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不同剂量和作用时间下乙烯利对雄性幼鼠睾丸组织的影响
编辑人员丨5天前
目的:探讨不同剂量乙烯利不同作用时间下对雄性幼鼠睾丸组织的影响。方法:将45日龄健康雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠32只,采用随机数字表法随机分为对照组和低、中、高剂量乙烯利组,取同日龄健康雄性SD大鼠32只与之一对一合笼。每日分别对雌鼠进行灌胃,低、中、高剂量组分别用200、400、800 mg/kg乙烯利水溶液灌胃,对照组采用等量9 g/L盐水,仔鼠出生后,停止给母鼠灌胃,改为给雄性仔鼠灌胃。子代雄鼠于出生0日龄、14日龄、28日龄时,分别从各组采用随机数字表法随机选取12只处死。取新鲜睾丸组织行苏木精-伊红(HE)染色,光镜下观察睾丸组织形态变化。采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法标记凋亡细胞,利用荧光显微镜检测睾丸生精细胞凋亡指数(AI)。结果:1.0日龄时高剂量组较中剂量组、低剂量组和对照组生精小管略增粗,生精细胞排列稍紊乱。高剂量组AI(1.00±0.06)明显高于对照组(0.41±0.03),差异有统计学意义( P<0.01);对照组、低剂量组与中剂量组比较差异无统计学意义( P>0.05)。2.14日龄时低、中、高剂量组较对照组生精小管明显增粗,排列疏松,生精细胞数目稀少,排列紊乱。14日龄时低剂量组(2.13±0.10)、中剂量组(2.18±0.10)、高剂量组(3.90±0.23)AI均明显高于对照组(1.00±0.02),差异有统计学意义( F=2 508.36, P<0.01)。中、低剂量组比较AI差异无统计学意义( P>0.05)。3.28日龄时低、中、高剂量组较对照组生精小管显著增粗,排列更疏松,生精细胞数目更少,排列严重紊乱。28日龄时低剂量组(5.52±0.13)、中剂量组(9.44±0.07)、高剂量组(14.56±0.27)AI均明显高于对照组(3.11±0.13),差异有统计学意义( F=10 784.69, P<0.01)。 结论:乙烯利可引起新生大鼠及幼鼠雄性睾丸生精小管增粗,生殖细胞排列紊乱,生精细胞凋亡增加和生精能力下降;且大鼠接触乙烯利时间越长,乙烯利浓度越高,睾丸组织损伤越严重。
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编辑人员丨5天前
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诱导多能干细胞体外分化为雄性生殖细胞的研究进展
编辑人员丨5天前
男性不育是影响生殖健康的重要问题,由于致病因素和发病机制复杂,临床上针对非梗阻性无精子症等不明原因的男性不育症往往缺乏特异性治疗措施。随着生殖细胞体外诱导培养的技术的发展,研究者们希望利用无精子症患者源性的多能干细胞体外培养出自身具有功能性的精子,从而治疗男性不育症。体外培养生殖细胞的策略,通常是先将诱导多能干细胞分化为原始生殖样细胞,然后进一步诱导分化为单倍体精子样细胞,其培养的难点在于将二倍体生殖细胞减数分裂为单倍体的精细胞,但是目前这个问题还没有得到解决。我们对诱导多能干细胞诱导雄性配子的技术进展和原理进行综述,希望能帮助我们更好地理解体外精子发生的机制,为体外受精的临床应用提供参考。
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编辑人员丨5天前
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生殖细胞特异性沉默信息调节因子1敲除小鼠睾丸转录组学分析
编辑人员丨5天前
目的:探究沉默信息调节因子1(SIRT1)在小鼠生殖细胞发育中的功能。方法:利用Cre-LoxP系统构建SIRT1雄性生殖细胞特异性敲除小鼠模型,所有小鼠均为C57BL/6背景。提取对照组(Con)小鼠和SIRT1雄性生殖细胞特异性敲除(cKO)小鼠睾丸总RNA,进行转录组测序分析。两组间比较采用 t检验。 结果:cKO小鼠睾丸组织SIRT1信使RNA水平(0.14±0.04)低于Con组(1.32±0.09),差异有统计学意义( t=26.144, P<0.01)。cKO小鼠睾丸组织SIRT1蛋白水平(0.28±0.05)低于Con组(1.01±0.06),差异有统计学意义( t=19.705, P<0.01)。转录组测序筛选出差异表达基因3 816个,基因本体(GO)功能富集分析显示,差异表达基因显著富集于转录调控、精子发生及精子活力等生物学功能;京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析显示,差异表达基因主要涉及信号通路包括细胞因子-细胞因子受体相互作用、转化生长因子-β(TGF-β)信号通路、补体等。 结论:雄性生殖细胞特异性SIRT1敲除,导致小鼠睾丸中与精子发生、精子活力及转录调控相关关键基因表达发生变化,影响小鼠生育力。
