD的独立危险因素( P<0.05)。 结论:老年患者POD的发生与术前血浆AChE、BuChE和ChAT浓度变化有关。

Oliver-McFarlane综合征是一种罕见的遗传病，以长睫毛、脉络膜视网膜萎缩和多种垂体激素缺乏为特征性改变。本例患者女性，29岁，自幼夜盲、视力低下、长睫毛，经基因测序检出PNPLA6基因复合杂合变异，综合临床表现诊断为Oliver-McFarlane综合征。

目的:探讨药物性肝损伤（DILI）的临床特征，为DILI的防治提供依据。方法:收集山西医科大学第一医院2018年11月至2021年11月住院治疗的资料完整的DILI患者202例的临床资料，对患者性别、年龄、服用或接触的药物种类和名称、临床特征、自身抗体、肝功能等相关指标进行统计学分析。结果:202例DILI患者中，男77例（38.1%），女125例（61.9%），年龄分布以 > 40~60岁（55.0%）为主。肝细胞型141例（69.8%），胆汁淤积型27例（13.4%），混合型34例（16.8%），不同临床分型间丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、γ-谷氨酰氨基转移酶、碱性磷酸酶、凝血酶原时间、国际标准化比值、凝血酶原活动度差异均有统计学意义（ H=91.43、58.65、9.25、32.69、9.56、8.19、9.40，均 P < 0.05）。202例DILI患者中，重度肝损伤最多（40.6%），不同临床分型疾病严重程度差异无统计学意义（ P=0.789）。引起DILI的药物种类占前3位的分别是中药［52.0%（105/202）］、抗肿瘤药［6.4%（13/202）］、抗精神病药［5.9%（12/202）］。202例DILI患者自身抗体检出率为29.7%（60/202）。 结论:DILI 临床表现缺乏特异性，致病药物种类较多，临床医师应对重点人群加强肝功能监测。混合型患者肝功能衰竭比例高，应引起重视。DILI患者肝病相关抗体阳性时，应高度警惕是否存在自身免疫性肝病的可能。

目的:探索硫醇乙酰基转移酶MshD对结核分枝杆菌在体外生长、应对压力刺激和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响.方法:利用CRISPR-NHEJ基因编辑技术,构建结核分枝杆菌mshD基因敲除株(ΔmshD株)和回补株(ΔmshD∷mshD株).分别检测H37Rv野生株(WT)、ΔmshD株和ΔmshD∷mshD株在液体培养基和固体培养基中的生长情况,以及外源添加L-半胱氨酸和过氧化氢酶对菌株生长的影响;检测3种菌株对不同刺激剂如H2O2、二硫苏糖醇(DTT)、十二烷基硫酸钠(SDS)的敏感性,以及外源添加过氧化氢酶对压力条件处理后菌株的恢复情况;采用流式细胞术检测SDS处理3种菌株前后菌株的ROS水平.结果:与WT和ΔmshD∷mshD株相比,ΔmshD株在固体平板上的生长较为缓慢,外源添加过氧化氢酶可以恢复其生长趋势;ΔmshD 株应对 DTT[WT(6.96±2.02)％,ΔmshD(0.02±0.00)％,ΔmshD∷mshD(6.64±0.77)％;F=29.700,P＜0.001],H2O2[WT(0.23±0.06)％,ΔmshD(0.01±0.00)％,ΔmshD∷mshD(0.26±0.06)％;F=25.520,P=0.001]和 SDS[WT(0.12±0.03)％,ΔmshD(0.01±0.00)％,ΔmshD∷mshD(0.18±0.04)％;F=19.540,P=0.002]刺激的存活率更低,差异均有统计学意义;外源添加过氧化氢酶可以恢复其存活率.ΔmsshD株自身ROS水平高于 WT(WT:95.100±2.553,ΔmshD:106.000±4.000,Δmsh∷mshD:94.667±3.055;F=11.650,P=0.009),SDS 处理 ΔmshD 株的自身 ROS 水平进一步升高(WT:436.000±8.000,ΔmshD:533.667±4.726,ΔmshD∷mshD:441.333±2.517;F=292.900,P＜0.001),差异均有统计学意义.结论:mshD基因缺失在固体培养基中生长减慢,mshD基因协助结核分枝杆菌抵抗各种应激压力,ΔmshD菌株内源性ROS水平增加.外源添加过氧化氢酶可一定程度恢复mshD基因敲除株生长和存活缺陷.

