目的:以钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)缺陷病为核心，探讨血清胆汁酸谱分析在协助该病诊断及其鉴别诊断中的价值。方法:收集整理并分析2015年4月初至2021年12月底暨南大学附属第一医院儿科诊治的66例胆汁淤积性肝病（CLDs）患者的临床资料，包括NTCP缺陷病患者32例(成人16例，儿童16例)、希特林缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症（NICCD）16例、Alagille综合征8例，胆道闭锁10例。同时设立成人和小儿健康对照组（各15例）。通过超高效液相色谱-串联质谱技术对研究对象血清胆汁酸成分进行定性定量分析，利用统计学SPSS 19.0及GraphPad Prism 5.0软件对数据进行作图和比较。用 t检验、Wilcoxon秩和检验、Kruskal-Wallis H检验等统计学方法，比较NTCP缺陷病与相应健康对照组以及NTCP缺陷病与其他CLDs患儿的临床及胆汁酸谱之间的差异。 结果:与健康对照相比，NTCP缺陷病患者总结合型胆汁酸、总初级胆汁酸、总次级胆汁酸，以及甘氨胆酸、牛磺胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸等水平均升高（ P < 0.05）；与NTCP缺陷病成人患者相比，NTCP缺陷病患儿血清总结合型胆汁酸和总初级胆汁酸水平均明显升高（ P < 0.05）；NTCP缺陷病患儿血清牛磺鹅脱氧胆酸、甘氨猪胆酸、牛磺猪胆酸和牛磺α鼠胆酸水平明显升高，但甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸、石胆酸等胆汁酸降低（ P < 0.05）；NTCP缺陷病患儿血清中石胆酸、脱氧胆酸和猪脱氧胆酸等次级胆汁酸水平明显高于NICCD、Alagille综合征和胆道闭锁等其他CLDs组（ P < 0.05）；总初级胆汁酸/总次级胆汁酸、总结合型胆汁酸/总未结合型胆汁酸，以及牛磺胆酸、血清牛磺鹅脱氧胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸等指标可有效鉴别NTCP缺陷病和其他非NTCP缺陷病CLDs患儿。 结论:证实血清胆汁酸谱分析对于协助NTCP缺陷病的诊断和鉴别诊断具有重要参考价值，深化了对NTCP缺陷病等CLDs患者血清胆汁酸谱变化特征的科学认识，为深入理解其发病机制提供了代谢组学依据，同时为后续深入研究提供了线索和思路。

目的:研究体外培养的人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)中钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(sodium taurocholate cotransporting polypeptide, NTCP)的表达情况，探索体外培养的BMSCs能否自然感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)及NTCP是否是HBV感染BMSCs的一个功能性受体。方法:将HBV阳性血清以不同方法感染BMSCs，检测培养基上清及细胞中HBV DNA、培养基上清中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)等感染指标。NTCP-siRNA转染BMSCs后，再次用HBV阳性血清感染BMSCs，检测各感染指标。Western blot法检测各处理组BMSCs中NTCP的表达情况。结果:HBV可自然感染体外贴壁培养的人BMSCs，但感染效率很低。当HBV感染悬浮状态下的BMSCs时，感染效率显著升高。BMSCs中存在NTCP的表达，且HBV可显著上调NTCP的表达量，特别是对悬浮状态下的BMSCs。当BMSCs中NTCP的表达被NTCP-siRNA沉默后，HBV对BMSCs的感染效率显著下降。结论:体外培养的人BMSCs可被HBV自然感染，且其细胞内表达的NTCP是其感染HBV的一个功能性受体。人BMSCs可作为一种易感、稳定、无需分子修饰的细胞模型，用于研究HBV生命周期的早期阶段以及抗病毒治疗研究。

