目的:建立可诱导表达骨形态发生蛋白质4(bone morphogenetic protein 4，BMP4)的正常来源及隐睾特异性诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells，iPSCs)，比较两者体外定向分化的差异，为研究部分隐睾患儿成年后不育的原因提供具有人类遗传背景的体外研究模型。方法:①建立可诱导表达BMP4的正常来源及隐睾特异性iPSCs，将正常来源iPSCs作为对照组，隐睾特异性iPSCs作为隐睾组；利用多西环素(doxycycline，Dox)进行诱导，筛选出BMP4表达量最高的细胞株；②将外源性添加BMP4的正常来源iPSCs作为外源性添加BMP4组(外源组)，将Dox内源诱导BMP4表达的正常来源iPSCs作为Dox内源诱导BMP4表达组(内源组)，此两组共同作为实验组；在细胞形态和基因表达水平比较实验组两组间BMP4因子诱导效果的差异；③通过Dox诱导BMP4的表达、双氢睾酮(dihydrotestosterone，DHT)、全反式维甲酸(all trans retinoid acid，ATRA)组成的三步法诱导分化方案，逐步诱导人的正常来源及隐睾特异性iPSCs向生精细胞方向分化，在基因及蛋白水平进行检测，比较两株细胞在分化过程中的差异。结果:①经Dox诱导后，在正常来源及隐睾特异性iPSCs两株细胞中均可检测到BMP4表达明显升高、同时多能性基因OCT4的表达均呈明显下降趋势，与d0相比差异具有统计学意义，其中对照组的3#细胞株与隐睾组的5#细胞株在Dox诱导后BMP4表达量最高；②与外源组相比，内源组的细胞株形态变化更为均一、同步，BMP4的基因表达量更高，两组间的差异具有统计学意义；③在向生精细胞诱导分化过程中，对照组及隐睾组细胞的DAZL和PRDM1的表达量在两组之间的差异均无统计学意义；隐睾组的VASA、SYCP3、ACROSIN和TEKT1的表达量于诱导d14和d21时均明显低于对照组，两组之间的差异具有统计学意义。免疫染色结果显示：DAZL的阳性率在对照组和隐睾组细胞间的差异无统计学意义；隐睾组的VASA和SYCP3的阳性率于诱导d14和d21时均明显低于对照组，ACROSIN的阳性率于诱导d21时明显低于对照组，差异均具有统计学意义。结论:本研究为部分隐睾患儿成年后不育的原因提供了具有人类遗传背景的体外研究模型，为未来的进一步研究奠定了良好基础。

目的:探讨煊流成像技术在帆状胎盘产前诊断中的价值。方法:2019年1月至2020年1月在浙江省人民医院行中孕期超声检查并分娩的孕妇共2 723例，其中48例经产后临床和病理检查确诊帆状胎盘，纳入回顾性分析。所有超声检查病例均在产前同时接受二维超声彩色多普勒血流显像（two-dimensional echocardiography-color Doppler flow imaging, 2D-CDFI）及煊流成像超声检查。总结帆状胎盘煊流成像的超声声像图特点，采用 χ2检验比较2种超声成像方法对帆状胎盘的产前检出率的差异。 结果:研究期间本院帆状胎盘的发生率为1.8%（48/2 723）。48例产后确诊帆状胎盘病例经产前煊流成像技术诊断帆状胎盘45例，检出率为93.8%（45/48），且其中3例合并前置血管；另外3例误诊为球拍状胎盘。产前2D-CDFI诊断帆状胎盘38例，检出率为79.2%（38/48）；另外10例误诊为球拍状胎盘。产前煊流成像技术对帆状胎盘的检出率高于2D-CDFI（ χ2=4.360， P=0.037）。煊流成像诊断的45例帆状胎盘声像图表现为：（1）41例可见脐带入口附着于远离胎盘以外的胎膜上，脐血管沿胎膜可呈网状分布；（2）3例可见脐带入口位于胎盘边缘的胎膜上；（3）1例"λ"型脐带入口显示脐带和脐血管分支呈"λ"型分别插入胎盘。 结论:煊流成像技术可以立体直观显示脐带、脐血管与胎盘之间的分布情况，提高帆状胎盘的产前超声检出率。