目的 探讨维生素D(vitamin D,VD)调控脂肪酸诱导的巨噬细胞M1-M2 极化表型转变对肝细胞脂质代谢的直接作用及机制.方法 体外饱和脂肪酸孵育培养小鼠巨噬细胞RAW264.7并予活性VD-1,25(OH)2D3补充干预,制备相应的条件培养液体外培养小鼠肝细胞AML12.Real-time PCR检测巨噬细胞M1/M2 极化基因表达水平,Real-time PCR、Western blot 分别检测巨噬细胞 VD 受体(VD receptor,VDR)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)基因、蛋白表达水平;油红O染色观察肝细胞内脂质沉积表现,Real-time PCR、Western blot分别检测肝细胞脂质合成和分解代谢相关酶类基因、蛋白表达水平.结果 体外饱和脂肪酸作用下,与VD对照组相较,VD补充组巨噬细胞M1 极化基因诱生型一氧化氮合酶 2(inducible nitric oxide synthase 2,iNOS2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)及M2 极化基因白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)mRNA表达水平均明显降低,巨噬细胞VDR/PPARγ mRNA和蛋白表达水平均明显降低.体外饱和脂肪酸作用的巨噬细胞条件培养液孵育肝细胞,与 VD 对照组相较,VD 补充组肝细胞脂肪变性明显减少,肝细胞脂质合成代谢酶[固醇调节元件结合蛋白 1C(sterol-regulatory element binding protein 1C,SREBP1C)、脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FASN)]mRNA 和蛋白表达水平均明显降低,脂质分解代谢酶肉碱棕榈酰转移酶 1A(carnitine palmitoyltransferase 1A,CPT1A)mRNA和蛋白表达水平明显降低.结论 补充VD介导VDR/PPARγ 通路逆转脂肪酸诱导的巨噬细胞极化表型直接影响肝细胞脂质代谢水平并改善肝细胞脂肪变性.[营养学报,2024,46(2):139-145]

目的 体外构建高糖诱导HT-22小鼠海马神经元"代谢记忆"细胞模型,探究"代谢记忆"对HT-22细胞凋亡和组蛋白乙酰化的影响.方法 以高糖培养基(葡萄糖浓度为55 mmol/L)和常规糖培养基(葡萄糖浓度为25 mmol/L)培养HT-22细胞,分为常糖组(NG 4、6、8组,25 mmol/L葡萄糖分别培养4、6、8 d),高糖组(HG 4、6、8组,高糖培养4、6、8 d),代谢记忆组(HG2NG2、HG2NG4、HG2NG6、HG4NG2、HG4NG4组,即高糖2d转25 mmol/L葡萄糖培养2、4或6d,高糖4d转25 mmol/L葡萄糖培养2d或4 d).CCK-8法检测细胞活力变化,检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量,筛选出建立"代谢记忆"模型的最佳作用时间.后续将细胞分为NG4组、NG8组、HG4组、HG4NG4组和HG8组,光学显微镜观察各组细胞形态;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测去乙酰化酶(HDAC)和组蛋白乙酰转移酶(HAT)活性;Western blot检测组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达情况.结果 HG4NG4组为理想的高糖"代谢记忆"细胞模型;NG4、NG8组细胞交织成致密网状,生长状态良好,细胞呈梭形,突触结构明显.而HG4、8组细胞胞体变圆,突触结构消失,生长受抑,HG4NG4组细胞数量增多但形态受损;流式细胞术结果显示,与NG8组相比,HG8、HG4NG4组凋亡率增加(P＜0.05);ELISA结果表明,与NG8组相比,HG8组及HG4NG4组HAT和HDAC的水平均增高(P＜0.05),与HG8组相比,HG4NG4组HAT和HDAC差异无统计学意义;Western blot结果显示,与NG8组相比,HG8组、HG4NG4组HDAC4、Bax和Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达水平降低(P＜0.05),与HG8组相比,HG4NG4组蛋白表达差异无统计学意义.结论 HT-22小鼠海马神经元细胞经高糖55 mmol/L培养4d后,再以25 mmol/L葡萄糖培养4d是理想的高糖"代谢记忆"细胞模型.其机制可能与高糖模型中HDAC、HAT活性及HDAC4表达升高有关.