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编辑人员丨5天前
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INSL3-RXFP2与两性生殖系统关系研究进展
编辑人员丨5天前
胰岛素样因子3(insulin-like factor 3,INSL3)在两性生殖系统中均有表达,在雄性个体中主要由睾丸间质细胞分泌,在雌性个体中主要由卵泡膜分泌。INSL3的受体为松弛素家族受体2(relaxin family peptide receptor 2,RXFP2),在雄性生殖系统中主要表达于引带细胞、生殖细胞以及睾丸间质细胞,在雌性生殖系统中主要表达于卵细胞及卵泡膜细胞。INSL3-RXFP2通路作用于两性生殖系统,其通路异常与两性生殖系统疾病密切相关。本文将结合最新研究进展,对INSL3-RXFP2与两性生殖系统的关系进行综述。
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编辑人员丨5天前
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HSPA2与恶性肿瘤关系的研究进展
编辑人员丨5天前
热休克蛋白A2(HSPA2)又名HSP70-2,是HSP70s家族的重要成员之一,最初在雄性生殖细胞中被发现,与精子的生成密切相关。随着研究的深入,越来越多的证据表明,HSPA2在人类多种恶性肿瘤中存在异常高表达,与肿瘤的恶性临床病理特征及不良预后紧密关联,在癌细胞的增殖、凋亡、侵袭及迁移过程中扮演着极其重要的作用,是癌症靶向治疗的潜在分子靶标。肿瘤细胞内HSPA2基因的表达受到缺氧应激等多种因素的调控。本文对HSPA2与恶性肿瘤关系及其表达调控机制的研究进展进行综述。
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编辑人员丨5天前
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飞燕草素通过Nrf2/HO-1信号通路改善镉致雄性大鼠生殖损伤
编辑人员丨2024/7/20
目的 探讨飞燕草素(Dp)能否通过调节Nrf2/HO-1通路改善镉(Cd)致雄性大鼠生殖损伤.方法 随机将24只雄性Wistar大鼠分为对照组(0.9%生理盐水)、Dp组(400 mg/kg.bw的Dp溶液)、Cd组(5 mg/kg.bw的CdCl2溶液)、Dp+Cd组(400 mg/kg.bw的Dp溶液+5 mg/kg.bw的CdCl2溶液).连续灌胃4周.干预结束后记录大鼠体重、睾丸、附睾重量;精子计数;HE染色检测各组大鼠睾丸、附睾组织形态学改变;免疫组织化学技术和TUNEL法检测生殖细胞增殖和凋亡情况.ELISA法检测血清MDA、SOD、GSH-Px和T-AOC、睾丸组织CAT、GSH氧化指标含量,以及血清睾酮、FSH性激素水平;蛋白质印迹技术测定Nrf2、HO-1蛋白表达水平.结果 与Cd组相比,Dp+Cd组精子数量、SOD、GSH-Px、T-AOC、CAT、GSH、睾酮含量、生殖细胞增殖率、Nrf2和HO-1蛋白表达水平均升高;Dp干预能够改善Cd导致的睾丸和附睾组织病理改变,抑制Cd导致的MDA、FSH含量增加和生殖细胞凋亡率升高.结论 Dp可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路保护Cd诱导的雄性大鼠生殖损伤.
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编辑人员丨2024/7/20
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N6-甲基腺嘌呤修饰及其调控因子在男性生殖中的作用
编辑人员丨2024/7/13
在哺乳动物中,精子发生是一个高度复杂且协调的生殖细胞分化过程,这一过程受到转录、转录后和翻译水平的精确调控,以确保不同发育阶段的生精细胞正确表达特定基因并维持正常的生精过程.N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)是真核生物mRNA上最丰富的修饰,在诸如mRNA剪接、转运和翻译等多个生物过程发挥关键作用.RNA甲基化修饰是一个动态可逆的过程,主要通过编码器(writers)催化、消码器(erasers)去除和读码器(readers)识别来调控修饰水平.本文首先概述了精子发生的主要阶段,然后重点介绍m6A修饰及相关蛋白在雄性生殖细胞不同发育阶段的关键功能,最后简要总结了目前检测m6A的主要方法,以期深入了解RNA修饰在调控精子发生以及在男性不育中发挥的作用和机制.
