目的:探讨长链非编码RNA细胞周期依赖性激酶抑制基因(CDKN)2B-AS1及其邻近基因CDKN2A在特发性肺纤维化(IPF)合并肺癌中的作用及机制。方法:收集8例肺腺癌患者手术中切除的少许癌组织标本及癌旁的正常肺组织标本，实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测CDKN2B-AS1及其邻近基因CDKN2A的含量。选择人肺成纤维细胞系MRC-5为研究对象，将细胞分为正常组、干预组[转化生长因子β1(TGF-β1)干预]、阴性siRNA干预组(TGF-β1干预，转染无义序列小干扰RNA)和阳性siRNA干预组(TGF-β1干预，转染CDKN2B-AS1的小干扰RNA)。干预24 h后倒置显微镜下观察细胞形态变化，RT-qPCR方法检测CDKN2B-AS1及CDKN2A的表达，蛋白质印迹法检测CDKN2A和P53蛋白的含量。结果:与对照组21.90±19.83、19.83±7.67比较，肺癌组织中CDKN2B-AS1及CDKN2A均低表达，分别为2.60±1.33和0.34±0.10( t＝2.747、7.187， P＝0.016、0.000)，与在IPF中的结果一致。在细胞试验中，观察到TGF-β1的干预可促使MRC-5肺成纤维细胞从多突的纺锤形或星形结构，逐渐转化为扁平状纤维结构的肌成纤维细胞，并出现不同程度的分化；与正常组56.12±2.46、64.54±3.89比较，TGF-β1干预后CDKN2B-AS1及CDKN2A mRNA的表达均明显减少，分别为6.80±0.30和9.39±0.37( t＝47.746、33.797，均 P<0.001)；转染CDKN2B-AS1的siRNA后，与干预组6.80±0.30、9.39±0.37比较，CDKN2B-AS1及CDKN2A的表达进一步下调，分别为2.38±0.29、2.81±0.36( t＝4.279、4.032， P＝0.003、0.004)，且两者表达量呈正相关( r＝0.988， P＝0.000)；此外，蛋白水平干预组CDKN2A及P53的表达3.12±0.06、1.12±0.07，较正常组4.12±0.59、2.11±0.06均减少，差异有统计学意义( t＝2.921、19.599， P＝0.043、0.000)，且两者表达量呈正相关( r＝0.772， P＝0.000)。 结论:长链非编码RNA CDKN2B-AS1在IPF和肺癌中均低表达，通过调节其邻近基因CDKN2A的表达，参与了P53通路，可能是IPF患者肺癌高发的原因之一。

目的:探讨子痫前期胎盘中长链非编码RNA转化生长因子β2-反义RNA1（lncRNA TGFB2-AS1）表达水平与胎盘螺旋动脉重铸的关系。方法:选取2019年10月至2021年6月于枣庄市妇幼保健院住院并行剖宫产术分娩的108例重度子痫前期孕妇为研究对象，并将其分为晚发子痫前期组（晚发型重度子痫前期孕妇，56例）和早发子痫前期组（早发型重度子痫前期孕妇，52例）；同期选取58例正常妊娠孕妇为正常妊娠组。收集孕妇年龄、收缩压、舒张压等一般资料；采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测胎盘组织lncRNA TGFB2-AS1表达水平，扫描电子显微镜下测量螺旋动脉管腔面积和管壁厚度；采用Pearson相关分析法分析早发型和晚发型重度子痫前期孕妇胎盘组织lncRNA TGFB2-AS1水平与螺旋动脉管壁厚度、管腔面积的相关性。结果:早发子痫前期组管壁厚度[（119.69±8.31）μm]、收缩压[（162.86±4.94）mmHg]、舒张压[（103.09±2.35）mmHg]、24 h尿蛋白[（2.17±0.31）g/24 h]高于晚发子痫前期组[（101.04±5.78）μm、（146.95±6.43）mmHg、（92.13±4.74）mmHg、（1.62±0.23）g/24 h]和正常妊娠组[（99.82±5.56）μm、（116.42±9.31）mmHg、（74.25±6.74）mmHg、（0.06±0.02）g/24 h]；胎盘组织lncRNA TGFB2-AS1水平（0.62±0.16）及管腔面积[（133.74±20.16）μm 2]、分娩孕周[（32.15±1.74）周]、新生儿体质量[（2.25±0.26）g]低于晚发子痫前期组[（0.99±0.21）、（185.49±22.75）μm 2、（36.14±1.59）周、（3.37±0.32）g]和正常妊娠组[（1.02±0.23）、（186.42±23.71）μm 2、（38.19±1.56）周、（3.42±0.37）g]（ P<0.05）。晚发子痫前期组收缩压、舒张压、24 h尿蛋白高于正常妊娠组，分娩孕周低于正常妊娠组（ P<0.05）。早发型重度子痫前期孕妇胎盘组织lncRNA TGFB2-AS1与管腔面积呈正相关，与管壁厚度呈负相关（ P<0.05）；晚发型重度子痫前期孕妇胎盘组织lncRNA TGFB2-AS1与管腔面积、管壁厚度均无相关性（ P>0.05）。 结论:早发型重度子痫前期孕妇胎盘组织lncRNA TGFB2-AS1异常低表达，可能与胎盘螺旋动脉重铸不足有关。

