目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定吸附无细胞百(三组分)白破灭活脊髓灰质炎和 b 型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗(以下简称 DTacP-sIPV-Hib)中多糖含量,并对方法进行验证.方法 在 1 ml 样品中加入 0.02 g 柠檬酸钠,振荡混匀后,置于 37℃保温 24 h,4000×g 离心 5 min 收集上清液,稀释后加入 6 mol/L 盐酸,100℃下加热 2 h,冰浴 10 min后加入 0.8 ml 氢氧化钠(1 mol/L)溶液用于终止酸水解.采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法根据检测信号峰面积计算对应水解荚膜多糖(PRP)含量,通过 PRP 占多糖含量干重的 41.3%计算出总的多糖含量.结果 核糖醇参考品浓度在 0.1～1.5 μg/ml 范围内标准曲线 r2>0.99,检测下限可达 10 ng/ml.核糖醇加标回收率均在 95%～105%;对高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法检测多糖的重复性和中间精密度进行验证,相对标准偏差(RSD)均小于 5%,方法专属性和耐用性良好.结论 使用柠檬酸钠作为解吸附剂,与高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法相结合可用于 DTacP-sIPV-Hib 中 Hib多糖的含量检测,为产品的质量控制和稳定性研究提供参考.

目的:比较南、北五味子果实多糖含量及组成成分的差异.方法:采用热水回流提取法提取南、北五味子多糖,减压浓缩,运用大孔树脂分离纯化得南北五味子总多糖.采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,采用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,采用硫酸-咔唑法测定糖醛酸含量.采用红外光谱、高效阴离子交换色谱法联用脉冲安培检测器HPAEC-PAD法初步表征南、北五味子多糖化学结构.结果:南五味子多糖出膏率为5.56%,北五味子多糖出膏率为10.6%.南五味子多糖中总糖、糖醛酸和蛋白质的含量分别为57.82%、29.1%和1.7%;北五味子多糖中总糖、糖醛酸和蛋白质含量分别为 67.07%、22.05%和0.7%.红外光谱表明南、北五味子多糖中均具有糖醛酸结构.结论:北五味子多糖提取率及总多糖、蛋白质含量高于南五味子,南五味子中糖醛酸含量高于北五味子;可根据化学成分的差异指导南、北五味子的临床使用.

目的:采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培(high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detector,HPAEC-PAD)检测法测定冻干AC群脑膜炎球菌(结合)b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗成品(以下简称冻干AC-Hib联合疫苗)中游离多糖的含量,并对方法进行验证.方法:合并15支成品用3 kDa超滤离心管浓缩,通过冷酚法分离游离多糖和多糖蛋白结合物,用2 mol·L-1盐酸水解游离多糖,得到对应的单糖;采用HPAEC-PAD法对水解的游离多糖进行分析,根据检测信号峰面积计算对应水解单糖含量,通过化学结构式确定多糖与水解后对应单糖摩尔比,计算出游离多糖的含量.结果:标准曲线R2>0. 99;不同多糖加标回收率均在80％ ～120％;A群多糖、C群多糖和Hib多糖的定量限分别为0. 025,0. 03和0. 05 μg·mL-1;对HPAEC-PAD法检测游离多糖的重复性和中间精密度进行验证,相对标准偏差(RSD)分别小于10％和15％;方法专属性、系统适用性及耐用性良好.结论:冷酚法与HPAEC-PAD法相结合可用于冻干AC-Hib联合疫苗中游离多糖的含量检测,为产品的质量控制和稳定性研究提供参考.