目的:探讨加味茵陈蒿汤治疗α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的胆汁淤积小鼠肝损伤的作用机制.方法:24只雄性SPF级C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(Normal组)、ANIT造模组(ANIT组)、加味茵陈蒿汤组(JWYCH组)、熊去氧胆酸组(UDCA组),每组6只.Normal组与ANIT组灌胃给予饮用水,持续10d;JWYCH组灌胃给予加味茵陈蒿颗粒剂水溶液,UDCA组灌胃给予熊去氧胆酸悬液,持续10d.第7天,小鼠用ANIT油溶液(50 mg/kg)造模.末次给药后,采用全自动生化仪检测小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸(TBA)及总胆红素(TBiL)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织形态学变化;采用RT-qPCR检测肝组织法尼醇X受体(FXR)、成纤维细胞生长因子15(FGF15)、FGF受体4(FGFR4)mRNA表达;Western blot检测肝组织FGF15、FXR、磷酸化FXR(p-FXR)、FGFR4、外排型转运体[胆盐输出泵(BSEP)、多药耐药相关蛋白2(MRP2)]、摄取型转运体[钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)、有机阴离子转运多肽2(OATP2)]蛋白表达.结果:血清肝功能生化学指标显示,与 Normal 组相比,ANIT 组 ALT、ALP、AST、TBA、TBiL 水平明显升高(P＜0.05);JWYCH 组和 UDCA 组 ALT、ALP、AST、TBA、TBiL水平明显低于ANIT组(P＜0.05);与UDCA组相比,JWYCH组的TBA水平明显下降(P＜0.05).肝组织病理结果显示,光镜下ANIT组可见胆管内胆栓形成,其汇管区以及胆管周国可见大量炎性细胞浸润,提示造模成功;JWYCH组、UDCA组病理损伤较ANIT组有明显改善.Western blot结果显示,与Normal组比较,ANIT组FGF15、FXR、p-PXR、FGFR4、BSEP、MRP2蛋白表达均明显减少(P＜0.05),提示造模成功;与 ANIT组比较,JWYCH组和 UDCA 组 FGF15、FXR、p-PXR、FGFR4、BSEP、MRP2 蛋白表达明显增加(P＜0.05,P＜0.01),而 NTCP、OATP2表达明显减少(P＜0.05).RT-qPCR结果显示,与Normal组比较,ANIT组小鼠肝组织FXR、FGF15、FGFR4的mRNA表达明显降低(P＜0.05);与ANIT组比较,UDCA组和JWYCH组FXR、FGF15、FGFR4的mRNA表达明显增加(P＜0.05);与UDCA组相比较,JWYCH组FGF15、FGFR4的mRNA表达明显增加(P＜0.05).结论:加味茵陈蒿汤能降低总胆汁酸水平,改善胆汁淤积和肝组织损伤.其作用机制可能是通过上调肝细胞FGF15、FGFR4表达,上调FXR和p-FXR水平,从而下调其下游摄取型转运体(NTCP、OATP2)水平以及上调外排型转运体(BSEP、MRP2)水平.

钠离子牛磺胆酸共转运多肽(sodium-taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)缺陷病是一种溶质载体家族 10 成员 1(solute carrier family 10 member 1,SLC10A1)双等位基因突变引起的胆汁酸代谢障碍性疾病,分布具有区域和种族差异,其中SLC10A1 c.800C>T(p.Ser267Phe)是我国的高频突变.NTCP缺陷病患儿主要表现为病理性黄疸,少部分有生长、运动和神经系统发育迟缓的表现,成年患者临床症状和体征不明显,生化检查提示血清总胆汁酸水平升高、部分伴有转氨酶和25-羟维生素D3 水平降低.NTCP缺陷病性高胆汁酸血症需与乙型肝炎病毒感染、丁型肝炎病毒感染、自身免疫性肝炎及妊娠期肝内胆汁淤积症等鉴别,妊娠合并NTCP缺陷病性高胆汁酸血症对母胎的影响迄今少有相关报道.综述NTCP缺陷病的分子遗传机制、临床表现、实验室检查、诊断、治疗及其对母胎的影响,为该病患者的明确诊断和正确干预提供依据.

