目的:评价肝硬化低蛋白血症患者应用重组人生长激素(rhGH)的有效性、安全性和经济性。方法:计算机检索中国生物医学文献数据库(CBM)、万方医学网、维普医药、Embase、PubMed、Cochrane Library等数据库2000年1月1日至2019年1月1日收录的随机对照试验，按照一定标准纳入排除，并使用RevMan 5.3软件进行统计分析。结果:13篇文献纳入Meta分析，共739例患者。结果表明，与人血白蛋白(HAS)相比，rhGH治疗肝硬化低蛋白血症的短期疗效差异无统计学意义[加权均数差(WMD)为-0.42，95% CI(-1.77，0.92)， P＝0.54]，但中远期疗效则更好[WMD为3.42，95% CI(0.13，6.70)， P＝0.04；WMD为7.12，95% CI(4.75，9.50)， P<0.001]。 结论:应用rhGH治疗肝硬化低蛋白血症的短期疗效与输注HSA相当，但药效维持时间明显延长，无明显不良反应，且更具经济性。

重组技术生产的人血白蛋白可以降低血浆来源人血白蛋白的病毒污染风险,缓解人血浆来源受限等问题.目前,国内外有多家公司从事药用注射级重组人血白蛋白研发,我国已有重组人血白蛋白进入临床试验阶段,但只有日本批准了一个本国生产的重组人血白蛋白(商品名:Medway)上市.本文简要介绍了 Medway的临床试验内容,分析其总体临床试验策略、给药方案、生物等效性研究、有效性评价和安全性评价的基本考虑,以期为国内处于研发中的重组人血白蛋白的临床试验提供参考.

目的:改善重组人白介素-11在原核表达体系中的可溶表达水平以及在体内的循环半衰期.方法:通过构建白蛋白结合肽融合人白介素-11重组蛋白表达载体[pET-30a(+)-ABD-rhIL11],实现融合蛋白在原核表达体系中的可溶表达;基于疏水层析、离子交换层析和凝胶层析建立从破菌上清液中纯化ABD-rhIL-11的方法;通过圆二色光谱及荧光发射光谱分析等鉴定ABD-rhIL-11空间结构,并进行体内外活性及药效学评价.结果:成功获得纯度高于95％的重组融合蛋白,体外结合实验结果表明,ABD-rhIL-11能够迅速与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)结合;细胞增殖实验结果显示,ABD-rhIL-11与对照品活性相当;药代动力学结果显示,融合蛋白能够显著延长白介素-11在大鼠体内的循环半衰期;血小板计数实验结果显示,ABD-rhIL-11能够有效刺激大鼠血小板增殖.结论:为基于白蛋白结合肽融合策略的白介素-11药物长效设计提供了新的思路.

1例49岁男性鼻咽癌复发伴多发转移患者在第2个周期化疗结束后第2天血常规检查示血小板计数52×109/L,给予重组人白细胞介素111.5 mg皮下注射,1次/d.4 d后患者出现全身水肿,胸腔及腹腔积液,低蛋白血症(蛋白总量57 g/L,白蛋白33 g/L),血压降至95/67 mmHg (1 mmHg=0.133 kPa).诊断为毛细血管渗漏综合征,考虑与重组人白细胞介素11有关.停用该药,给予人血白蛋白5 g静脉滴注、1次/d,地塞米松10 mg静脉滴注、1次/d,迈之灵片0.15 g口服、2次/d,同时给予抑酸、护胃、补充电解质等对症治疗.6d后,患者全身水肿消退,各项指标逐渐恢复正常.