目的:建立一种高效阴离子交换色谱-脉冲安培(HPAEC-PAD)检测方法,直接用于检测石斛属植物单糖组分,并对其进行主成分聚类分析.方法:通过单因素试验筛选石斛多糖水解条件,使用DIONEX-ICS-5000*型离子色谱进行检测,梯度洗脱;并通过主成分聚类分析20种石斛属植物.结果:建立的HPACE-PAD法能在15 min之内实现7种单糖(甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、果糖、乳糖)的分离,精密度、稳定性、重复性RSD＜5.0％,各成分平均加样回收率为141.95％,平均RSD 3.4％;对单糖组分分析结果表明,单糖组分差异显著,最高相差961倍,最低相差38.5倍;20种石斛均检测出甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和木糖,球花石斛、滇金石斛、尖刀唇石斛3种未检测出果糖和乳糖;长距石斛、长苏石斛未检测出果糖;景洪石斛、小黄花石斛、玫瑰石斛未检测出乳糖;通过主成分聚类分析,能将铁皮石斛、鼓槌石斛、金钗石斛、线叶石斛、姬竹叶石斛、小黄花石斛、玫瑰石斛、长苏石斛、长距石斛、尖刀唇石斛、蜻蜓石斛、滇金石斛、景洪石斛聚为一类,此类单糖组分含量较低,其他石斛种含量相对较高.结论:建立的HPAEC-PAD法灵敏度高、重复性好,样品处理简单,分析快速准确,仪器使用便利,可用于石斛单糖或其他植物、微生物单糖组分测定,为石斛多糖成分质控提供参考,通过组分分析也为高多糖种质选择、选育提供重点关注材料.

目的 建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)测定重组人促红素(rhEPO)中唾液酸含量的方法.方法 将rhEPO样品用5mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH 7.0)换液后,调整浓度到0.33 mg/mL,取20 μL样品溶液加入10 mU/μL的神经氨酸酶20 μL,37℃孵育1h后,加入0.04 mmol/L的尤罗索尼克酸(KDN)内标物50 μL,再加入70 μL超纯水,混匀后分析测定.采用CarboPac PA1分析柱,CarboPac PA100保护柱,流动相为150 mmol/L氢氧化钠与125 mmol/L乙酸钠混合溶液,柱温30℃,流速1.0 mL/min,等度洗脱,数据采集时间15 min.根据唾液酸峰面积与KDN内标峰面积的比值与含量的量效关系,计算样品中的唾液酸含量.结果唾液酸标准品浓度在0.0015～0.0075 μg/mL范围内与唾液酸峰面积与KDN内标峰面积的比值呈良好的线性关系,R2＞ 0.99;重复性RSD＜ 4％;(低、中、高浓度)样品回收率分别为94.9％、94.3％、96.7％.用建立的HPAEC-PAD法测定了6批rhEPO中唾液酸含量,与间苯二酚测定法测定结果比较差异无统计学意义(P=0.7488).结论本研究建立了rhEPO中唾液酸含量测定的HPAEC-PAD方法,该方法线性、重复性、稳定性良好,适用于rhEPO的唾液酸含量的常规测定.

目的 用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)测定A、C、Y和W135群脑膜炎球菌多糖含量,并对该方法进行验证及初步应用.方法 采用CarboPac?PA-14×250 mm分析柱与Aminotrap 4×50 mm保护柱;使用氢氧化钠/醋酸钠梯度洗脱,以多糖抗原标准溶液质量浓度为横坐标,其相应的峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,并对建立的方法进行专属性、精密度和准确性验证;同时与传统方法的检测结果进行比较分析.结果 A、C、Y和W135群脑膜炎球菌多糖质量浓度在0.5～27.0μg/mL范围内与峰面积均具有良好线性关系,r=0.999.该方法专属性高,分析结果重复性良好,RSD均<5％;回收率均在95％～105％范围内;与传统的火箭免疫电泳法相比,检测结果差异均无统计学意义(P>0.05).结论 HPAEC-PAD准确、可靠,重复性好,可用于检测脑膜炎球菌多糖原液及疫苗成品中的多糖含量.