目的 制备乙肝病毒受体钠离子/牛磺胆酸共转运多肽(Na+/taurocholate co-transporting polypeptide,NTCP)小鼠基因转染模型,为乙肝的防治研究提供动物模型.方法 制备携带人NTCP真核表达框的亲本质粒ZY781-CMV-NTCP及微环DNA pMC-CMV-hNTCP,采用水动力转染技术将微环DNA pMC-CMV-hNTCP经尾静脉注入ICR小鼠体内,采用PCR和免疫组化方法检测NTCP基因在小鼠体内的表达情况.结果 成功构建了携带人NTCP基因的微环载体.PCR检测表明人NTCP基因成功转入小鼠肝组织内,同时肝组织免疫组化检测表明hNTCP可以在小鼠的肝脏内表达.结论 成功制备出乙肝病毒受体(NTCP)基因转染小鼠模型.

目的 探讨不同胆酸减轻受鹅膏毒肽攻击人肝细胞(L-O2)损伤的作用及机制.方法 根据鹅膏毒肽的质量浓度将实验分为0.00 g/L、0.26 g/L、0.40 g/L、1.40 g/L、2.80 g/L共5个剂量组,将培养至指数生长期的L-O2铺于96孔板,每孔1×103细胞,24 h加入上述浓度的鹅膏毒肽,每组设3个复孔,分别与药物作用24、48、72 h采用四唑盐(MTT)比色法检测肝细胞活性,确定肝细胞生存的最小鹅膏菌毒素攻击剂量.实验分为空白对照组、损伤组和胆酸组,每个组均设3个时间点:攻击24、48、72 h,在攻击24h后使用牛磺胆酸、鹅脱氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸和牛磺鹅脱氧胆酸分别保护损伤肝细胞,在倒置相差显微镜下观察细胞形态学改变,MTT法进行活细胞计数,生化法检测培养上清液中AST和ALT.结果 肝细胞生存的鹅膏毒肽体外最小攻击剂量为1.40 g/L.空白对照组、损伤组、牛磺胆酸组、鹅脱氧胆酸组、甘氨胆酸组、甘氨鹅脱氧胆酸组及牛磺鹅脱氧胆酸组在鹅膏毒肽攻击肝细胞72 h时吸光度分别为0.812 ±0.035、0.345 ±0.021、0.363±0.018、0.387±0.027、0.431 ±0.018、0.465 ±0.015及0.452±0.030.胆酸各组较损伤组攻击72 h时吸光度逐渐升高,其中鹅脱氧胆酸组、甘氨胆酸组、甘氨鹅脱氧胆酸组、牛磺鹅脱氧胆酸组与损伤组比较差异有统计学意义(P＜0.05).胆酸各组AST和ALT活性下降,其中甘氨鹅脱氧胆酸组AST和ALT活性最低,与损伤组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 胆酸对鹅膏毒肽攻击L-O2有保护作用,作用机制可能与鹅膏毒肽和胆酸同为钠离子-牛磺酸共同转运多肽和有机阴离子转运多肽底物有关.

慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是造成肝炎、肝硬化、肝癌的主要诱因之一,已成为全球性的公共健康问题.乙型肝炎疫苗的推广应用显著降低了HBV感染率,但现阶段慢性乙肝病毒感染仍然无法根治.HBV研究模型对推动HBV相关研究和临床治疗起到了重要的作用.然而,由于缺乏合适的研究模型,HBV生物学以及HBV与宿主之间相互作用等方面仍存在很多问题未明了,制约了抗HBV新药研发.近年来,HBV功能性受体钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)的发现以及干细胞技术的发展应用,极大推动了HBV研究模型的发展.本文分别从病毒来源、细胞和动物感染模型等角度对HBV研究模型领域的进展进行综述.

