目的:探讨鞘氨醇-1-磷酸转运体2(SPNS2)和富含亮氨酸重复单位的G蛋白偶联受体5(Lgr5)在喉鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法:收集2012年3月至2016年3月江苏省泰兴市人民医院82例喉鳞状细胞癌患者术后石蜡标本，采用免疫组织化学法检测82例癌组织及50例癌旁正常组织中SPNS2、Lgr5的表达状态，分析SPNS2、Lgr5的表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果:喉鳞状细胞癌组织SPNS2高表达率为40.24%(33/82)，高于癌旁正常组织的8.00%(4/50)，癌组织Lgr5高表达率为46.34%(38/82)，高于癌旁正常组织的12.00%(6/50)，差异均有统计学意义( χ2＝16.008， P<0.001； χ2＝16.484， P<0.001)。SPNS2表达状态与肿瘤大小( χ2＝5.713， P＝0.017)、肿瘤分期( χ2＝7.071， P＝0.008)、肿瘤分化程度( χ2＝5.722， P＝0.017)及淋巴结转移( χ2＝6.595， P＝0.010)有关。Lgr5表达状态与肿瘤分期( χ2＝8.200， P＝0.004)、肿瘤分化程度( χ2＝9.435， P＝0.002)以及淋巴结转移( χ2＝16.188， P<0.001)有关。SPNS2低表达组患者的3年总生存率为90.91%，显著高于SPNS2高表达组的71.43%( χ2＝4.975， P＝0.026)。SPNS2低表达组患者的3年无进展生存率为78.79%，显著高于SPNS2高表达组的55.10%( χ2＝6.113， P＝0.013)。Lgr5低表达组患者的3年总生存率为86.84%，显著高于Lgr5高表达组的65.91%( χ2＝5.801， P＝0.016)；Lgr5低表达组患者的3年无进展生存率为78.95%，显著高于Lgr5高表达组的56.82%( χ2＝6.316， P＝0.012)。多因素Cox回归分析显示，分化程度( RR＝0.199，95% CI为0.057～0.691， P＝0.011)、肿瘤分期( RR＝0.167，95% CI为0.053～0.531， P＝0.002)、SPNS2( RR＝0.208，95% CI为0.072～0.604， P＝0.004)、Lgr5( RR＝0.198，95% CI为0.060～0.655， P＝0.008)是影响喉鳞状细胞癌患者预后的危险因素。列联相关分析显示，SPNS2和Lgr5在喉鳞状细胞癌组织中的表达呈正相关( C＝0.591， P<0.001)。 结论:SPNS2和Lgr5在喉鳞状细胞癌组织中显著高表达，与临床病理特征密切相关，且二者均是影响喉鳞状细胞癌患者预后的危险因素。

目的:探讨1-磷酸鞘氨醇(S1P)通过1-磷酸鞘氨醇受体2(S1P2)及RhoA/Rho激酶通路对人胎儿肺成纤维细胞(HFL-1)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的作用。方法:本研究为实验研究。培养14~19代HFL-1。应用蛋白质印迹法分别检测不同浓度(10 -7 mol/L、10 -6 mol/L、10 -5 mol/L)S1P刺激下HFL-1中α-SMA的表达，10 -6 mol/L S1P及10 -6 mol/L S1P2拮抗剂JTE-013刺激下HFL-1中α-SMA、RhoA的表达，10 μg/L RhoA抑制剂C3胞外酶、10 -5 mol/L Rho激酶抑制剂Y27632、10 -6 mol/L S1P刺激下HIF-1中α-SMA的表达。 结果:S1P 10 -6 mol/L组、S1P 10 -5 mol/L组α-SMA的相对表达量0.641(0.591，0.747)、0.662(0.633，0.810)较空白对照组0.116(0.089，0.456)升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。S1P组α-SMA的相对表达量0.907(0.466，1.629)较空白对照组0.540(0.210，0.807)、JTE-013组0.296(0.182，0.598)升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。S1P10 -6 mol/L 5 min组RhoA的相对表达量0.931(0.660，0.977)较S1P 10 -6 mol/L 0 min组0.060(0.023，0.061)升高；S1P 10 -6 mol/L 10 min组RhoA的相对表达量0.086(0.016，0.097)较S1P 10 -6 mol/L 5 min组RhoA的相对表达量0.931(0.660，0.977)降低；S1P 10 -6 mol/L组RhoA的相对表达量2.221(2.063，3.061)较空白对照组0.833(0.092，1.393)、JTE-013 10 -6 mol/L组0.619(0.145，0.967)、JTE-013 10 -6 mol/L+S1P 10 -6 mol/L组0.984(0.354，1.442)升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。S1P组α-SMA的相对表达量0.738(0.389，0.774)较空白对照组0.120(0.057，0.120)、C3胞外酶组0.073(0.027，0.093)高，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。Y27632+S1P组α-SMA的相对表达量0.142(0.014，0.430)较空白对照组0.544(0.489，0.632)低，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:S1P在毫摩尔水平浓度通过S1P2及其下游信号RhoA/Rho激酶通路调控HFL-1中α-SMA的表达。