目的 研究天然产物大黄素是否能够影响HpG2肝癌细胞中组蛋白乙酰化水平,进而加速肝癌细胞焦亡和凋亡,为肝癌的治疗提供新的靶点.方法 CCK-8法检测不同浓度大黄素对HpG2细胞活力的影响;生物信息学分析TCGA数据库中肝癌患者组蛋白乙酰化相关基因表达情况,验证候选基因赖氨酸乙酰基转移酶2A(KAT2A)与细胞凋亡通路的相关性;实时荧光定量PCR(qPCR)检测HepG2细胞与L02细胞KAT2A mRNA水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大黄素对HpG2细胞中组蛋白乙酰转移酶(HAT)、组蛋白去乙酰转移酶(HDAC)、白细胞介素(IL)-1β、IL-18的影响;流式细胞术检测大黄素对肝癌细胞凋亡的影响;Western blot检测细胞凋亡、细胞焦亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2-相关X蛋白质(Bax)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、Gasdermin家族成员DN端(GSDMD-N)及KAT2A的表达情况.结果 大黄素能降低HpG2细胞活性,半抑制浓度(IC50)95%置信区间为58.12～66.52μmol/L.与正常肝组织相比,组蛋白乙酰化相关基因mRNA水平在肝癌组织中表达增高,且KAT2A变化倍数最大[log2(Fold Change)=2.010,P＜0.01];在肝癌组织中,KAT2A mRNA的表达与细胞凋亡通路呈负相关(rs=-0.230,P＜0.01).与L02细胞相比,KAT2A mRNA在HepG2中表达升高(P＜0.05);与对照组相比,大黄素干预组HAT和HDAC的表达水平下降,IL-18、IL-1β表达水平水平增高,细胞凋亡率升高,KAT2A、BAX的表达降低,Bcl-2、NLRP3、GSDMD-N及Caspase-1表达水平升高(P＜0.05).结论 大黄素可抑制肝癌细胞活力,加速细胞凋亡和焦亡,其机制可能与调控KAT2A表达相关.

以从新疆富蕴县金属矿区土壤筛选出的抗重金属微藻F1为材料,测定在不同浓度(0、0.5、1.0、1.5和2.0mmol/L)Cu2+胁迫下F1微藻叶绿素a、可溶性蛋白、MDA和谷胱甘肽(GSH)含量,以及谷胱甘肽硫转移酶(GST)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)和谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCL)的活性,同时用红外光谱仪检测细胞壁上参与重金属螯合的官能团,用扫描电镜分析细胞壁上的离子交换情况,探讨F1土壤微藻对CR2胁迫的耐受生理机制,为利用微藻生态修复技术去除污染区土壤重金属奠定基础.结果显示:(1)F1土壤微藻对Cu2+具有较强的耐抗性.(2)F1土壤微藻细胞中参与吸附Cu2的基团分别为-OH、-CH2、-RCONH2和C-OH等.(3)F1土壤微藻在吸附Cu2+的过程中,Cu2 +与细胞壁上的Al3+、Fe2+、Mg2+、Ca2 +、K+、Na+和Zn2+发生了交换.(4)藻细胞中的GSH和GSH-PX在F1土壤微藻耐受Cu2+胁迫时起主要作用.研究认为,F1微藻种对Cu2+的耐受性首先与其细胞壁外表细微结构及其离子交换特性有关,并且细胞壁上-OH、-CH2、-RCONH2和C-OH等化学基团起着重要作用,其次细胞内的谷胱甘肽以及谷胱甘肽相关酶类能够有效清除活性氧的过量积累,最终保护细胞免受重金属胁迫损伤.