目的 检测原发性膜性肾病(primary membranous nephropathy,PMN)患者外周血长链非编码RNA-生长停滞特异性转录本 5反义RNA1(long non-coding RNA growth arrest-specific transcript 5 antisense RNA1,lncRNA GAS5-AS1)、白细胞介素(interleukin,IL)-27表达,并分析其与患者调节性T细胞/辅助性T细胞 17(regulatory T cell/T help 17cells,Treg/Th17)平衡的关系.方法 选择 2019年 9月至 2020年 9月间河北以岭医院收治的PMN患者 94例作为PMN组.另选取同期体检健康者 96例作为对照组.收集所有研究对象外周血标本,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)法测定血清lncRNA GAS5-AS1水平、酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法测定IL-27、IL-17、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-10、转化生长因子β1(transforming growth factor betal,TGF-β1)水平,流式细胞仪测定外周血Treg细胞、Th17细胞比例,并计算Treg/Th17比值.Pearson法分析PMN患者lncRNA GAS5-AS1、IL-27水平与IL-17、TNF-α、IL-10、TGF-β1、Treg/Th17的相关性.结果 对照组血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)为(4.03±0.66)mmol/L,PMN组患者BUN为(6.52±1.05)mmol/L;对照组血尿酸(uric acid,UA)为(266.13±44.35)μmol/L,PMN组患者UA为(338.92±56.45)μmol/L;对照组胱抑素C(cystatin C,Cys C)为(0.72±0.12)mg/L,PMN组患者Cys C为(1.38±0.23)mg/L;对照组抗磷脂酶 A2受体抗体(phospholipase A2 receptor antibody,PLA2R-Ab)为(9.37±1.92)RU/mL,PMN组患者PLA2R-Ab为(32.92±6.19)RU/mL;对照组 24h尿蛋白定量(0.11±0.02)g,PMN组患者24h尿蛋白定量(7.96±0.94)g;对照组lncRNA GAS5-AS1为(1.02±0.17),PMN组患者lncRNA GAS5-AS1 为(3.46±0.56);对照组 IL-27为(62.71±10.44)ng/L,PMN组患者 IL-27为(124.76±20.77)ng/L;对照组Th17为(0.75±0.12)%,PMN组患者Th17为(4.86±0.81)%;对照组Th17/Treg为(0.11±0.02),PMN组患者Th17/Treg为(1.43±0.23).对照组肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)为(109.22±14.85)mL·min-1·(1.73 m2)-1,PMN组患者 GFR为(57.47±10.24)mL·min-1·(1.73 m2)-1;对照组Treg水平为(6.42±1.07)%,PMN组患者Treg水平为(3.21±0.53)%.不同危险程度PMN患者Th17/Treg、IL-17、TNF-α、IL-10、TGF-β1、lncRNA GAS5-AS1、IL-27水平差异均有统计学意义(P＜0.05);PMN患者外周血lncRNA GAS5-AS1与Th17/Treg、IL-17、TNF-α正相关(r = 0.632、0.554、0.572,P＜0.05),与IL-10负相关(r =-0.468,P＜0.05);IL-27与Th17/Treg、IL-17正相关(r=0.581、0.602,P＜0.05),与IL-10、TGF-β1负相关(r=-0.533、-0.436,P＜0.05).结论 PMN患者血清lncRNA GAS5-AS1、IL-27均高表达,二者均调节Th17/Treg免疫平衡,在PMN中发挥重要作用,有望成为PMN的研究靶点.