目的:与产前超声和病理对照，探讨产前MRI对胎盘脐带附着异常（APCIs）的诊断价值。方法:回顾性收集2013年12月至2021年12月在佛山市妇幼保健院同时行产前胎盘超声及MRI的440例患者资料，其中37例经手术或病理证实为APCIs。分析患者的产前胎盘MRI表现，并与产前超声诊断对照，计算产前MRI和超声诊断APCIs的效能。结果:经手术或病理证实，37例APCIs中，17例为脐带边缘附着（MCI），13例为脐带帆状附着（VCI），5例为血管前置（VP），2例为VCI合并VP。超声诊断APCIs的灵敏度、特异度分别为59.5%（22/37）、97.8%（394/403）；MRI诊断APCIs的灵敏度、特异度分别为86.5%（32/37）、98.5%（397/403）。与手术或病理结果比较，在37例APCIs中，产前MRI漏诊2例MCI、2例VCI，1例VCI误诊为副胎盘。MRI发现超声漏诊APCIs 10例，包括5例MCI、2例VP、2例VCI、1例VCI合并VP；发现超声误诊APCIs类型4例，其中2例VCI超声误诊为MCI，2例MCI超声误诊为VCI。结论:对于妊娠晚期合并胎盘位置或形态异常、胎盘植入的APCIs，MRI的诊断效能优于超声。

目的:探索C57BL/6J小鼠玻璃体血管退化与视网膜血管发育的过程及两者之间的关系。方法:取75只SPF级出生后第1天(P1)的C57BL/6J健康小鼠，采用随机数表法将其分为对照组65只和氧诱导视网膜病变(OIR)模型组10只。其中对照组不做处理，OIR模型组自P7连续在体积分数(75±3)%氧气环境中饲养5 d，并于P12开始在常氧状态下饲养5 d。对照组分别于P1~P12、P17任意处死5只小鼠并摘取眼球进行实验。OIR模型组分别于P12、P17各处死5只小鼠并摘取眼球进行实验。采用体式显微镜观察不同日龄小鼠玻璃体动脉(HA)、玻璃体固有血管(VHP)、晶状体血管膜(TVL)的血管数量；另选取5只15个月龄的成年小鼠，采用光学相干断层扫描仪检查玻璃体脉管系统的存在情况。采用免疫荧光染色法观察视网膜星形胶质细胞与视网膜血管发育、VHP的关系。结果:对照组中，HA在小鼠眼球发育中退化不明显，出生后15个月的成年鼠中依然存在HA；VHP数量在小鼠P4~P8急速减少，在P10时变化趋于稳定，为(2.33±1.32)个，P17时数量稳定在(1.80±0.92)个；TVL数量在P5~P9急剧下降，在P10时TVL为(2.30±1.42)个，大部分TVL血管呈透明状态，不再有血供，P17时TVL降至(0.30±0.48)个。视网膜血管在星形胶质细胞的引导下自P1开始从视盘向四周生长，P8时蔓延至视网膜周边，形成视网膜初级血管网。在视网膜表层血管发育的过程中玻璃体血管出现同步退化，视网膜血管覆盖位置的VHP密度减小，管径变细，当视网膜血管发育至周边时VHP则脱离视网膜，且星形胶质细胞与VHP无结构上的重合。OIR模型组小鼠P12时VHP数量为(2.14±0.90)个，明显低于P17时的(4.60±1.35)个，差异有统计学意义( t＝4.188， P<0.001)；P12时TVL数量为(2.90±1.55)，明显低于P17时的(5.80±1.75)个，差异有统计学意义( t＝4.668， P<0.001)。OIR模型组与对照组小鼠P12时VHP和TVL数量比较，差异均无统计学意义( t＝0.429， P＝0.232； t＝1.116， P＝0.134)；但在P17时，OIR模型组小鼠VHP和TVL数量明显多于对照组，差异均有统计学意义( t＝5.422、9.574，均 P<0.001)。 结论:小鼠玻璃体血管系统中，VHP和TVL在P10退行变化趋于稳定，而HA退化不明显。小鼠玻璃体血管的正常退化依赖于视网膜血管和星形胶质细胞的正常发育；视网膜缺氧延缓了玻璃体血管退化。