目的 用多种方法测定不同表达体系重组人血白蛋白中糖蛋白的含量,进行初步质量评价.方法 选择不同来源样品包括酿酒酵母表达的重组人血白蛋白、毕赤酵母表达的重组人血白蛋白、水稻表达的重组人血白蛋白、血浆来源的人血白蛋白,采用硫酸苯酚法、HPLC峰面积法、ConA结合洗脱HPLC定量法测定样品中糖蛋白含量.结果 硫酸苯酚法测定毕赤酵母表达体系的10批次样品,两个企业样品的甘露糖含量均值分别为2.7 mg·g(Pro)-1(A厂,n=4)和1.7 mg· g(Pro)-1(B厂,n=6);HPLC峰面积法测定整体上看毕赤酵母表达的重组人血白蛋白ConA结合蛋白峰面积百分比较高,分别为2.65％(A厂)及0.71％(B厂),而水稻表达的重组人血白蛋白ConA结合蛋白峰面积百分比较低,均值为0.05％(E厂,n=3),血浆来源的人血白蛋白ConA结合蛋白峰面积为0.01％(W厂);ConA结合后洗脱HPLC定量法测定毕赤酵母表达重组人血白蛋白ConA结合蛋白含量分别为27.58(A厂)、21.48(B厂)、32.02 mg·g(Pro)-1(C厂);酿酒酵母来源重组人血白蛋白ConA结合蛋白含量较低,仅为2.29 mg·g(Pro)-1(D厂);水稻来源重组人血白蛋白ConA结合蛋白含量最低,为1.27 mg·g(Pro)-1(E厂);血浆来源人血白蛋白ConA结合蛋白含量为31.16 mg·g(Pro)-1(S厂).结论 就本实验涉及的样品和检测方法所获得的初步结果而言,重组人血白蛋白中均含有糖类蛋白,毕赤酵母表达体系样品中的糖类蛋白含量整体上高于酿酒酵母表达体系,水稻表达的重组人血白蛋白中糖类蛋白含量最低(仅限现有分析条件),血浆来源的人血白蛋白中也含有糖类蛋白.

目的 应用超高效液相色谱-行波离子淌度串联四极杆飞行时间质谱仪(UPLC-VION)高分辨质谱联用技术对不同表达体系重组人血白蛋白和不同生产工艺下人血白蛋白在完整蛋白水平进行分析,探讨质谱分析技术在白蛋白产品鉴别实验上的实际应用.方法 采用ACQUITY UPLC超高效液相色谱系统,ACQUITY UPLC BEH C4色谱柱脱盐处理,电喷雾离子化(ESI) VION IMS QTof高分辨率质谱和UNIFI软件,对重组和血浆来源人血白蛋白进行分析.质谱信号经MaxEnt1去卷积化软件处理后,获得样品平均相对分子质量以及相对强度图谱.样品包括血浆来源人血白蛋白(2个厂家)、酵母表达系统(毕赤及酿酒酵母)生产的重组人血白蛋白(3个厂家)、转基因水稻表达的重组人血白蛋白(1个厂家)共6批,分别进行了测定和数据分析.结果 UPLC-VION高分辨质谱联用分析结果显示,不同厂家和不同表达载体纯化得到的重组人血白蛋白均能检测到66 437的信号,误差低于1,与人血白蛋白理论序列平均相对分子质量一致;不同厂家和不同工艺的样品具有特征性的质谱图,即不同来源人血白蛋白具有不均一性.结论 UPLC/VION超高效液相色谱-质谱联用方法专属性好,灵敏度高,能够区分出不同厂家及不同工艺得到的重组或血浆来源人血白蛋白,可作为白蛋白类药品质量控制的鉴别实验方法.