1-磷酸鞘氨醇(S1P)是一种具有生物活性的脂质介质，在人体内广泛表达，通过与不同部位的G蛋白耦联受体(S1PR1-5)结合，介导Ras/MEK/ERK、PI3K/AKT、PLC/IP3、Rho/NF-κB等信号通路参与多个生理病理过程；S1P及其受体的相互作用会影响气道、肺组织内的细胞增殖与迁移、凋亡，在炎症及免疫调节中也有重要作用，S1P参与哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌、肺纤维化、肺部感染、急性肺损伤等疾病的致病过程，拮抗S1P则带来积极影响，深入研究S1P可能为呼吸系统疾病提供治疗新靶点。

目的:筛选支气管哮喘核心差异表达基因并对其进行生物信息学分析。方法:从基因表达数据库（GEO）下载哮喘患者巨噬细胞基因芯片数据GSE22528，该数据集包括了10份人肺泡灌洗液的转录组信息，其中哮喘患者和对照个体各5份。采用R 4.0.4软件筛选差异表达基因（DEGs）。利用DAVID 6.8数据库对筛选出的DEGs进行基因本体（GO）功能和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。利用STRING在线数据库对DEGs编码蛋白构建蛋白互作网络（PPI），采用Cytoscape软件构建核心模块并确定核心DEGs。结果:肺泡灌洗液标本均来自加拿大白种人，哮喘患者和对照个体年龄范围分别为20~37和18~36岁，各组男性均为3例。哮喘患者上调基因449个，下调基因47个。GO分析显示：哮喘患者上调基因主要涉及对未折叠蛋白的反应等生物过程，分子功能集中于未折叠蛋白和生长因子的绑定；下调基因主要涉及组蛋白脱乙酰作用和泛素介导的蛋白质降解等生物过程，分子功能集中于组蛋白脱乙酰酶活性。KEGG通路富集分析显示：通路主要由上调基因富集，涉及Hippo信号通路、肥厚型心肌病、雌激素信号通路、致心律失常性右心室心肌病、基底细胞癌、神经活化的受体配体相互作用、扩张型心肌病和黏附连接等信号通路。PPI分析共得到两个核心模块，筛选出14个核心DEGs，分别为促黑色素聚集激素（PMCH）、孤啡肽前体（PNOC）、鞘氨醇-1-磷酸受体2（S1PR2）、鞘氨醇-1-磷酸受体5（S1PR5）、CC型趋化因子配体21（CCL21）、Kelch样蛋白25（KLHL25）、泛素结合酶E2V2（UBE2V2）、F-box蛋白17（FBXO17）、味觉受体2型成员3（TAS2R3）、生长抑素受体2（SSTR2）、代谢型谷氨酸受体2（GRM2）、李斯特E3泛素蛋白连接酶1（LTN1）、LIM域特有蛋白7（LMO7）和环指蛋白19A基因（RNF19A），其中LTN1和UBE2V2下调，其余均上调。结论:哮喘患者与对照个体存在DEGs、PMCH、PNOC、S1PR2、S1PR5和CCL21基因等可能为哮喘发病机制中的核心基因。