目的 研究长链非编码RNA FEZ家族锌指 1-反义RNA 1(lncRNA FEZF1-AS1)调控zeste同源物增强子 2(EZH2)对肺间质细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及其作用机制.方法 将人肺腺癌细胞系A549 分为对照组(control)和模型组[model,用转化生长因子β1(TGF-β1)20 ng/mL作用 48 h,诱导成为肺间质细胞].用Western blot检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的蛋白表达.RT-qPCR检测细胞中lncRNA FEZF1-AS1 和EZH2 基因表达.转染组细胞分为转染si NC组、si ln-cRNA FEZF1-AS1+OE vector组和si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZH2 组.CCK-8法检测细胞增殖、细胞划痕检测细胞迁移、Transwell小室法检测细胞侵袭;用Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、vimentin及EZH2 的蛋白表达,用RNA免疫沉淀(RIP)测定FEZF1-AS1 与EZH2 的直接结合作用.结果 与对照组比较,模型组E-cadherin的蛋白表达水平减少(P＜0.05);N-cadherin 及 vimentin 的蛋白表达水平升高(P＜0.05);与对照组比较,模型组lncRNA FEZF1-AS1 与EZH2 基因的表达水平明显升高(P＜0.05);与si NC组相比,si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、vimentin、EZH2 蛋白表达降低(P＜0.05);与si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector 组比较,si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZHZ 组细胞增殖、侵袭、迁移能力升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、vimentin、EZH2 蛋白表达升高(P＜0.05);RIP 实验进一步证实了 lncRNA FEZF1-AS1 与EZH2 具有结合作用.结论 LncRNA FEZF1-AS1 通过调控EZH2 促进肺间质细胞增殖、侵袭、转移和EMT过程.

目的:探究血清长链非编码 RNA(lncRNA)TGFB2-反义 RNA 1(TGFB2-AS1)水平与冠状动脉钙化(CAC)及其严重程度的关系.方法:选取 2018年 5月—2021年 7月于丹东市第一医院行 CT、冠状动脉造影检查的 185例病人为研究对象,根据病人是否发生 CAC将其分为非 CAC组(47例)与CAC组(138例).比较CAC组、非CAC组一般资料及血清lncRNA TGFB2-AS1、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;比较不同CAC严重程度病人的血清lncRNA TGFB2-AS1、TGF-β1 水平;分析 CAC病人血清 lncRNA TGFB2-AS1表达水平与 TGF-β1 的相关性;分析血清 lncRNA TGFB2-AS1表达水平诊断 CAC的价值.结果:CAC组病人高血压占比、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平、糖尿病占比、冠心病占比及 TGF-β1 水平高于非 CAC组(P<0.05),血清 lncRNA TGFB2-AS1 水平低于非CAC组(P<0.05);中度、重度 CAC组病人血清 lncRNA TGFB2-AS1表达水平低于轻度 CAC组(P<0.05),TGF-β1 水平高于轻度CAC组(P<0.05);重度 CAC组病人血清 lncRNA TGFB2-AS1 表达水平低于中度 CAC组(P<0.05),TGF-β1 水平高于中度 CAC组(P<0.05);CAC病人血清 lncRNA TGFB2-AS1表达水平与 TGF-β1 呈负相关(r =-0.589,P<0.05);血清 lncRNA TGFB2-AS1诊断 CAC的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)为 0.905,截断值为 0.78,此时其敏感度为 83.0%,特异度为 87.7%.结论:CAC病人血清 lncRNA TGFB2-AS1表达水平较低,与 TGF-β1 相关,其有望成为临床诊断 CAC并评估其严重程度的有效指标.