目的:建立具有不同解剖形态的猪胸主动脉夹层(TAD)模型，并基于该模型对夹层进行组织病理学分析。方法:在单发破口猪TAD模型基础上，通过经颈动脉入路联合介入微创的技术在全麻下构建2种具有不同解剖形态的猪TAD模型，分别为TAD假腔扩展模型(6例)和TAD继发破口再塑模型(6例)。建模前后分别通过血管造影对正常或夹层管壁进行评估，术后通过CT血管造影和血管内超声随访夹层进展和继发破口情况，随访3个月时对管壁进行组织病理学分析。计量资料以均数±标准差( ± s)或中位数及四分位间距表示，计数资料采用例数和百分数表示。 结果:假腔扩展模型组建模成功率为83.3%(5/6)，手术操作时间为(30.3±8.7) min，术中造影假腔扩展平均长度为(223.2±79.5) mm。TAD继发破口再塑模型组建模成功率为100%，手术操作时间为(36.4±8.8) min，术中造影联合血管内超声测量继发破口平均直径为(7.2±1.1) mm。随访期3个月，两种再塑模型动物均无死亡。组织病理学检测提示滋养血管在升主动脉和主动脉弓更丰富，主要集中于外膜和中膜靠近外膜部分。弹力纤维染色提示TAD撕裂处弹力纤维破碎、断裂，假腔外侧壁(中膜外层及外膜)弹力纤维被过度拉伸，呈线状分布，内侧壁弹力纤维仍呈波浪状排列。TAD未累及分支处可见靠近内膜层弹力纤维逐渐聚集终止，靠近外膜层弹力纤维延伸至分支内。结论:本研究提供了一种成功率高、可复制性强、具有不同解剖形态的TAD模型，可作为新型腔内器具临床前实验或有效性验证等研究的动物模型选择。

目的:探讨前置血管（vasa previa，VP）伴低置胎盘（low-lying placenta，LP）的临床特征。方法:本研究为回顾性病例对照研究。研究对象为2015年1月至2021年8月在广州市妇女儿童医疗中心产前检查并分娩的VP患者。按照有无合并LP，将其分为VP+LP组和VP-LP组。以同期前置胎盘（placenta previa，PP）组（128例）作为对照。比较3组的临床特征及母胎临床结局的差异。采用 t检验、Mann-Whitney U检验、 χ2检验（或Fisher精确概率法）进行统计学分析。 结果:研究期间VP病例共116例，占同期分娩孕妇的0.085%（116/136 450）；VP+LP组64例，VP-LP组51例（排除1例孕晚期非前置血管导致胎儿宫内死亡者）。VP+LP占PP病例总数的2.9%（64/2 219），且经产妇及既往剖宫产比例高于VP-LP组［分别为62.5%（40/64）与39.2%（20/51）， χ 2= 6.17， P=0.013；31.3%（20/64）与13.7%（7/51）， χ 2= 4.85， P=0.028］，9.4%（6/64）存在Ⅲ型前置血管，产前超声诊断孕周延后［28.3周（23.6~31.7周）与23.9周（23.3~25.9周）， Z=2.61， P=0.007］。VP+LP组产前出血比例与VP-LP组差异无统计学意义，但产后24 h内出血量显著增加［550 ml（436~732 ml）与420 ml（300~540 ml）， Z=3.37， P=0.001］；VP+LP组新生儿5 min Apgar评分<7分［0.0%（0/64）与6.9%（4/58），Fisher精确概率法］及缺氧缺血性脑病的发生比例［0.0%（0/64）与8.6%（5/58），Fisher精确概率法］均低于VP-LP组（ P值均<0.05），且无新生儿死亡。与PP组比较，VP+LP组产前出血比例差异无统计学意义，但分娩孕周提前［36.0周（34.3~36.9周）与37.0周（35.7~37.3周）， Z=3.79， P<0.001］、胎心异常比例更高［10.9%（7/64）与3.1%（4/128），Fisher精确概率法， P=0.044］；且新生儿重症监护病房收住率［36.4%（24/66）与12.1%（16/132）， χ 2= 16.04， P<0.001］及呼吸窘迫综合征发生率更高［25.8%（17/66）与12.1%（16/132）， χ 2= 5.89， P=0.015］。 结论:VP伴LP存在特殊类型的Ⅲ型VP。VP伴LP患者产后24 h出血量更多，新生儿发生不良结局的风险更高，因此孕晚期诊断LP需关注伴发VP的可能。

研究发现,在维持性血液透析患者自体动静脉内瘘(autologous arteriovenous fistula,AVF)构建过程中的静脉分离所造成的血管损伤及其滋养血管损伤对AVF成熟不良的发生起着重要作用,其可通过导致被分离静脉炎症反应、缺氧等影响血管壁细胞增殖、迁移、表型转化及血管壁细胞外基质重构,进而介导AVF的负性血管重构及成熟不良.有研究在利用大隐静脉进行冠状动脉旁路手术时,提出了静脉分离的No-touch技术(no-touch technique,NTT),比较静脉分离的常规技术,NTT能够减轻静脉分离过程所造成的血管损伤及其滋养血管损伤,并提高术后移植静脉的通畅率.近年来,NTT亦开始应用于维持性血液透析患者AVF构建过程中的静脉分离,为促进AVF术后成熟并降低AVF成熟不良发生率提供了新的手术方法.本文将就应用该技术分离静脉构建AVF能够促进AVF术后成熟并降低AVF成熟不良发生率的机制做一综述.