目的:探讨肾必宁颗粒通过鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1,SphK1)/1-磷酸鞘氨醇受体2(sphingosine 1 phosphate receptor 2,S1PR2)通路改善IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)大鼠肾损伤的作用及机制.方法:将54只健康雄性SD大鼠按照完全随机分组法分为空白组(n=10)、模型组(n=10)、泼尼松组(n=10)、肾必宁低剂量组(n=12)和肾必宁高剂量组(n=12).除空白组外,其余4组建立IgAN模型,第9周起治疗组灌胃给药,7周后生化检测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、谷丙转氨酶(ALT)、血清白蛋白(ALB)、尿红细胞计数及24 h尿蛋白定量(24 h-UTP);苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肾组织病理学变化;免疫荧光观察IgA沉积;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测SphK1、S1PR2蛋白表达;实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测SphK1、S1PR2 mRNA表达.结果:与空白组比较,模型组大鼠尿红细胞计数、24 h-UTP、SCr、BUN水平均显著升高(P＜0.01或P＜0.05),ALB水平显著降低(P＜0.01),ALT水平有所升高,但差异无统计学意义(P＞0.05),有明显的肾脏病理损伤,免疫荧光可见大量IgA荧光沉积,肾组织SphK1、S1PR2蛋白及mRNA表达水平显著升高(P＜0.01);与模型组比较,泼尼松组、肾低组、肾高组大鼠尿红细胞数、24 h-UTP、BUN水平均明显降低(P＜0.01),ALB水平显著升高(P＜0.01),各组ALT水平有所下降,但差异无统计学意义(P＞0.05),肾低组SCr水平显著降低(P＜0.05),肾脏病理有不同程度改善,IgA荧光沉积可见不同程度减少,肾组织SphK1、S1PR2蛋白及mRNA表达水平明显下降(P＜0.01).结论:肾必宁颗粒可能通过抑制SphK1/S1PR2通路来降低IgAN大鼠尿蛋白,减轻血尿并改善肾功能,从而起到保护肾脏、防治肾损害的作用.

目的 通过体外实验探讨清疕饮和鞘氨醇-1-磷酸受体 5(sphingosine-1-phosphate receptor 5,S1PR5)信号对鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)诱导的人永生化角质形成细胞(human immortalized keratinocytes,HaCaT)生物学功能的影响,研究清疕饮在角质细胞(keratinocytes,KC)上对银屑病的治疗机制.方法 脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)(1 μg/mL,24 小时)刺激HaCaT细胞,酶联免疫吸附测定实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞上清中 S1P 含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time-polymerase chain reaction,q-PCR)法检测S1PRs mRNA转录水平,筛选出高特异性的S1P/S1PR5 通路.细胞增殖和细胞毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)法测定细胞存活率,q-PCR法检测白介素(interleukin,IL)-17、IL-23 mRNA表达,筛选适宜的 S1P处理浓度和时间,蛋白质免疫印迹法(Western blot,WB)检测清疕饮对S1PR5 蛋白表达的抑制,WB检测S1PR5 蛋白表达筛选高效siRNA构建S1PR5基因缺陷模型.将细胞分为阴性对照组(PBS+NC siRNA)、S1P 炎症模型组(S1P+PBS+NC siRNA)、清疕饮处理组(S1P+清疕饮+NC siRNA)、S1PR5 基因缺陷组(S1P+PBS+S1PR5 siRNA)、清疕饮处理S1PR5 基因缺陷组(S1P+清疕饮+S1PR5 siRNA)予对应处理,划痕试验检测细胞迁移率,EILSA法检测细胞上清中 IL-36γ 分泌,WB 法检测细胞核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)通路相关蛋白核因子抑制蛋白(inhibitor kappa B alpha,IκBα)、kappa B 抑制因子激酶(inhibitor of kappa B kinase,IKK)、磷酸化(p)-IKK、p65、p-p65 的表达.结果 相比于正常细胞,LPS刺激HaCaT银屑病炎症模型细胞上清S1P含量显著上升(P＜0.01),S1PR5 mRNA表达增加最明显(P＜0.01).筛选出浓度0.5 μmol/L的S1P处理 48 小时为炎症造模方案,清疕饮冻干粉溶液能显著抑制S1P造成的S1PR5 蛋白高表达(P＜0.01).与阴性对照组比较,S1P炎症模型组HaCaT细胞迁移能力显著增强,上清液IL-36γ显著增加,细胞中p-IKK、p-p65 蛋白的表达水平显著增加(P＜0.01),IκBα、IKK、p65 蛋白未发现显著变化.与S1P炎症模型组比较,清疕饮处理组、S1PR5 基因缺陷组、清疕饮处理S1PR5 基因缺陷组HaCaT细胞迁移能力显著降低,IL-36γ分泌量显著减少,细胞中p-IKK、p-p65 表达水平显著降低(P＜0.01),IκBα、IKK、p65 蛋白未发现显著变化,但清疕饮处理 S1PR5 基因缺陷组 IL-36γ、p-IKK、p-p65 的变化相较于另外两组更明显(P＜0.01).结论 清疕饮可以部分通过阻碍S1P与S1PR5 结合抑制HaCaT细胞迁移和IL-36γ分泌,截断NF-κB通路信号,从而干预炎症反应.