目的 探讨siRNA抑制饥饿素-O-乙酰基转移酶(GOAT)对肝脂肪变性影响及作用机制.方法 游离脂肪酸(FFA)作用于人肝细胞系LO2细胞以诱导肝细胞脂肪变性.FFA与siRNA-GOAT单独或联合处理LO2细胞,分为4组,即空白对照(NC)组:仅用PBS处理;siRNA-GOAT组:仅以终浓度为10 nmol/L的siRNA-GOAT处理;FFA组:仅以终浓度为1 mmol/L的FFA处理;FFA+ siRNA-GOAT组:采用上述浓度FFA和siRNA-GOAT混合处理.肝细胞油红O染色检测脂肪滴形成情况;TG检测试剂盒检测LO2细胞脂质水平;免疫印迹法(Western Blot)、实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫荧光染色、电子显微镜检测自噬活性;酶联免疫吸附测定法、RT-PCR检测TNFα、IL-6水平.Western Blot检测雷帕霉素(mTOR)、磷酸化mTOR(pmTOR)、AMP-活化蛋白激酶(AMPK)以及磷酸化AMPK(p-AMPK)的蛋白水平变化.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 FFA+ siRNA-GOAT组脂肪滴形成较FFA组明显减轻,TG水平明显低于FFA组,差异有统计学意义(P ＜0.001).FFA+ siRNA-GOAT组TNFα和IL-6蛋白、mRNA表达水平较FFA组均明显下降,差异均有统计学意义(P值均＜0.005).siRNA-GOTA组LC3-Ⅱ、Beclin-1 mRNA表达水平明显高于NC组,差异均有统计学意义(P值均＜0.001).FFA+siRNA-GOAT组LC3-Ⅱ、Beclin-1 mRNA表达水平明显高于FFA组,差异均有统计学意义(P值均＜0.001).siRNA-GOAT组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白水平明显高于NC组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).FFA+ siRNA-GOAT组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白水平明显高于FFA组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).免疫荧光染色示FFA+ siRNA-GOAT组LO2细胞中内源性LC3-Ⅱ表达水平较FFA组、siRNA-GOAT组升高.电子显微镜观察结果示FFA+ siRNA-GOAT组自噬体表达较FFA组增加.自噬抑制剂siRNA-ATG5、3-MA或刺激剂雷帕霉素处理LO2细胞后,FFA+ siRNA-ATG5组、FFA+3-MA组TG水平分别与FFA+ siRNA-GOAT组、FFA+雷帕霉素组比较,差异均有统计学意义(P值均＜0.001).FFA+ siRNA-GOAT组、FFA+雷帕霉素组LC3-Ⅰ/Ⅱ水平明显高于FFA+ siRNA-ATG5组、FFA+3-MA组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).FFA+ siRNA-GOAT组p-AMPK蛋白表达水平明显高于于FFA组、p-mTOR蛋白表达水平明显低于FFA组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 siRNA抑制GOAT可通过调节AMPK/mTOR通路,上调自噬活性,进而减轻肝细胞内脂肪变性.

目的 探讨肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症临床、生化以及基因变异特点.方法 对2014—2017年在广西壮族自治区妇幼保健院遗传代谢中心实验室确诊的4例肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症患儿的临床表现、生化检查、基因检测结果进行回顾性分析.4例患儿均通过干血滤纸片提取基因组DNA进行基因分析,其中1例患儿进行SLC25A20基因分析,3例患儿进行全外显子组测序分析.结果 4例无亲缘关系的患儿发病年龄1～28 d,死亡年龄1.5～30 d,临床表现为新生儿低血糖(4例)、心律失常(2例)、猝死(2例),生化检查:血糖1.2～2.0 mmol/L、肌酸激酶955～8 361 U/L,肌酸激酶同工酶199～360 U/L,游离肉碱3.70～27.07 μmol/L,棕榈酰肉碱1.85～14.84 μmol/L.4例患儿均携带SLC25A20基因c.199-10T＞G纯合变异,父母为杂合变异携带者.通过构建单体型发现, c.199-10T＞G变异位点均处于同一单体型.结论 肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症临床表现急重,预后不佳.表现有低血糖、心肌酶升高,长链酰基肉碱升高.c.199-10T＞G变异是肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症的重要分子病因,单体型分析提示该变异与奠基者效应有关.