目的 探索利用磁珠提取法结合实时荧光定量核酸扩增技术,建立定量测定毕赤酵母来源重组人血白蛋白中残留DNA的方法.方法 将蛋白裂解后采用磁珠提取法提取样品中的残留DNA,利用Taqman探针法对样品和DNA标准品进行定量PCR测定,根据标准曲线对样品中的DNA残留量进行分析.采用重组人血白蛋白和血浆来源人血白蛋白2种基质对建立的方法进行回收率和重复性测定,评价方法准确性及精密度,并测定毕赤酵母来源重组人血白蛋白产品中残留DNA含量.结果 该方法测定毕赤酵母DNA残留最低准确定量浓度为3fg· μL-1,DNA含量在3 fg· μL-1 ～300pg· μL-1内曲线线性良好,标准曲线相关系数r2为0.998 3;以重组人血白蛋白作为基质时,100和10fg·μL-1 DNA加标回收率均值分别为93.58％(n=4)和215.56％(n=4);相对标准偏差RSD分别为19.6％及42.9％;以人血白蛋白作为基质时,100和10 fg·μL-1DNA加标回收率均值分别为67.09％(n=3)和113.40％(n=3);相对标准偏差RSD分别为6.9％和11.1％.按该方法检测毕赤酵母来源的3批重组人血白蛋白DNA残留量均值(n=7)分别为5.98、4.16和4.49 fg·μL-1 (n =7);3批样品DNA残留量均小于1ng· 10 g(Pro)-1.结论 磁珠分离法结合荧光定量PCR方法可解决超高蛋白浓度背景下重组人血白蛋白痕迹量DNA定量测定的技术难题,准确性和重现性良好,可以用于重组人血白蛋白毕赤酵母DNA残留量的定量检测.

目的 考察制品注射用重组人血清白蛋白与干扰素α2b融合蛋白的稳定性.方法 按照《中国药典》2015年三部的方法进行检测,影响因素试验[(42±2)℃高温试验、(4 500±500)Lx强光照射试验、90％高湿试验]、加速试验(37℃加速试验与25℃加速试验)及长期稳定性试验,方法均按照《生物制品稳定性研究技术指导原则》进行.结果 影响因素试验、加速试验及长期试验结果显示,温度对于本制品的纯度有一定的影响,随着试验温度越高,制品纯度变化越快,保存时间越短;湿度对制品的水分也有影响,其他指标相对稳定;通过长期稳定性考察发现,制品的试验样品在2～8℃密闭储存条件下保存24个月是相对稳定的,且各项考察指标均符合质量检定标准.结论 本制品注射用重组人血清蛋白与干扰素α2b融合蛋白在2～8℃密闭储存条件下保存24个月,各项考察指标保持稳定,且均符合质量检定标准.

目的 探讨植物源重组人血清白蛋白能否替代传统B27细胞培养添加剂作为基础培养基分化人多潜能干细胞为心肌细胞.方法 人多潜能干细胞以1.2×l04个/cm2的细胞密度接种,汇合度达至75％后采用含有0、50、100、200 g/L不同浓度植物源重组人血清白蛋白的分化培养基对其进行诱导分化,在光学显微镜和荧光显微镜下记录干细胞向心肌分化的全过程.用流式细胞仪检测不同浓度植物源人血清重组白蛋白心肌细胞的分化效率.用免疫荧光染色检测心肌细胞特异性标志物α-辅肌动蛋白(α-actinin)和心肌肌钙蛋白T(cTnT);用电镜观察人多潜能于细胞来源心肌细胞的超显微结构以及心肌细胞对药物的反应.结果 大量的自发跳动心肌细胞在诱导分化第9d左右出现,浓度为200 g/L的重组人血清白蛋白配成的心肌分化液的分化效率达60.4％;跳动心肌细胞α-actinin和cTnT染色阳性,超显微结构有肌丝的存在,且对异丙肾上腺素和维拉帕米呈剂量依赖性.结论 利用成分明确的、无动物源性的方法在体外诱导人多潜能干细胞分化为心肌细胞,分化效率达60.4％,分化方法简单且低成本,可作为临床级别使用.

δ-睡眠肽(delta sleep inducing peptide,DSIP)的相对分子质量较小,在体内半衰期较短,因此本研究将蛋白质转导结构域(protein transduction domain,PTD)、人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)、连接肽(linker)以及δ-睡眠肽(DSIP)进行融合表达,以获得重组PHLD睡眠肽融合蛋白.研究以pPIC9K/HSA为模板,利用PCR技术进行扩增,将获得的PHLD基因连接到表达载体pPIC9K上,然后转入组氨酸缺陷型毕赤酵母GS115,经G418筛选获得了高表达PHLD融合蛋白的酵母工程菌株,并进一步获得了高纯度的融合蛋白.本研究将为DSIP的深入研究和应用提供技术资料.