目的 观察淫羊藿苷对血管性勃起功能障碍(ED)大鼠的治疗效果,并初步探究其作用机制.方法 采用双侧髂内动脉结扎的方式构建血管性ED大鼠模型,将其随机分为5组,每组10只:模型组(每天1 mL生理盐水灌胃),他达拉非组(按每天0.8 mg/kg的剂量给予他达拉非溶液灌胃),淫羊藿苷低、中、高剂量组(分别按每天20、40、80 mg/kg的剂量给予淫羊藿苷混悬液灌胃).假手术组(10只)给予每天1 mL生理盐水灌胃.造模4周后,刺激大鼠阴茎海绵体神经,测量最大阴茎海绵体内压(ICPmax),评估大鼠的勃起功能.连续灌胃30 d后取大鼠阴茎海绵体标本,用ELISA法检测各组大鼠阴茎海绵体中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、鞘氨醇-1-磷酸(S1P)和鞘氨醇-1-磷酸受体1(S1PR1)的表达水平;采用Masson染色测定大鼠阴茎海绵体组织纤维化情况,计算所采集图像的积分光密度(IOD).对各组大鼠ICPmax和阴茎海绵体中α-SMA、S1P、S1PR1水平进行线性回归分析.结果 他达拉非组大鼠的ICPmax高于淫羊藿苷低剂量组,低于淫羊藿苷中、高剂量组(P均<0.05).他达拉非组大鼠阴茎海绵体的Masson染色IOD低于淫羊藿苷低、中剂量组,高于淫羊藿苷高剂量组(P均<0.05).他达拉非组大鼠阴茎海绵体中α-SMA的表达水平低于淫羊藿苷高剂量组,高于淫羊藿苷低、中剂量组(P均<0.05).他达拉非组大鼠阴茎海绵体中S1P的表达水平低于淫羊藿苷中、高剂量组(P均<0.05).他达拉非组大鼠阴茎海绵体中S1PR1表达水平低于淫羊藿苷低、中、高剂量组(P均<0.05).线性回归分析结果显示,α-SMA、S1P、S1PR1水平和ICPmax之间存在线性关系(P均<0.05).结论 淫羊藿苷可显著改善血管性ED大鼠的勃起功能,其可能通过调节S1P、S1PR1水平促进血管内皮的新生和稳定,达到改善勃起功能的目的.

胆汁酸是胆固醇代谢的产物,主要在肝脏及肠道微生物的共同作用下产生,少部分可由中枢神经系统内神经元和星形胶质细胞产生.中枢神经系统中不但有合成胆汁酸的多种酶类,还有多种胆汁酸的结合受体,比如法尼醇X受体(FXR)、武田G蛋白偶联受体5(TGR5)、鞘氨醇1-磷酸受体2(S1PR2)等,在脑内的物质和能量代谢、神经元电活动过程中发挥重要作用,并与阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)、亨廷顿病(HD)、脑卒中等多种神经系统疾病有关.以上表明胆汁酸是肠道微生物调节神经系统功能的重要介质.深入研究胆汁酸对中枢神经系统的影响,将有助于丰富脑-肠轴的理论,为中枢神经系统疾病的治疗提供新的思路.