目的 探究中国六地区成熟母乳中主要母乳低聚糖(2'-岩藻糖基乳糖、3-岩藻糖基乳糖、乳酰-N-新四糖、乳酰-N-四糖、6'-唾液酸乳糖和3'-唾液酸乳糖)的含量及不同含量组母乳的比例及分布.方法 在全国六个地区招募单胎足月分娩的健康产妇,收集40-45 d的成熟乳,使用高效阴离子交换色谱偶联脉冲安培检测器(HPAEC-PAD)测定了629例母乳样品中6种母乳低聚糖的含量.结果 所有母乳样品中均检出6种母乳低聚糖,含量最高为2'-岩藻糖基乳糖,中值为1915.88 mg/L,依次是乳酰-N-四糖、3-岩藻糖基乳糖、6'-唾液酸乳糖、乳酰-N-新四糖和3'-唾液酸乳糖,中值分别为701.13、443.95、301.72、112.78和105.52 mg/L.本研究显示,根据检测方法中2'-岩藻糖基乳糖的含量可划分母乳为极低含量组、低含量组和高含量组,其中极低/低含量组在乳母中的比例为22％,而高含量组约占乳母的78％,与人群中母乳非分泌和分泌型比例基本一致,且2'-岩藻糖基乳糖的含量在高、低含量组中相差约80倍.6种母乳低聚糖在六地区成熟乳中均存在显著差异(P<0.05).结论 成熟母乳中均可检测出6种母乳低聚糖,其中2'-岩藻糖基乳糖的含量高于其他五种低聚糖.

目的 建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测同时测定婴幼儿配方奶粉中4种单糖和9种功能性低聚糖的方法 .方法 样品经提取、乙酸沉淀蛋白、净化处理后,外标法定量.淋洗液为乙酸钠和氢氧化钠,流速0.4 ml/min,梯度洗脱,洗脱时间50 min.采用高效阴离子交换色谱,色谱柱为CarboPacTM PA20(3 mm×150 mm),柱温30℃,脉冲安培检测.结果 4种单糖线性范围为0.1～5.0 mg/L,9种功能性低聚糖线性范围为0.2～10.0 mg/L,相关系数(r)均大于0.995,方法 回收率为82.0％～106.1％,RSD为2.7％～8.9％(n=13),检出限为2.0 mg/100 g.结论 该方法 简便、快速、高灵敏、无干扰,适用于奶粉中的单糖和功能性低聚糖的电化学方法 同时定量检测.

目的:建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)测定枸杞粗多糖及其不同组分单糖和糖醛酸的种类及含量.方法:枸杞子经水提醇沉,Hiprep DEAE FF16/10柱分离,再由HPAEC-PAD法测定枸杞粗多糖及其不同组分中单糖及糖醛酸的组成.结果:测得各单糖及糖醛酸在2.5～50mg/L线性关系良好(r≥0.9990),最低检出限为0.010～0.028mg/L,日内精密度RSD为0.98％～2.20％,日间精密度RSD为1.38％～2.46％,加标回收率为94.60％～112.62％.枸杞粗多糖及其不同组分均由阿拉伯糖、氨基葡萄糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、果糖、核糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸组成.结论:本研究所建立的方法简便、准确、分离效果好、灵敏度高,可用于枸杞粗多糖及其不同组分单糖及糖醛酸组成和测定的分析研究.

目的 建立b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗游离多糖含量检测的超速离心联合高效阴离子交换色谱-脉冲安培(high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detector,HPAEC-PAD)法,并对该方法进行验证及初步应用.方法 将供试品经超速离心后,收集上清获得游离多糖,加入水解液使供试品水解约16h后,采用CarboPacPA-104 mm×250 mm分析柱与CarboPacPA-104 mm×50 mm保护柱,氢氧化钠-醋酸钠溶液梯度洗脱,检测供试品游离多糖含量.对该方法进行专属性、线性、精密度、稳定性、准确度验证,确定定量限.用建立的方法检测13个批次Hib结合疫苗游离多糖含量,同时与乙醇沉淀法进行比较.结果 Hib多糖标准品在0.77～12.26 μg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系,测定5次,线性相关系数均大于0.995;方法定量限为1.875 ng/mL;精密度、稳定性的RSD均小于5％;高、中、低3个浓度的平均加标回收率为100.26％,RSD为3.96％.13个批次Hib结合疫苗中的游离多糖含量为6.76％～16.74％.结论 该方法准确可靠,可用于检测Hib结合疫苗游离多糖含量,同时也为其他多糖蛋白结合疫苗游离多糖提取和检测提供了思路.