目的 筛选高糖诱导腹膜间皮细胞转分化小鼠模型中差异表达长链非编码RNA(lncRNA),分析其作用.方法 将20只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和模型组,每组10只.对照组正常饲养4周,模型组给予4.5%高糖腹膜透析液腹腔注射4 周(1 mL/kg、1 次/d).取两组壁层腹膜组织,进行HE 染色,并采用Western blotting法检测转化生长因子β1(TGF-β1)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,结果均提示转分化模型建立成功.采用芯片技术筛选模型组与对照组差异表达lncRNA,应用生物信息学方法分析lncRNA芯片结果,采用RT-PCR法进行验证.结果 芯片筛选结果显示,两组差异表达(≥2倍、P＜0.05)lncRNA共757条,差异表达mRNA共1 431条.差异表达倍数较大(＞5倍),长度为500～2 000 nt,表达丰度在1 000以上的2个上调和2 个下调的 lncRNA 分别为 ri |4732442J12 |PX00051O23 |2580、 NONMMUT055611、 NONMMUT002253、NONMMUT064302.差异表达lncRNA功能与细胞膜结合蛋白组成、膜蛋白基因转录、炎症防御反应、信号转导通路等有关;差异表达 mRNA 可能参与真核生物翻译过程、膜蛋白合成等途径.模型组 NONMMUT002253、NONMMUT064302相对表达量低于对照组,ri|4732442J12|PX00051O23|2580、NONMMUT055611相对表达量高于对照组(P均＜0.05),结果与芯片检测结果基本一致.结论 高糖诱导腹膜间皮细胞转分化小鼠模型中存在差异表达lncRNA,差异表达lncRNA参与腹膜间皮细胞转分化的形成.

目的 探讨被转化生长因子β活化长链非编码RNA(lncRNA ATB)在食管鳞状细胞癌中的表达及对预后的影响.方法 选取95例食管鳞状细胞癌患者的食管鳞状细胞癌组织及癌旁组织.采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测食管鳞状细胞癌组织中lncRNA ATB的相对表达量,分析lncRNA ATB与食管鳞状细胞癌患者预后的关系.结果 食管鳞状细胞癌组织中lncRNA ATB相对表达量明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P﹤0.01).食管鳞状细胞癌死亡患者lncRNA ATB相对表达量明显高于生存患者,差异有统计学意义(P﹤0.01).lncRNA ATB相对表达量评估食管鳞状细胞癌患者预后的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度、约登指数及最佳截断值分别为0.853(95％CI:0.765～0.917)、75.00％、87.30％、0.623、9.34.不同肿瘤直径、分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况的食管鳞状细胞癌患者的食管鳞状细胞癌组织中lncRNA ATB表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05).lncRNA ATB≥9.34的食管鳞状细胞癌患者1年、2年、3年累积生存率分别明显低于lncRNA ATB﹤9.34患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05).经Cox多因素分析,TNM分期、淋巴结转移、新辅助放化疗及lncRNA ATB是食管鳞状细胞癌患者生存情况的影响因素.结论 食管鳞状细胞癌患者lncRNA ATB相对表达量升高,检测lncRNA ATB有助于评估患者预后情况.

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)PCGEM1通过转化生长因子β2(TGFβ2)/Smad2信号通路调控口腔鳞状细胞癌(OSCC)侵袭和转移的机制.方法 将60例OSCC患者癌组织及距离癌组织超过2 cm处的正常组织纳入研究,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-148a、lncRNA PCGEM1在OSCC组织及正常组织、人正常口腔黏膜上皮细胞(OMEC)及人源OSCC细胞株KB、BcaCD885、SCC-4、CAL27、SCC-15中的表达情况;分析lncRNA PCGEM1和miR-148a表达与患者临床病理信息之间的关系.构建lncRNA PCGEM1沉默细胞系KB-siPCGEM1及阴性对照(KB-NC),并以KB作为空白对照组,采用MTT、Transwell和划痕实验检测lncRNA PCGEM1对KB细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响;使用生物信息学网站starBase预测lncRNA PCGEM1可以互补结合的微小RNA(miRNA),再根据www.microRNA.org网站预测相应miRNA可靶向结合的基因;免疫印迹(Western blotting)检测TGFβ2/Smad2信号通路蛋白表达情况.结果 qRT-PCR结果显示,OSCC组织中lncRNA PCGEM1、miR-148a的表达水平高于正常组织(P<0.05);lncRNA PCGEM1和miR-148a在不同TNM分期、淋巴结转移和组织分化程度的患者癌组织中表达差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组和KB-NC组相比,KB-siPCGEM1组细胞OD492 nm值下降,细胞侵袭数量及迁移率降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);生物信息学预测结果显示,lncRNA PCGEM1可与miR-148a互补结合,miR-148a与TGFβ2存在靶向结合位点;qRT-PCR和Western blotting检测结果显示,KB-siPCGEM1组中miR148a、TGFβ2及p-Smad 2的表达明显低于空白对照组与KB-NC组(P<0.05),空白对照组和KB-NC组的差异无统计学意义(P>0.05).结论 lncRNA PCGEM1在OSCC中高表达,高表达lncRNA PCGEM1可能通过上调miR-148a水平,强化TGFβ2/Smad2信号通路,从而促进OSCC的进展.