研究柏子仁脂肪油(Platycladi Semen oil,SP)对Aβ25-35诱导小鼠脑损伤的保护作用及其机制,为临床治疗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)提供理论依据.雄性昆明(KM)小鼠随机分为对照组、模型组(脑部注射200μmol·L-1 Aβ25-35溶液,0.15μL·g-1)、阳性药多奈哌齐组(10 mg·kg-1)及柏子仁脂肪油低、高剂量(0.5、1 mL·kg-1)组.探究各组小鼠的学习记忆功能、神经元损伤、Aβ1-42/Aβ1-40、p-Tau、细胞凋亡、氧化应激相关指标、免疫细胞及鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1,SPHK1)/鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)/鞘氨醇-1-磷酸受体5(sphingosine-1-phosphate receptor 5,S1PR5)通路相关蛋白或mRNA水平.接着利用气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析SP中的成分,并通过网络药理学、肠道菌群(gut mircrobiota,GM)16S rDNA测序及分子对接技术探讨SP干预AD的作用机制.结果显示SP可改善Aβ25-35诱导小鼠的学习记忆功能,减少海马神经元损伤,降低脑内Aβ1-42/Aβ1-40、p-Tau、细胞凋亡和氧化应激相关指标的水平,并维持小鼠机体免疫细胞和GM的稳态.网络药理学和GM测序分析显示,SP对AD的治疗作用与鞘脂通路相关.同时,(Z,Z,Z)-9,12,15-十八碳三烯酸和(Z,Z)-9,12-十八碳二烯酸是SP中含量最高的2种成分,与SPHK1和S1PR5有较好的结合活性.因此,推测SP通过调节肠道菌群,抑制SPHK1/S1P/S1PR5通路来发挥抗凋亡和抗氧化作用,从而改善Aβ25-35诱导小鼠的脑损伤;并且(Z,Z,Z)-9,12,15-十八碳三烯酸和(Z,Z)-9,12-十八碳二烯酸可能是SP发挥抗AD作用的物质基础.

电针治疗脊髓损伤可以显著提高脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、原肌球蛋白受体激酶B(tropomyosin-receptor kinase,TrkB)蛋白的表达,下调 p75 神经营养素受体(p75 neurotrophin receptor,p75 NTR)蛋白的表达.电针可以通过提高BDNF促进神经元的存活、促进受损纤维的再生、促进神经可塑性、促进髓鞘形成BDNF基因修饰的成纤维细胞.BDNF诱导的TrkB信号可能通过四种主要的细胞内途径影响突触可塑性、轴突生长、存活和细胞内阳离子平衡:(1)经磷脂酰-3激酶(P1-3K)/Akt通路促进神经元树突分枝和树突棘生成,影响突触生长和结构形成.(2)受体诱导小分子GTP酶Ras的激活,经过一系列复杂的磷酸化过程,最终激活许多细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated Kinase,ERK)途径并对环腺苷3',5'-单磷酸含量进行调节促进轴突生长.(3)经磷脂酶C-γ(PhospholipaseC-y,PLC-γ)/肌醇3-磷酸(inositol triphosphate,IP-3)通路参与Ca2+的调控,促进Ca2+从细胞内储存释放,促进突触可塑性等.(4)此外通过N-甲基-D-天冬氨酸(N-Methyl-D-aspartic acid,NMDA)受体的磷酸化,TrkB信号可能导致钙和钠内流的增加.故电针治疗脊髓损伤,可使BDNF与TrkB高亲和力结合,促进脊髓损伤的修复.其可能是通过激活BDNF-TrkB信号通路,抑制BDNF前体(brain-derived neurotrophic factor precursor,proBDNF)-p75NTR信号通路来实现对神经的再生修复.