以优化培养体系中生长状态良好的卵巢生殖干细胞(ovarian germline stem cells,OGSCs)为研究对象,观察雷公藤多苷(Tripterygium glycosides,TG)对OGSCs的影响,并从Notch信号通路探讨其生殖毒性的作用机制.采用cell counting kit-8(CCK-8)检测 3.75、7.5、15 μg·mL-1 TG 对体外培养小鼠 OGSCs 活力的影响;免疫荧光技术和逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测 3.75 μg·mL-1 TG给药后OGSCs标志物VASA基因同源类似物(mouse vasa homologue,MVH)、八聚体结合转录因子 4(octamer-binding transcription factor 4,Oct4)蛋白和基因的表达;RT-PCR检测Notch信号通路关键分子神经源性基因Notch同源蛋白 1(neurogenic locus Notch homolog protein 1,Notch1)、Hes家族BHLH转录因子 1(Hes family BHLH transcription factor 1,Hes1)、锯齿典型 Notch 配体 1(jagged canonical Notch ligand 1,Jagged1)基因表达;提取RNA进行转录组学分析TG干预OGSCs的作用机制.3.75 μg·mL-1 TG配伍 40 ng·mL-1 Notch信号通路γ-促分泌酶激动剂jagged canonical Notch ligand(Jagged)联合给药,采用CCK-8检测OGSCs活力水平;免疫荧光双标法检测MVH与Hes1、Notch1、Jagged1 蛋白共表达.结果显示,与空白组比较,TG给药后均显著抑制OGSCs活力(P<0.01 或P<0.001);显著降低OGSCs标志物MVH、Oct4 蛋白和基因表达(P<0.05,P<0.01 或P<0.001);显著抑制Notch1、Hes1、Jagged1基因表达(P<0.001).转录组学分析提示,TG通过干预Notch信号通路相关配体Jagged1 影响OGSCs的生长增殖.实验验证结果表明,配伍Notch信号通路γ-促分泌酶激动剂Jagged可显著缓解TG所致OGSCs活力的降低(P<0.001);并与TG组比较,显著升高MVH/Hes1、MVH/Notch1、MVH/Jagged1 蛋白共表达(P<0.01 或P<0.001).综上可知,TG可发挥γ-促分泌酶抑制剂样作用,通过下调OGSCs标志物MVH、Oct4 和Notch信号通路分子Notch1、Hes1、Jagged1 参与OGSCs途径介导Notch信号通路诱发生殖毒性.

本研究旨在探索VASA基因在绵羊睾丸发育中的表达变化,并通过构建VASA基因敲入载体,为下一步进行绵羊生殖细胞体外诱导分化研究提供基础.采集性成熟前后即 3 月龄(3-month-old,3M)和 9 月龄(9-month-old,9M)绵羊睾丸组织,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blotting技术分析VASA基因的差异表达,并利用免疫组织化学技术对VASA基因的表达定位进行分析.设计靶向VASA基因的向导RNA(guide RNA,gRNA),并构建同源重组载体,进行质粒转染绵羊耳成纤维细胞.结合CRISPR/dCas9技术对VASA基因进行激活,进一步验证载体效率.结果表明,VASA 基因随着绵羊睾丸发育,表达水平极显著增加(P<0.01),且主要定位在精母细胞和圆形精子细胞中.利用CRISPR/Cas9系统构建了VASA基因敲入载体,联合pEGFP-PGK puro-VASA载体转染耳成纤维细胞,CRISPR/dCas9 系统激活后,耳成纤维细胞成功表达 VASA 基因.结果提示,VASA 基因在绵羊睾丸发育和精子发生中发挥潜在功能,且通过CRISPR/Cas9系统可在体外构建VASA基因敲入载体,为下一步探究VASA基因对绵羊雄性生殖细胞的发育和分化提供有效的研究手段.

为了研究Sox8基因在中华鳖性别分化中的功能,研究利用慢病毒介导的过表达载体,在性别分化前的雌性中华鳖中过表达Sox8.通过组织学分析和生殖细胞标记蛋白VASA的免疫荧光染色发现在Sox8过表达后,50％的ZW性腺髓质区发育出睾丸特有的、含有生殖细胞的性索结构;qRT-PCR和免疫荧光结果显示雌性特异性基因Foxl2和Cyp19a1表达量显著降低,而调控睾丸发育的Dmrt1、Sox9和Amh基因表达上调.实验结果表明Sox8的过表达诱导ZW胚胎性腺往雄性方向分化,揭示了Sox8在中华鳖睾丸分化过程中的作用.