目的:分析狼疮性肾炎患者长链非编码RNA-Gm4419(LncRNA-Gm4419)的表达水平及其与肾纤维化的关系,明确LncRNA-Gm4419对狼疮性肾炎肾纤维化的可能作用机制.方法:选择2017年7月至2019年4月本院确诊的狼疮性肾炎患者76例作为实验组,并将实验组患者依据肾组织病理活检结果分为有肾纤维化组和无肾纤维化组,选择同期本院体检的健康人员59例作为对照组.采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测受试者血清LncRNA-Gm4419水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血肌酐、尿素、β2-微球蛋白、胱抑素C(CysC)、基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)、转化生长因子-β1(TGFβ1)、Ⅳ型胶原(CⅣ)表达水平,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析LncRNA-Gm4419的表达水平对狼疮性肾炎肾纤维化的诊断价值,用Logistic回归分析法分析影响狼疮性肾炎肾纤维化的危险因素.结果:实验组血清血肌酐、尿素、β2-微球蛋白、LncRNA-Gm4419、CysC、TIMP-1、TGF-β1、CⅣ均比对照组高(P＜0.05),有肾纤维化患者上述指标明显高于无肾纤维化患者(P＜0.05).ROC曲线显示,血清LncRNA-Gm4419诊断狼疮性肾炎肾纤维化的曲线下面积(AUG)为0.900,截断值为2.571,此时对应的灵敏度为78.9％,特异度为93.0％.LncRNA-Gm4419与CysC、TIMP-1、TGF-β1、CⅣ均呈正相关,差异有统计学意义(r=0.598、0.680、0.718、0.834,P＜0.001).LncRNA-Gm4419、CysC、TIMP-1是狼疮性肾炎肾纤维化的危险因素.结论:狼疮性肾炎患者血清LncRNA-Gm4419呈高表达,血清LncRNA-Gm4419诊断狼疮性肾炎肾纤维化特异度较好,且LncRNA-Gm4419与肾纤维化指标密切相关,是狼疮性肾炎肾纤维化的危险因素,可作为肾脏纤维化的参考指标.

目的 探讨长链非编码RNA PCGEM1(LncRNA PCGEM1)通过转化生长因子β2/果蝇母源抗皮肤生长因子蛋白2(TGF-β2/Smad2)信号通路调控膀胱尿路上皮癌(BUCC)细胞侵袭和转移.方法 将BUCC细胞分为空白对照组、T24-siNC组和T24-siPCGEM1组.空白对照组置于10％胎牛血清的DMEM培养基中进行培养;T24-siPCGEM1组和T24-siNC组分别用Lipofectamine 2000将10μmol·L-1的siPCGEM1和阴性对照siNC转染至细胞,然后置于10％胎牛血清的DMEM培养基中进行培养.用实时荧光定量聚合酶链反应检测LncRNA PCGEM1的表达水平,用平板克隆实验检测细胞增殖情况,用蛋白质印迹法检测TGF-β2和Smad2的表达情况.结果 T24-siPCGEM1组、T24-siNC组和空白对照组的细胞克隆数分别为(192.83±15.59),(419.00±52.15)和(432.83±57.74)个,TGF-β2相对表达量分别为0.08±0.01,0.39±0.05和0.41±0.05,Smad 2相对表达量分别为0.10±0.03,0.58±0.03和0.59±0.03,T24-siPCGEM1组的上述指标与空白对照组和T24-siNC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 LncRNA PCGEM1可能通过激活TGF-β2/Smad2信号通路,从而促进BUCC的进展.