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编辑人员丨2024/7/13
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RBFOX2缺失抑制雄性小鼠的减数分裂起始
编辑人员丨2024/3/30
减数分裂起始是配子发生的关键步骤.目前人们已经发现了一些减数分裂起始所必需的基因,但是对于该过程的调控基因及其作用机制还知之甚少.本实验室先前建立了精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养以及体外诱导减数分裂起始的技术体系,为更好地探究减数分裂起始调控基因及作用机理提供了良好的条件.实验室前期研究发现 RNA 结合蛋白RBFOX2 可能调控减数分裂起始,然而RBFOX2 在生殖细胞的减数分裂起始过程中的功能及作用机制还需深入研究.本研究利用慢病毒介导的转基因技术产生了RBFOX2 敲降的精原干细胞系;发现RBFOX2 敲降后,精原干细胞的自我更新、增殖以及分化未发生显著变化,但是减数分裂无法启动,分化型精原细胞发生明显凋亡.这一结果进一步显示了RNA结合蛋白在雄性动物减数分裂起始中的重要功能.
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编辑人员丨2024/3/30
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基于CRISPR/Cas9系统构建绵羊VASA基因敲入载体及验证
编辑人员丨2024/3/30
本研究旨在探索VASA基因在绵羊睾丸发育中的表达变化,并通过构建VASA基因敲入载体,为下一步进行绵羊生殖细胞体外诱导分化研究提供基础.采集性成熟前后即 3 月龄(3-month-old,3M)和 9 月龄(9-month-old,9M)绵羊睾丸组织,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blotting技术分析VASA基因的差异表达,并利用免疫组织化学技术对VASA基因的表达定位进行分析.设计靶向VASA基因的向导RNA(guide RNA,gRNA),并构建同源重组载体,进行质粒转染绵羊耳成纤维细胞.结合CRISPR/dCas9技术对VASA基因进行激活,进一步验证载体效率.结果表明,VASA 基因随着绵羊睾丸发育,表达水平极显著增加(P<0.01),且主要定位在精母细胞和圆形精子细胞中.利用CRISPR/Cas9系统构建了VASA基因敲入载体,联合pEGFP-PGK puro-VASA载体转染耳成纤维细胞,CRISPR/dCas9 系统激活后,耳成纤维细胞成功表达 VASA 基因.结果提示,VASA 基因在绵羊睾丸发育和精子发生中发挥潜在功能,且通过CRISPR/Cas9系统可在体外构建VASA基因敲入载体,为下一步探究VASA基因对绵羊雄性生殖细胞的发育和分化提供有效的研究手段.
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编辑人员丨2024/3/30
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父代n-3多不饱和脂肪酸对子代小鼠端粒长度的影响
编辑人员丨2024/3/16
目的 探讨父代备孕期n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFAs)对子代端粒长度(TL)的影响.方法 将3~4周龄C57BL/6J雄性小鼠(父代)随机分为3组(10只/组),分别给予n-3 PUFAs缺乏(n-3 D)、n-3 PUFAs正常含量(n-3 N)和n-3 PUFAs高含量(n-3 H)饲料饲喂12周,然后与12周龄正常体重的同品系雌性小鼠交配繁育子代小鼠.对成年期子代小鼠进行外周血和组织TL以及端粒酶和端粒结合蛋白基因mRNA表达检测.结果 与n-3 N饲料相比,父代n-3 D饲料喂养使得子代雌和雄性小鼠的外周血、肝脏、脂肪组织和/或脑组织中的TL显著缩短,伴随雄性肝脏端粒酶组分TERC以及结合蛋白TRF2和POT1a的mRNA表达下调;同时显著缩短了子代睾丸TL并下调了端粒酶(TERT)和结合蛋白(TRF1、TRF2、POT1a)的mRNA表达.父代n-3 H饲料喂养虽然未改变子代的TL和肝脏端粒酶及结合蛋白表达,但却显著逆转了n-3 D饲料的不良影响.另外,相对于n-3 N饲料,父代n-3 D和n-3 H饲料喂养均未改变自身睾丸TL,但n-3 H饲料喂养时睾丸TL以及端粒结合蛋白TRF1、TRF2、POT1a和RAP1的表达显著高于n-3 D饲料喂养.结论 父代备孕期良好的n-3 PUFAs营养状态可能通过父代生殖细胞中TL的遗传以及对子代端粒酶和端粒结合蛋白表达的调控增加子代小鼠的TL,这可能有助于促进子代发育以及成年后相关慢病的预防.
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编辑人员丨2024/3/16