目的 观察茵陈蒿汤防治大鼠非酒精性脂肪性肝病 (NAFLD) 的效果及其对肝组织钠离子牛磺胆酸共转运多肽 (NTCP) 表达的影响, 探讨茵陈蒿汤防治NAFLD的机制.方法 将45只SD大鼠随机分为3组各15只, 模型组、干预组每天给予高脂饲料灌胃进行NAFLD造模, 同时干预组每天给予茵陈蒿汤10 m L/kg灌胃, 对照组每天给予普通饲料喂养.12周后分批处死, 取大鼠腹主动脉血及肝脏组织;生化分析仪检测丙氨酸转氨酶 (ALT) 、天门冬氨酸转氨酶 (AST) 、总胆汁酸 (TBA) 、甘油三酯 (TG) , HE染色观察肝组织病理变化; Real time PCR、Western blotting法分别检测肝脏组织中NTCP mRNA及蛋白表达.结果 与对照组比较, 模型组血清ALT、AST、TBA、TG水平均升高 (P均<0. 05) ;干预组血清ALT、AST、TBA、TG水平均较模型组下降 (P均<0. 05) , 而与对照组间差异无统计学意义 (P均> 0. 05) .HE染色显示, 模型组肝组织可见空泡样变性、炎性细胞浸润和棕黄色胆汁颗粒, 而干预组较模型组肝组织脂肪变性、炎性细胞浸润均有一定程度缓解.与对照组比较, 模型组肝组织中NTCP mRNA及蛋白表达水平均下调 (P均<0. 05) ;干预组肝组织中NTCP mRNA及蛋白表达水平均较模型组上调 (P均<0. 05) , 而与对照组间差异无统计学意义 (P均> 0. 05) .结论 茵陈蒿汤可能通过上调NTCP基因表达, 减轻肝细胞内胆汁淤积, 进而改善肝脏功能, 减轻NAFLD大鼠肝脏病理损害.

目的 探讨钠离子-牛磺胆酸钠共转运多肽(NTCP,SLCI0A1)的S267F位点变异与不同HBV感染结局之间的相关性.方法 采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应法检测42例无症状HBV携带者(ASC)、158例慢性HBV感染(CHB)患者、175例HBV相关性肝硬化(LC)患者、71例HBV相关性肝细胞癌(HCC)患者以及224例HBV自限性清除者的NTCP基因S267F的基因型,分析S267F变异与不同HBV感染结局的关系.结果 S267F的T等位基因在ASC组的频率(5.95％)高于在HBV感染组中的频率(1.86％),差异有统计学意义(95％CI=0.108～0.852,P＜0.05).S267F的T等位基因在LC组(0.29％)、HCC组(0.70％)和LC+HCC组(0.41％)中的频率均低于CHB组(2.15％),差异有统计学意义(P＜0.05);但S267F变异与HBV自限性清除无显著相关性(P＞ 0.05).结论 HBV受体NTCP的S267F变异与不同的HBV感染结局有关,S267F变异可能是CHB患者进展为肝硬化和肝癌的保护因素.

肠肝循环是体内胆汁酸代谢过程中至关重要的一环.目前,多个在其中发挥重要功能的胆汁酸转运体已被发现,包括回肠顶端膜刷状缘吸收胆汁酸的顶膜钠离子依赖性胆汁酸转运体(apical sodium-dependent bile acid transporter,ASBT)[1]和肝细胞摄取胆汁酸的钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(Na-tauro?cholate co-transporting polypeptide,NTCP)[2]等.本世纪初,研究者发现了一种在肠上皮细胞基侧膜控制胆汁酸分泌至门静脉血流的新型胆汁酸转运体,并命名为有机溶质转运体α/β(organic solute trans?porterα/β,OSTα/β).OSTα/β由OSTα和OSTβ两个亚基组成,且只有OSTα和OSTβ同时表达时才能稳定存在并发挥功能[3-5].小鼠OSTα缺乏会导致肠道绒毛变钝、融合以及胆汁酸吸收不良等表型[6].